CN103329720A - 拟康氏木霉smf2菌株在促进植物生长中的应用 - Google Patents

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本发明涉及拟康宁木霉SMF2菌剂在促进植物生长中的应用，属于微生物生应用技术领域。本发明通过如下技术方案促进植物的生长：（1）将拟康宁木霉SMF2菌剂配制成浓度100倍液进行浸种处理；（2）将拟康宁木霉SMF2菌剂幼苗移栽时蘸根处理；（3）将拟康宁木霉SMF2菌剂与有机肥或细沙土按照1：10的比例混匀，基施处理。该木霉菌剂可以有效的促进种子的萌发、幼苗的生长、提高作物产量和品质，在农业生产过程中具有很好的应用潜力。

Description

拟康氏木霉SMF2菌株在促进植物生长中的应用
技术领域
本发明涉及拟康宁木霉SMF2(Trichoderma pseudokoningii SMF2)菌株在促进植物生长中的应用，属于微生物应用技术领域。
背景技术
化学肥料的施用对于提高作物产量、解决粮食问题具有重要的意义。但是由于片面追求产量，造成了化学肥料的过量施用。有关资料表明耕地面积只有世界耕地总面积的7％左右，但化肥施用量却超过了世界化肥施用总量的25％，单位耕地面积的化学肥料施用量远远超过了发达国家设置的上限。长期过量施用化学肥料，不仅直接影响植物的正常生长和农产品的品质，还会导致土壤中养分过剩和污染物积累，给土壤环境造成巨大压力，带来严重的生态问题。
生物有机肥能够有效地改善土壤环境，提高作物产量，改善作物品质，提高化学肥料的使用率，减少化学肥料的施用量，减少环境污染，因此日益受到重视。
木霉属真菌是一种重要的生物有机肥的功能菌株和有效的生防菌株，其对多种植物病原真菌具有很好的防治效果，并能有效地促进植的物生长。目前美国、以色列等国已有50多种木霉商品化制剂上市，取得了很好的经济、社会效益。我国在木霉的生防作用，特别是促进植物生长方面的研究及应用还相对滞后。
木霉属真菌具有很强的促进植物生长作用，主要表现为：诱导植物产生抗性，抑制植物病原菌的生长来间接促进植物的生长；产生植物激素类物质或其他代谢产物直接促进植物生长；产生有机酸溶解土壤中的不溶性无机盐，为植物的生长提供微量元素而促进植物生长。但目前没有针对木霉菌剂如何进行科学施用的报道。
发明内容
本发明针对现有应用技术的不足，提供拟康氏木霉SMF2菌株在促进植物生长中的应用。该方法能够显著提高作物产量，改善农产品的品质。
拟康氏木霉SMF2菌株在促进植物生长中的应用，包括育苗施用、蘸根施用和基肥施用，步骤如下：
（1）取孢子数为2～3×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，稀释100倍后，按照5～10ml/株的浇灌量浇灌苗床，控温15～30℃，制得待栽苗床；
（2）取孢子数为2～3×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，按0.1～0.5g/株的剂量进行蘸根处理，然后移栽至步骤（1）制得的待栽苗床中，15～30℃条件下培养20～60天，制得待定植苗木；
（3）取孢子数为2～3×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，按质量比1：10～15的比例与有机肥或沙土混合均匀，制得菌剂基肥，将菌剂基肥按15～25kg/亩施于播种或定植行地面下15～25厘米处，与土壤混合均匀，经15～20天，制得待定植地块；
（4）取步骤（2）制得的待定植苗木定植于待定植地块中，进行田间管理即可。
根据本发明优选的，所述步骤（1）～（3）的拟康宁木霉SMF2菌剂的孢子数为2×108/mL。
根据本发明优选的，所述步骤（1）～（3）的拟康宁木霉SMF2菌剂的制备方法如下：
（i）将拟康宁木霉菌株SMF2经活化培养基活化后，按重量比1%的接种量接种到摇瓶种子培养基中进行液体振荡培养，然后按接种到种子罐种子培养基中进行发酵培养，制得液体种子；
（ii）将步骤（i）制得的液体种子按重量百分比6～8%的接种量接种于固体发酵培养基中，进行厚层通风固体发酵，在25～28℃，相对湿度（RH）80～85%的条件下，培养5天，培养过程中每24小时翻料一次，制得木霉孢子产物；
