CN103285383A - 一种包含菠萝蛋白酶的药物组合物及菠萝蛋白酶肠溶片 - Google Patents

Abstract

本申请属于药物制剂技术领域，具体涉及一种包含菠萝蛋白酶的片剂的药物组合物，特别是涉及菠萝蛋白酶肠溶片。一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为片剂；包含菠萝蛋白酶或其药学上可以接受的盐的形式，和聚乙二醇。本申请发现了新的技术问题，并解决了该技术问题，提供了一种稳定的含菠萝蛋白酶的片剂药物组合物，并取得了预料不到的技术效果。

Description

一种包含菠萝蛋白酶的药物组合物及菠萝蛋白酶肠溶片

技术领域

本申请属于药物制剂技术领域，具体涉及一种包含菠萝蛋白酶的片剂的药物组合物，特别地涉及菠萝蛋白酶肠溶片。

背景技术

菠萝蛋白酶片剂已见临床上各种应用，主要有菠萝蛋白酶肠溶片、复方菠萝蛋白酶肠溶片、以及其它包含菠萝蛋白酶的复方片剂。其中，以菠萝蛋白酶肠溶片为例，是用于手术后感染，即作为抗微生物剂，用于骨节急性发炎、乳腺炎、腮腺炎、蜂窝组织炎、慢性血栓静脉炎、支气管炎、肾盂肾炎等辅助治疗。为药效学酶类药，作用机理是，能催化蛋白质分子中肽键裂解，使蛋白质、肽、脂和酰胺等物质分解，具有抗炎，消水肿作用。口服：一次3万～9万单位，一日9万～12万单位。

而且，菠萝蛋白酶由于其能作为胆汁酸受体拮抗剂而阻止通过胃肠道吸收胆汁酸，因此，菠萝蛋白酶还具有预防或治疗高胆固醇血症、甘油三脂、以及类似疾病的用途（WO95/22348 A1）。也可以用于调节依赖于肌醇磷酸蛋白激酶和/或蛋白磷酸酶的细胞内信号途径，用于免疫性疾病及癌症的辅助治疗等（WO96/00082 A1）。

菠萝蛋白酶肠溶片作为药物，最早的资料见于国家药品监督管理局颁布的早期的国家药品标准，包括菠萝蛋白酶肠溶片、菠萝蛋白酶的质量标准，WS1-XG-046-2000、WS1-XG-045-2000。同样地，复方菠萝蛋白酶肠溶片、以及其它包含菠萝蛋白酶的复方片剂，也可见国家药品监督管理局、药典委员会、卫生部颁布或各省市颁布的各类国家药品标准或地方标准。然而，各类标准或文献中均没有涉及菠萝蛋白酶制剂或复方制剂的具体制备工艺，也没有公开如何进行菠萝蛋白酶制剂或复方制剂的改进。国内各制药企业，也仅仅是根据自己的生产工艺尝试性地进行生产，并未形成规模化的产业。

发明内容

一、药检问题与技术问题发现

    1、药检劣药问题的出现

本发明的研究人员查阅资料发现，菠萝蛋白酶作为药物使用，在我国至少有三十年历史了，特别是在两广地区。而且，菠萝蛋白酶的药效是被多种资料披露的，一直以来疗效非常值得肯定。然而，随着人们对药品质量标准的重视，国家药监部门批准多种含菠萝蛋白酶的制剂，也颁布了相应的质量标准，但是，特别是近年来，市场上却很难购买或很少能够买到这些含菠萝蛋白酶的制剂，只有少数的企业零星地进行生产，以维持最基本的生产需要，并没有进行市场推广。另一种现象是，市场上的菠萝蛋白酶制剂，例如菠萝蛋白酶、复方菠萝蛋白酶肠溶片，常被各地药检单位披露不合格的报道。这些报道有的是涉及性状如色泽不合格、有的是涉及效价不合格、有的还涉及崩解时限、溶出度等，即为劣药。这一不良现象的出现，更加大大影响该类制剂在市场的应用，也使得菠萝蛋白酶的应用前景蒙上厚厚的一笔阴影。

2、技术问题的发现

为什么在含有菠萝蛋白酶片剂的制剂上出现药检劣药等上述现象，本发明的研究人员尝试从各个角度去研究该制剂，特别是从技术的角度寻找其中的存在的技术问题，并解决该问题。从市场上，研究人员收集了7个批次的菠萝蛋白酶肠溶片（生产企业，略），及第8批（海南同盟药业）。为了确保实验的准确性，收集的菠萝蛋白酶肠溶片均在距离生产日期3-6个月的期限内进行第一次检定。检验的依据为国家药品监督管理局颁布的国家药品标准，菠萝蛋白酶肠溶片、菠萝蛋白酶的质量标准WS1-XG-046-2000、WS1-XG-045-2000，以及中国药典2010版第二部关于片剂的项目检测。其中，主要包括了测定菠萝蛋白酶肠溶片的效价，效价合格标准为，不得低于标示量的85％。在完成第一次测定后，将样品至于30℃/65%湿度的恒温箱中，按照中国药典2010版第二部关于稳定性加速实验的方法，进行3个月的加速实验。结果如表1及下面内容所示。

