CN103235026A

CN103235026A - 蛋白质等电聚焦电泳的方法及其装置

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Publication number: CN103235026A
Application number: CN2013101138550A
Authority: CN
Inventors: 曹成喜; 郭陈刚; 刘小平; 李思; 王后禹
Original assignee: Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2013-04-02
Filing date: 2013-04-02
Publication date: 2013-08-07

Abstract

一种基于移动反应界面和扩散技术的蛋白质等电聚焦电泳方法及其装置，首先制备含有电极液的多孔亲水材料作为酸性垫和碱性垫，然后将酸性垫置于电泳槽内的阳极与经过水化上样的固化或非固化pH梯度胶条的一端之间，将碱性垫置于阴极与胶条的另一端之间且并轻压固定以实现电连接，最后滴加硅油覆盖整个电泳槽内并施加直流电压，通过逐步增加电压实现等电聚焦电泳测试。本发明的目的在于提高pH梯度可调控性和分辨率。

Description

蛋白质等电聚焦电泳的方法及其装置

技术领域

本发明涉及的是电化学方法分析材料技术领域的方法和装置，具体是基于移动反应界面(moving reaction boundary，MRB)的蛋白质等电聚焦电泳（isoelectric focusing，IEF）方法及其装置。

背景技术

IEF技术为蛋白质高效分离技术，其原理是利用两性电解质在凝胶中创造一个pH梯度，同时利用蛋白质具有两性解离和等电点的特点，对蛋白质进行分离分析（P.G.Rightti,In:T.S.Work and R.H.Rurdon,Laboraotary Techniques in Biochemistry and Molecular Bioboligy,ElsevierBiomedical Press,Amesterdam New York Oxford,v II,1983,p.1-86,268-313）。IEF具有分离效率高、分离富集同时完成、上样模式多样等优点。IEF技术应用广泛，它不仅是蛋白质pI表征和纯度鉴定的标准分析技术（O.Vesterberg,Acta Chem.Scand.1969,23,2653）；同时也是复杂蛋白质及其组学研究中的关键分离技术（S.Nilesh,E.Scott,Nature Protocols,2006,1,1732），在双向凝胶电泳中总是作为第一向分离技术（P.H.O'Farrell,J.Biol.Chem.1975,250,4007；A.D.Rolland,B.Evrard,N.Guitton,J.Proteome Res.2007,6,683）。

基于常规凝胶电泳的IEF技术主要二种，包括：（i）、管式凝胶IEF技术（L.E.M.Miles,G.E.Simmons,A.Chrambach,Anal.Biochem.1972,49,109）；（ii）、薄层凝胶IEF技术（P.G.Rightti,In:T.S.Work and R.H.Rurdon,Laboraotary Techniques in Biochemistry and Molecular Bioboligy,Elsevier Biomedical Press,Amesterdam New York Oxford,v II,1983,p.1-86,268-313）。但在这两种凝胶IEF电泳技术中始终存在pH梯度漂移（drifting of pH gradient,H.Rilbe,In:Electrofocusingand Isotachophoresis(Editors:B.J.Radola and D.Graeslin),Walter de Gruyter&Co.,Berlin NewYork,1977,p35-50）和水平化（plateau of pH gradient,P.Arosio,E.Grana and P.G.Righetti,J.Chromatogr.1978,166,55）现象造成的不稳定性。并且在双向凝胶电泳（two dimensional gelelectrophoresis,2DE）中，由于管式和薄层凝胶IEF的凝胶很难取出，取出后也很难完整的进行后续的转移操作；因此，基于常规凝胶电泳的第一向IEF分离技术很难与第二向的SDS-PAGE电泳兼容。

为了克服常规凝胶IEF技术稳定性问题以及与SDS-PAGE电泳兼容性问题，Rightti等于上世纪八十年代发明了固定化pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条以及基于IPG胶条的IEF技术（（A.W.Postel,R.Westermeier,B.Bjellqvist,K.Ek,E.Gianazza,P.G.Righetti,Prot.Biol.Fluids1983,30,607；A.