（iii）将步骤（ii）制得的木霉孢子产物在60～75℃条件下烘干，粉碎、过150目筛，制得拟康宁木霉菌株SMF2菌剂。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（i）的活化培养基的组分如下，均为重量份：
马铃薯5份，蔗糖0.05～0.1份，琼脂0.1份，pH自然。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（i）的活化条件为：25～28℃培养5～7天。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（i）的摇瓶种子培养基的组分如下，均为重量份：
麸皮1份，马铃薯5份，KH2PO4 0.03～0.05份，(NH4)2SO4 0.03～0.05份，CaCl2 0.01～0.02份，pH自然。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（i）的液体振荡培养条件为：25～28℃培养24～36小时。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（i）的种子罐种子培养基的组分如下，均为重量份：
将麸皮5～6重量份、玉米粉2～3重量份、马铃薯5～7重量份，水100重量份，混合，煮沸半小时后，过滤，再加入酵母膏0.3～0.5重量份、Na2HPO4 0.35～0.45重量份、KH2PO40.03～0.05重量份，混匀后灭菌，即得种子罐种子培养基；
根据本发明进一步优选的，所述步骤（ii）的发酵培养条件为：28～30℃通风搅拌，发酵30～40小时，即得种子罐种子。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（ii）的固体发酵培养基的组分如下，均为重量份：
玉米秸粉40～50份，麸皮50～60份，无机盐溶液80份；
上述无机盐溶液每升含有如下组分：
KH2PO4 0.048g，(NH4)2SO4 0.048g，CaCl2 0.02g，MgSO4·7H2O 0.02g。
根据本发明进一步优选的，所述步骤（ii）的厚层通风固体发酵条件为：发酵料层厚度为40～50cm，温度24～25℃，空气相对湿度（RH）80～85%。
根据本发明优选的，所述步骤（1）中的浇灌量为10ml/株。
根据本发明更优选的，所述步骤（i）的拟康宁木霉菌株SMF2(Trichodermapseudokoningii SMF2)菌株，2009年2月24日保藏于中国典型微生物培养中心，地址：武汉市武昌珞珈山，保藏号CCTCC NO:M209031。
有益效果
（1）通过本发明所述的施用方法，能够很好的促进植物的生长，有效地提高作物产量和农产品的品质，在农业生产中具有很好的应用潜力，符合现代农业的需要；
（2）通过本发明所述的施用方法，可以有效改善土壤微生物生态，提高化肥的利用效率，减少化肥的施用量，减轻环境污染；
（3）通过本发明所述的施用方法，可以显著提高种子发芽率，出苗齐、促进幼苗和植株的生长，基施能促进蔬菜和大田作物的生长、提高产量、改善农产品的品质。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
实施例中所述拟康宁木霉SMF2(Trichoderma pseudokoningii SMF2)菌株，2009年2月24日保藏于中国典型微生物培养中心，地址：武汉市武昌珞珈山，保藏号CCTCCNO:M209031。
实施例1
拟康宁木霉SMF2（Trichoderma pseudokoningii SMF2）菌株制备木霉菌剂的方法，步骤如下：
1．种子的制备
以PDA为活化培养基，将保藏的拟康宁木霉菌株SMF2菌株划线接种到PDA培养基上，25～28℃培养5～7天，将斜面种子加适量的无菌水配制成菌悬液即为摇瓶种子。
以麸皮1份，马铃薯1份，水5份，混合，煮沸半小时后，过滤，滤液加水至原体积，再加入KH2PO4 0.03～0.05份，(NH4)2SO4 0.03～0.05份，CaCl2 0.01～0.02份，pH自然，配制种子罐种子。培养基灭菌后，按照5%的重量比接种摇瓶种子，28～30℃通风搅拌，发酵36小时，即得种子罐种子。
2.固体厚层通风发酵生产拟康宁木霉SMF2(Trichoderma pseudokoningii SMF2)菌剂