表1    市售菠萝蛋白酶肠溶片的3个月的加速实验（30℃）

     没有疑义的是，上述7个批次的菠萝蛋白酶在第一次测定时（即各类产品出厂才3-6个月时），就或多或少地存在了不合格的现象。之后，经过简单的3个月的加速实验（30℃），则非常明显地出现了不合格的现象，以至于全部的7批样品都不能耐受30℃/65%湿度，3个月。也就是说，只要3个月，最关键的效价指标迅速下降至不合格显著。本发明根据这样的第一次、第二次比较实验后，得出了结论并验证了上述劣药现象的出现。显然，根据药物领域的常识，没有一个企业会去生产这样不稳定的药物，这就解释了，目前含菠萝蛋白酶制剂逐渐退出的市场的原因。

然而，造成上述现象的原因是什么呢？技术问题在哪里？可能是生产工艺造成的（例如投料不准确，或者是工艺不当），可能是贮藏或流通环节处理不当（例如包装的破损、受热等），可能是原料的不规范。本发明研究人员经过慎重分析后，认为这种不稳定性的原因虽然是多种多样的，但其中最关键的一点，应该是由于菠萝蛋白酶本身不稳定造成的，造成效价下降很快，颜色形状也可能随之发生显著的变化。于是，研究人员又经过了一系列的反复实验，证实了这一点推测。正式基于这一点，研究人员把菠萝蛋白酶片剂出现药检不合格现象，过渡到片剂制剂稳定性的解决的技术问题上。进一步地，研究人员并找到了通过关键的稳定剂的选择实验，找到解决菠萝蛋白制剂不稳定的技术问题的办法，进而将可能彻底解决含有菠萝蛋白酶片剂出现劣药的可能性。显然，这种过渡并非一蹴而就的；而且，片剂为何会存在这种技术问题，且采用何种技术问题，都是经过研究人员深思熟虑后和反复的实验得出的。

进一步地，本发明研究人员发现，目前含有菠萝蛋白酶的片剂之所以存在上述问题，与两个关键技术问题有关。技术问题1：片剂的制备工艺，主要体现在，压片过程中，即压片的瞬间足以让其分解30％，甚至更多以上。研究人员经过反复验证发现（各实验三次），将菠萝蛋白酶与可压性较好的甘露糖进行简单混和，以及将混合好的菠萝蛋白酶和甘露糖直接压制成素片（50N）。这一简单的压片过程，也就是不到0.1秒的时间，使得菠萝蛋白酶的效价损失至少30%（如果降低压力，且采用工业化的大型设备，降解情况能略微改善）。而且，压制完的素片片芯有大量黑点。技术问题2：肠溶片长期不稳定性，表现为：在30摄氏度下，三个月后，效价即变得不合格，且片芯明显变褐色。上述两个技术问题及其解决的办法，在本发明实施部分还将详细讨论和分析。

 

二、技术问题的解决

（一）文献报道的菠萝蛋白酶及相关制剂的稳定性

菠萝蛋白酶是一种巯基蛋白酶，存在于菠萝植株中，根据提取分离部位的不同分为果实蛋白酶和茎蛋白酶，在食品、医药等行业中有广泛的用途。通常地，作为药用的菠萝蛋白酶是从菠萝的果皮中提取的。作为一种巯基蛋白酶，菠萝蛋白酶在应用中的主要不足就是其活性的不稳定性，尤其是它的不耐热性。另外，巯基蛋白酶的不稳定性主要原因有两个：一是其活性中心中的巯基状态由于氧化而改变，当其中的 SH-SH 变成 S-S 时，酶便被钝化，二是由于构象的改变而失活。因此，提高菠萝蛋白酶的热稳定性，延长酶的稳定性就成为待其应用的关键。下面，对菠萝蛋白酶及其制剂的稳定化研究进行介绍。

在酶类、蛋白类药物或活性物质的研究中，关于其稳定化研究，通常的研究的方向是：维系酶分子三维构象的作用力包括：氢键、疏水相互作用、静电相互作用、范德华力，有些还包括共价二硫键，蛋白质分子不管是变性、还是增强稳定性，都是通过影响这些作用力来实现的。如Ca²⁺在α溶菌醉分子内部，通过和酶分子的羧基或羰基的静电作用，增强了酶分子各部分之间的紧密程度，因为在酶分子的琉水内环境中，静电作用是相对较强的。但总的来看，氮健、疏水相互作用在增强酶的稳定性方面起，主要作用。