W.Postel,R.Westermeier,B.Bjellqvist,K.Ek,E.Gianazza,P.G.Righetti,Prot.Biol.Fluids1983,30,607）。由于较好地解决了传统凝胶IEF技术稳定性和兼容性等问题，基于IPG胶条的IEF是目前应用最广泛的聚焦电泳技术，已经成为2DE的第一向标准分离技术（S.Nilesh,E.Scott,Nature Protocols,2006,1,1732）。相关的IEF技术体系、IPG胶条以及配套仪器等主要有美国GE公司通用电气医疗集团生命科学部（http://gehealthcare.bioon.com.cn/）和Bio-Rad公司（http://www.bio-rad.com/）提供。

但IPG技术带来一些新的问题。第一、由于IPG胶条是直接放在正负电极上，胶条两端没有电极液，所以无法有效控制pH梯度的形成，进而对pH梯度进行调控，这特别不利于酸性和/或碱性蛋白的分离分析；第二、在IPG电泳技术中，由于两性电解质的固化导致不同pI的蛋白质非同步聚焦，造成IEF分辨率的明显下降。第三、IPG技术消耗了IEF体系中大量的活性极性基团，增加了pH梯度形成后IEF体系的疏水性，导致聚焦电泳时蛋白质很容易沉淀，严重影响IEF和2DE稳定性以及后续定量分析的不确定性。因此，亟待发明一种新的IEF技术，该IEF技术能够较好解决上述IEF时的蛋白质沉淀、非同步聚焦和pH梯度的调控等问题。

在新近的研究中，我国学者Cao等提出了系统的移动反应界面（moving reactionboundary,MRB）概念和理论（C.-X.Cao,Acta Phys.-Chim.Sin.1997,13,827;C.-X.Cao,ActaChem.Scand.1998,52,709;C.X.Cao,L.Y.Fan,W.Zhang,Analyst2008,133,1139），并且基于MRB概念Cao和Liang等建立了较系统的IEF动力学理论（C.X.Cao,J.Chromatogr.A1998，813,153；C.-X.Cao,J.-H.Zhu,H.Liu,W.-H.Fang,W.-Z.Tang,L.-H.Song,W.-K.Chen,Acta Chem.Scand.1999,53,955.C.X.Cao,L.Y.Fan,W.Zhang,Analyst2008,133,1139;H.Liang,Y.Chen,L.J.Tian,L.Zhang,Electrophoresis2009,30,3134）。这些前期研究结果为上述问题的解决创造了重要条件，并且为较稳定IEF技术的设计等提供了关键基础。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种蛋白质等电聚焦电泳的方法及其装置，发展了蛋白质等电聚焦电泳的方法与器件，目的在于提高在IEF中的pH梯度可调控性，解决现有IPG-IEF的蛋白质沉淀和非同步聚焦问题，提高IEF的稳定性和分辨率。

本发明是通过以下技术方案实现的：制备含有电极液的多孔亲水材料作为酸性垫和碱性垫，然后将酸性垫置于电泳槽内的阳极，并与经过水化上样的固化或非固化pH梯度胶条的一端接触；将碱性垫置于电泳槽内的阴极，并与胶条的另一端接触，阴极和阳极端再经轻压固定确保实现电连接，最后滴加硅油覆盖整个电泳槽内的胶条与酸性电极液垫和碱性电极液垫，并施加直流电压，通过逐步增加电压实现等电聚焦电泳测试。

在基于MRB的稳定pH梯度控制时，所述的酸性垫为酸性电极液垫，其中所含的电极液为：H₂SO₄、HCl、HBr、HI、HNO₃、CH₃COOH、H₃PO₄、或者上述混合溶液的除HF外的酸性电解质，酸性电极液浓度为5mM～200mM；所述的碱性垫为碱性电极液垫，其中的电极液为：NaOH、NH₄OH、H₂NCH₂CH₂NH₂、或者上述混合溶液的除KOH外的碱性电解质，碱性性电极液浓度为5mM～200mM。

在基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控时，所述的酸性垫为酸性扩散调控垫，其中所含的电极液为：H₂SO₄、HCl、HBr、HI、HNO₃、CH₃COOH、H₃PO₄、或者上述混合溶液的酸性电解质，浓度为200mM～2000mM；所述的碱性垫为碱性电极液垫，其中的电极液为：NaOH、NH₄OH、H₂NCH₂CH₂NH₂、或者上述混合溶液的除KOH外的碱性电解质，浓度为200mM～2000mM。

所述的酸性垫和碱性垫的基材为：滤纸、脱脂棉、海绵或无纺布，其长度是与所在的电泳槽两端电极到电泳槽道端部之间的距离相适应，为4.5mm～12mm；其宽度与所在的电泳槽的槽道宽度匹配，为2.5～6.5mm，其厚度为0.6mm～4mm。

