CN103263427A

CN103263427A - 新橙皮苷在制备防治高脂血症药物中的应用

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Publication number: CN103263427A
Application number: CN2013101642909A
Authority: CN
Inventors: 吴昊姝; 杨波; 何俏军; 陈昆松; 李鲜; 孙崇德
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2013-05-07
Filing date: 2013-05-07
Publication date: 2013-08-28

Abstract

本发明提供一种新橙皮苷在制备防治高脂血症药物中的应用，所述药物为新橙皮苷单用或新橙皮苷与柚皮苷或二甲双胍的组合物与药学允许的敷料制成。通过对新橙皮苷、橙皮苷和柚皮苷三者调脂作用的对比研究，发现新橙皮苷在体外可降低肝细胞脂肪蓄积模型的甘油三酯含量，在体内则可降低蛋黄诱发急性高血脂小鼠模型的血浆甘油三酯水平，升高血浆高密度脂蛋白水平，作用强于柚皮苷和橙皮苷，新橙皮苷与柚皮苷或二甲双胍合用具有协同降脂作用。可制备含有新橙皮苷的植物提取物或包含新橙皮苷的复方药物或保健品，用于治疗或预防高脂血症。

Description

新橙皮苷在制备防治高脂血症药物中的应用

技术领域

本发明属医药领域，涉及天然来源的黄酮类化合物新橙皮苷或其组合物在防治高脂血症中的应用，尤其涉及新橙皮苷在制备防治高脂血症的单用药物或复方药物或保健品中的应用。

背景技术

高脂血症是指血中总胆固醇和/或甘油三酯水平过高，伴低密度脂蛋白胆固醇过高或高密度脂蛋白胆固醇（具有清除体内胆固醇的作用）过低，现代医学称之为血脂异常，俗称“高血脂”。血脂异常在中老年人群中非常普遍，它是动脉粥样硬化的病理基础，且常和糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖、非酒精性脂肪性肝病等代谢综合征互为因果关系，成为冠心病的高危因素。改善脂质代谢对预防和延缓高脂血症、糖尿病、脂肪肝、高血压、冠心病、中风等具有重要意义。由于目前常用调血脂药存在肌痛、肝炎、胃肠道不适等不良反应，甚至可能引起横纹肌溶解的严重后果，人们越来越重视从植物中寻找具有防治高脂血症的物质。应用具有改善高脂血症的天然产物制备复方药物或保健品对于辅助治疗血脂异常相关疾病，减少临床治疗药物的用量，将具有重要的实践意义。

新橙皮苷是一类天然黄酮类化合物，通常和柚皮苷、橙皮苷一起广泛存在于芸香科及茜草科植物中，常从柚、柑橘、橙等的果皮，以及中药枳实（酸橙或甜橙的干燥幼果）和枳壳（酸橙的未成熟果实）中提取而来。对柚皮苷和橙皮苷调节糖脂代谢的作用已有文献报道，本发明人在对柑橘类胡柚白皮层提取分离成分的研究中，首次发现新橙皮苷具有体外降糖作用并进行了报道，但新橙皮苷对脂质代谢方面的作用仍未见任何报道。

新橙皮苷和柚皮苷结构式如下：

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发明内容

本发明的目的是提供一种新橙皮苷在制备防治高脂血症药物中的应用，所述药物由新橙皮苷与药学上允许的敷料制成。研究证实新橙皮苷单用具有明确的改善高脂血症作用，其作用与临床常用药物苯扎贝特相似，明显优于同类天然产物橙皮苷和柚皮苷。

本发明的另一个目的是提供一种新橙皮苷在制备防治高脂血症的药物中的应用，所述药物是由重量比1：1的新橙皮苷与柚皮苷或二甲双胍制成的复方药物。

本发明的再一个目的是提供一种新橙皮苷在制备防治高脂血症的保健品中的应用。所述保健品由新橙皮苷与允许的食品添加剂制成，或者由重量比1：1的新橙皮苷和柚皮苷（或含此两种有效成分1：1的天然提取物）及允许的食品添加剂制成。

本发明强调新橙皮苷作为一种防治高脂血症药物或保健品的新用途。

本发明通过研究新橙皮苷的调节脂质代谢作用，达到将其应用于高脂血症防治的目的。新橙皮苷和柚皮苷1：1合用可协同降低游离脂肪酸造模的脂肪蓄积肝细胞内甘油三酯水平，提示其潜在的降脂作用。新橙皮苷和柚皮苷1：1合用（或含此两种有效成分1：1的天然提取物）制成保健品，可用于防治高脂血症。新橙皮苷在细胞水平的降脂作用有效浓度（10 mmol/L）远低于降糖降脂药物二甲双胍（1 mmol/L），而其降脂幅度强于二甲双胍，二者合用具有协同作用，因此，依据二甲双胍临床有效剂量以重量比1:1合用，有利于改善糖尿病患者的高脂血症。

