CN103327964A - 形成细乳液的方法以及所述细乳液用于递送生物活性作用剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及形成细乳液的方法以及该细乳液作为生物活性作用剂的递送体系的用途。具体地，本发明涉及用于形成细乳液的方法，包括提供包含亲水性表面活性剂、亲脂性表面活性剂和水的第一相以及包含脂质的第二相，其中所述细乳液包含平均直径为1μm以下的乳化颗粒。

Description

形成细乳液的方法以及所述细乳液用于递送生物活性作用剂的用途

发明领域

本公开涉及形成细乳液的方法以及该细乳液作为生物活性作用剂的递送体系的用途。特别地，本公开涉及由包含亲水性表面活性剂和亲脂性表面活性剂的第一相以及包含脂质的第二相形成具有小于1μm的乳化颗粒的细乳液的方法。

背景技术

乳液是由两种不混溶的液体组成的分散体系，其中一种液体的小液滴分散在第二种液体中。液滴尺寸小于1μm的乳液在文献中通常称为细乳液、纳米乳液、微乳液等。这些“细乳液”由分散或高能乳液法如高剪切搅拌、高压均化器和超声发生器形成。

微乳液作为药物和化妆品制剂受到很大关注。在药物工业中，主要的问题是药物的高效和有效递送。众所周知，许多有前景的药物由于递送困难而从未制成最终产品。药物递送的问题趋于与药物的物理或化学性质、诸如使用许可的行政事项、赋形剂和工程问题相关。药物递送的一些主要挑战是不良的溶解度、短的体外(保存期)和体内(半衰期)稳定性、低生物利用度、不可接受的副作用(由于全身递送而导致的)和调节问题。

药物递送体系或制剂应具有下列特性：易于生产、尽可能多的药物的适用性、物理稳定性、完全耐受并被监管机构接受并可用于监管机构许可的大规模生产的赋形剂。细乳液具有使其理想地用于药物递送的性质，包括热力学稳定性(长保存期)、易于形成、高表面积(高溶液化性能)和非常小的液滴尺寸。

然而，存在与可用的细乳液制剂相关的问题。高水平的非活性化合物在化妆品和药物递送体系中是有害的，并且许多细乳液具有高表面活性剂浓度并在大多数情况下具有高的醇、溶剂和助溶剂含量以保持稳定性。此外，许多细乳液利用高能过程如高压和高温而产生。例如，高温用于诱发稳定性，其使得商业生产变得昂贵。此外，利用诸如超声乳化的仅可用于产生小批量的过程而产生的细乳液意味着商业规模期间的乳液再现性是困难的。

因此，目前可用于制备切实可行地配制产品的微乳液的方法受到约束。由此，需要用于作为活性作用剂的递送体系的细乳液的改善方法和配方。

发明概述

本文公开的方法涉及通过低能方法形成的细乳液制剂，所述制剂适于大规模商业生产，具有低表面活性剂含量，在不冷藏的情况下高达3年保持稳定，并能用于通过各种途径递送各种不同的生物活性作用剂。因此，在某些方面中，本文公开的方法提供了适于用作生物活性作用剂的递送体系的细乳液。

在第一方面中，公开了形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中，所述细乳液包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

应当理解，本领域已知的适于形成细乳液的任何方式能用于形成所述细乳液，例如搅拌或其它合适的混合机构。优选地，适于形成细乳液的方式为低能方式。因此，在一实施方案中，适于形成细乳液的方式包括在连续混合期间，向第一相以连续流动(flow)或连续流(stream)形式添加第二相。在另一实施方案中，适于形成细乳液的方式包括在连续混合期间，在受控流动下向第一相添加第二相。在其它实施方案中，适于形成细乳液的方式包括在连续混合期间，将第二相滴加入第一相中。通常，通过以约5,000rpm至约20,000rpm的速度由搅拌器进行连续混合。

因此，本公开的细乳液能在不存在高温或高压的情况下形成。在一实施方案中，在小于约80°C、优选小于约60°C的温度下进行步骤a.至d.，并且更优选地，在40°C以下的温度下进行步骤a.至d.。在另一实施方案中，在小于约1,000kPa、优选小于约500kPa的大气压力下进行步骤a.至d.，并且更优选地，在标准大气压(约101kPa)下进行步骤a.至d.。在另一实施方案中，所述方法不包括冷却步骤。在具体的实施方案中，在40°C以下的温度并在标准大气压(约101kPa)下进行步骤d.。

因此，在一实施方案中，公开了形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中在40°C以下的温度和标准大气压(约101kPa)下进行步骤d.，并且其中所述细乳液包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

应当理解，任何亲水性或亲脂性表面活性剂可以用于第一相的形成。尽管可以使用本领域已知的任何亲水表面活性剂，但在一实施方案中，亲水性表面活性剂选自聚氧化乙烯烷基醚、山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧化乙烯烷基酚、聚氧乙二醇酯、聚丙二醇烷基醚、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油酯、聚氧乙烯甾醇、聚氧化乙烯植物油、聚氧化乙烯氢化植物油、藻酸丙二醇酯、脂肪酸盐、月桂基聚乙二醇甘油酯(lauryl macrogolglyceride)和它们的混合物。

同样地，能使用本领域已知的任何亲脂性表面活性剂。然而，在一实施方案中，亲脂性表面活性剂选自脂肪酸、乙酰化甘油脂肪酸酯、低级醇脂肪酸酯、脂肪酸的转酯产物、氢化植物油、甘油三酯和聚亚烷基多元醇、甾醇或甾醇衍生物、季戊四醇脂肪酸酯和聚亚烷基乙二醇醚、单甘油酯和乙酰化的单甘油酯、卵磷脂和氢化的卵磷脂、溶血卵磷脂和氢化的溶血卵磷脂、溶血磷脂及其衍生物、磷脂及其衍生物以及它们的混合物。在一方面中，亲水性表面活性剂为非离子表面活性剂，例如聚山梨醇酯80，并且亲脂性表面活性剂为磷脂酰胆碱。

在某些实施方案中，所述方法涉及具有低表面活性剂含量的细乳液。在一实施方案中，细乳液包含小于10%w/w的表面活性剂。在另一实施方案中，细乳液包含约1%w/w至约5%w/w的亲脂性表面活性剂和约0.5%w/w至约5%w/w的亲水性表面活性剂。在一实施方案中，所述方法可以还包括向第一或第二相添加溶剂。

在某些实施方案中，所述方法涉及具有高油含量的细乳液。在一实施方案中，所述细乳液包含至少约0.5%w/w、或例如约0.5%w/w至约40%w/w、约0.5%w/w至约15%w/w、或约15%w/w至约25%w/w的油，或者约25%w/w至约40%w/w的油。

脂质可以为本领域已知的任何脂质，包括源自植物的脂质、源自动物的脂质以及矿物油。优选地，脂质为包含具有6个碳或更长的脂肪族尾部(aliphatic tails)的中链或长链脂肪酸的植物油。适用于本方法的植物油的实例包括椰油、蓖麻油、花生油、玉米油、棉籽油、橄榄油、棕榈油、包括芥花油在内的菜籽油、红花油、大豆油、液体石蜡和向日葵油，以及它们的衍生物。在一实施方案中，所述油为大豆油。在另一实施方案中，脂质为源自动物的脂质，例如磷脂酰胆碱。

乳化颗粒能具有多种形状和结构，尺寸通常小于等于1μm。在一方面中，乳化颗粒具有小于1μm的平均粒径。在一实施方案中，平均粒径为约250nm至1μm。在另一实施方案中，平均粒径的范围为约300nm至约700nm。在另一实施方案中，平均粒径为约600nm。在又一实施方案中，细乳液中至少70%的颗粒具有小于等于1μm的直径。在又一实施方案中，细乳液中至少75%的颗粒具有小于1μm的直径。

因此，在一方面中，公开了形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中，所述平均粒径的范围为约250nm至约700nm。

在另一方面中，公开了形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中，细乳液中至少70%的颗粒具有小于等于1μm的直径。