本发明涉及一种实现pH梯度调控、避免蛋白质沉淀和非同步聚焦的非固化pH梯度胶条，即non-IPG胶条，包括：包含具有亲水面并直接与聚丙烯酰胺凝胶聚合的凝胶支持膜、承载蛋白质样品并与支持膜键合的抗对流介质、形成pH梯度并增加亲水性的两性载体电解质和储存保护non-IPG-IEF的保护膜。

所述的凝胶支持膜的其中一面是具有乙烯基团的聚酯材料的薄膜，以便与聚丙烯酰胺凝胶牢固键合。

所述的凝胶支持膜的宽度为2.5～4.5mm；长度为3.5cm～24cm；其厚度为0.15mm～0.35mm。

所述的抗对流介质材料由聚丙烯酰胺凝胶，其浓度T为2～10%（质量百分比浓度），交联度C为2～6%。

所述的抗对流介质的长度为3.5cm～24cm，厚度为0.45mm～0.65mm，宽度为2.5～4.5mm。

所述的保护膜的材料为聚乙烯膜或聚酯膜或腈纶膜或尼龙膜；其长度和宽度均与凝胶支持膜相匹配，宽度为2.5～4.5mm；长度为3.5cm～24cm；厚度为40μm～100μm。

本发明涉及一种实现上述方法的电泳槽，包括：设有若干个槽道的聚焦槽框架、散热底板、用于压制酸性垫或碱性垫的盖板和电极部件，其中：聚焦槽框架和散热底板相互契合，电极部件固定于聚焦槽框架和散热底板之间，盖板与散热底板相互配合。

所述的聚焦槽框架有楔形头且与散热底板上的楔形孔相配合。

所述的聚焦槽框架有定位孔且与盖板上的定位片相配合。

所述的电极部件包括：相互接触的电极丝和电极片，其中：电极丝的电极丝环贴在环聚焦槽框架上所开的电极螺丝孔上。

所述的聚焦槽框架的槽道个数为6～12个，聚焦槽框架沿槽道方向的长度为7cm～24cm。

技术效果

与现有技术相比，本发明利用移动反应界面MRB通过设计稳定pH梯度控制方法和器件，提高IEF的可调控性；基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控方法和器件，进一步提高pH梯度调控范围和分辨率；基于MRB和亲水相互作用设计非固化pH梯度胶条（non-IPG胶条)，解决IPG-IEF的蛋白质非同步聚焦和沉淀问题，提高分辨率和稳定性。

附图说明

图1为基于MRB的稳定pH梯度控制的电泳槽的纵向横截面图；

图2为基于MRB的稳定pH梯度控制的实验结果；

图3为基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度的电泳槽的纵向横截面图；

图4为基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控的实验结果；

图5为实施例1和实施例3使用的非固化pH梯度胶条（non-IPG胶条）示意图；

图6为电泳槽的结构分解图。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1

如图1所示，本实施例是基于MRB的稳定pH梯度控制的实例，实施方法具体如下：1）对IPG或non-IPG胶条1进行水化上样；2）制备IEF酸性电极液垫2和碱性电极液垫3；3）将水化后的IPG或non-IPG胶条放入IEF电泳槽4；4）将酸性电极液垫2和碱性电极液垫3分别放置于电泳槽4的阳极5和阴极6，并使其接触良好；5）将所述盖板7轻压酸性电极液垫2和碱性电极液垫3，之后滴加硅油覆盖整个胶条1；6）通直流电，并程序性升压，进行等电聚焦电泳实验。

图1显示所述的电泳槽4，其中，电泳槽4是导热系数较高的材料制作，如导热塑料（2～10W m^-1K^-1）或导热陶瓷（5～150W m^-1K^-1）或它们的混合材料（2～30W m^-1K^-1），有良好的散热效果，所述胶条1放置在电泳槽4的上面，其在等点聚焦过程中产生的热量会通过所述电泳槽4散去。所述胶条1放置在电泳槽4槽道内，其长度比正电极丝和负电极丝之间的间距要略微短些，其两端离阳极5和阴极6有适当的空间，酸性电极液垫2和碱性电极液垫3各自一端放在胶条1上，另一端放置在阳极5或者阴极6上面，起到一个连接桥的作用，并且酸性电极液垫2和碱性电极液垫3分别浸泡正极电极液和负极电极液。等电聚焦电泳时，盖板7适当落入电泳槽4中，其作用是适当压紧酸性电极液垫2和碱性电极液垫3与胶条1接触，使其导电良好。接通直流电源即可进行等电聚焦实验。

