CN110684044B - 一种制备Tubulysin关键片段Tuv的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化学合成技术领域，涉及一种制备具有抗癌活性天然产物Tubulysin的关键片段Tuv的方法。本发明方法操作简单，路线简洁，收率较高，尤其本发明方法的技术路线高选择性、可放大制备Tubulysin V的Tuv片段。本发明方法制得的具有抗癌活性天然产物Tubulysin的关键片段Tuv有助于该类化合物的成药性评价及临床前评价。

Description

一种制备Tubulysin关键片段Tuv的方法
技术领域
本发明属于化学合成技术领域，涉及具有抗癌活性天然产物Tubulysin的Tuv片段高效制备方法
背景技术
资料显示癌症已成为严重威胁人类健康的重大疾病之一。据世界卫生组织2014年发布癌症报告资料显示：2012年全球癌症新增病例和死亡人数出现惊人的增长，全球有1400万新增癌症病例，死亡人数达到820万；中国已成为癌症发病大国，2012年新增癌症病例多达350万，死亡人数250万。在癌症的治疗方案中，化学药物治疗一直是最重要的手段之一。有报道公开了Tubulysins(Figure 1)是从黏细菌Archangium gephyra和Angiococcusdisciformis中提取得到的细菌次生代谢产物(Antibiot.2000，53：879-885)，具有很强的抗癌活性，其细胞毒性是紫杉醇的20-1000倍，如，Tubulysin V对60多种癌细胞的GI50值小(GI50＝0.059nM)，远远低于紫杉醇的GI50(GI50＝1.95nM)和长春碱的GI50(GI50＝0.94nM)。
Figure BSA0000166785320000011
Figure 1Tubulysins的结构
Tubulysins作用的靶点是微管蛋白，其通过阻止微管蛋白的聚合从而裂解癌细胞的细胞骨架并介导细胞凋亡；研究显示，Tubulysins的抗癌活性的机理是：阻止微管蛋白聚合使细胞周期停滞，在细胞有丝分裂微管形成纺锤体的过程中Tubulysins标定到微管蛋白上，阻止微管蛋白的聚合、从而抑制有丝分裂过程中纺锤体的形成，最终抑制有丝分裂和介导细胞凋亡。另有研究报道，Tubulysins对P-糖蛋白过度表达的人KB-V宫颈癌细胞系具有很好的抗癌活性(IC50＝0.31nM)，表现出Tubulysin V具有抗多药耐药性(MDR)活性。
由于天然产物Tubulysins优异的抗癌活性及优异的抗多耐药性活性，自分离以来饱受国内外的合成化学家和药物化学家的青睐，诸多的不对称合成方法已经发表((a).Angew.Chem.Int.Ed.2007，46，2337-2348.(b).Angew.Chem.Int.Ed.2007，46，3526-3529.(c).J.Med.Chem.2009，52，238-240.(d).Chem.Eur.J.2010，16，11678-11688.(e).Chin.J.Chem.2013，31，40-48.(f).Chem.Asian J.2013，8，1213-1222.(g).J.Org.Chem.2016，81，10302-10320.(h).J.Am.Chem.Soc.2018，140，3690-3711.)，然而，由于Tubulysins家族分子中，均具有两个手性孤立的直链片段，这为其制备带来了极大的困难，使诸多已报道的文献方法难用于进一步药理学评价级的制备，给该类化合物的成药性评价及临床前评价带来很大的困难.因此，条件温和制备Tubulysins诸片段及类分子的合成方法在本领域仍然具有很大的挑战。
基于现有技术的现状和有关Tubulysins的高效合成研究(Tetrahedron 2016，72，5928-5933)基础上，本申请的发明人拟提供一种Tuv片段的高选择性合成新方法。
发明内容
本发明的目的旨在提供Tubulysins分子关键Tuv片段高选择性制备技术路线，具体涉及一种制备Tubulysin关键片段Tuv的方法。本方法可以高效、低成本、可放大制备Tuv片段。