本文公开的方法提供了在不冷藏的情况下高达三年保持稳定的细乳液。因此，细乳液当在大于4℃的温度下贮存时不聚结并保持粒径。在一实施方案中，细乳液在大于4℃的温度下至少一个月、优选至少六个月保持稳定，并且更优选地，细乳液在大于4℃的温度下至少一年保持稳定。在另一实施方案中，细乳液在大于4℃的温度下至少两年保持稳定。在另一实施方案中，细乳液在大于4℃的温度下多于两年保持稳定。

在第二方面中，公开了用于形成细乳液的方法，其基本由下述组成：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中所述细乳液包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

在一实施方案中，所述方法的步骤以形成多层和/或球形乳化颗粒的特定顺序而实施。根据该实施方案，步骤(a)、(b)和(c)在步骤(d)之前进行。因此，在步骤(d)中合并第一和第二相之前，形成包含亲水性表面活性剂、水和亲脂性表面活性剂的第一相，并且形成包含脂质的第二相。

因此，在一实施方案中，公开了形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中步骤(a)、(b)和(c)在步骤(d)之前进行，并且其中所述细乳液包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

在另一实施方案中，公开了形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中所述细乳液包含平均直径小于1μm的乳化颗粒，并且其中所述乳化颗粒为多层和/或球形的。

在某些方面中，本文描述的细乳液可以用作一种或多种生物活性作用剂的递送体系。尽管本领域技术人员会理解，生物活性作用剂能通过第一相、第二相或二者并入细乳液，但在一实施方案中，所述第二相还包含生物活性作用剂。在另一实施方案中，细乳液包含约0.2%w/w至15%w/w的生物活性作用剂。

因此，在第三方面中，公开了形成生物活性作用剂的递送体系的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质和生物活性作用剂的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中所述递送体系包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

在一实施方案中，公开了形成生物活性作用剂的递送体系的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂和生物活性作用剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中所述递送体系包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

应当理解，本文公开的递送体系可以用于递送任何生物活性作用剂。在一实施方案中，所述生物活性作用剂为亲脂性药物。在另一实施方案中，所述生物活性作用剂为利多卡因或利诺卡因。

由于具有小于等于1μm的粒径，该递送体系可以用于通过多种途径给予生物活性作用剂，例如局部地、肠内地、鼻内地或肠道外地给药。在一实施方案中，局部给药是通过气溶胶或喷雾剂进行的。

在第四方面中，公开了形成生物活性作用剂的递送体系的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的聚山梨醇酯80的水相；

b.将磷脂酰胆碱分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含大豆油和利多卡因的第二相；

d.向所述第一相以适于形成包含约0.5%w/w至约5%w/w的聚山梨醇酯80、约1%w/w至约5%w/w的磷脂酰胆碱、约0.5%w/w至约25%w/w的大豆油和约0.2%w/w至约5%w/w的利多卡因的细乳液的方式添加所述第二相，

其中，所述递送体系包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

在第五方面中，公开了形成生物活性作用剂的递送体系的方法，其由下述组成：

a.提供包含分散在水中的聚山梨醇酯80的水相；

b.将磷脂酰胆碱分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含大豆油和利多卡因的第二相；

d.向所述第一相以适于形成包含约0.5%w/w至约5%w/w的聚山梨醇酯80、约1%w/w至约5%w/w的磷脂酰胆碱、约0.5%w/w至约25%w/w的大豆油和约0.2%w/w至约5%w/w的利多卡因的细乳液的方式添加所述第二相，

其中所述递送体系包含平均直径小于1μm的乳化颗粒。

应当理解，在一方面中，公开了包含通过上述方法制备的乳化颗粒的组合物。

在又一方面中，将上述递送体系配制为可用于在有需要的个体中治疗或减轻疼痛的组合物。

附图简述

图1：荧光显微镜(400×)的细乳液相片。

图2：荧光显微镜(400×)的细乳液相片。

图3：相差光学显微镜(1000×)的细乳液相片。

图4：在室温和4℃下贮存322天的细乳液中的利诺卡因的稳定性。

图5：以150g和1kg批量制备的细乳液的粒径分布。

图6：以150g批量制备的细乳液的粒径分布图。

图7：以1kg批量制备的细乳液的粒径分布图。

图8：以1kg批量制备并在室温下贮存30个月的细乳液的粒径分布。

图9：制备的含40%w/w脂质的细乳液的粒径分布。

图10：来自接受NS喷雾剂和赛罗卡因喷雾剂的患者的最终疼痛分数的分布。

图11：来自接受NS喷雾剂和赛罗卡因喷雾剂的患者的平均患者满意分数(95%CI；1=非常满意，而5=非常不满意)。

优选实施方案详述

应当理解，本公开不限于具体例示的方法，并且当然可以进行变化。还应当理解，本文所用的术语仅是为了描述具体实施方案的目的，而不旨在限制仅由随附权利要求所限定的内容。

本文引入的所有公开、专利和专利公开(无论在上文还是下文)以其整体形式并入本文作为参考。然而，本文提及的公开被引用仅为了描述和公开在该公开中报道并可以与所公开的方法关联使用的方案和试剂。不应将本文任何内容解释为承认本文公开的内容没有权利借助现有发明先于这样的公开。

在该说明书和随后的权利要求中，会提及大量术语，所述术语应限定为具有下列含义：

术语“包含”表示但不限于在措词“包含”之后的任何项。因此，使用术语“包含”是指列举的要素是所需的或强制的，但其它元素是任选的且可以存在或不存在。“由…组成”表示包括且限于措辞“由…组成”之后的任何项。因此，措辞“由…组成”表示列举的要素是所需的或强制的，且没有其它要素存在。“基本由…组成”表示包括在该措辞之后列举的任何要素，且受限于不干涉或有助于所列举要素的公开中所规定的活性或作用的其它要素。因此，措辞“基本由…组成”表示列举的要素是所需的或强制的，但其他要素是任选的且可以存在或不存在，这取决于它们是否影响所列举的要素的活性或作用。

必须注意的是，如在本说明书和所附权利要求中所用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包括复数指示物，除非内容明显另有所指。因此，例如，提及“一种生物活性作用剂”包括两种或更多种这样的作用剂的混合物，等等。

在本文中，可以将范围表示为从“约”一具体值和/或到“约”另一具体值。当表达这样的范围时，另一方面包括从一具体值和/或到另一具体值。同样地，当通过使用前缀“约”将值表达为近似值时，应当理解，该特定值形成另一方面。还应当理解，每一范围的端点相对于另一端点以及独立于另一端点均是有效的。

“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或情况能或不能发生，并且该描述包括其中事件或情况发生的情形以及其不发生的情形。

除非特别相反规定，则组分的重量百分比基于其中包括组分的制剂或组合物的总重量。

“生物活性作用剂”是指具有生物活性的作用剂。生物作用剂能用于治疗、诊断、治愈、减轻、防止(即预防上)、改善、调节疾病、病症、感染等，或对其具有其它有利作用。生物活性作用剂还包括影响个体的结构或功能的那些物质或前药，其在被放入预定生理环境之后变成有生物活性或更加有生物活性的。

“低能方式”是指不涉及加热到高温、冷却或使用高压的过程。可用于本文方法的适于形成细乳液的低能方式的实例包括：在室温(即约25℃)下进行的那些、不需要显著加热步骤(即加热大于约40℃)和/或冷却步骤的那些，以及在约海平面标准大气压(即，约101.325kPa)下进行的那些。

术语“冷藏”是指在低于室温、即小于约25℃的温度下贮存细乳液。更具体地，冷藏可以涉及在10℃以下且特别在4℃以下贮存细乳液。因此，术语“没有冷藏”涉及至少大于4℃的温度。

在最宽泛的方面，公开了用于形成细乳液的方法。所述方法包括通过将水和一种或多种亲水性表面活性剂组合而制备水相。在一实施方案中，表面活性剂组分包括亲水性表面活性剂。在另一实施方案中，表面活性剂组分由单个亲水性表面活性剂组成，并且在另一实施方案中，亲水性表面活性剂组分包括多于一种的亲水性表面活性剂。亲水性表面活性剂可以选自但不限于聚氧化乙烯烷基醚、被称为聚山梨醇酯(Polysorbates)的山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧化乙烯烷基酚、聚氧乙二醇酯、聚丙二醇烷基醚、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油酯、聚氧乙烯甾醇、聚氧化乙烯植物油、聚氧化乙烯氢化植物油、藻酸丙二醇酯、脂肪酸盐、月桂基聚乙二醇甘油酯或它们的混合物。优选地，亲水性表面活性剂是非离子表面活性剂。可适合用于本文方法的合适的亲水性非离子表面活性剂的非限制性实例包括山梨聚糖脂肪酸酯(聚山梨醇酯)、聚氧乙二醇、聚氧乙二醇烷基醚和聚丙二醇烷基醚。在一实施方案中，所用的非离子表面活性剂为聚山梨醇酯80(Tween80