以玉米秸粉40～50重量份，麸皮50～60重量份，无机盐溶液80重量份（每升含：KH2PO40.048g，(NH4)2SO4 0.048g，CaCl2 0.02g，MgSO4·7H2O 0.02g），按原料：无机盐溶液=1：0.8（重量比）混匀后灭菌，制得发酵培养基。厚层通风固态发酵，发酵料层厚度为40～50cm，24～25℃，空气相对湿度80～85%，深层通风发酵4天，发酵期间每间隔24小时翻料一次，制得拟康宁木霉SMF2(Trichoderma pseudokoningii SMF2)培养物。
将拟康宁木霉SMF2（Trichoderma pseudokoningii SMF2）培养物粉碎、过150目筛，制得拟康宁木霉SMF2（Trichoderma pseudokoningii SMF2）菌剂，经检测，拟康宁木霉SMF2菌剂的孢子数为2×108/mL。
实施例2
拟康氏木霉SMF2菌株在促进烟草生长中的应用，包括育苗施用、蘸根施用和基肥施用，步骤如下：
（1）取孢子数为2×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，稀释100倍后，按照10ml/株的浇灌量浇灌苗床，控温15～30℃，制得待栽苗床；
（2）取孢子数为2×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，按0.1g/株的剂量进行蘸根处理，然后移栽至步骤（1）制得的待栽苗床中，15～30℃条件下培养50～60天，制得待定植苗木；
（3）取孢子数为2×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，按质量比1：10的比例与有机肥或沙土混合均匀，制得菌剂基肥，将菌剂基肥按20kg/亩施于播种或定植行地面下15～25厘米处，与土壤混合均匀，经15天，制得待定植地块；
（4）取步骤（2）制得的待定植苗木播种或定植于待定植地块中，进行正常田间管理即可。如可参考李海宾等文献中的描述进行烟草的常规田间管理（烟草的种植技术与田间管理研究，科技创新与应用，2012，1：188-189）。
实验例
实验例在山东费县进行，土壤类型为褐土，前茬作物花生，肥力中等。栽前取0～20cm土样进行化验，土壤基本理化性状：pH7.33，有效氮108.36mg/kg，速效磷72.88mg/kg，速效钾331.79mg/kg，有机质24.08g/kg。
实验采用随机区组设计，对照组不用木霉处理，移栽时施用烟草专用提苗肥（购自湖南金叶众望科技股份有限公司），处理组：按照实施例2的记载处理，移栽时施用烟草专用提苗肥。
考察记载
生物学性状调查在现蕾期进行，测定株高、有效叶片数、茎粗、腰叶长和腰叶宽。调查其田间病害情况和原烟外观质量调查。烟叶样品按照《烤烟》（GB2635-1992）进行外观、化学成分鉴定。
不同处理对烟株农艺性状的影响见表1，由表1可见，木霉处理比对照在株高、最大叶面积、有效叶数等方面均好于其它处理，茎围、节距方面，各处理间差异不显著。
表1.木霉SMF2菌剂处理对烟草生物学性状的影响
Figure BDA00003492241500041
不同处理对烤烟原烟外观质量影响见表2，从表2可以看出，处理的原烟外观质量较对照较好，原烟光泽浓，叶片结构疏松，叶片厚度中等。
表2.木霉SMF2菌剂处理原烟外观质量统计表
Figure BDA00003492241500042
处理和对照对烤烟原烟主要化学成分见表3，由表3可见，木霉处理和对照的烟叶化学成分均比较协调，差异不大。
表3.木霉SMF2菌剂处理原烟主要化学成分
Figure BDA00003492241500043
不同处理对烤烟原烟感官评吸质量见表4，由表4可见，处理感官质量要好于对照，木霉SMF2菌剂主要通过提高烟叶香气质、余味、杂气、刺激性，来提高烟叶感官质量。
表4.木霉SMF2菌剂处理原烟感官评吸质量
Figure BDA00003492241500051
木霉处理对烟叶产量的影响见表5，由表5可见，处理比对照能够很好地提高烟叶的产量。
表5.木霉SMF2菌剂处理对烟叶产量的影响

Claims (9)

1.拟康氏木霉SMF2菌株在促进植物生长中的应用，包括育苗施用、蘸根施用和基肥施用，步骤如下：