所述的酸性电极液垫2，其中所含的电极液为：H₂SO₄、HCl、HBr、HI、HNO₃、CH₃COOH、H₃PO₄、或者上述混合溶液的酸性电解质，但HF除外，酸性电极液浓度为5mM～200mM；所述的碱性电极液垫3，其中的电极液为：NaOH、NH₄OH、H₂NCH₂CH₂NH₂、或者上述混合溶液的碱性电解质，但KOH除外，碱性电极液浓度为5mM～200mM。

所述的酸性电极液垫2和碱性电极液垫3的基材为：滤纸、脱脂棉、海绵或无纺布，其长度是与所在的电泳槽两端电极到电泳槽道端部之间的距离相适应，为4.5mm～12mm；其宽度与所在的电泳槽的槽道宽度匹配，为2.5～6.5mm，其厚度为0.6mm～3mm。

实施例2

如图2所示，本实施例为基于MRB的稳定pH梯度控制的对比实验结果。在此描述的实验中，对有酸性和碱性电极液垫控制的IEF实验（图2A）和没有酸性和碱性电极液垫控制的IEF实验（图2B）进行比较。在图2A中，所述的酸性电极液垫中使用的酸性电极液为H₃PO₄溶液，浓度为150mM，所述的碱性电极液垫中使用的碱性电极液为H₂NCH₂CH₂NH₂，浓度为200mM。而在图2B中，不使用酸性和碱性电极液垫。实验中可见的几种蛋白质样品分别为藻蓝蛋白（pI：4.45）、肌红蛋白（pI：6.8和7.0）、血红蛋白（pI：7.1和7.5）、细胞色素C（pI：9.6）。图2A中使用的方法可以很好的控制pH梯度的漂移。与下面的图2B对比后可以看出，藻蓝蛋白的相对位置聚焦在4.3附近，肌红蛋白和血红蛋白相对位置分别聚焦在6.7～6.85和7.1～7.3，细胞色素C相对位置设定在9.6，这些相对位置基本与各自的pI值接近。而在图2B中，藻蓝蛋白相对位置在pH4.55～4.7，肌红蛋白和血红蛋白相对位置分别聚焦在7.95～8.1和8.55，细胞色素C相对位置设定在9.6，说明pH梯度有明显的阴极漂移现象。图2A和2B的对比实验结果说明在此描述的pH梯度可以很好的控制蛋白质的漂移。

实施例3

如图3所示，本实施例是基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控实例，其具体方法是：

1）对IPG或non-IPG胶条1进行水化上样；2）制备IEF酸性扩散调控垫8和碱性扩散调控垫9；3）将酸性扩散调控垫8和碱性扩散调控垫9分别放置于电泳槽4的阳极5和阴极6，并使其接触良好；4）将水化后的IPG或non-IPG胶条1放入IEF电泳槽4，并使胶面与电泳槽底部接触；5）将所述盖板7轻压胶条的阳极端和阴极端，并分别于酸性调控垫8和碱性调控垫9电连接，之后滴加硅油覆盖整个胶条1；6）通直流电，并程序性升压，进行等电聚焦电泳实验。

所述的酸性扩散调控垫，其中所含的电极液为：H₂SO₄、HCl、HBr、HI、HNO₃、CH₃COOH、H₃PO₄、或者上述混合溶液的酸性电解质，浓度为150mM～2000mM；所述的碱性扩散调控垫，其中的电极液为：NaOH、NH₄OH、H₂NCH₂CH₂NH₂、或者上述混合溶液的除KOH以外的碱性电解质，浓度为150mM～2000mM。

所述的酸性扩散调控垫和碱性扩散调控垫的基材为：滤纸、脱脂棉、海绵或无纺布，其长度是与所在的电泳槽两端电极到电泳槽道端部之间的距离相适应，为4.5mm～12mm；其宽度与所在的电泳槽的槽道宽度匹配，为2.5～6.5mm，其厚度为0.6mm～3mm。