新橙皮苷是橙皮苷的同分异构体，本发明通过对新橙皮苷、橙皮苷和柚皮苷三者调脂作用的对比研究，发现新橙皮苷在体外可降低肝细胞脂肪蓄积模型的甘油三酯含量，在体内则可降低蛋黄诱发急性高血脂小鼠模型的血浆甘油三酯水平，升高血浆高密度脂蛋白水平，这些作用强于柚皮苷和橙皮苷。进一步体外研究发现，新橙皮苷与柚皮苷或二甲双胍合用具有协同降脂作用。新橙皮苷组合物包括含有新橙皮苷的植物提取物或包含新橙皮苷的复方药物或保健品，用于治疗或预防高脂血症。新橙皮苷属于天然来源的黄酮类化合物，在柑橘类水果中含量丰富，它不但可以降低甘油三酯，还可升高有利于机体清除胆固醇的高密度脂蛋白，可制备作为防治高脂血症的药物或保健品。

附图说明

图1是新橙皮苷、橙皮苷和柚皮苷降低游离脂肪酸（0.5mM油酸和0.25mM棕榈酸）诱导脂肪蓄积HepG2细胞内甘油三酯含量的比较。注：空白对照与溶剂对照的区别为前者不加任何处理，后者加配制游离脂肪酸和药物所需溶剂；n=4；t检验，与模型对照组比较，*P<0.05, **P<0.01。

图2是新橙皮苷、橙皮苷和柚皮苷对蛋黄乳剂诱导高血脂C57小鼠降甘油三酯作用的比较。注：n=6；t检验，与模型对照组比较，*P<0.05, **P<0.01。

图3是新橙皮苷、橙皮苷和柚皮苷对蛋黄乳剂诱导高血脂C57小鼠升高密度脂蛋白作用的比较。注：n=6；t检验，与模型对照组比较，*P<0.05, **P<0.01。

图4是新橙皮苷和柚皮苷协同降低游离脂肪酸（0.5mM油酸和0.25mM棕榈酸）诱导脂肪蓄积HepG2细胞内的甘油三酯含量。注：空白对照与溶剂对照的区别为前者不加任何处理，后者加配制游离脂肪酸和药物所需溶剂；n=4；t检验，与模型对照组比较，*P<0.05, ***P<0.001。

图5是新橙皮苷和二甲双胍协同降低游离脂肪酸（0.5mM油酸和0.25mM棕榈酸）诱导脂肪蓄积HepG2细胞内的甘油三酯含量。注：空白对照与溶剂对照的区别为前者不加任何处理，后者加配制游离脂肪酸和药物所需溶剂；n=4；t检验，与模型对照组比较，*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。

实施例1：

新橙皮苷对游离脂肪酸诱导的脂肪蓄积肝细胞具有降脂作用，其作用强于橙皮苷和柚皮苷。实验方法和结果如下：

将HepG2细胞用含10％胎牛血清的高糖型DMEM培养液接种于5 ml培养皿中，37 ℃、5% CO₂培养箱中孵育，待细胞接近70%融合时，用PBS洗一遍，加入部分1640培养液，设立空白对照组，溶剂对照组（配置游离脂肪酸溶剂含NaOH，终浓度为0.5 mmol/L），脂肪酸造模模型对照组、降脂药苯扎贝特阳性对照组（sigma产品，终浓度为10 μmol/L），新橙皮苷组、橙皮苷组和柚皮苷组（sigma产品，终浓度均为10 μmol/L）。于37 ℃、5% CO₂培养箱中作用30 min，之后加入含或不含游离脂肪酸（终浓度为油酸0.5 mmol/L和棕榈酸0.25 mmol/L）1640培养液（含0.5% BSA），于37 ℃、5% CO₂培养箱中作用24 h。

将收集到的细胞悬液转移至离心管，1000 rpm离心5 min。去除培养液，用冷PBS缓冲液洗细胞两次，直接裂解。细胞裂解时，加入冰预冷的RIPA裂解液，冰浴上反复吹打，裂解30 min后，13000 rpm、4℃离心30 min，混匀上清中的脂肪酸后取上清。用甘油三酯试剂盒测定甘油三酯含量，并以蛋白浓度校正其含量。