那么，即使就解决菠萝蛋白酶的稳定性而言（应该注意的是，菠萝蛋白酶的稳定性，和解决菠萝蛋白酶片剂的稳定性不是等同的概念，后者涉及了太多的制剂工艺及存放稳定的问题），是不是很简单的一个技术问题呢？事实证明，事情远远没有这么简单，具有看看如下文献的报道，即菠萝蛋白酶的稳定性的研究。另外，还应该引起注意的是，原料的稳定性和片剂制剂的稳定性不是等同的概念；具体地说，原料稳定不代表片剂制剂稳定。在某些情况下，原料是制剂稳定前提，但某些情况下，制剂可能比原料稳定。

内容一：主流方向的稳定化研究

看看主流的关于菠萝蛋白酶稳定性的研究内容，就知道目前市场上的含菠萝蛋白酶片剂为何不稳定了。欧英杰（欧英杰，菠萝蛋白酶酶活力影响因素及测定酶活力方法的研究进展，广东化工，2010 年，第37卷，第5期，第49-51页）进行了综述性的报道。梳理一下，欧英杰概括主要提高菠萝蛋白酶活力的方法为：（1）湿度、温度和pH的影响作用显著。（2）糖类和多元醇，具体地，50 %葡萄糖可将菠萝蛋白酶的半寿期延长10倍，具有显著保护作用；40 %半乳糖也有一定的保护作用，半寿期提高3倍，蔗糖、麦芽糖、棉子糖和松三糖均有明显的保护作用，50 %甘油可将菠萝蛋白酶的半寿期延长8倍，乙二醇和甘露醇对菠萝蛋白酶有一定的保护作用，葡聚糖和肌醇则没有保护作用。（3）金属离子，，Fe3+、Fe2+、Cu2+对浸提液中菠萝蛋白酶的活性具有较明显的抑制作用，其中Fe3+的影响最大。而浸提液中的Ca2+含量在20～40 mg/L 时，有利于提高酶的稳定性。（4）未经修饰的聚乙二醇对菠萝蛋白酶有抑制作用（即直接添加聚乙二醇），当聚乙二醇浓度为40 %时，抑制作用最明显，酶活仅存有原酶活的85.5 %。用琥珀酸酐法活化的聚乙二醇对菠萝蛋白酶进行化学修饰，得到菠萝蛋白酶的修饰酶，则可以提高酶的热和酸碱稳定性。（5）有机溶剂将果菠萝蛋白酶分别加至不同浓度有机溶剂中处理60 min，分别在含对应浓度的有机溶剂的测活体系中测定它们的剩余酶活力，随着有机溶剂浓度增大，酶活力呈直线下降。（6）硫代硫酸钠和半胱氨酸，菠萝蛋白酶在提取分离和干燥过程中，酶的活性中心巯基易被氧化而使酶活性降低。林韶湘等研究表明，在提取过程中适当加入某些抗氧化剂，对阻止酶被氧化失活有良好作用。其中以硫代硫酸钠和半胱氨酸的组合最为明显。（7）其它酶活力稳定剂，纯菠萝蛋白酶在室温下贮存1 个月，酶活力大约下降20 %～30 %。Heinicke R.M.报导，添加苯甲酸钠，贮存1个月后酶活力比对照组提高14 %；添加C-半胱氨酸，贮存1个月后酶活力比对照组提高20 %。据Renee报导，添加焦亚硫酸钠，在15 ℃下避光保存2 个月酶活力保持不变。据Liang H H报道，茶多酚与菠萝蛋白酶的结合能使菠萝蛋白酶在60 ℃下贮存的半衰期提高1 倍。据潘江球等报导，Polyacrylamide(PAAM)稳定剂可使酶失活半衰期延长108 d，明显提高了酶的稳定性。

然而，虽然该文献大量地罗列了各种因素对菠萝蛋白酶酶活力的影响并得出结论，其中某些因素具有提高酶活力的作用，某些因素则会抑制酶活力，这似乎等于没有“结论”的结论，即并没有给出一个肯定的结论。而且，本领域研究菠萝蛋白酶片剂的研究人员也都能看到这篇文章，会去作出改进，然而，事实是，目前的市售的含有菠萝蛋白酶的片剂，的确存在严重的不合格的问题。研究人员验证了这篇文章的部分方法（例如，加入葡萄糖到菠萝蛋白酶片剂中），发现根本解决了菠萝蛋白酶肠溶片的稳定性问题，仍然是出现不合格现象。原因很简单，如上面指出的，（1）应该注意的是，菠萝蛋白酶的稳定性，和解决菠萝蛋白酶片剂的稳定性不是等同的概念，后者涉及了太多的制剂工艺及存放稳定的问题；（2）该文章菠萝蛋白酶酶活力不能和菠萝蛋白酶的稳定性进行等同，（3）该文献概括的内容还不全面。

