CN103320489A - 一种松籽蛋白源抗氧化肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域，涉及一种松籽蛋白源抗氧化肽及其制备方法。是以松子粕为原料，经过浸泡、粉碎、均质、蛋白质变性、酶解、离心、超滤、浓缩、真空冷冻干燥过程，获得分子量为1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、灰分为0.5～2.5%、DPPH清除率为80～90%的松籽蛋白源抗氧化肽。本发明的原料是松籽粕，用冷压榨技术处理，未接触任何有机提取溶剂，无对原料的污染，保存了松籽蛋白的原有的品质及功能；在原料低成本易获取的前提下，高效利用松籽中的优质蛋白，获得一种松籽源蛋白源抗氧化肽，保护了环境，实现了优质蛋白资源的有效增值利用，提高了松籽产品附加值。

Description

一种松籽蛋白源抗氧化肽及其制备方法

技术领域

本发明属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域，涉及一种松籽蛋白源抗氧化肽及其制备方法，能够获得一种分子量为1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、含水量1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%，DPPH清除率为80～90%的松籽蛋白源抗氧化肽。

背景技术

松籽又名罗松子、海松子、红松果等。红松籽仁是一种营养价值很高的果品，富含蛋白质、氨基酸、脂肪、脂肪酸、维生素、矿物质元素及生理活性物质。红松籽仁中蛋白质为17.6%，由18种氨基酸组成，组成较为齐全，特别是各种必需氨基酸的含量都相当丰富且普遍高于一般植物，红松籽仁中对人体生理作用有着重要功能的谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸含量均较高。包括所有人体必需氨基酸，其中谷氨酸含量最高达16.3%。松仁中所含的多种人体所必需的微量元素，对激活酶的活性、促进蛋白质合成、抗衰老、抗缺氧、抗辐射、增强体力、提高耐力、消除疲劳、增强人体免疫力都有很好的促进作用。因此，松籽蛋白是一种很好的蛋白源。

松籽是我国东北地区的重要天然资源，是一种经济价值很高的物种。由红松仁提取出的松籽蛋白肽具有很高的营养价值和药用价值，具有良好的免疫调节功能，能调动机体自身免疫系统，促进自身免疫能力的提高。目前为止，松籽加工副产物在我国食品工业中多数被当作废弃物排掉，附加值低，所以，如何更好的提高松籽的产品附加值，有效利用松籽加工副产物，特别是松籽中的优质蛋白资源，是松籽副产物综合利用的关键课题。前人只简单对红松籽蛋白的简单提取做出了研究，而对松籽蛋白肽的分离纯化技术鲜有报道，提高对松籽加工副产物的利用，特别是对松籽蛋白高效利用的关键技术亟待攻克。

抗氧化肽产品研究与开发已被国内外学者认定为热点问题与焦点问题。源于天然食品中的肽不仅比蛋白质本身更容易被人体消化吸收，还可促进人体对其他营养素如钙和铁的吸收。更重要的是，这些肽类具有清除自由基的生理活性。近年来，国内外学者从松籽、大豆、玉米、花生、牛乳、草鱼等动植物蛋白中提取分离了具有抗氧化活性的肽类。红松籽仁中蛋白质含量较高，氨基酸组成齐全，是一种优良的抗氧化肽源；但是，对于松籽蛋白肽抗氧化肽组分的分子量范围与其抗氧化活性组分的量效关系研究甚少。

已有的发明专利中，多是涉及松籽的开口、脱壳、整理、压榨，以及松籽饮品、食用油的开发与研究，本发明涉及一种松籽蛋白源抗氧化肽及其制备方法，在原料低成本，易获取的前提下，高效利用了松籽中的优质蛋白。本专利所采用的原料，来源于红松榨油后产生的的副产物，即松籽粕，其特征在于是采用冷压榨技术处理，未接触任何有机提取溶剂，无化学试剂对原料的污染，保存了松籽蛋白的原有的品质及功能。对松籽粕中的优质蛋白进行了提取、分离、浓缩、冻干等研究，获得了一种松籽蛋白源抗氧化肽，其DPPH清除率可达80～90%，对松子粕蛋白的有效利用，保护环境，同时又提高了松籽的产品附加值。

本申请发明专利的技术优势分析

第一，本专利所采用的原料来源广泛，成本低，且无污染。

（1）本发明松子粕源于红松榨油后产生的的副产物，其特征在于是采用冷压榨技术处理，未接触任何有机提取溶剂，无化学试剂对原料的污染，保存了松籽蛋白的原有的品质及功能，实现了对松籽优质蛋白资源的有效增值利用。