实施例4

如图4所示，本实施例为基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控的实验结果。在此描述的实验中，对有高浓度酸性和碱性电极液垫控制的IEF实验（图4A）和只有酸性和碱性电极液垫控制的IEF实验（图4B）进行比较。在图4A中，所述的高浓度酸性电极液垫中使用的酸性电极液为H₃PO₄溶液，浓度为150mM，所述的高浓度碱性电极液垫中使用的碱性电极液为H₂NCH₂CH₂NH₂，浓度为1000mM。而在图4B中，使用的是实施例2A中所述的酸性和碱性电极液垫，即酸性电极液为H₃PO₄溶液，浓度为150mM，碱性电极液为H₂NCH₂CH₂NH₂，浓度为200mM。实验中可见的几种蛋白质样品分别为藻蓝蛋白（pI：4.45）、肌红蛋白（pI：6.8和7.0）、血红蛋白（pI：7.1和7.5）、细胞色素C（pI：9.6）。在图4A中，藻蓝蛋白相对聚焦位置在3.6，肌红蛋白和血红蛋白相对聚焦位置分别在4.4～4.85和5.05～5.4，细胞色素C相对聚焦位置设定在9.6，明显的拉大了阴极端的pH梯度范围，并且可以看出几条褐色的条带分辨率提高了，说明拉大阴极端pH梯度范围可以很好的用于阴极端碱性蛋白样品的分离，这对于碱性蛋白质样品的重点分析有重要意义。而在图4B中，藻蓝蛋白聚焦位置在4.3，肌红蛋白和血红蛋白位置分别在pH6.65～6.85和7.1～7.3，细胞色素C聚焦位置设定在pH9.6，进一步对比分析可以看出褐色蛋白的分辨率没有图4A中好，当需要对碱性pI值样品进行重点分析时就会有困难。综上所述分析，使用本技术所述的高浓度酸性和碱性扩散调控垫有很好的调节pH梯度线性和范围的作用。

实施例5

如图5所示，本实施例是非固化pH梯度胶条（non-IPG胶条）的实例，包括：包含能与聚丙烯酰胺凝胶聚合的亲水面的凝胶支持膜10、承载蛋白质样品并与支持膜键合的抗对流介质11、形成pH梯度和亲水性的两性载体电解质12和储存保护胶条的保护膜13。

所述的凝胶支持膜10的其中一面是具有乙烯基团的材质，以便与聚丙烯酰胺凝胶牢固键合。

所述的凝胶支持膜10的宽度为2.5～4.5mm，长度为3.5cm～24cm，其厚度为0.15mm～0.35mm。

所述的抗对流介质11的材料由聚丙烯酰胺凝胶，介质浓度T为2～10%（质量百分百），交联度C为2～6%。

所述的抗对流介质11的长度为3.5cm～24cm，厚度为0.45mm～0.65mm，宽度为2.5～4.5mm。

凝胶支持膜10长度和宽度可随需要裁切。抗对流介质11与凝胶支持膜10牢固结合，在抗对流介质11中添加的两性载体电解质12与抗对流介质11没有化学键的结合，在电场作用下，两性载体电解质12沿正极到负极方向形成从低到高的pH梯度。两性电解质质量百分浓度优选在1.5%至5%，而现有IPG-IEF中所有两性电解质质量浓度为0.5%至1%，两性电解质浓度的提高有助于提高抗对流介质中的水溶性基团，使其更好的稳定pH梯度。

所述的保护膜13覆盖于抗对流介质11之上，材料为聚乙烯膜或聚酯膜或腈纶膜或尼龙膜；其长度和宽度均与凝胶支持膜10相匹配，宽度为2.5～4.5mm，长度为3.5cm～24cm，厚度为40μm～100μm。可以有效地防止胶条受到污染，方便non-IPG胶条的长期保存。

实施例6

如图6所示，本实施例为电泳槽的实例，包括：设有若干个槽道的聚焦槽框架14、散热底板16、用于压制酸性电极液垫或碱性电极液垫的盖板7和电极部件，其中：聚焦槽框架14和散热底板16相互契合，电极部件固定于聚焦槽框架14和散热底板16之间，盖板7与散热底板16相互配合。

所述的聚焦槽框架14有楔形头15且与散热底板16上的楔形孔17相配合。

所述的聚焦槽框架14有定位孔22且与盖板7上的定位片23相配合。

所述的电极部件包括：相互接触的电极丝和电极片20，其中：电极丝的电极丝环19贴在环聚焦槽框架14上所开的电极螺丝孔18上，电极固定螺丝21穿过所述电极丝环19和电极片20固定于所述聚焦槽框架14上的所述电极螺丝孔18。