同样地，这些主流研究的观点和研究还包括如下具体的研究报道，也都存在上述的普遍问题。

李兴等（李兴 等，某些因素对菠萝中菠萝蛋白酶热稳定性的影响，药物生物技术，2001年，第8卷，第6期，第339-341期）发现，当温度恒定时Ａ，菠萝中菠萝蛋白酶的热失活过程遵循一级蜕变规律：＝Ｋｄ·ｔ，失活半寿期是常数，可以用作衡量菠萝蛋白酶热稳定性的指标。某些羧酸盐和金属离子如钙离子、锌离子能明显延长菠萝蛋白酶在较高温度下的半寿期。这些物质的稳定化作用可能是由于它们影响了溶剂结构和疏水相互作用，从而维护了酶分子的活性三维构象的结果。这一结果，与潘红球 等（潘红球 等，polyacrylamide 对菠萝蛋白酶活力的稳定化作用，热带作物学报，2002年12月，第23卷，第4期，第29-32页）发现的结果存在一定一致性，polyacrylamide 对菠萝蛋白酶活力的具有稳定化作用。具体地，添加PAAM稳定剂，可以使得菠萝蛋白酶的半衰期由109天，提高到209天。也与王晓敏 等（王晓敏 等，Ca²⁺和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响，现代食品科技，2008年，第24卷，第9期，第870-872页）的研究结果一致。Ca²⁺与菠萝蛋白酶作用后，酶的半衰期均有所延长。

薛力荔 等，（薛力荔 等，不同添加物对菠萝蛋白酶酶活稳定性和抑制作用的影响，肉类研究，2011年）报道，选择几种添加物于菠萝蛋白酶酶液中,并在不同pH值缓冲液中保存,定期测定其酶活力,研究添加物及缓冲液对菠萝蛋白酶的稳定性和抑制作用的影响。结果显示:VB1、L-半胱氨酸、异抗坏血酸钠、NaCl对菠萝蛋白酶酶活均有促进作用。保存的第1天,添加0.100g/100mL VB1的酶活比对照组提高了22%。添加0.2g/100mLL-半胱氨酸、0.005g/100mL异抗坏血酸钠的酶活比对照组分别提高了60%、37%。而NaNO2、乙酸锌、ZnCl2对菠萝蛋白酶酶活都有一定的抑制作用。随着NaNO2浓度的升高，抑制作用逐渐增强。乙酸锌、ZnCl2能将菠萝蛋白酶酶活分别降低到原酶活力的11%、1%。而KCl和NaNO3对菠萝蛋白酶活力影响不显著。

黄卓烈（黄卓烈，菠萝果蛋白酶生产工艺的改进，植物资源与环境，1993年，第2卷，第1期，第25-30页）用08~0.1%的丹宁作沉淀剂较适宜，既可保持产品质量，又可兼顾产品产量。酶膏在-12℃以下低温冻结和真空干燥两个因素能显著提高产品酶活性；1000μg/g硫代硫酸钠加62.5μg/g半胱氨酸是菠萝果蛋白酶活性的有效保护剂，可使酶活性比对照提高32.57%，提取过程中用抗坏血酸、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠和醋酸锌溶液对酶复合物进行洗涤可有效地提高产品的活性和质量。H.H. Liang 等（H.H. Liang 等，Properties of tea-polyphenol-complexed bromelain，Food Research International，1999年，第 32卷，第545-551页）也得到了相似的茶多酚的稳定化的结论。

章佩芬等（章佩芬 等，菠萝蛋白酶的保存稳定性研究，药物生物技术，2002，9 (3)：163-164），评价了菠萝蛋白单宁提取物原料的稳定性。针对菠萝蛋白酶稳定性方面存在的实际问题，研究了湿度条件、温度条件及60co7辐射对菠萝蛋白酶活性的影响，结果表明，随着储存时间的延长，湿度条件比温度条件更能影响酶的活性。具体在13天、35天、105天、315天测定酶的活性，相对湿度为0.1%时，分别为95.5、93.2、93.0、92.4%；相对湿度为75%时，分别为87.9、86.0、80.3、80.0％。具体在32天、78天、285天测定酶的活性，温度29度时，分别为90.8、85.2、83.7%；温度55度时，分别为78.9、77.0、68.0％。选用功Coy辐射(8kGy)对菠萝蛋白酶进行杀菌，酶活损失率为11.0%。由此可知，菠萝蛋白酶原料本身就很不稳定，微小的条件的改变，如上述的湿度、温度或采用辐照条件，就可以导致菠萝蛋白大量分解。

通常地，认为糖类物质对蛋白类物质有稳定作用，例如海藻糖，是一种非常广泛应用的蛋白及酶类物质保护剂。然而，S. Habib等（S. Habib等，Thermal Destabilization of Stem Bromelain by Trehalose，The Protein Journal,，2007年，第26卷，第2期，第117-124页）发现，海藻糖对菠萝蛋白酶具有去稳定化的作用。这一些报道可以看出，菠萝蛋白酶是一种非常规的酶类，它的稳定性不符合本领域的一些通用的稳定规定，同时也大大增加了研究者对其进行研究的难度。