)。

在将亲水性表面活性剂和水组合之后，处理溶液直至亲水性表面活性剂分散。可以通过本领域已知的任何混合方法分散亲水性表面活性剂。合适的混合方法的实例如下文所述。在一实施方案中，亲水性表面活性剂通过搅拌而分散。在另一实施方案中，以约5,000rpm至约10,000rpm的速率通过搅拌来分散亲水性表面活性剂。一旦分散，则该溶液形成水相。

通过将亲脂性表面活性剂分散在水相中形成“第一相”。亲脂性表面活性剂可以选自但不限于脂肪酸、山梨聚糖脂肪酸酯、乙酰化甘油脂肪酸酯、低级醇脂肪酸酯、脂肪酸的转酯产物、甘油酯、植物油、氢化植物油、甘油三酯和聚亚烷基多元醇、甾醇或甾醇衍生物、季戊四醇脂肪酸酯和聚亚烷基乙二醇醚、单甘油酯和乙酰化的单甘油酯(例如单和二乙酰化的单甘油酯)、卵磷脂和氢化的卵磷脂、溶血卵磷脂和氢化的溶血卵磷脂、溶血磷脂及其衍生物、磷脂及其衍生物以及它们的混合物。优选地，亲脂性表面活性剂为磷脂。磷脂是两亲性分子且可以用作表面活性剂。适于使用的磷脂包括磷脂酸(磷脂酸盐)、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)、磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷脂酰丝氨酸以及磷酸肌醇。还可以使用各种磷脂的混合物。在一实施方案中，磷脂为卵磷脂。在另一实施方案中，磷脂为磷脂酰胆碱富集的卵磷脂(Epikuron^TM)。磷脂可以通过混合器而分散，如下文所述。在一实施方案中，通过使用搅拌器以约10,000rpm至约20,000rpm的速率分散磷脂。

不希望受限于任何特定理论或假设，发明人认为向水相添加亲脂性表面活性剂由于存在亲水性表面活性剂而产生稳定的多层/球形胶束结构或脂质体结构。这种多层胶束结构被认为增加了界面的表面积，这有助于在乳化过程期间接近表面活性剂。

因此，在某些方面，所述方法的步骤以特定顺序进行，从而促进多层/球形胶束结构的形成。根据这些方面，步骤(a)、(b)和(c)在步骤(d)之前进行。因此，在步骤(d)中合并第一和第二相之前，形成包含亲水性表面活性剂、水和亲脂性表面活性剂的第一相，并形成包含脂质的第二相。此外，在一实施方案中，细乳液包含多层/球形乳化颗粒。

现有技术的细乳液通常包含高表面活性剂浓度(大于10%)以保持稳定性。例如，WO2010/093523描述了包含约10重量%至约20重量%的助表面活性剂以及约15重量%至约40重量%的表面活性剂的细乳液。类似地，WO2010/092596描述了具有从15%至96%(v/v)的表面活性剂/助表面活性剂浓度的细乳液。尽管在本文所述的第一相和所得细乳液中的表面活性剂的量一定会根据所用的表面活性剂类型和其它因素例如意图用途而变化，但细乳液通常包含低浓度的表面活性剂。细乳液能包含2%w/w、4%w/w、5%w/w、6%w/w、8%w/w或10%w/w的表面活性剂，包括在所公开的百分比内的任何范围。在一实施方案中，细乳液包含小于10%w/w的表面活性剂。在另一实施方案中，细乳液包含约1%w/w至约5%w/w的亲脂性表面活性剂和约0.5%w/w至约5%w/w的亲水性表面活性剂。

临界胶束浓度(CMC)定义为在其之上自发形成胶束的表面活性剂浓度。当将表面活性剂(或任何表面活性材料)引入所述体系时，它们将初始分为界面，通过a)降低界面能以及b)使表面活性剂的疏水性部分移除避免与水接触，从而降低体系自由能。

随后，当表面活性剂的表面覆盖度增加且表面自由能(表面张力)降低且表面活性剂开始聚集成胶束时，由此通过降低表面活性剂的疏水性部分与水的接触面积而再次降低体系的自由能。当达到CMC时，表面活性剂的任何另外添加将仅增加胶束的数量(在理想情况下)。

当添加第二相时，这些胶束或脂质体结构使得亲脂性表面活性剂在界面处易于接触脂质，促进乳化颗粒的形成。下面提供的是常用非离子表面活性剂以及它们的CMC值的表：

不希望受限于任何假设，通常表面活性剂的浓度高于最终体系中的CMC。然而，本领域技术人员会认识到，由于体系中表面活性剂的复杂行为且因为CMC值根据溶剂的存在以及温度的差异而变化，所以不能描述具体的范围。

本文所述的方法还包括制备包含脂质的“第二相”。脂质可以为本领域已知的任何脂质，包括源自植物的脂质、源自动物的脂质以及矿物油。优选地，脂质为包含具有6个碳或更长的脂肪族尾部的中链或长链脂肪酸的植物油。适于用于本方法的植物油的实例包括椰油、蓖麻油、花生油、玉米油、棉籽油、橄榄油、棕榈油、包括芥花油在内的菜籽油、红花油、大豆油和向日葵油，以及它们的衍生物。在一实施方案中，所述油为大豆油。在另一实施方案中，脂质为源自动物的脂质，例如磷脂酰胆碱。

细乳液能包含0.5%w/w、2%w/w、5%w/w、10%w/w、15%w/w、20%w/w、25%w/w、30%w/w或40%w/w的脂质，包括在所公开的百分比内的任何范围。在一实施方案中，所述细乳液包含至少约0.5%w/w、或例如约0.5%w/w至约40%w/w、约0.5%w/w至约15%w/w、或约15%w/w至约25%w/w的油，或者约25%w/w至约40%w/w的油。

任选地，可以通过向第一或第二相添加溶剂来辅助脂质的分散。合适的溶剂对于本领域技术人员为公知的。合适的溶剂的实例包括丙酮(2-丙酮、丙-2-酮)、1-丁醇(正丁醇)、2-丁醇(丁-2-醇)、乙醇(乙醇(ethylalcohol))、乙酸乙酯(乙酸乙酯)、庚烷(正庚烷)、3-甲基-1-丁醇(异戊醇、异戊基醇)、甲基乙基酮(2-丁酮、MEK、丁-2-酮)、2-甲基-1-丙醇(异丁醇、2-甲基丙-1-醇)、戊烷(正戊烷)、1-戊醇(戊醇、戊-1-醇)、1-丙醇(丙-1-醇、丙醇)、2-丙醇(丙-2-醇、异丙醇、IPA)。优选地，溶剂为水溶性(亲水性)溶剂，例如丙醇、异丙醇、乙醇或丙酮。在一实施方案中，第一或第二相还包含约5g至约20g的丙醇。

一旦已经制备第一相和第二相，则以适于形成水包油细乳液的方式向第一相添加第二相。适于形成细乳液的合适方式对于本领域技术人员而言是公知的。优选地，适于形成细乳液的方式以及用于形成本文所述细乳液的其它过程是低能的。通常，需要高能过程产生平均尺寸为1μm以下的颗粒。例如，当使用常规制剂时，通常双倍能量耗散(能耗)可以导致平均粒径约25%的降低。

能耗可以以各种形式发生，例如，其能为在分批工艺中搅拌器克服细乳液的剪切阻力所需的能量、用于加热和冷却的能量和/或克服压力降的功率。例如，WO2008/128779描述了使用高能剪切过程、例如高压均化或超声处理通过使油相与水相混合来形成微乳液。当其中一相在室温下不能流动或流动过慢时，乳化通常需要加热。WO2006/024095描述了在40°C至99°C、优选45°C至95°C的范围内进行加热并连续混合以获得水包油微乳液的步骤。加热的乳液通常由于连续相的粘度较低进而阻力较小而具有更低的稳定性。阻力是停止或抵抗液滴运动并转而聚结成更大的且通常不期望的液滴或液滴聚集体以及相分离成层所必须的。在乳化之后，液滴趋于通过浮力而上升。由此，可以需要立即降温的步骤，这同样消耗能量。