（2）本发明是以松子粕原料，而不是以松籽分离蛋白作为原料，这样使松籽源抗氧化肽生产工艺大大简化，明显降低成本。

第二，本发明采用酶解技术、超滤技术方便有效地分离出一种松籽源抗氧化肽，使用DPPH清除率测定法对其抗氧化活性进行评价;

（1）本发明使用碱性蛋白酶对松子粕进行酶解，获得了松子粕蛋白肽液，实现了对松籽优质蛋白资源的有效增值利用；

（2）采用超滤技术方便有效地分离出一种1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、含水量1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%的松籽源抗氧化肽；

（3）本专利采用DPPH清除率法，作为一种松籽源抗氧化肽抗氧化活性的衡量指标，经测定，DPPH清除率可达80～90%。

发明内容

本发明申请所需要解决的技术问题是：公开一种利用超滤技术分离制备1000～3000Da松籽源抗氧化活性肽的方法。

本发明的技术方案：

1.一种松籽蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征在于，是以松籽粕为原料，经过浸泡、粉碎、均质、蛋白质变性、酶解、灭酶、离心、超滤、浓缩、真空冷冻干燥过程，获得分子量为1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、含水量1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%，DPPH清除率为80～90%的松籽蛋白源抗氧化肽；其中松籽粕是指红松籽采用冷压榨法后的副产物，其蛋白质含量为20～34%，脂肪含量为25～35%，淀粉含量为30～35%；

1）所述的浸泡过程，是指以松籽粕为原料，在环境温度为18～25℃的条件下，按照松籽粕与水的比例为5:100g/mL～10:100g/mL范围内进行混合，浸泡12～18h后备用；

2）所述的粉粹过程，是指将浸泡后的松籽粕置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数，功率为2.0～5.0KW，转速2500～3000r/min，反复处理时间为15～20min，直至松籽粕被粉碎至颗粒度直径达2～50μm，收集粉碎液；

3）所述的均质过程，是指将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为5000～10000r/min，均质5～10min后备用；

4）所述的蛋白质变性过程，是指将均质液至于反应釜中，开启搅拌器使其转速为15～25r/min，同时加热升温使其内料液温度为85～95℃时，保温为5～15min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至40～50℃后，维持恒温和搅拌状态，即为松籽粕蛋白变性液；

5）所述的酶解过程，是指利用8.0～10.0mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为6.0～9.0；称取初始松籽粕质量的6～12%的液体碱性蛋白酶，投入反应釜中，继续用5～10mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH6.0～9.0；酶解温度为40～50℃，酶解时间为1.0～3.0h，获得松籽粕蛋白酶解液；

6）所述的灭酶过程，是指将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至90～95℃时，保温10～30min后，冷却至5～20℃备用；

7）所述的离心过程，是指将上述冷却液进行离心处理，离心温度为0～4℃，转速为8000～10000r/min，离心时间为10～20min，收集上清液，利用5.0～8.0mol/L盐酸调节上清液pH为7.0～7.5，获得松籽蛋白肽液，置于4℃保存备用；

8）所述的超滤过程，是指将pH为7.0～7.5的松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为1.0～2.0mL/min，控制进口压力为10～30psi，回流压力为5～20psi，收集膜下液，获得分子量为1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液；

9）所述的浓缩过程，是指将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1000～1500rpm，温度50～60℃，浓缩汁初始体积的1/3～1/10，收集获得分子量为1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，冷却至5～20℃备用；

10）所述的真空冷冻干燥过程，是指将5～20℃的1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于于400×200mm的冷冻盘中，厚度为2～6mm；置于预冻温度为-35～-30℃冷冻库中，预冻时间为1～2h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-60～-50℃，真空度压力设定为20～60Pa，冻干时间为10～15h，获得一种分子量为1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、含水量为1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%、DPPH清除率为80～90%的松籽蛋白源抗氧化肽。

2．根据权利要求1中所述的浸泡过程，其特征在于，水是pH为7.0的去离子水。

3.根据权利要求1中所述的均质过程，其特征在于，利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为5000～10000r/min，均质5～10min；

4.根据权利要求1所述的酶解过程，其特征在于，所用的液体碱性蛋白酶Alaclase为酶活力为2.4AU的FG2.4L。

5.根据权利要求1所述的超滤过程，其特征在于，利用分子截流量为1000～3000Da的超滤膜，控制酶解液在循环管路中的恒流速度为1.0～2.0mL/min，控制进口压力为10～30psi，回流压力为5～20psi。