内容二：其它类的稳定剂的研究

在这里，不得不提一下本发明的采用的技术手段聚乙二醇。

通常地，有机溶剂或有机类溶剂物质对酶会产生负面的稳定化作用，即去稳定化作用。最早涉及在菠萝蛋白酶的制剂中使用有机溶剂或有机类溶剂作为稳定剂的文献应该是DE1617626 A1，这篇文献中介绍了采用重均分子量聚乙二醇200-1000，例如聚乙二醇200、400、600、1000作为稳定剂，制备的胶囊剂，并非片剂。然而，该文献仅仅给出了其软胶囊制剂的稳定性，一种液体、半液体的制剂。并且，并确地给出了，除非使用其它多种稳定剂并在特定的配方下，其制备成固体的明胶硬胶囊制剂时，菠萝蛋白酶变得很不稳定（例如，效价从95％迅速下降至78％及25％）。后来，又有大量文献，涉及这一类稳定剂进行了研究。这些研究包括：Basir Ahmad等（Basir Ahmad 等，Low versus High Molecular Weight Poly(ethylene glycol)-Induced States of Stem Bromelain at Low pH: Stabilization of Molten Globule and Unfolded States，Published online 12 December 2005 in Wiley InterScience）报道了采用聚乙二醇研究菠萝蛋白酶构相变化和稳定化的研究。可惜的是，该文献并没有具体给出究竟聚乙二醇是否对菠萝蛋白酶具有何种的稳定化作用，具有何种程度的稳定化作用，仅仅给出了会影响酶的构相及其转化。Rizwan hasan khan 等（Rizwan hasan khan等，Effect of pH, temperature and alcohols on the stability of glycosylated and deglycosylated stem bromelain，Indian Academy of Sciences，2003年，第28卷，第6期，第709–714页）70％甲醇、50％乙醇、30％的异丙醇，即随着分子量的增加，出现低浓度的有机溶剂，就可以使得菠萝蛋白酶完全去活性的性质。

进一步地，Fatima, S 等（Fatima, S 等，Effect of polyethylene glycols on the function and structure of thiol proteases，JOURNAL OF BIOCHEMISTRY，第142卷，第1期，第65-72页）提示，聚乙二醇PEG会引起巯基类蛋白酶的二级结构的变化，从而产生去稳定化作用，并提示在巯基蛋白酶制品中应该慎用聚乙二醇。王晓敏 等（王晓敏 等，Ca²⁺和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响，现代食品科技，2008年，第24卷，第9期，第870-872页）最新的研究结果表明，未经修饰的聚乙二醇6000 加入酶反应体系中，其对酶活性起很大的抑制作用，且酶的热稳定性也未得到改善。

由此可见，现有技术中，对于菠萝蛋白酶的稳定化，其研究虽多，但是无论是主流的观点，还是一些研究个例，都存在或多或少的问题。更为重要的是，这么多的研究让人眼花缭乱，而且，有些研究前后互相矛盾，让人根本分不清楚到底哪些才是有用的信息。也就是说，现有技术整体上，给出一种模糊不清，似是而非的技术启示或教导。

进一步地，对于片剂和胶囊，以及药学上的其它常规剂型，虽然，对于大多数药物来说（化学性质相对稳定的药物）来说，这些常规剂型之间的转换，通常不存在技术难度，而且本领域技术人员也能够预料到其转换后的技术效果，例如稳定性的效果。但是，对于酶类制剂，尤其是菠萝蛋白酶来说，这种转换就存在难以逾越的技术难度。其难度在于，片剂与最接近的剂型胶囊相比较，其存在一个关键的工艺环节就是压片。众所周知，压片是一个非常复杂的物理化学过程，在压片的瞬间，存在压力和热的迅速转换过程。而对于菠萝蛋白酶这样的制剂来说，如文献所述的，即使是简单而短暂的辐照灭菌，都可能导致效价下降11％。何况菠萝蛋白酶的片剂。其次，就是包肠衣，又涉及湿、热的过程，以及对片剂硬度的要求等苛刻条件。又例如，文献（CN1562360）明确指出，由于压片和包衣存在的各种困难，这一过程可能导致菠萝蛋白酶分解50%，即教导了含菠萝蛋白酶的制剂不适合制备成片剂。因此，本申请研究人员，有理由相信，如前面表1所示的，目前市场上存在的含菠萝蛋白酶的制剂（除研发者本身外），都存在稳定性的问题。而且，目前没有任何的技术人员去或有能力解决制剂的稳定性问题。正因为如此，才激发本发明研究人员，以极大的兴趣和创造力，解决含有菠萝蛋白酶的片剂的技术问题。本发明研究人员没有受到现有技术的束缚，特别是没有受到上述文献涉及的聚乙二醇对菠萝蛋白酶产生的不稳定的相反技术启示的影响，反而，通过认真的研究，发现聚乙二醇能够极大地提高菠萝蛋白酶片剂的稳定性，这是任何一项文件均没有教导的。