本发明所涉及的Tubulysins分子关键Tuv片段按下述技术路线制备：：
在下文的陈述中，中间体通式是根据结构式中的编号，用阿拉伯数字表示。P表示氮原子的保护基，具体为Boc、Cbz，COOMe或COOEt，P1表示氧原子保护基，具体为TBS、TES、TBDPS、Bn、PMB、Ac，R、R1和R2表示不同芳基或烷基取代基。
具体的，本发明的制备Tubulysin的关键片段Tuv的方法按下述技术路线和步骤：
Figure BSA0000166785320000031
步骤1：化合物1溶于有机溶剂中，在-78℃至50℃之间用还原剂还原1-10小时，后处理得到化合物2；
步骤2：在-78℃至0℃的有机溶剂中，加入有机碱和不同基团取代的甲基酮或醛，搅拌10-30分钟后加入Lewis酸反应0.5-1.5h后，缓慢加入化合物2，反应0.5-2h后经后处理得化合物3；
步骤3：化合物3溶于一种有机溶剂中，在-78℃至50℃之间用一种还原剂还原1-10小时，后处理得到化合物4；
步骤4：化合物4和一种硒化合物溶于一种有机溶剂中，在0℃至30℃加入一种配位磷试剂，0.5-2.5h后，将体系置于-20℃至30℃，并加入一种氧化剂，反应0.5-4h后进行后处理得到化合物5；
步骤5：氮气保护下将化合物5溶于一种有机溶剂，加入钯/碳，置换氢气后室温反应0.5-3h后处理得到化合物6；
步骤6：化合物6溶于一种有机溶剂，在0℃至30℃加入一种氧化剂，反应5-20h后处理得到化合物7；
步骤7，化合物7通过开环得到甲酯化合物，还原得到醇，再经swern氧化，再与L-半胱氨酸甲酯对接制得Tubulysin的Tuv片段。
本发明中，步骤1：化合物1溶于有机溶剂中，在-78℃至50℃之间用还原剂还原1-10小时，经后处理得到化合物2。这里所说的一种有机溶剂指甲醇、二氯甲烷、四氢呋喃，特别是四氢呋喃。所说的一种还原剂指三乙氧基氢化铝锂、氰基硼氢化钠、硼烷二甲硫醚、四氢铝锂或三乙基硼氢化锂等，特别是三乙基硼氢化锂。
本发明中，步骤2：在-78℃至0℃的有机溶剂中，加入有机碱和不同基团取代的甲基酮或醛，搅拌十分钟后加入Lewis酸反应0.5-1.5h后，缓慢加入化合物2，反应0.5-2h后经后处理后得到化合物3。这里所说的有机溶剂指四氢呋喃、乙腈、二氯乙烷、二氯甲烷、环己烷或正己烷，特别是二氯甲烷。所说的有机碱指咪唑、三乙胺、乙二胺或异丙胺等，特别是异丙胺和三乙胺。所说的Lewis酸指三氟甲磺酸镍、三氟甲磺酸酮、三氟甲磺酸三甲基硅酯、四氯化钛、三氟化硼乙醚、三氟甲磺酸钐或三氟甲磺酸铟，特别是三氟甲磺酸三甲基硅酯。
本发明中，步骤3：化合物3溶于一种有机溶剂中，在-78℃至50℃之间用一种还原剂还原1-10小时，后处理得到化合物4。这里所说的一种溶剂指四氢呋喃、甲醇或二氯甲烷，特别是甲醇。所说的一种还原剂指硼氢化钾、硼氢化钠、硼氢化锂、腈基硼氢化钠、四氢铝锂或三乙基硼氢化锂，特别是硼氢化钾或硼氢化钠。
本发明中，步骤4：化合物4和一种硒化合物溶于一种有机溶剂中，在0℃至30℃加入一种配位磷试剂，0.5-2.5h后，将体系置于-20℃至30℃，并加入一种氧化剂，反应0.5-4h后进行后处理得到化合物5。这里所说的一种硒化合物指2-硝基苯基硒氰酸酯、苯基溴化硒，苯基氯化硒等，特别是2-硝基苯基硒氰酸酯。所说的一种有机溶剂是指四氢呋喃、甲醇、乙腈或二氯甲烷，特别是四氢呋喃。所说的一种配位磷试剂是指三丁基膦，三苯基膦，特别是三丁基膦。所说的一种氧化剂是指过氧化氢，高碘酸钠，特别是过氧化氢。
本发明中，步骤5：氮气保护下将化合物5和溶于一种有机溶剂，加入钯/碳，置换氢气后室温反应0.5-3h后处理得到化合物6。这里所说的一种有机溶剂是指甲醇，乙醇，乙酸乙酯，二氯甲烷，特别是甲醇和乙酸乙酯。
本发明中，步骤6：化合物6溶于一种有机溶剂，在0℃至30℃加入一种氧化剂，反应5-20h后处理得到化合物7。这里所说的一中有机溶剂是指乙酸乙酯，二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈/四氯化碳/，乙酸乙酯/水，乙腈/水，特别是乙腈/四氯化碳/水和乙酸乙酯/水。所说的一种氧化剂是指过氧化苯甲酰，3-氯过氧苯甲酸，叔丁基过氧化氢，高碘酸钠/三氯化钌，高碘酸钠/二氧化钌，硝酸铈铵，特别是高碘酸钠/三氯化钌。