相反，本文所述的方法不需要显著的加热(并由此不需要冷却)或压力以形成稳定的细乳液。因此，所公开的细乳液能在无需高温的情况下形成。通常，本文所述的细乳液的形成在小于约80°C、优选小于约60°C的温度下、且更优选在40°C以下的温度下进行。此外，因为本文公开的方法不采用高温，所以不需要冷却步骤。尽管辅助步骤、例如材料的灭菌可能涉及高温，但本领域技术人员会认识到，这样的步骤不以任何方式促进细乳液的形成。

本文公开的细乳液能在无需高压的情况下形成。通常，本文所述的细乳液的形成在压力小于约1,000kPa、优选小于约500kPa且更优选为标准大气压(约101kPa)的室中进行。在一实施方案中，向第一相添加第二相在40°C以下的温度和标准大气压(约101kPa)下进行。

因此，用于本文方法的适于形成细乳液的方式与用于形成常规细乳液的那些方式相比在能耗方面显著更低。例如，在一方面中，能够通过使用磁力搅拌器、顶置搅拌器或其它合适的搅拌装置搅拌形成细乳液。在另一方面中，能通过混合器辅助细乳液的形成。在一方面中，例如，以滴加方式向包含第一相的连续混合器添加第二相。连续混合器能包括任何合适的混合装置，包括静态和/或动态混合器。混合器能为包含机械或非机械混合部件的任何混合器。

连续混合器可以包括具有静态混合臂的搅拌器，所述静态混合臂在流中产生湍流以使第一和第二相混合，由此形成细乳液。在其它方面中，连续混合器包括乳化器、乳化装置或均化器(例如联机的或连续的均化器或转子/定子均化器)。实例包括但不限于填充床乳化器、筛和膜乳化器。在一方面中，连续混合器是具有混合部件的搅拌器，所述混合部件能以所需转数/分钟(rpm)、例如约5,000rpm至约20,000rpm混合相。在一实施方案中，在连续混合期间，向第一相以连续流动或连续流的形式添加第二相。在另一实施方案中，在连续混合期间，在受控流动下向第一相添加第二相。在又一实施方案中，连续混合使用速度高达约20,000rpm的转子均化器。

通常，能由本文公开的方法产生任何乳化颗粒。乳化颗粒能具有各种形状和结构，包括具有约10nm至1μm尺寸的球形、多层、微胶囊、微球、纳米颗粒、纳米胶囊和纳米球，以及通常小于约1μm的颗粒。细乳液能包含平均尺寸为约10nm至约900nm、约20nm至约800nm以及约50nm至约850nm(包括所公开的范围内的任何范围)的颗粒。然而，通常，由本文所述方法产生的细乳液具有250nm至1μm的平均粒径。在一方面中，所公开的乳化颗粒具有小于1μm的平均粒径。在一实施方案中，平均粒径的范围为约250nm至约1μm。在又一实施方案中，平均粒径的范围为约300nm至约700nm。在另一实施方案中，平均粒径为约600nm。在又一实施方案中，细乳液中至少70%且最优选至少75%的颗粒为1μm以下。

由本领域技术人员已知的激光衍射技术测量粒径分布。任选地，细乳液可以进行超声处理和/或高压均化和/或若需要的话，增加混合时间以进一步降低粒径。

由上述方法形成的细乳液在不冷藏的情况下能在延长时段内保持稳定。当乳液变得不稳定时，其分离或聚结成其组分相，并且脂质或油的层变得可见。粒径增加也说明乳液正在变得不稳定。如上所讨论的，测定粒径的方法是本领域技术人员已知的。因此，本文所述的细乳液是稳定的，因为在延长时段之后，细乳液仍具有1μm以下的平均粒径。在一实施方案中，本文所述的细乳液在不冷藏的情况下从至少一个月至高达约三年保持稳定。优选地，细乳液在不冷藏的情况下至少约一年保持稳定。更优选地，细乳液在不冷藏的情况下至少约两年保持稳定。在一实施方案中，在约三年之后，至少70%的颗粒为1μm以下。在另一实施方案中，在约三年之后，平均粒径的增加少于0.05μm。

在一方面中，可以配制由上述方法提供的细乳液以包含生物活性作用剂或组合的多种生物活性作用剂。多种生物活性作用剂能与本文所述方法一起使用。能将液体或固体生物活性作用剂并入本文所述的细乳液中。生物活性作用剂能包含活性成分的盐。因此，生物活性作用剂能为酸性的、碱性的或两性的盐。它们能为非离子分子、极性分子、前药、溶剂化物、多晶型物或能氢键结合的分子配合物。能将生物活性作用剂以下列形式包含在组合物中，例如不带电荷的分子、分子配合物、盐、醚、酯、酰胺、聚合物药物轭合物或提供有效生物或生理活性的其它形式。

可以并入本文体系的活性作用剂的实例包括但不限于肽，诸如激素、酶、抗体、抗体片段等的蛋白，诸如适配子、siRNA、DNA、RNA、反义核酸等、反义核酸类似物等的核酸，低分子量化合物，或高分子量化合物。预期用于所公开的细乳液的生物活性作用剂包括同化剂、抗酸剂、平喘剂、抗胆固醇和抗脂质作用剂、阻凝剂、抗惊厥剂、止泻药、镇吐药、包括抗菌和抗微生物作用剂在内的抗感染作用剂、抗炎剂、抗躁剂、抗代谢剂、抗呕吐剂(anti-nauseants)、抗肿瘤剂、抗肥胖剂、退热和镇痛剂、镇痉剂、抗血栓剂、止咳剂、抗尿毒症剂、抗血管生长剂、抗血管内皮生长剂、抗心绞痛剂、抗组胺药、厌食剂、生物制剂、脑血管扩张剂、管状动脉扩张剂、支气管扩张剂、细胞毒素剂、减充血剂、利尿剂、诊断剂、红血球生成剂、祛痰药、胃肠镇静剂、高血糖剂、安眠药、降血糖剂、免疫调节剂、离子交换树脂、泻药、矿物质补充剂、粘液溶解剂、神经肌肉药物、外周血管舒张药、精神药物、镇静剂、兴奋剂、甲状腺和抗甲状腺作用剂、组织生长剂、血管生长剂、血管内皮生长剂、子宫松弛剂、维生素或抗原性材料。

其它生物活性作用剂包括雄激素抑制剂、多糖、生长因子、激素、抗血管生成因子、右美沙芬、氢溴酸右美沙芬、诺斯卡品、柠檬酸喷托维林、盐酸氯苯达诺、马来酸氯苯吡胺、酒石酸苯茚胺、马来酸比拉明、琥珀酸抗敏安、柠檬酸苯托沙敏、盐酸苯肾上腺素、盐酸苯丙醇胺、盐酸假麻黄碱、麻黄素、磷酸可待因、硫酸可待因吗啡、矿物质补充剂、消胆胺、N-乙酰普鲁卡因胺、对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、盐酸苯丙氨醇、咖啡因、呱芬那辛、氢氧化铝、氢氧化镁、肽、多肽、蛋白、氨基酸、激素、干扰素、细胞因子和疫苗。

能用作细乳液中生物活性作用剂的典型的药物包括但不限于肽药物，蛋白药物，脱敏材料，抗原，诸如抗生素、抗微生物剂、抗病毒物质、抗菌物质、抗寄生虫物质、抗真菌物质及其组合的抗感染剂，抗过敏药，雄激素类固醇，减充血剂，安眠药，固醇抗炎剂，抗胆碱能药，拟交感神经药，镇静剂、缩瞳剂、抗抑郁药，镇定剂，疫苗，雌激素，促孕剂，体液因子，前列腺素，镇痛剂，镇痉剂，抗疟药，抗组胺，心血管剂，非类固醇抗炎剂，抗帕金森病药，降压药，β-肾上腺素能阻断剂，α-肾上腺素能拮抗剂，营养剂，阿片生物碱和苯并菲啶生物碱。作用剂还能为可用作兴奋剂、镇静剂、安眠药、镇痛剂、抗惊厥剂等的物质。