（二）本发明采用的技术手段和技术方案

一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为片剂；包含菠萝蛋白酶或其药学上可以接受的盐的形式，和聚乙二醇。

所述的药物组合物，其中，所述的菠萝蛋白酶选自硫酸盐、盐酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、乙酸盐、茶多酚盐或鞣酸盐的一种或多种。

所述的药物组合物，其中，所述的菠萝蛋白酶选自鞣酸盐和茶多酚盐的一种或多种。

所述的药物组合物，其中，以菠萝蛋白酶作为唯一的药用活性成分。

所述的药物组合物，还可以进一步包含药学上的其它药物活性分子。

所述的药物组合物，聚乙二醇的作用是，作为稳定剂，用于提高菠萝蛋白酶的稳定性。

所述的药物组合物，使用聚乙二醇作为唯一的稳定剂，或者地，聚乙二醇联合其它稳定剂使用。

所述的聚乙二醇优选未经过修饰的聚乙二醇。

所述的聚乙二醇本身为经过化学修饰的聚乙二醇。

所述的聚乙二醇选自平均分子量为200-10万，优选聚乙二醇200、400、600、800、1000、1500、2000、4000、6000、8000、1万、2万、4万，更优选2000、4000、6000、8000。

所述的聚乙二醇的用量，以药物组合物的总重计，为0.01-50%，优选0.1-50%、0.5-50%、1-50%、1-40%、1-30%、1-20%、2-20％或2-10%。

所述菠萝蛋白酶或其药学上可以接受的盐的用量，以药物组合物的总重量计，为5-70%，优选5-50%、10-50%、或2-50%。

所述的药物组合物，其中的片剂优选为肠溶片。

所述的药物组合物，其中的片剂优选为肠溶片，所述的肠溶片采用欧巴代水分散体作为包衣材料，而且采用水作为溶剂，进行包衣。

所述的药物组合物，其中的片剂选自，菠萝蛋白酶肠溶片或复方菠萝蛋白酶肠溶片。

所述的药物组合物，进一步还包括以甘露糖作为填充剂。

所述的药物组合物，甘露糖的用量，以药物组合物的总重量计算，为5-80%，优选10-70%、20-60%、或20-50%。

所述的药物组合物，进一步还包括药学上可以接受的其它辅料。

所述的药物组合物，进一步包括保护剂乙二胺四乙酸、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素E、半胱氨酸的一种或多种。

所述的药物组合物，进一步包括保护剂半胱氨酸；半胱氨酸的作用是是抗氧化作用和起到底物抑制的作用。

所述的药物组合物，进一步包含适量的崩解剂。

 以上的技术方案在确保技术方案清楚的前提下，可以进行任一的组合。

具体实施方式

    本发明的部分研究过程及采用的技术手段如下，仅作示例性说明。

检验方法：按照国家药品标准菠萝蛋白酶肠溶片、菠萝蛋白酶的质量标准WS1-XG-046-2000、WS1-XG-045-2000检测菠萝蛋白酶的效价，计算标示量，以及中国药典2010版第二部关于片剂的有关项目检测。

 

实施例1、菠萝蛋白酶的原料效价的测定

市售批号为20120801的菠萝蛋白酶（鞣酸菠萝蛋白酶），经效价测定原料的效价如表2所示。经计算，效价平均值为735.6±22.6单位/mg，RSD=3.1 %。应该说明的是，测定原料的效价为735.6单位/mg，并不代表其它含义，仅仅是出于制剂稳定性数据的计算考虑。也就是说，作为一种参考数值。真正能够比较菠萝蛋白酶肠溶片剂，必须是在相同的条件下，比较片剂制剂的数据，以获得真实的结果和结论。

表2    市售批号为20120801的菠萝蛋白酶

实施例2、菠萝蛋白酶肠溶片的制备和稳定剂的筛选过程

（1）由于高效价单位的片剂，存在的技术难度更大，故研究人员选择示例性地研究菠萝蛋白酶肠溶片，其规格（理论值或标示量值）为三万单位/0.21克/片，这里的均是指素片（或者叫做片芯），这也符合药剂领域通常的规定。

（2）菠萝蛋白酶肠溶片的实际投料量：

经上述菠萝蛋白酶原料的含量测定，确定20120801的菠萝蛋白酶原料的效价为735.6单位/毫克计。考虑到压片、包衣，以及长期放置可能导致效价下降，特别是，为了进行加速实验比较和长期稳定性比较的需要，我们按照如下处方和方法进行投料。