本发明中，化合物1可根据文献方法制备(Tetrahedron，2000，56，7705-7713)，Tubulysin的Tuv片段合成可参照文献方法制备(Tetrahedron，2016，72，5928-5933)。
本发明提供了一种制备Tubulysin关键片段Tuv的方法，该方法操作简单，路线简洁，收率较高，所用的试剂均为常用试剂，尤其所述技术路线低成本、高选择性、可放大制备高光学活性Tubulysin。
具体实施方式
实施例1
步骤1：合成化合物2(P＝Boc，P1＝TBS)
化合物1(2.0g，6.30mmol)溶于干燥四氢呋喃(25mL)，在-78℃滴加LiEt3BH(15mL，15.75mmol，1.0M in THF)，反应30分钟后MeOH(5mL)淬灭，5分钟后加入饱和碳酸氢钠溶液，升至室温，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤浓缩，柱层析得到浅黄色油状液体化合物2(1.91g，95％)；
步骤2：合成化合物3(R1＝CH3，R2＝H)
在-78℃下的二氯甲烷(8.0mL)中，加入三乙胺(0.47mL，3.40mmol))和丙醛(0.17mL，2.36mmol)，搅拌15分钟后加入TMSOTf(1.00mL，5.50mmol)，反应30分钟后，将溶于二氯甲烷(3.0mL)的化合物2(500mg，1.57mmol)滴加到上述反应体系中，反应1h后加入饱和碳酸氢钠淬灭，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩经硅胶柱层析得到无色油状液体化合物3(396mg，71％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，isomers，rotamers)δ9.81-9.63(m，1H)，4.39-4.27(m，1H)，4.23-4.09(m，0.8H)，4.04-3.94(m，0.2H)，3.87-3.74(m，0.5H)，3.72-3.62(m，0.5H)，3.30-2.80(m，2H)，2.32-2.05(m，1H)，1.87-1.64(m，1H)，1.47-1.43(m，9H)，1.23-1.21(m，0.2H)，1.13-1.09(m，0.8H)，1.08-1.04(m，1.5H)，1.04-0.99(m，0.5H)，0.88(s，9H)，0.06(s，6H)ppm.
步骤3：合成化合物4
化合物3(396mg，1.11mmol)溶于干燥MeOH(6mL)，0℃加入NaBH4(105mg，2.78mmol)，搅拌30分钟后，饱和氯化铵淬灭，并蒸干溶剂，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩经硅胶柱层析得到浅黄色油状液体化合物4(400mg，100％)；
步骤4：合成化合物5
化合物4(198mg，0.55mmol)和2-硝基苯基硒氰酸酯(250mg，1.10mmol)溶于干燥四氢呋喃(8mL)，室温下加入Bu3P(0.27mL，1.10mmol)，反应45分钟后于0℃加入H2O2(30％，4mL)，反应2.5h后，用水淬灭体系，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩(20℃)后经硅胶柱层析得到浅黄色油状液体化合物5(99mg，53％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，rotamers)δ4.85-4.71(m，2H)，4.30-4.21(m，1.4H)，4.19-4.10(m，0.6H)，3.86-3.77(m，0.6H)，3.76-3.67(m，0.4H)，3.12(dd，J＝10.9，6.6Hz，1H)，2.32-2.22(m，1H)，1.71-1.67(m，4H)，1.47-1.43(m，3.6H)，1.42-1.38(m，5.4H)，0.87(s，9H)，0.05(s，6H)ppm.