（1）取孢子数为2～3×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，稀释100倍后，按照5～10ml/株的浇灌量浇灌苗床，控温15～30℃，制得待栽苗床；
（2）取孢子数为2～3×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，按0.1～0.5g/株的剂量进行蘸根处理，然后移栽至步骤（1）制得的待栽苗床中，15～30℃条件下培养20～60天，制得待定植苗木；
（3）取孢子数为2～3×108/mL的拟康宁木霉SMF2菌剂，按质量比1：10～15的比例与有机肥或沙土混合均匀，制得菌剂基肥，将菌剂基肥按15～25kg/亩施于播种或定植行地面下15～25厘米处，与土壤混合均匀，经15～20天，制得待定植地块；
（4）取步骤（2）制得的待定植苗木定植于待定植地块中，进行田间管理即可。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤（1）～（3）的拟康宁木霉SMF2菌剂的孢子数为2×108/mL。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤（1）～（3）的拟康宁木霉SMF2菌剂的制备方法如下：
（i）将拟康宁木霉菌株SMF2经活化培养基活化后，按重量比1%的接种量接种到摇瓶种子培养基中进行液体振荡培养，然后按接种到种子罐种子培养基中进行发酵培养，制得液体种子；
（ii）将步骤（i）制得的液体种子按重量百分比6～8%的接种量接种于固体发酵培养基中，进行厚层通风固体发酵，在25～28℃，相对湿度（RH）80～85%的条件下，培养5天，培养过程中每24小时翻料一次，制得木霉孢子产物；
（iii）将步骤（ii）制得的木霉孢子产物在60～75℃条件下烘干，粉碎、过150目筛，制得拟康宁木霉菌株SMF2菌剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤（i）的活化培养基的组分如下，均为重量份：
马铃薯5份，蔗糖0.05～0.1份，琼脂0.1份，pH自然；
所述步骤（i）的活化条件为：25～28℃培养5～7天。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤（i）的摇瓶种子培养基的组分如下，均为重量份：
麸皮1份，马铃薯5份，KH2PO4 0.03～0.05份，(NH4)2SO4 0.03～0.05份，CaCl2 0.01～0.02份，pH自然；
所述步骤（i）的液体振荡培养条件为：25～28℃培养24～36小时。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤（i）的种子罐种子培养基的组分如下，均为重量份：
将麸皮5～6重量份、玉米粉2～3重量份、马铃薯5～7重量份，水100重量份，混合，煮沸半小时后，过滤，再加入酵母膏0.3～0.5重量份、Na2HPO4 0.35～0.45重量份、KH2PO40.03～0.05重量份，混匀后灭菌，即得种子罐种子培养基；
所述步骤（ii）的发酵培养条件为：28～30℃通风搅拌，发酵30～40小时，即得种子罐种子。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤（ii）的固体发酵培养基的组分如下，均为重量份：
玉米秸粉40～50份，麸皮50～60份，无机盐溶液80份；
上述无机盐溶液每升含有如下组分：
KH2PO4 0.048g，(NH4)2SO4 0.048g，CaCl2 0.02g，MgSO4·7H2O 0.02g；
所述步骤（ii）的厚层通风固体发酵条件为：发酵料层厚度为40～50cm，温度24～25℃，空气相对湿度80～85%。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤（i）的拟康宁木霉菌株SMF2的保藏号为CCTCC NO:M209031。
9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤（1）中的浇灌量为10ml/株。
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