以20120801的菠萝蛋白酶原料的效价为735.6单位/毫克计，在三万单位/0.21克/片规格的基础上，以210毫克×30.61%×735.6单位/毫克=4.728万单位，即4.728万单位/3万单位=157.6%的相对标示量进行投料（相对于三万单位/0.21克/片的规格而言）。另外，考虑到辅料之间会相互影响，我们的比较试验设计的片剂的素片的处方中，仅仅使用主要菠萝蛋白酶、填充剂甘露醇、聚乙二醇PEG，及其它少量的助流剂。

（3）空白颗粒的制备：

甘露醇     2000g，

PEG6000    200g，

混匀后，用适量的50％乙醇制软材，制粒。50摄氏度干燥至水分合格（水分小于5%，越干燥越好；烘干时间约为4-5小时以上），20目筛整粒，制得空白颗粒，备用。

（4）压片：

按照如下处方的组成进行压片：

处方1（3万单位/片，10000片）：

菠萝蛋白酶原料（批号20120801）：     642.8克（占30.61%）

空白颗粒辅料（含PEG）：             1436.2克（占68.4%）

硬脂酸镁                            12.6克（占0.6%）

微粉硅胶                            8.4克（占0.4%）

合计：                              2100克（100%）

处方2（3万单位/片，10000片）：

菠萝蛋白酶原料（批号20120801）：     642.8克（占30.61%）

空白颗粒辅料（含PEG）：             1331.2克（占63.4%）

聚乙二醇：                          105.0克（占5.0%）

硬脂酸镁                            12.6克（占0.6%）

微粉硅胶                            8.4克（占0.4%）

合计：                              2100克（100%）

将上述菠萝蛋白酶原料、空白颗粒、硬脂酸镁，微粉硅胶，充分混合后，压片。压片的压力参数设定为40-50N。

（5）处方1和2的包肠溶衣

以肠溶欧巴代水分散体包衣粉进行包衣，考虑到菠萝蛋白酶在湿热环境下容易分解，故根据使用的溶剂为85%和水两种分别对上述处方1和2进行包衣。从而，得到4种菠萝蛋白酶肠溶片，分别是处方1-1（85%乙醇包衣）、处方2-1（85%乙醇包衣）、处方1-2（水包衣）和处方2-2（水包衣）。

 

实施例3、参照实施例2处方2-2的方法，采用PEG1500或4000分别制备处方3、处方4

    具体方法，与实施例2处方2-2的方法相同，不同的是，分别采用PEG4000或1500代替了实施例2制备过程中处方2-2的PEG6000。具体而言，就是步骤（3）中采用了含有PEG4000或1500预制的空白颗粒，在步骤（4）再按照处方量，加入主药菠萝蛋白酶、PEG4000或1500，以及适量的助流剂，混合进行压片，得到素片（或者叫做片芯）。然后，采用欧巴代水分散体肠溶包衣粉，以水作为分散剂，进行包衣。

 

实施例4、为比较实施例，未添加任何PEG成分，制备比较的处方5。过程如下：

步骤（3）空白颗粒的制备（不含有PEG）：

甘露醇     2000g，

混匀后，用适量的50％乙醇制软材，20目筛制粒。50摄氏度干燥至水分合格（水分小于5%，越干燥越好；烘干时间约为4-5小时以上），20目整粒，制得空白颗粒（不含有PEG），备用。

步骤（4）压片：

按照如下处方的组成进行压片：

处方5（3万单位/片，10000片）：

菠萝蛋白酶原料（批号20120801）：    642.8克（占30.61%）

空白颗粒（不含有PEG）：            1436.2克（占68.4%）

硬脂酸镁                           12.6克（占0.6%）

微粉硅胶                           8.4克（占0.4%）

合计：                             2100克（100%）

将上述菠萝蛋白酶原料、空白颗粒、硬脂酸镁，微粉硅胶，充分混合后，压片。压片的压力参数设定为40-50N。

（5）处方5的包肠溶衣

以肠溶欧巴代水分散体包衣粉进行包衣，考虑到菠萝蛋白酶在湿热环境下容易分解，故根据使用的溶剂为85%和水两种分别对上述处方5进行包衣。但是，包衣过程中奇怪地发现，处方的5的素片如果采用水包衣的方式，很容易吸水。吸水的处方的素片发生膨胀，片重迅速增加，并导致包衣的肠溶片软化，硬度不符合要求，水分也严重不合格。因此，处方5的比较实验，只能采用85％乙醇分散欧巴代水分散体后，进行包肠溶衣，然后，与处方1或处方2进行比较实验。也就是说，处方5为：不含PEG成分，采用肠溶欧巴代水分散体包衣粉（85％乙醇分散后）进行包衣。

 

实施例4、生产后的效价的测定

对处方1-5肠溶片（规格：0.21克/片）的效价测定，平行测定三次（n=3），取平均值，结果如表3所示。

表3    处方1-5肠溶片生产后的效价测定（理论投料量为标示量的157.6%）

注：处方1-1，为处方1的素片采用85%乙醇包衣；处方2-1，为处方2的素片采用85%乙醇包衣；处方1-2，为处方1的素片采用水作为溶剂包衣；处方2-2，为处方2的素片采用水作为溶剂包衣。