其它生物活性作用剂包括但不限于包含抗生素的生物活性作用剂。抗生素能为例如下列中的一种或多种：阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、链霉素、妥布霉素、巴龙霉素、安沙霉素、格尔德霉素、除莠霉素、碳头孢烯、氯碳头孢、碳青霉烯、厄他培南、多利培南、亚胺培南/西司他丁、美洛培南、头孢菌素(第一代)、头孢羟氨苄、头孢唑啉、头孢噻吩(Cefalotin)或头孢噻吩(Cefalothin)、头孢氨苄、头孢菌素(第二代)、头孢克洛、头孢羟唑、头孢西丁、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢菌素(第三代)、头孢克肟、头孢地尼、头孢妥仑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢菌素(第四代)、头孢吡肟、头孢菌素(第五代)、头孢吡普、糖肽、替考拉宁、万古霉素、大环内酯、阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、罗红霉素、醋竹桃霉素、泰利霉素、壮观霉素、单菌霉素、氨曲南、青霉素类、阿莫西林、氨比西林、阿洛西林、羧苄西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素、哌拉西林、替卡西林、多肽、杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B、喹诺酮、环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、磺酰胺类、磺胺米隆、百浪多息(已不通用)、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、磺胺类(已不通用)、柳氮磺吡啶、磺胺异噁唑、甲氧苄啶、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(复方新诺明)(TMP-SMX)、四环素类包括地美环素、强力霉素、米诺环素、氧四环素、四环素及其它；胂凡纳明、氯霉素、克林霉素、林可霉素、乙胺丁醇、磷霉素、梭链孢酸、呋喃唑酮、异烟肼、利奈唑胺、甲硝唑、莫匹罗星、呋喃妥因、平板霉素、吡嗪酰胺、奎奴普丁/达福普丁、利福平(在美国为利福平(Rifampin))、替硝唑，或其组合。

生物活性作用剂还能为免疫调节剂，包括例如细胞因子、白介素、干扰素、克隆刺激因子、肿瘤坏死因子等；过敏原，例如，猫皮屑、桦树花粉、屋尘螨、草花粉等；细菌生物体的抗原，例如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、酿脓链球菌(Streptococcuspyrogenes)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphteriae)、单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、肉毒杆菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningitides)、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、伤寒杆菌(Salmonella typhi)、副流感嗜血杆菌(Haemophilus parainfluenzae)、百日咳博代氏杆菌(Bordetella pertussis)、土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)、问号钩端螺旋体(Leptspirosis interrogans)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgddorferi)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)等；病毒的抗原，例如天花病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、麻疹病毒、HIV、SARS、水痘带状疱疹病毒、单纯性疱疹1和2、巨细胞病毒、艾巴病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、脊髓灰质炎病毒、腮腺炎病毒、狂犬病毒、风疹病毒、柯萨基病毒、马脑炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、里夫特裂谷热病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、乙型肝炎病毒等；真菌的抗原，例如原生动物和寄生生物体，例如新型隐球菌(Cryptococcucneoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、白色念珠菌(Candida albicans)、热带念珠菌(Candida tropicalis)、星形诺卡菌(Nocardia asteroids)、立氏立克次体(Rickettsia ricketsii)、斑疹伤寒立克次体(Rickettsia typhi)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamyda psittaci)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、布氏锥虫(Trypanasoma brucei)、痢疾变形虫(Entamoeba histolytica)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、曼氏裂体吸虫(Schistosoma mansoni)等。这些抗原可以为全灭生物体、肽、蛋白、糖蛋白、碳水化合物或其组合的形式。

在又一具体方面中，镇痛药，例如对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸等；麻醉药，例如利多卡因、利诺卡因、赛罗卡因等；厌食剂，例如右旋苯丙胺、酒石酸苯二甲吗啉等；抗关节炎药，例如甲基强的松龙、布洛芬等；平喘药，例如硫酸特布他林、茶碱、麻黄碱等；抗生素，例如磺胺异噁唑、青霉素G、氨苄青霉素、头孢菌素、阿米卡星、庆大霉素、四环素、氯霉素、红霉素、克林霉素、异烟肼、利福平等；抗真菌剂，例如两性霉素B、制霉菌素、酮康唑等；抗微生物剂，例如西曲溴铵等；抗病毒剂，例如阿昔洛韦、金刚烷胺等；抗癌剂，例如环磷酰胺、甲氨蝶呤、依曲替酯等；抗凝血剂，例如肝素、华法林等；抗惊厥药，例如苯妥英钠、安定等；抗抑郁药，例如异卡波肼、阿莫沙平等；抗组胺剂，例如盐酸苯海拉明、马来酸氯苯那敏等；激素，例如胰岛素、孕酮、雌激素、类皮质激素、糖皮质激素、雄激素等；镇定剂，例如氯丙嗪、安定、盐酸氯丙嗪、利血平、盐酸利眠宁等；镇痉剂，例如颠茄生物碱、盐酸双环维林、罂粟碱等；维生素和矿物质，例如必要氨基酸、钙、铁、钾、锌、维生素B12、维生素C、维生素D等；心血管药，例如盐酸哌唑嗪、硝酸甘油、盐酸普萘洛尔、盐酸肼苯哒嗪、胰脂肪酶、琥珀酸脱氢酶等；肽和蛋白，例如LHRH、生长激素抑制素、降血钙素、生长激素、胰高血糖素样肽、生长释放因子、血管紧张素、FSH、EGF、骨形态发生蛋白(BMP)、红细胞生成素(EPO)、干扰素、白介素、胶原、纤维蛋白原、胰岛素、因子VIII、因子IX、Enbrel

Rituxam

赫赛汀、α-葡萄糖苷酶、Cerazyme/Ceredose

后叶加压素、ACTH、人血清白蛋白、γ球蛋白、结构蛋白、血产物蛋白、复合蛋白、酶、抗体、单克隆抗体、抗体片段等；前列腺素，例如前列腺素E1、前列腺素I2、前列腺素E2等；核酸；碳水化合物；脂肪；麻醉剂，例如吗啡、可待因等；心理治疗剂；非类固醇抗炎剂，例如布洛芬、双氯芬酸等；抗高血压剂，例如盐酸酚妥拉明等；抗疟药，左旋多巴，利尿剂，例如呋喃苯胺酸、安体舒通等；抗溃疡药，例如盐酸雷尼替丁、盐酸西咪替丁等。

在某些方面中，生物活性作用剂能以药物组合物中的组分形式存在。能以期望的剂型而常规地制备并能由药学领域公知的任何方法制备药物组合物，所述剂型包括单位剂型或控释剂型。通常，通过使生物活性作用剂与液体载体或精细分散的固体载体或二者均匀且紧密地结合而制备药物组合物。所采用的药物载体能为例如固体、液体或气体。固体载体的实例包括乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体的实例为糖浆、花生油、橄榄油和水。气体载体的实例包括二氧化碳和氮气。能与生物活性作用剂混合的其它药物可接受的载体或组分能包括例如脂肪酸、糖、盐、诸如聚乙二醇、蛋白、多糖或羧甲基纤维素的水溶性聚合物、表面活性剂、增塑剂、诸如聚合物或盐或糖的高或低分子量成孔剂(porosigen)，或者诸如胆固醇或蜡的疏水性低分子量化合物。

将生物活性作用剂并入细乳液的方法将取决于生物活性作用剂的性质。例如，通常将亲脂性作用剂溶解在脂质中，并与脂质一起分散在脂质液滴中，而通常将亲水性作用剂溶解在水相中。然而，还能将亲水性和亲脂性作用剂与化合物、脂质和/或表面活性剂化学地或物理地结合。将生物活性作用剂并入细乳液的方法是本领域技术人员公知的(参见，例如Hendrickson,R.Ed.Remington:The Science and Practiceof Pharmacy(雷明顿：药物科学和实践),第21版;Lippincott Williams&Wilkins:Baltimore MD,2005)。