6.根据权利要求1-5所述的松籽粕，其特征在于，是以红松籽为原料，通过冷压榨技术处理后，获得的副产物；其蛋白质含量为20～34%，脂肪含量为25～35%，淀粉含量为30～35%，水分含量为2～4%，灰分含量为5～7%。

7.一种权利要求1松籽蛋白源抗氧化肽的制备方法制得的松籽蛋白源抗氧化肽。

8.根据权利要求7所述的松籽蛋白源抗氧化肽，其特征在于，松籽蛋白源抗氧化肽的分子量为1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、含水量1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%、DPPH清除率为80～90%。

本发明技术效果：

（1）申请发明是以松籽粕为原料，采用在酶解后，采用超滤技术，对酶解液组分进行分离，得到一种蛋白质含量为分子量为1000～3000Da、95.0～98.0%、含水量1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%、DPPH清除率为80～90%的松籽蛋白源抗氧化肽；

（2）本发明设计的工艺路线便捷，投入设备较少，可用于工业推广。

具体实施方式

实施例1：

以蛋白含量20%的松籽粕为原料，去离子水温度为19℃，按照松籽粕与水的比例为5:100g/mL进行混合，浸泡18h后置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数，功率为2.5KW，转速3000r/min，反复处理18min；将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为6000r/min，均质5min。将均质液置于反应釜中，开启搅拌器使其转速为25r/min，同时加热升温使其内料液温度为85℃时，保温为9min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至40℃后，维持恒温和搅拌状态，利用8.0mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为6.0；称取初始松籽粕质量的6%的液体碱性蛋白酶投入反应釜中，继续用5mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH6.0，酶解温度为45℃，酶解时间为1.5h，将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至95℃，保温15min后冷却。将上述冷却液进行离心处理，离心温度为0℃，转速为10000r/min，离心时间为20min，收集上清液，再用5.5mol/L盐酸调节上清液pH为7.0，获得松籽蛋白肽液。将松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为2.0mL/min，控制进口压力为10psi，回流压力为5psi，收集膜下液，即为1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，将其置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1000rpm，温度60℃，浓缩至初始体积的1/10，冷却至18℃，获得松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液。将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于400×200mm的冷冻盘中，厚度为2mm；置于预冻温度为-30℃冷冻库中，预冻时间为1h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-50℃，真空度压力设定为60Pa，冻干时间为10h，获得蛋白含量为95.0%、含水量1.0%、分子量为1000～3000Da、灰分为2.5%、DPPH清除率为88%的松籽蛋白源抗氧化肽。

实施例2：

以蛋白含量30%的松籽粕为原料，去离子水温度为25℃，按照松籽粕与水的比例为8:100g/mL进行混合，浸泡15h后置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数功率为2.0KW，转速2500r/min，反复处理时间为10min，将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为5000r/min，均质10min，将均质液至于反应釜中，开启搅拌器使其转速为15r/min，同时加热升温使其内料液温度为92℃时，保温为5min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至50℃后，维持恒温和搅拌状态，利用9.5mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为8.0时；称取初始松籽粕质量的12%的液体碱性蛋白酶投入反应釜中，并继续用8mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH8.0；酶解温度为40℃，酶解时间为1.0h，将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至90℃时，保温10min后，将上述冷却液进行离心处理，离心温度为3℃，转速为8500r/min，离心时间为12min，收集上清液后，再用5.0mol/L盐酸调整上清液，使其pH为7.5，将pH为7.5松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为1.3mL/min，控制进口压力为12psi，回流压力为8psi，收集膜下液，即为1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，将其置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1500rpm，温度55℃，浓缩汁初始体积的1/8，冷却至15℃，获得1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液。将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于于400×200mm的冷冻盘中，厚度为3mm；置于预冻温度为-31℃冷冻库中，预冻时间为1h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-58℃，真空度压力设定为20Pa，冻干时间为12h，获得蛋白质含量为95.5%、含水量1.5%分子量为1000～3000Da、灰分为0.6%、DPPH清除率为82%的松籽蛋白源抗氧化肽。