    由上述结果可知，结论是明显的：

其一、压片过程后，效价下降百分数的结果是显著的。处方1-1和2-1（加入了PEG6000），要明显比处方5稳定。

其二、采用欧巴代水分散体包衣粉、以水作为溶剂进行包衣是更优选的处方和工艺。处方1-2和2-2，与之对应的处方1-1和2-1比较，以水作为溶剂具有明显的好处。

同样地，采用聚乙二醇1500和4000也取得了与聚乙二醇6000相似的结果。而且，所得到的处方1-4的任一产品，片芯的颜色均符合要求，为浅黄色；而处方5的片芯明显存在大量黑点，表现出性状不合格的特征。由此可见，聚乙二醇的添加解决了技术问题1。特别地体现在，在压片过程中，对菠萝蛋白酶的保护作用。

 

实施例5、稳定性加速试验

按照中国药典2010版第二部附录199“原料药与药物制剂稳定性试验指导原则”，并考虑前期预试验菠萝蛋白酶及其制剂在60℃、40℃下不稳定的特点，故拟定稳定性加速实验可以在30℃进行加速试验，相对湿度65％下进行；为期6个月，分别在0、1、2、3、6月末分别取样，进行检测，重点检测效价的变化，以观察片剂制剂的稳定性和PEG对效价的保护作用。具体进行实验的样品就是表3所示的处方，具体结果如表4所示。

表4    处方1-5肠溶片稳定性加速试验的效价测定（理论投料量为标示量的157.6%）

处方名称	标示量	0月	1月	2月	3月	6月
							处方1-1	3.00万单位	139.5%	118.5%	102.0%	97.5%	88.6%
处方2-1	3.00万单位	144.5%	120.5%	108.7%	103.4%	95.7%
							处方1-2	3.00万单位	148.6%	120.4%	110.4%	103.9%	93.9%
处方2-2	3.00万单位	153.3%	127.6%	119.1%	115.7%	105.6%
							处方3	3.00万单位	152.3%	123.3%	119.6%	114.3%	103.9%
处方4	3.00万单位	151.5%	124.5%	118.1%	117.5%	106.5%
							处方5	3.00万单位	117.4%	81.0%	55.3%	35.6%	30.1%

注：（1）表4中的效价均是相对于标示量（3万/片，100％）的效价的百分数。

（2）处方1-1，为处方1的素片采用85%乙醇包衣；处方2-1，为处方2的素片采用85%乙醇包衣；处方1-2，为处方1的素片采用水作为溶剂包衣；处方2-2，为处方2的素片采用水作为溶剂包衣。

    由上述结果可知，结论是明显的：

其一、添加PEG的处方的稳定性明显高于未添加PEG的处方5，即，聚乙二醇的添加解决了技术问题1。特别地体现在，在贮藏过程中，也能表现出对菠萝蛋白酶的保护作用。而且，在加速试验完成6个月末，仍然保持产品效价的合格。显然，这为含有菠萝蛋白酶的肠溶片剂提供了可靠的依据。

其二、从稳定性数据看，在加速试验的第一个，效价下降加快，然后趋于平缓，这一现象值得进一步研究或改进。

综合实施例4和5来看，聚乙二醇的添加比较完美地解决本发明的技术问题，达到了预期的目的和效果。当然，这只是本发明研究人员所进行的实验的代表，是示例性的。

Claims (9)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为片剂；包含菠萝蛋白酶或其药学上可以接受的盐的形式，和聚乙二醇。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述的菠萝蛋白酶选自硫酸盐、盐酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、乙酸盐、茶多酚盐或鞣酸盐的一种或多种；优选自鞣酸盐和茶多酚盐的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，以菠萝蛋白酶作为唯一的药用活性成分；或者地还可以进一步包含药学上的其它药物活性分子。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，使用聚乙二醇作为唯一的稳定剂；或者地聚乙二醇联合其它稳定剂使用。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，所述的聚乙二醇优选未经过修饰的聚乙二醇；或者地聚乙二醇本身为经过化学修饰的聚乙二醇。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，所述的聚乙二醇选自平均分子量为200-10万，优选聚乙二醇200、400、600、800、1000、1500、2000、4000、6000、8000、1万、2万、4万，更优选聚乙二醇2000、4000、6000、8000。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，所述的片剂优选为肠溶片。

8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中的片剂选自，菠萝蛋白酶肠溶片或复方菠萝蛋白酶肠溶片。

9.根据前述任一项所述的药物组合物，其特征在于，用于手术后感染、急性发炎、乳腺炎、腮腺炎、蜂窝组织炎、慢性血栓静脉炎、支气管炎、肾盂肾炎、高胆固醇血症、甘油三脂症、免疫性疾病及癌症的辅助治疗。