在一实施方案中，第二相包含脂质和生物活性作用剂。显而易见的是，在一方面中，本文公开的方法相对于乳化颗粒尺寸提供了高浓度的生物活性活性作用剂。如上文所述，本文描述的细乳液能包含高至40%w/w的油。这种高油含量允许高浓度的活性作用剂并入细乳液。例如，细乳液能包含0.1%w/w、0.5%w/w、2%w/w、3%w/w、5%w/w、10%w/w、15%w/w、30%w/w或40%w/w(包括在所公开的百分比内的任何范围)的生物活性作用剂。在一实施方案中，细乳液包含至少约0.2%w/w，例如约0.2%w/w至约8%w/w、或约10%w/w至约15%w/w的生物活性作用剂。

在具体的方面中，优选的活性作用剂为“疏水性化合物”或“亲脂性化合物”。术语“疏水性化合物”是指具有有限水溶性的化合物。术语“亲脂性化合物”是指特征为与脂质具有良好相互作用的化合物。这样的化合物的实例包括缺少可以支撑形式电荷的基团(例如羧酸和氨基)或缺少诸如羟基的极性基团的有机分子。这样的化合物可以为基于氨基酸的(例如氨基酸、肽、多肽和蛋白)，其中氨基酸仅为或主要为疏水的(例如亮氨酸、缬氨酸等)。可用于各种医疗应用的疏水性生物活性作用剂的实例包括丙泮尼地、异丙酚、阿法双酮、利多卡因、利诺卡因、棘霉素、硝酸咪康唑、诸如紫杉醇和多西他赛的紫杉烷(也称为紫杉碱或紫杉烷(taxoids))、足叶草毒素、诸如喜树碱、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、喜树碱-11(“伊立替康”)、拓扑替康的喜树碱类、长春花生物碱及它们的类似物(长春新碱、长春瑞滨、长春地辛、vintripol、vinxaltine、安西他滨)、亲脂性蒽环霉素、达卡巴嗪、氯尼达明、吡罗蒽醌、蒽吡唑、依托泊苷、争光霉素、6-氨基□、长春花碱、三丁酸甘油酯、替尼泊苷、基于铂的作用剂、吡喹酮、环孢菌素A、18-羟基去氧皮质酮、雷帕霉素、氢化波尼松、维生素A、维生素E、红紫素、本紫红素锡、卟啉、对氨基苯甲酸、安定、δ9-四氢大麻酚、BBB-MDP、维拉帕米和硝苯地平。在一实施方案中，生物活性作用剂为利多卡因或利诺卡因。

在另一实施方案中，第一相包含生物活性作用剂。在该情况下，优选的生物活性作用剂为“亲水性化合物”或“疏脂性化合物”。术语“亲水性化合物”是指可溶于水的化合物。适于各种医疗应用的亲水性生物活性作用剂的实例为本领域技术人员公知的，例如盐酸利诺卡因。

因此，在一方面中，上述方法和细乳液可以形成用于生物活性作用剂的递送体系。由于乳化颗粒的尺寸为1μm或更小，所以本文所述的递送体系能通过局部途径、肠内途径或非肠道途径而给药。例如，能口服、鼻内、静脉内、肌肉内、皮下、舌下、鞘内、腹腔内、瘤内、局部、经皮、皮内给予递送体系。给药途径可取决于多种因素，例如环境和治疗目的。可以并入本文公开的药物制剂/组合物的其它非限制性药物合适的材料包括吸收增强剂、pH调节剂和缓冲剂、渗透调节剂、防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂、增稠剂、助溶剂、软化剂、分散剂、调味剂、着色剂和湿润剂以及配体/指示(pilote)/靶分子。递送体系可以为液体、粉末、气溶胶、胶囊、片剂、栓剂、乳膏、凝胶和软膏的形式。液体的示例性形式包括洗液和喷雾剂。在具体实施方案中，配制递送体系，从而以喷雾剂或气溶胶形式给药。用于制备合适制剂的方法在本领中是公知的(参见例如Hendrickson,R.Ed.Remington:The Science and Practice of Pharmacy(雷明顿：药物科学和实践),第21版;Lippincott Williams&Wilkins:Baltimore MD,2005)。

在一具体实例中，可以将细乳液配制为能降低疼痛敏感性或伤害感受的组合物，无论发生的疼痛是由于疾病、炎症、创伤或身心反应。因此，将组合物以有效量向需要疼痛缓解的个体给药。措辞“需要疼痛缓解”当用于本文的个体时包括在给予组合物时经受轻度至强烈疼痛的个体，以及在不给予疼痛缓解的情况下能合理预期在例如约1小时至约2小时尤其是约30分钟内具有轻度至强烈疼痛开始的个体。

术语“有效量”是指当向个体给予时足以诱发或保持疼痛缓解的量，即，疼痛缓解量。组合物的有效疼痛缓解量或剂量的确定取决于个体的体重和受治疗的疼痛的强度等因素。

如本文所用，“有效疼痛缓解浓度”或“有效疼痛缓解血浆浓度”旨在表示当在包括个体对疼痛严重性计分的标准化测试中进行测试时，达到表明疼痛缓解的平均分数的个体的血浆水平。在一下文所述的这样的测试中，患者疼痛分数等级为10(疼痛的严重性没有降低)至0(疼痛完全缓解)，并且等于或大于给定值的平均分数被认为构成了有效的疼痛缓解。在这样的测试中，如本文所例示的，5.0以下且优选2.0以下的平均分数被认为构成了有效的疼痛缓解。然而，本领域技术人员要认识到，其它方法能用于评价疼痛的严重性和这样的疼痛的缓解。

因此，本文所述的细乳液方法的一方面包括用于疼痛缓解的治疗方法，其中向个体以提供可检测的疼痛缓解的制剂形式给予包含利多卡因的细乳液。“可检测的疼痛缓解”表示制剂产生有效的疼痛缓解，这可由标准方法如上述方法来测量。例如，基于上述测试体系的0至10的等级，达到5.0以下、更优选2.0以下的平均分数的制剂被认为提供了可检测的疼痛缓解。本公开不限于使用的任何具体类型的制剂，只要其表现出本文所定义的药物动力学类型。在一实施方案中，细乳液配制为用于疼痛缓解的包含利多卡因或利诺卡因的气溶胶喷雾剂。

本文所述的细乳液或递送体系能向任何期望的个体给药。个体能为脊椎动物，例如哺乳动物、鱼、鸟、爬行动物或两栖动物。本文所公开的方法的个体能为例如人类、非人类灵长类动物、马、猪、兔子、狗、绵羊、山羊、牛、猫、豚鼠或啮齿动物。该术语不表示特定的年龄或性别。因此，无论男性或女性，旨在涵盖成年和新生的个体以及胎儿。

现在将仅通过参考下列非限制性实施例来进一步描述本公开。然而，应理解的是，下列实施例仅为示例性的，且绝不应视为对上述公开的普遍性的限制。

实施例

实施例1  细乳液制剂

使用下列方法，制备100g的具有各种表面活性剂浓度的细乳液：

制剂A：

1.向制备细乳液所需的80%的WFI添加聚山梨醇酯80，并搅拌直至分散。

2.然后，将卵磷脂加入Tween80的水溶液并通过使用转子均化器均化2分钟或直至分散而进行分散。

制剂B：

1.大豆油。

混合A和B：

将制剂B滴入制剂A(缓慢地)并使用转子均化器以10,000rpm的速率连续均化。添加剩余的WFI补足重量。使用转子均化器以18,000rpm的速率均化所得混合物10分钟。

实施例2  具有不同浓度的表面活性剂的细乳液的稳定性

使用表1所示的多个参数，在一个月后对实施例1制备的细乳液的稳定性进行计分。从表1能够看出，表面活性剂的总浓度对细乳液的总稳定性没有显著影响。

表1

实施例3  用或不用超声处理制备的细乳液

除了由蠕动泵辅助制剂B向制剂A的添加而非滴加之外，根据下列配方，依照实施例1制备1kg批次的细乳液。

然后，对所得细乳液进行磁力搅拌均化2分钟、4分钟或10分钟，并且超声处理5分钟，并在每一阶段采集样品以进行粒径分析。简言之，使用磁力搅拌器搅拌乳液10分钟，然后采集第一个样品。然后，使用转子均化器均化乳液10分钟，并在2分钟、4分钟和10分钟采集样品。然后，将乳液用超声处理进一步加工5分钟，并且采集最终的样品。