步骤5：合成化合物6
氮气保护下将化合物5(53mg，0.16mmol)和100％钯/碳(53mg)溶于甲醇，置换氢气后室温反应2h后过硅胶漏斗，浓缩柱层析得到浅黄色油状液体化合物6(49mg，92％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，rotamers)δ4.33-4.17(m，1H)，3.93-3.84(m，0.6H)，3.78-3.60(m，1.4H)，2.93(dd，J＝11.0，6.9Hz，1H)，2.43-2.19(m，1H)，2.07-1.96(m，1H)，1.77-1.59(m，1H)，1.45(s，9H)，0.87(s，9H)，0.91-0.87(m，9H)，0.86-0.82(m，5.6H)，0.77-0.74(m，0.4H)，0.06(s，6H)ppm.
步骤6：合成化合物7
化合物6(23mg，0.067mmol)溶于乙酸乙酯(1mL)，氮气保护下加入NaIO4(43mg，0.20mmol)and RuCl3·nH2O(3mg，0.013mmol)的水溶液(1mL)，反应18后，异丙醇淬灭，蒸干有机溶剂，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩(20℃)后经硅胶柱层析得到黄色油状液体化合物7(11mg，46％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.26(dd，J＝8.8，8.0Hz，1H)，3.95-3.87(m，1H)，2.60-2.48(m，1H)，2.25-2.15(m，1H)，1.68-1.58(m，1H)，1.53(s，9H)，0.92-0.88(m，12H)，0.80(d，J＝6.9Hz，1H)，0.17(s，3H)，0.13(s，3H)ppm.
步骤7：Tubulysin的Tuv片段合成
化合物7(526mg，1.47mmol)溶于甲醇(13mL)，加入碳酸钾(203mg，1.47mmol).，室温反应过夜，饱和氯化铵淬灭，旋蒸除去有机相，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩柱层析得到无色油状化合物(504mg，88％)。此无色油状化合物(382mg，0.98mmol)溶于干燥四氢呋喃(10mL)，于0℃下滴加三乙基硼氢化锂(2.5mL，2.45mmol，1.0M in THF)反应5分钟后MeOH(5mL)淬灭，5分钟后加入饱和碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤浓缩，柱层析得到浅黄色油状液体化合物(269mg，76％)。干燥二氯甲烷(8mL)中加入(COCl)2(0.15mL，1.78mmol)，并降至-78℃，滴加DMSO(0.25mL，3.56mmol)的二氯甲烷溶液(6mL)，-78℃反应1小时后，滴加上述浅黄色油状液体化合物(322mg，0.89mmol)的DCM(8mL)溶液，-78℃反应3小时后，加入TEA(0.74mL，5.34mmol)淬灭，升至室温，45分钟后，加入L-半胱氨酸甲酯酸盐(367mg，2.23mmol)的乙醇溶液(8mL)，反应3小时候，后处理得到黄色油状化合物(291mg，77％)。此油状化合物(682mg，1.43mmol)溶于干燥乙腈(15mL)，在75℃下经两次二氧化锰(2.87gX2，14.3mmolx2)氧化得到Tubulysin的Tuv片段(352mg，52％)。8.10(s，1H)，7.39-7.32(m，2H)，7.28-7.23(m，2H)，7.22-7.15(m，1H)，5.22-5.15(m，1H)，4.73-4.65(m，2H)，3.93(s，3H)，3.68(brs，1H)，2.07-1.97(m，1H)，1.94-1.80(m，2H)，1.76-1.67(m，1H)，1.42(s，9H)，0.84(s，9H)，0.81(s，9H)，0.04(s，3H)，-0.02(s，3H)，-0.16(s，3H)，-0.24(s，3H)ppm.