结果表明，在10μM浓度下，新橙皮苷降低游离脂肪酸诱导脂肪蓄积肝HepG2细胞的甘油三酯含量具有明显的降低作用（31.4%，与模型组比较P<0.01），其降低幅度大于柚皮苷组（21.4%，与模型组比较P<0.05），而橙皮苷组的降低作用与模型组比较则不具有显著性差异（P>0.05）。可见新橙皮苷的体外降脂作用明确，且作用强于柚皮苷和橙皮苷。结果参见图1。

实施例2 ：

新橙皮苷对蛋黄乳剂诱导的高血脂C57小鼠具有降低甘油三酯作用，其作用强于橙皮苷和柚皮苷。实验方法和结果如下：

C57小鼠随机分为6组，每组6只，分别为正常对照组、模型对照组、苯扎贝特阳性对照组、新橙皮苷组、橙皮苷组和柚皮苷组，各给药组以100 mg/kg剂量灌胃给药，正常对照组和模型对照组给予相同给药容量的溶剂（0.5% CMC-Na），连续给药2周后动物腹腔注射75%新鲜蛋黄乳剂，20 h后取血分离血浆，测定甘油三酯含量。

结果表明， C57小鼠腹腔注射75%新鲜蛋黄乳剂后，血浆甘油三酯水平比正常对照组显著升高（P<0.001）。在100 mg/kg剂量下，新橙皮苷可明显降低蛋黄乳剂诱导的甘油三酯升高（P<0.01），与模型对照组比较降低幅度为21.8%，而橙皮苷组降脂作用不明显（7.7%，P>0.05）。柚皮苷组在该剂量下对该模型也无降脂作用。新橙皮苷组和橙皮苷或柚皮苷组之间经t检验，两者的降脂作用具有显著性差异（P<0.05），说明新橙皮苷的降甘油三酯作用明显强于橙皮苷和柚皮苷。结果参见图2。

实施例3：

新橙皮苷对蛋黄乳剂诱导的高血脂C57小鼠具有升高高密度脂蛋白作用，其作用强于橙皮苷和柚皮苷。实验方法和结果如下：

C57小鼠随机分为6组，每组6只，分别为正常对照组、模型对照组、苯扎贝特阳性对照组、新橙皮苷组、橙皮苷组和柚皮苷组，各给药组以100 mg/kg剂量灌胃给药，正常对照组和模型对照组给予相同给药容量的溶剂（0.5% CMC-Na），连续给药2周后动物腹腔注射75%新鲜蛋黄乳剂，20 h后取血分离血浆，测定高密度脂蛋白胆固醇（反映高密度脂蛋白）含量。

结果表明， C57小鼠腹腔注射75%新鲜蛋黄乳剂后，血浆高密度脂蛋白水平比正常对照组明显降低（P<0.05）。在100 mg/kg剂量下，新橙皮苷可明显升高蛋黄乳剂诱导高密度脂蛋白下降（P<0.05），与模型对照组比较升高幅度为45.4%，而橙皮苷组和柚皮苷组的升高作用无统计学意义（P>0.05）。说明新橙皮苷的升高高密度脂蛋白作用强于橙皮苷和柚皮苷。结果参见图3。

实施例4：

新橙皮苷对游离脂肪酸诱导的脂肪蓄积肝细胞具有降脂作用，其作用强于柚皮苷，且和柚皮苷合用具有协同降脂作用。实验方法和结果如下：

将HepG2细胞用含10％胎牛血清的高糖型DMEM培养液接种于5 ml培养皿中，37 ℃、5% CO₂培养箱中孵育，待细胞接近70%融合时，用PBS洗一遍，加入部分1640培养液，设立空白对照组，溶剂对照组（配置游离脂肪酸溶剂含NaOH，终浓度为0.5 mmol/L），脂肪酸造模模型对照组、二甲双胍阳性对照组（终浓度为1 mmol/L），柚皮苷组（sigma产品，终浓度为5 μg/ml），新橙皮苷组（sigma产品，终浓度为5 μg/ml），以及柚皮苷和新橙皮苷各2.5 μg/ml合用组。于37 ℃、5% CO₂培养箱中作用30 min，之后加入含或不含游离脂肪酸（终浓度为油酸0.5 mmol/L和棕榈酸0.25 mmol/L）1640培养液（含0.5% BSA），于37 ℃、5% CO₂培养箱中作用24 h。