通过Malvern的Mastersizer2000来分析粒径，并且测定中值直径(其中50%的分布在直径(d(0.5))之上并且50%在其之下)。如表2所示，仅通过磁力搅拌器进行搅拌而实现了0.680μm的d(0.5)。此外，用均化和/或超声处理没有d(0.5)的显著降低，表明本方法能利用低能方法产生细乳液。

表2

批次	d(0.5)
		2%w/w乳化剂-搅拌的	0.680μm
2%w/w乳化剂-均化2分钟	0.623μm
		2%w/w乳化剂-均化4分钟	0.659μm
2%w/w乳化剂-均化10分钟	0.715μm
		2%w/w乳化剂-超声处理5分钟	0.651μm

实施例4  多层胶束结构的形成和评价

假定向分散的亲水性表面活性剂添加亲脂性表面活性剂产生了多层胶束结构。制备如下的包含荧光染料的100g细乳液：

制剂A：

1.将荧光素钠(水溶性)溶解在50g水中。

2.在磁力搅拌器上将Tween80加入50g的包含荧光素钠的水，直至分散。

3.将卵磷脂加入Tween80的水溶液并通过使用转子均化器均化10分钟或直至分散而进行分散。

制剂B：

1.将若丹明通过在温水(40°C)中超声处理20分钟而溶解在大豆油中。

2.然后，通过0.2μm过滤器来过滤油以除去任何未溶解的若丹明颗粒。

混合A和B：

将制剂B滴入制剂A(缓慢地)，并且由磁力搅拌器以中速(5)连续搅拌。在该阶段采集样品并利用荧光显微镜成像(图1)。

添加剩余的水补足重量。将最终混合物用磁力搅拌器搅拌10分钟(最大速率10)。不包括均化过程，并且中速搅拌的制剂反而实现了更大的粒径，这能由荧光显微镜在400×放大率下容易地观察到。

然后，利用荧光显微镜使所得制剂的样品成像(图2)。从图1和图2能够看出，制剂包含卵磷脂的多层/球形结构和在其内包含脂质的Tween80。使用类似的方法制备了光学显微镜的样品，除了从水相省略荧光素钠(图3)。该多层结构被认为增加了界面的表面积并在乳化过程中使表面活性剂容易达到界面。

此外，颗粒为球形，这表明颗粒完全被表面活性剂分子覆盖，并且与其它颗粒形式相比，存在适于颗粒相互作用的最小表面。

最后，该实施例证明细乳液包含亲水性作用剂(荧光素钠)和亲脂性作用剂(若丹明)的能力。

实施例5  其它细乳液制剂

还制备了上述制剂的下列变体，并且在3个月至6个月内保持稳定。

制剂A：

1.通过搅拌将Tween80溶解在80%的WFI中。

2.将1.0g卵磷脂加入Tween80的水溶液并通过使用转子均化器均化5分钟而分散。

制剂B：

1.将剩余的卵磷脂加入油中，然后添加异丙醇并在40°C下超声处理20分钟以溶解卵磷脂并除去溶剂。

混合A和B：

将制剂B滴加入制剂A(缓慢地)，并使用转子均化器以10,000rpm连续均化。然后，添加剩余的WFI补足重量。

制剂A：

1.通过搅拌将Tween80溶解在80%的WFI中。

2.将单硬脂酸甘油酯加入Tween80的水溶液中并充分混合。

制剂B：

1.大豆油。

混合A和B：

将制剂B滴入制剂A(缓慢地)，并使用转子均化器以10,000rpm连续均化。添加剩余的WFI以补足重量。

制剂A：

1.通过搅拌将Tween80溶解在80%的WFI中。

2.将1.0g Span20加入Tween80的水溶液并通过使用转子均化器均化5分钟而分散。

制剂B：

1.将残留的Span20加入油中并在40°C下搅拌20分钟以溶解Span20。

混合A和B：

将制剂B滴入制剂A(缓慢地)，并使用转子均化器以10,000rpm连续均化。添加剩余的WFI以补足重量。

实施例6  细乳液制剂

制备如下的包含利诺卡因的150g细乳液：

制剂A：

1.将Tween80加入50g WFI中，并使用转子均化器在10,000rpm至15,000rpm下均化5分钟。

2.将磷脂酰胆碱加入Tween80的水溶液中并通过均化器分散2分钟或直至分散。

3.将水溶液在121°C下，在高压釜中灭菌15分钟。

制剂B：

1.将大豆油在215°C下灭菌2小时或通过0.2μm过滤器过滤而灭菌。

2.通过将利诺卡因在温水(40°C)中超声处理20分钟而溶解在灭菌的油中。

混合A和B：

将制剂B经过0.2μm无菌过滤器而滴加入制剂A(缓慢地)，并使用转子均化器以10,000rpm连续均化。添加剩余的WFI补足重量。使用转子均化器以18,000rpm均化最终混合物10分钟。

实施例7  在室温和在4℃下的稳定性-利诺卡因浓度

为确保利诺卡因不随时间分解，测试根据实施例6的方法而形成的两个单独批次(“批次1”和“批次2”)的乳液在室温和4℃(即使用或不使用冷藏)下贮存322天时的利诺卡因稳定性。通过在特定时点由HPLC测量制剂中利诺卡因浓度并将其与形成制剂期间添加的实际量进行对比，从而测试稳定性。简言之，在每一时点，通过液-液萃取从制剂样品中萃取利诺卡因。通过使用不同的溶解体系来优化方法并且还根据药典指南来确认。

步骤1：在25mL量瓶中称重0.5g乳液。将乳液样品溶解在异丙醇中，然后用另外的异丙醇补足体积(溶液A)。然后，将溶液A的2mL等份转移至螺帽试管中，然后添加4mL的二氯甲烷。将混合物轻轻地倒置振动4至5次。

步骤2：将4mL的0.1MHCl添入溶剂混合物中。通过轻轻地振动5分钟然后在1000rpm下离心5分钟而将利诺卡因萃取在0.1MHCl中。移除水性上层并收集到20mL量瓶(溶液A/1)中。重复步骤2两次，总计三次。

步骤3：通过0.1MHCl将溶液A/1补足至体积。将少量样品通过0.5μm过滤器而过滤并注射以进行HPLC分析。HPLC条件如下：

将样品中利诺卡因浓度与制剂中利诺卡因的原始浓度进行比较，并且以百分比形式表达。如图4所示，在室温下贮存的制剂和在4℃下贮存的制剂中，利诺卡因以大致相同的速率发生分解。因此，该结果表明由所述方法制备的细乳液具有长保存期，因为其是稳定的并当在室温下贮存延长的时段时维持作用剂的浓度。

实施例8  在室温和在4℃下的稳定性-粒径

还通过测量粒径测试了如实施例6和7所述那样制备的批次1和2在室温和4℃(即使用或不使用冷藏)下贮存236天时的稳定性。通过Malvern的Mastersizer2000来分析粒径，并且测定中值直径(其中50%的分布在直径(d(0.5))之上并且50%在其之下，以及其中90%的分布在直径(d(0.9))以下)。如表3和4所示，在室温下贮存的制剂和在4℃下贮存的制剂中，在平均分布d(0.5)和d(0.9)之间几乎没有观察到差异。

表3

表4

实施例9  细乳液的表征：粒径报道

通过Malvern的Mastersizer2000分析了按照实施例6所述的方法制备的细乳液的样品。还使用实施例6的方法(除了通过蠕动泵辅助制剂B向制剂A的添加而非滴加)制备了1kg的按比例放大的批次，并进行了分析。简言之，将2至3滴乳液滴入100mL的去离子水中。图5至7示出测试结果。几乎100%(99.24%)的从150g批次分析的颗粒具有小于1μm以下的尺寸。这比1kg批次(85.00%)稍高。此外，在150g批次中约50%的颗粒为200nm至1μm，并且在1kg批次中约85%的颗粒为200nm至1μm。