实施例2
步骤1：合成化合物2(P＝Boc，P1＝TBS)
化合物1(2.0g，6.30mmol)溶于干燥四氢呋喃(25mL)，在-78℃滴加NaBH3CN(0.91mL，15.75mmol)，反应30分钟后MeOH(5mL)淬灭，5分钟后加入饱和碳酸氢钠溶液，升至室温，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤浓缩，柱层析得到浅黄色油状液体化合物2(1.91g，95％)；
步骤2：合成化合物3(R1＝CH3，R2＝H)
在-78℃下的二氯甲烷(8.0mL)中，加入三乙胺(0.47mL，3.40mmol))和丙醛(0.17mL，2.36mmol)，搅拌15分钟后加入Cu(OTf)2(1.81g，5.50mmol)，反应30分钟后，将溶于二氯甲烷(3.0mL)中的化合物4(500mg，1.57mmol)滴加到上述反应体系中，反应1h后加入饱和碳酸氢钠淬灭，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩经硅胶柱层析得到无色油状液体化合物3(396mg，71％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，isomers，rotamers)δ9.81-9.63(m，1H)，4.39-4.27(m，1H)，4.23-4.09(m，0.8H)，4.04-3.94(m，0.2H)，3.87-3.74(m，0.5H)，3.72-3.62(m，0.5H)，3.30-2.80(m，2H)，2.32-2.05(m，1H)，1.87-1.64(m，1H)，1.47-1.43(m，9H)，1.23-1.21(m，0.2H)，1.13-1.09(m，0.8H)，1.08-1.04(m，1.5H)，1.04-0.99(m，0.5H)，0.88(s，9H)，0.06(s，6H)ppm.
步骤3：合成化合物4
化合物2(396mg，1.11mmol)溶于干燥MeOH(6mL)，0℃加入KBH4(150mg，2.78mmol)，搅拌30分钟后，饱和氯化铵淬灭，并蒸干溶剂，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩经硅胶柱层析得到浅黄色油状液体化合物4(400mg，100％)；
步骤4：合成化合物5
化合物4(198mg，0.55mmol)和2-硝基苯基硒氰酸酯(250mg，1.10mmol)溶于干燥四氢呋喃(8mL)，室温下加入Bu3P(0.27mL，1.10mmol)，反应45分钟后于0℃加入高碘酸钠(118mg，0.55mmol)，反应2.5h后，用水淬灭体系，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩(20℃)后经硅胶柱层析得到浅黄色油状液体化合物5(99mg，53％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，rotamers)δ4.85-4.71(m，2H)，4.30-4.21(m，1.4H)，4.19-4.10(m，0.6H)，3.86-3.77(m，0.6H)，3.76-3.67(m，0.4H)，3.12(dd，J＝10.9，6.6Hz，1H)，2.32-2.22(m，1H)，1.71-1.67(m，4H)，1.47-1.43(m，3.6H)，1.42-1.38(m，5.4H)，0.87(s，9H)，0.05(s，6H)ppm.
步骤5：合成化合物6
氮气保护下将化合物5(53mg，0.16mmol)和100％钯/碳(53mg)溶于乙酸乙酯(3mL)，置换氢气后室温反应2h后过硅胶漏斗，浓缩柱层析得到浅黄色油状液体化合物6(49mg，92％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，rotamers)δ4.33-4.17(m，1H)，3.93-3.84(m，0.6H)，3.78-3.60(m，1.4H)，2.93(dd，J＝11.0，6.9Hz，1H)，2.43-2.19(m，1H)，2.07-1.96(m，1H)，1.77-1.59(m，1H)，1.45(s，9H)，0.87(s，9H)，0.91-0.87(m，9H)，0.86-0.82(m，5.6H)，0.77-0.74(m，0.4H)，0.06(s，6H)ppm.
步骤6：合成化合物7
化合物6(23mg，0.067mmol)溶于乙酸乙酯(1mL)，氮气保护下加入NaIO4(43mg，0.20mmol)and RuO2·nH2O(2mg，0.013mmol)的水溶液(1mL)，反应18后，异丙醇淬灭，蒸干有机溶剂，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩后经硅胶柱层析得到黄色油状液体化合物7(11mg，46％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.26(dd，J＝8.8，8.0Hz，1H)，3.95-3.87(m，1H)，2.60-2.48(m，1H)，2.25-2.15(m，1H)，1.68-1.58(m，1H)，1.53(s，9H)，0.92-0.88(m，12H)，0.80(d，J＝6.9Hz，1H)，0.17(s，3H)，0.13(s，3H)ppm.