结果表明，新橙皮苷5 μg/ml的降脂作用（降低19.0%，t检验，P<0.05）强于相同浓度下的柚皮苷（10.7%）；二者分别2.5 μg/ml合用有很好的协同作用，降脂作用增强至30.0% （t检验，P<0.001）。说明新橙皮苷和柚皮苷可协同降低游离脂肪酸（0.5 mmol/L油酸加0.25 mmol/L棕榈酸）诱导的脂肪蓄积肝HepG2细胞内的甘油三酯含量。结果参见图4。

实施例5：

新橙皮苷对游离脂肪酸诱导的脂肪蓄积肝细胞具有降脂作用，且和临床药物二甲双胍合用具有协同降脂作用。实验方法和结果如下：

将HepG2细胞用含10％胎牛血清的高糖型DMEM培养液接种于5ml培养皿中，37 ℃、5% CO₂培养箱中孵育，待细胞接近70%融合时，用PBS洗一遍，加入部分1640培养液，设立空白对照组，溶剂对照组（配置游离脂肪酸溶剂含NaOH，终浓度为0.5 mmol/L），脂肪酸造模模型对照组、降血脂药苯扎贝特阳性对照组（终浓度为20 μmol/L）、二甲双胍阳性对照组（终浓度为1 mmol/L），新橙皮苷组（湖南康麓生物科技有限公司产品，终浓度为10 μmol/L），以及二甲双胍0.5mmol/L和新橙皮苷5 μmol/L合用组。于37 ℃、5% CO₂培养箱中作用30min，之后加入含或不含游离脂肪酸（终浓度为油酸0.5 mmol/L和棕榈酸0.25mmol/L）1640培养液（含0.5%BSA），于37 ℃、5% CO₂培养箱中作用24h。

结果表明，新橙皮苷10 μmol/L具有明显的降脂作用，与高脂模型对照组比较，可降低细胞内甘油三酯水平36.3%（P<0.01），降脂药苯扎贝特20 μmol/L和降糖药二甲双胍1 mmol/L均可降低细胞内甘油三酯水平，降低幅度分别为56.8%（P<0.001）和22.8%（P<0.05）；二甲双胍0.5 mmol/L和新橙皮苷5 μmol/L合用有良好的协同作用，降脂幅度为37.8%（P<0.01）。说明新橙皮苷和二甲双胍可协同降低游离脂肪酸（0.5mM油酸加0.25mM棕榈酸）诱导的脂肪蓄积肝HepG2细胞内的甘油三酯含量。结果参见图5。

本发明涉及的参考文献：

Jung UJ, Lee MK, Park YB, Kang MA, Choi MS. Effect of citrus flavonoids on lipid metabolism and glucose-regulating enzyme mRNA levels in type-2 diabetic mice. Int J Biochem Cell Biol. 2006; 38(7): 1134-1145。

Pu P, Gao DM, Mohamed S, Chen J, Zhang J, Zhou XY, Zhou NJ, Xie J, Jiang H. Naringin ameliorates metabolic syndrome by activating AMP-activated protein kinase in mice fed a high-fat diet. Arch Biochem Biophys. 2012; 518(1): 61-70。

Zhang J, Sun C, Yan Y, Chen Q, Luo F, Zhu X, Li X, Chen K. Purification of naringin and neohesperidin from Huyou (Citrus changshanensis) fruit and their effects on glucose consumption in human HepG2 cells. Food Chem. 2012; 135(3): 1471-1478。

Claims

1.一种新橙皮苷在制备防治高脂血症药物中的应用，其特征在于，所述药物由新橙皮苷与药学上允许的敷料制成。

2.根据权利要求书所述的一种新橙皮苷在制备防治高脂血症药物中的应用，其特征在于，所述药物由新橙皮苷与柚皮苷或二甲双胍及药学上允许的敷料制成，新橙皮苷与柚皮苷或二甲双胍的重量比1：1。

3.一种新橙皮苷在制备防治高脂血症保健品中的应用，其特征在于，所述保健品由新橙皮苷与食品允许的添加剂制成。

4.根据权利要求3所述的一种新橙皮苷在制备防治高脂血症保健品中的应用，其特征在于，所述的保健品由新橙皮苷和柚皮苷与食品允许的添加剂制成，新橙皮苷与柚皮苷的重量比1：1。

5.根据权利要求3所述的一种新橙皮苷在制备防治高脂血症保健品中的应用，其特征在于，所述的保健品由含新橙皮苷和含柚皮苷有效成分的天然提取物与食品允许的添加剂制成，新橙皮苷和柚皮苷有效成分的重量比为1：1。