实施例3：

以蛋白含量34%的松籽粕为原料，去离子水温度为20℃，按照松籽粕与水的比例为10:100g/mL进行混合，浸泡17h后置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数功率为3.5KW，转速2800r/min，反复处理时间为17min，将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为8000r/min，均质8min，将均质液至于反应釜中，开启搅拌器使其转速为18r/min，同时加热升温使其内料液温度为95℃时，保温为8min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至45℃后，维持恒温和搅拌状态，利用10.0mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为9.0时；称取初始松籽粕质量的7%液体碱性蛋白酶投入反应釜中，并继续用10mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH9.0；酶解温度为50℃，酶解时间为3.0h，将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至93℃时，保温20min后，将上述冷却液进行离心处理，离心温度为4℃，转速为9500r/min，离心时间为15min，收集上清液后，再用8.0mol/L盐酸调整上清液，使其pH为7.2，将pH为7.2松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为1.8mL/min，控制进口压力为20psi，回流压力为10psi，收集膜下液，将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1300rpm，温度50℃，浓缩汁初始体积的1/5，冷却至20℃，获得1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液。将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于于400×200mm的冷冻盘中，厚度为4mm，置于预冻温度为-33℃冷冻库中，预冻时间为1h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-55℃，真空度压力设定为50Pa，冻干时间为15h，获得蛋白质含量为98.0%、含水量3.0%分子量为1000～3000Da、灰分为0.5%、DPPH清除率为85%的松籽蛋白源抗氧化肽。

实施例4：

以蛋白含量25%的松籽粕为原料，去离子水温度为18℃，按照松籽粕与水的比例为6:100g/mL进行混合，浸泡13h后置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数功率为5.0KW，转速2600r/min，反复处理时间为20min，将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为7000r/min，均质6min，将均质液至于反应釜中，开启搅拌器使其转速为22r/min，同时加热升温使其内料液温度为91℃时，保温为15min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至47℃后，维持恒温和搅拌状态，利用8.5mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为7.0时；称取初始松籽粕质量的8%液体碱性蛋白酶投入反应釜中，并继续用9mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH7.0；酶解温度为46℃，酶解时间为2.5h，将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至92℃时，保温30min后，将上述冷却液进行离心处理，离心温度为1℃，转速为8000r/min，离心时间为18min，收集上清液后，再用6.0mol/L盐酸调整上清液，使其pH为7.1，将pH为7.1松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为1.9mL/min，控制进口压力为25psi，回流压力为12psi，收集膜下液，将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1200rpm，温度58℃，浓缩汁初始体积的1/3，收集获得1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，，冷却至9℃，将9℃的1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于于400×200mm的冷冻盘中，厚度为1mm；置于预冻温度为-35℃冷冻库中，预冻时间为1h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-59℃，真空度压力设定为40Pa，冻干时间为11h，获得蛋白质含量为96.5%、含水量2.5%分子量为1000～3000Da、灰分为1.5%、DPPH清除率为81%的松籽蛋白源抗氧化肽。

实施例5：

以蛋白含量28%的松籽粕为原料，去离子水温度为22℃，按照松籽粕与水的比例为7:100g/mL进行混合，浸泡12h后置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数功率为4KW，转速2900r/min，反复处理时间为15min，将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为10000r/min，均质7min，将均质液至于反应釜中，开启搅拌器使其转速为20r/min，同时加热升温使其内料液温度为88℃时，保温为6min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至42℃后，维持恒温和搅拌状态，利用8.8mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为8.5时；称取初始松籽粕质量的10%液体碱性蛋白酶投入反应釜中，并继续用6mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH8.5；酶解温度为42℃，酶解时间为2.0h，将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至94℃时，保温25min后，将上述冷却液进行离心处理，离心温度为2℃，转速为10000r/min，离心时间为14min，收集上清液后，再用7.0mol/L盐酸调整上清液，使其pH为7.4，将pH为7.4松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为1.0mL/min，控制进口压力为30psi，回流压力为20psi，收集膜下液，将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1100rpm，温度53℃，浓缩汁初始体积的1/4，冷却至5℃获得1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液。将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于于400×200mm的冷冻盘中，厚度为5mm，置于预冻温度为-32℃冷冻库中，预冻时间为1h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-60℃，真空度压力设定为30Pa，冻干时间为13h，获得蛋白质含量为97.0%、含水量2.0%、分子量为1000～3000Da、灰分为2.0%、DPPH清除率为80%的松籽蛋白源抗氧化肽。

Claims (8)

1.一种松籽蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征在于，是以松籽粕为原料，经过浸泡、粉碎、均质、蛋白质变性、酶解、灭酶、离心、超滤、浓缩、真空冷冻干燥过程； 