所述的聚焦槽框架14的槽道个数为6～12个，聚焦槽框架14沿槽道方向的长度为7cm～24cm。

等电聚焦电泳时，盖板7落于电泳盘内，优选所述盖板材料为PMMA，其作用是适当压紧所述酸性垫或碱性垫，使其与所述等电聚焦电泳盘两端的电极丝接触良好。

在此描述的电泳槽能很好的与实施例1至6所述的稳定pH梯度的控制技术和调节pH梯度线性的技术相兼容。具体包括：1）电泳槽4是导热系数较高的材料制作，如导热塑料（2～10W m^-1K^-1）或导热陶瓷（5～150W m^-1K^-1）或它们的混合材料（2-30W m^-1K^-1），有良好的散热效果，而现有通用的电泳槽散热效果较差，导热系数一般在3W m^-1K^-1以下。2）电泳槽槽道宽度与所述non-IPG-IEF胶条的宽度匹配，宽度在2.5mm至4.5mm之间。3）所述的电极使用内嵌设计，与现有等点聚焦设备完全兼容，且有更方便操作的优势。

Claims

1.一种蛋白质等电聚焦电泳的pH梯度控制方法，其特征在于，首先制备含有电极液的多孔亲水材料作为酸性垫和碱性垫，然后将酸性垫置于电泳槽内的阳极与经过水化上样的固化或非固化pH梯度胶条的一端之间，将碱性垫置于阴极与胶条的另一端之间，且并轻压固定以实现电连接，最后滴加硅油覆盖整个电泳槽内并施加直流电压，通过逐步增加电压实现等电聚焦电泳测试。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，在基于MRB的稳定pH梯度控制时，所述的酸性垫为酸性电极液垫，其中所含的电极液为：H₂SO₄、HCl、HBr、HI、HNO₃、CH₃COOH、H₃PO₄、或者上述混合溶液的酸性电解质，但HF除外，酸性电极液浓度为5mM～200mM；所述的碱性垫为碱性电极液垫，其中的电极液为：NaOH、NH₄OH、H₂NCH₂CH₂NH₂、或者上述混合溶液的碱性电解质，但KOH除外，碱性性电极液浓度为5mM～200mM；

在基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控时，所述的酸性垫为酸性扩散调控垫，其中所含的电极液为：H₂SO₄、HCl、HBr、HI、HNO₃、CH₃COOH、H₃PO₄、或者上述混合溶液的酸性电解质，浓度为150mM～2000mM；所述的碱性垫为碱性电极液垫，其中的电极液为：NaOH、NH₄OH、H₂NCH₂CH₂NH₂、或者上述混合溶液的碱性电解质，浓度为150mM～2000mM。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，所述的酸性垫和碱性垫以及的基材为：滤纸、脱脂棉、海绵或无纺布，其长度是与所在的电泳槽两端电极到电泳槽道端部之间的距离相适应。

4.一种实现上述任一项权利要求所述的方法的非固化pH梯度胶条，其特征在于，包括：包含具有亲水面的能与聚丙烯酰胺凝胶聚合的凝胶支持膜、具有承载蛋白质样品并与支持膜键合的抗对流介质、具有形成pH梯度的两性载体电解质和用于储存保护等胶条的保护膜。

5.根据权利要求4所述的非固化pH梯度胶条，其特征是，所述的凝胶支持膜的其中一面是具有乙烯基团，以便与聚丙烯酰胺凝胶牢固键合。

6.根据权利要求4所述的非固化pH梯度胶条，其特征是，所述的抗对流介质材料由聚丙烯酰胺凝胶，其浓度T为2%至10，交联度C为2%至6%。

7.一种实现上述任一项权利要求所述的电泳槽，其特征在于，包括：设有若干个槽道的聚焦槽框架、散热底板、用于压制酸性垫或碱性垫的盖板和电极部件，其中：聚焦槽框架和散热底板相互契合，电极部件固定于聚焦槽框架和散热底板之间，盖板与散热底板相互配合。

8.根据权利要求7所述的装置，其特征是，所述的聚焦槽框架有楔形头且与散热底板上的楔形孔相配合。

9.根据权利要求7或8所述的装置，其特征是，所述的聚焦槽框架有定位孔且与盖板上的定位片相配合。

10.根据权利要求7所述的装置，其特征是，所述的电极部件包括：相互接触的电极丝和电极片，其中：电极丝的电极丝环贴在环聚焦槽框架上所开的电极螺丝孔上。