150kg批次中的颗粒(d(0.5)=0.202μm)比1kg批次颗粒(d(0.5)=0.619μm)平均稍微更小，这被认为归因于技术采样问题。然而，这些结果表明细乳液能成功地放大到商品批量而不显著影响粒径。

实施例10  1kg批次中制备的细乳液的稳定性

还测试了1kg批次的稳定性以确保乳液能在其按比例放大的形式中保持稳定。检测了稳定性的若干参数并且在表5中示出结果。

通过Malvern的Mastersizer2000分析了粒径，并且测定中值直径(50%的分布在该直径(d(0.5))之上并且50%在其之下)。使用实施例7所述的HPLC方法测定了利诺卡因浓度(%w/w)和利诺卡因的分析百分比。

使用来自British Pharmacopoeia Volume IV,Appendix XF2010;London:Her Majesty′s Stationery Office for the Department of Health(英国药典第IV卷，附录XF2010；伦敦：女王陛下文书局，卫生署)的标准化方法A来测定过氧化物值。简言之，将2.50g乳液放入装备有磨砂玻璃塞的250mL锥形瓶中。添加2体积氯仿R和3体积的冰醋酸的30mL混合物，并且振动烧瓶直至乳液溶解。然后，添加0.5mL的饱和碘化钾溶液R，并且再次振动烧瓶1分钟整，然后添加30mL的水。将0.01M硫代硫酸钠缓慢滴定入溶液，并且连续地剧烈搅拌，直至黄色几乎渗散。然后，添加5mL的淀粉溶液并且持续滴定，剧烈振动，直至颜色渗散(n1ml的0.01M硫代硫酸钠)。然后，在相同条件下进行空白测试(n2ml的0.01M硫代硫酸钠)。在空白滴定中使用的0.01M硫代硫酸钠的体积不能超过0.1ml。

计算：

$\mathrm{lp}=\frac{10(n_1-n_2)}{m}$

通过数字pH计测量了乳液的pH。在测量乳液样品之前，使用标准缓冲溶液(pH4和pH7)校正了pH计。还使用Duo测试pH计测试了pH。

表5

从表5中能够看出，在15个月内没有一个参数显著变化，说明乳液甚至当按比例放大至1kg时也在2年内保持稳定。

重要地，平均粒径没有随时间增加。粒径的增加是乳液不稳定的关键指征。然而，甚至当在室温下30个月(914天)之后，粒径的增加也是可忽略不计的(图8)。因此，这些结果表明乳液能稳定2年以上并且在室温下稳定6个月。

油的氧化是乳液不稳定的另一关键指征。如上所示，过氧化物值随时间无显著变化，表明油在乳液中没有氧化。所见的过氧化物的小变化归因于分析的性质。此外，所有值符合可输注产品的药典标准。

实施例11  包含40%w/w脂质的细乳液制剂

制备如下的包含盐酸利诺卡因、水杨酸和桉树油的100g细乳液：

制剂A：

1.将盐酸利诺卡因和苯甲酸溶解在20g水中。

2.将Tween80加入包含盐酸利诺卡因和苯甲酸的20g WFI中，并使用转子均化器在10,000rpm至15,000rpm下均化5分钟。

3.将磷脂酰胆碱加入Tween80的水溶液中并通过使用转子均化器均化20分钟或直至分散而分散。

制剂B：

1.将椰油在40°C下融化并与液体石蜡混合，并轻轻地搅拌。

2.在温水(40°C)中，通过用2mL异丙醇的超声处理20分钟，从而将水杨酸溶解在油中。

混合A和B：

将制剂B滴入制剂A(缓慢地)，并使用转子均化器以10,000rpm连续均化。添加剩余的WFI以补足重量。将最终的混合物在18,000rpm下均化10分钟(假定大部分异丙醇在该过程中蒸发)。

通过Malvern的Mastersizer2000分析了细乳液的样品。简言之，将2至3滴乳液滴入100mL的去离子水中。表9示出测试结果。

该实施例还证实了细乳液包含亲水性作用剂(盐酸利诺卡因)和亲脂性作用剂(水杨酸)的能力。

实施例12  细乳液治疗疼痛的用途

将上述实施例9和10所述的按比例放大的1kg批次用于治疗接受供皮位点换药的患者的疼痛。将乳液以喷雾剂(“NS喷雾剂”)形式递送并相对常规的含4%赛罗卡因的止痛喷雾剂(“赛罗卡因喷雾剂”)进行了测试。

患者被随机地分配接受赛罗卡因喷雾剂或NS喷雾剂的治疗。在该程序之后一小时，患者给出最终疼痛分数并评定他们的总体满意度。患者疼痛分数等级为10(疼痛的严重性没有降低)至0(疼痛完全缓解)，并且等于或大于给定值的平均分数被认为构成了有效的疼痛缓解。5.0以下且优选2.0以下的平均分数被认为构成了有效的疼痛缓解。

实施例13  疼痛分数分析

对于他们的最终疼痛分数，所有患者记录了小于5的疼痛分数(图10)。从图10中能够看出，NS喷雾剂治疗与赛罗卡因喷雾剂相比在降低疼痛方面稍微更有效。

基于1至5的等级，还询问了患者他们对治疗的满意度(其中1为非常满意，并且5为非常不满意)。用NS喷雾剂治疗的患者给出了1.4的平均满意分数(图11)。因此，患者对NS喷雾剂治疗非常满意，并且NS喷雾剂至少与标准疗法一样地管理疼痛，并且能够具有更长的持续作用。

Claims (22)

1.形成细乳液的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中所述细乳液包含平均直径为1μm以下的乳化颗粒。

2.如权利要求1所述的方法，其中在小于约80℃的温度和小于约1,000kPa的大气压力下进行步骤a.至d.。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述细乳液包含小于10%w/w的表面活性剂。

4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述细乳液包含约1%w/w至约5%w/w的亲脂性表面活性剂。

5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中所述细乳液包含约0.5%w/w至约5%w/w的亲水性表面活性剂。

6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中所述细乳液包含约0.5%w/w至约40%w/w的脂质。

7.如权利要求1或6所述的方法，其中所述乳化颗粒具有约10nm至约900nm的平均直径。

8.如权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其中所述乳化颗粒具有约600nm的平均直径。

9.如权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其中所述乳化颗粒在大于4℃的温度下至少1年保持稳定。

10.如权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其中所述适于形成细乳液的方式包括在连续混合期间，以连续流动或连续流形式向所述第一相添加所述第二相。

11.如权利要求10所述的方法，其中通过转子均化器以约5,000rpm至约20,000rpm的速度进行所述连续混合。

12.如权利要求1至11中任一权利要求所述的方法，其中所述细乳液还包含生物活性作用剂。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述细乳液包含约0.2%w/w至约15%w/w的生物活性作用剂。

14.组合物，其包含由权利要求1至13中任一权利要求所述的方法产生的乳化颗粒。

15.形成生物活性作用剂的递送体系的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的亲水性表面活性剂的水相；

b.将亲脂性表面活性剂分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含脂质和生物活性作用剂的第二相；

d.以适于形成细乳液的方式向所述第一相添加所述第二相，

其中所述递送体系包含平均直径为1μm以下的乳化颗粒。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述生物活性作用剂为亲脂性药物。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述亲脂性药物为利多卡因。

18.如权利要求15至17中任一权利要求所述的方法，其中所述递送体系是局部给药、肠内给药和非肠道给药的。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述局部给药通过气溶胶或喷雾剂进行。

20.形成生物活性作用剂的递送体系的方法，其包括：

a.提供包含分散在水中的聚山梨醇酯80的水相；

b.将磷脂酰胆碱分散在所述水相中以提供第一相；

c.提供包含大豆油和利多卡因的第二相；

d.向所述第一相以适于形成包含约0.5% w/w至约5% w/w的聚山梨醇酯80、约1% w/w至约5% w/w的磷脂酰胆碱、约0.5% w/w至约25% w/w的大豆油和约0.2% w/w至约5% w/w的利多卡因的细乳液的方式添加所述第二相，其中所述递送体系包含平均直径为1μm以下的乳化颗粒。

21.组合物，其包含由权利要求15至20中任一权利要求所述的方法产生的乳化颗粒。

22.在有需要的个体中通过向所述个体给予有效量的权利要求21所述的组合物而治疗或缓解疼痛的方法。

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