1）所述的浸泡过程，是指以松籽粕为原料，在环境温度为18～25℃的条件下，按照松籽粕与水的比例为5:100g/mL～10:100g/mL范围内进行混合，浸泡12～18h后备用； 

2）所述的粉粹过程，是指将浸泡后的松籽粕置于胶体磨中进行粉碎，设置胶体磨工作参数，功率为2.0～5.0KW，转速2500～3000r/min，反复处理时间为15～20min，直至松籽粕被粉碎至颗粒度直径达2～50μm，收集粉碎液； 

3）所述的均质过程，是指将粉碎液利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为5000～10000r/min，均质5～10min后备用； 

4）所述的蛋白质变性过程，是指将均质液至于反应釜中，开启搅拌器使其转速为15～25r/min，同时加热升温使其内料液温度为85～95℃时，保温为5～15min后，再开启冷却器，使反应釜中料液温度降低至40～50℃后，维持恒温和搅拌状态，即为松籽粕蛋白变性液； 

5）所述的酶解过程，是指利用8.0～10.0mol/L的氢氧化钠溶液调整反应釜中的松籽粕蛋白变性液pH为6.0～9.0；称取初始松籽粕质量的6～12%的液体碱性蛋白酶，投入反应釜中，继续用5～10mol/L的氢氧化钠溶液使反应釜中溶液的维持pH6.0～9.0；酶解温度为40～50℃，酶解时间为1.0～3.0h，获得松籽粕蛋白酶解液； 

6）所述的灭酶过程，是指将反应釜中松籽粕蛋白酶解液迅速升温至90～95℃时，保温10～30min后，冷却至5～20℃备用； 

7）所述的离心过程，是指将上述冷却液进行离心处理，离心温度为0～4℃，转速为8000～10000r/min，离心时间为10～20min，收集上清液，利用5.0～8.0mol/L盐酸调节上清液pH为7.0～7.5，获得松籽蛋白肽液，置于4℃保存备用； 

8）所述的超滤过程，是指将pH为7.0～7.5的松籽蛋白肽液进行超滤处理，膜分子截流量为1000～3000Da，恒流速度为1.0～2.0mL/min，控制进口压力为10～30psi，回流压力为5～20psi，收集膜下液，获得分子量为1000～3000Da 的松籽蛋白源抗氧化肽液； 

9）所述的浓缩过程，是指将1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽液，置于真空旋转蒸发器中，控制转速为1000～1500rpm，温度50～60℃，浓缩汁初始体积的1/3～1/10，收集获得分子量为1000～3000Da的松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，冷却至5～20℃备用； 

10）所述的真空冷冻干燥过程，是指将5～20℃的1000～3000Da松籽蛋白源抗氧化肽浓缩液，分装于于400×200mm的冷冻盘中，厚度为2～6mm；置于预冻温度为-35～-30℃冷冻库中，预冻时间为1～2h后，再移至真空冷冻干燥机中，制冷温度设定为-60～-50℃，真空度压力设定为20～60Pa，冻干时间为10～15h，获得松籽蛋白源抗氧化肽。 

2.根据权利要求1中所述的浸泡过程，其特征在于，水是pH为7.0的去离子水。 

3.根据权利要求1中所述的均质过程，其特征在于，利用高速分散均质机进行均质化处理，控制转速为5000～10000r/min，均质5～10min。 

4.根据权利要求1所述的酶解过程，其特征在于，所用的液体碱性蛋白酶Alaclase为酶活力为2.4AU的FG2.4L。 

5.根据权利要求1所述的超滤过程，其特征在于，利用分子截流量为1000～3000Da的超滤膜，控制酶解液在循环管路中的恒流速度为1.0～2.0mL/min，控制进口压力为10～30psi，回流压力为5～20psi。 

6.根据权利要求1-5所述的松籽蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述的松籽粕，是以红松籽为原料，通过冷压榨技术处理后，获得的副产物；其蛋白质含量为20～34%，脂肪含量为25～35%，淀粉含量为30～35%，水分含量为2～4%，灰分含量为5～7%。 

7.一种权利要求1松籽蛋白源抗氧化肽的制备方法制得的松籽蛋白源抗氧化肽。 

8.根据权利要求7所述的松籽蛋白源抗氧化肽，其特征在于，松籽蛋白源抗氧化肽的分子量为1000～3000Da、蛋白质含量为95.0～98.0%、含水量1.0～3.0%、灰分为0.5～2.5%、DPPH清除率为80～90%。