步骤7：Tubulysin的Tuv片段合成
同实施例1。
实施例3
步骤1：合成化合物2(P＝Boc，P1＝TBS)
化合物1(2.0g，6.30mmol)溶于干燥四氢呋喃(25mL)，在-78℃滴加三乙氧基氢化铝锂(2.68g，15.75mmol)，反应30分钟后MeOH(5mL)淬灭，5分钟后加入饱和碳酸氢钠溶液，升至室温，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤浓缩，柱层析得到浅黄色油状液体化合物2(1.91g，95％)。
步骤2：合成化合物3(R1＝CH3，R2＝H)
在-78℃下的二氯甲烷(8.0mL)中，加入三乙胺(0.47mL，3.40mmol))和丙醛(0.17mL，2.36mmol)，搅拌15分钟后加入三氟甲磺酸镍(1.96g，5.50mmol)，反应30分钟后，将溶于二氯甲烷(3.0mL)中的化合物4(500mg，1.57mmol)滴加到上述反应体系中，反应1h后加入饱和碳酸氢钠淬灭，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩经硅胶柱层析得到无色油状液体化合物3(396mg，71％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，isomers，rotamers)δ9.81-9.63(m，1H)，4.39-4.27(m，1H)，4.23-4.09(m，0.8H)，4.04-3.94(m，0.2H)，3.87-3.74(m，0.5H)，3.72-3.62(m，0.5H)，3.30-2.80(m，2H)，2.32-2.05(m，1H)，1.87-1.64(m，1H)，1.47-1.43(m，9H)，1.23-1.21(m，0.2H)，1.13-1.09(m，0.8H)，1.08-1.04(m，1.5H)，1.04-0.99(m，0.5H)，0.88(s，9H)，0.06(s，6H)ppm.
步骤3：合成化合物4
化合物2(396mg，1.11mmol)溶于干燥MeOH(6mL)，0℃加入LiBH4(61mg，2.78mmol)，搅拌30分钟后，饱和氯化铵淬灭，并蒸干溶剂，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩经硅胶柱层析得到浅黄色油状液体化合物4(400mg，100％)。
步骤4、5、6，7同实施例1。

Claims (8)

1.一种制备Tubulysin关键片段Tuv的方法，其特征在于，按下述路线合成：
Figure FDA0003649469690000011
其中，P1为二甲基叔丁基硅基，P为Boc保护基，R1为甲基，R2为氢；
包括步骤：
步骤1：化合物1溶于有机溶剂中，在-78℃至50℃之间用还原剂还原1-10小时，后处理得到化合物2；
步骤2：在-78℃至0℃的有机溶剂中，加入有机碱和不同基团取代的甲基酮或醛，搅拌10-30分钟后加入Lewis酸反应0.5-1.5h后，缓慢加入化合物2，反应0.5-2h后经后处理得化合物3；
步骤3：化合物3溶于一种有机溶剂中，在-78℃至50℃之间用一种还原剂还原1-10小时，后处理得到化合物4；
步骤4：化合物4和一种硒化合物溶于一种有机溶剂中，在0℃至30℃加入一种配位磷试剂，0.5-2.5h后，将体系置于-20℃至30℃，并加入一种氧化剂，反应0.5-4h后进行后处理得到化合物5；
步骤5：氮气保护下将化合物5溶于一种有机溶剂，加入钯/碳，置换氢气后室温反应0.5-3h后处理得到化合物6；
步骤6：化合物6溶于一种有机溶剂，在0℃至30℃加入一种氧化剂，反应5-20h后处理得到化合物7；
步骤7，化合物7通过开环得到甲酯化合物，还原得到醇，再经swern氧化后，与L-半胱氨酸甲酯对接制得Tubulysin的Tuv片段。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述的还原剂是三乙氧基氢化铝锂、氰基硼氢化钠、硼烷二甲硫醚、四氢铝锂或三乙基硼氢化锂。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2所述的有机溶剂是四氢呋喃、乙腈、二氯乙烷、二氯甲烷、环己烷或正己烷。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2所述的有机碱是咪唑、三乙胺、乙二胺或异丙胺。
5.按权利要求1的方法，其特征在于，步骤2所述的Lewis酸是三氟甲磺酸镍、三氟甲磺酸酮、三氟甲磺酸三甲基硅酯、四氯化钛、三氟化硼乙醚、三氟甲磺酸钐或三氟甲磺酸铟。
6.按权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4所述的硒化合物是2-硝基苯基硒氰酸酯、苯基溴化硒或苯基氯化硒；所述的氧化剂是过氧化氢或高碘酸钠。
7.按权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5所述的有机溶剂是甲醇。
8.按权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6所述有机溶剂是乙酸乙酯，所述的氧化剂是高碘酸钠/三氯化钌。
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