CN103214422A

CN103214422A - 一类新型取代胺基咪唑酮衍生物的制备方法及抗癌作用

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Publication number: CN103214422A
Application number: CN2013101643795A
Authority: CN
Inventors: 王新杨; 凌勇; 肖幼安; 王志强; 高琦; 陈敏; 李杨; 仇文倩
Original assignee: Nantong University
Current assignee: Nantong University
Priority date: 2013-05-07
Filing date: 2013-05-07
Publication date: 2013-07-24
Anticipated expiration: 2033-05-07
Also published as: CN103214422B

Abstract

本发明涉及一类医药技术领域，是一类新型取代胺基咪唑酮制备方法及抗癌作用。该化合物的结构通式为：在咪唑酮环中，一方面在通式I中，基团中，R¹或R²可以分别独立地选自基团选自H，或C1～C12的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基，或带有O，N，S，卤素等杂原子的C1～C12的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基，或苯基、苄基，或取代苯基。另一方面在通式II中，基团可为饱和或不饱和的环状基团，其中R³可以分别独立地选自基团选自H，或C1～C12的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基，或带有O，N，S，卤素等杂原子的C1～C12的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基，或取代苯基；X可以为O，或S，或NH，或取代的N原子等。本化合物化学性质稳定，具有抑制肿瘤细胞生长，可以用来制备抗癌药物。

Description

一类新型取代胺基咪唑酮衍生物的制备方法及抗癌作用

技术领域

本发明是关于一类具有抗肿瘤活性的特定化学结构及制备该化合物的方法。

背景技术

肿瘤严重威胁着人类生命健康，根据全国肿瘤登记中心发布的《2012中国肿瘤登记年报》显示，2009年全国恶性肿瘤发病率为285.91/10万，每年新发肿瘤病例约312万例，每分钟就有6人被确诊为肿瘤。全国恶性肿瘤死亡率为180.54/10万，每年因肿瘤死亡病例达270万例，恶性肿瘤已经成为重大的公共卫生问题之一，也是我国每年患者因病死亡的第二位主要因素。抗肿瘤研究及药物治疗也成为药学家重要的关注课题之一。

在各种不同作用机制的抗肿瘤药物中，肿瘤血管阻断剂因具有较低毒副作用和耐药性而成为抗肿瘤药物的研究热点。小分子的血管阻断剂主要以微管蛋白为作用靶点，通过与其作用产生微管解聚，最终导致肿瘤细胞死亡。本发明人根据咪唑啉酮类化合物对肿瘤细胞微管蛋白的相互作用，设计了以微管蛋白为靶点的新型咪唑啉酮化合物, 即含二氟烷基氧基取代基团的芳基亚甲基-2-取代胺基-咪唑啉酮类化合物。之所以引入氟原子，主要因为氟原子与氢原子的范德华半径相近（原子半径：H原子1.2×10^-10m， F原子1.35×10^-10 m），以氟原子取代化合物中的氢原子，两者原子半径差异很小，生物体难于识别，不影响化合物进入生物体组织的能力，但通过引入氟原子，因较强的电负性，可重新改善分子内电子云分布，提高分子脂溶性，增加化合物对细胞组织、细胞壁和细胞膜的渗透性能，加大生物膜中的溶解度，促进它在体内的输送传导和吸收。除此之外，C—F键的键能（484.9kj.mol^-1）比C—H键能（414.5 kj.mol^-1）大，与氟原子结合的部位C—F键稳定性高，直接增大该化合物体内抗代谢能力，可使之在生物组织中不易分解，而保持较长的生物活性有效作用期，提高生物利用度。另外，有研究表明，具有4-羟基-3-二氟甲氧基苯基团的目标化合物显示出更好的肿瘤细胞毒性，尤其对在肝癌，胃癌，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞中高表达的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)活性也有显著的抑制作用，因此引入该结构必将能显著地增强化合物的抗癌活性。除此之外，为平衡分子因引入二氟甲氧基基团导致的脂溶性增加，在结构里再引入含胺基片段，则在一定程度上改善了分子的脂水分配系数，从而改善了化合物一定的抗肿瘤活性。实验表明该化合物具有相当的抗肿瘤活性。

发明内容

发明的结构通式为

其中，在通式中，咪唑酮环的2-位取代基Y为含氮的各类杂环，可以为

或

形式。当Y基团为

形式时， R¹或R²可以分别独立地选自基团选自H，或C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或带有O, N, S，卤素等杂原子的C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或苯基、苄基, 或取代苯基及各种杂环基团；当Y基团为

Figure 2013101643795100002DEST_PATH_IMAGE004

形式时，可为饱和或不饱和的环状基团。其中R3可以分别独立地选自基团选自H，或C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或带有O, N, S，卤素等杂原子的C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或苯基、取代苯基，及各种杂环基团；X可以为O，或S，或 NH，或取代的N原子等。

Y基团为

形式时，R¹或R²尤其可独立地选自：H或 X(CH₂)_m- (m=0,1,2,3,4; X=H, NH2, SH, OH)，如

特别优选基团为： -NH₂, CH₃NH-, CH₃CH₂NH-, CH₃CH₂CH₂NH-, CH₃CH₂CH₂CH₂NH-, HOCH₂CH₂NH-, HOCH₂CH₂CH₂NH-, CH₃CH(CH₂OH)NH-, HOCH₂CH(CH₂OH)NH-, [HOCH₂(CHOH)CH₂]CH₃N-, (HOCH₂CH₂)₂N-。

Y基团为

形式时，Y基团尤其特别优选的是含有各种羟基、巯基、氨基、卤素及烷基取代的饱和含氮杂环如哌啶环、吡咯环、哌嗪环、吗啉环，以及含有各种羟基、巯基、氨基、卤素及烷基取代的不饱和含氮杂环如噻唑环、噁唑环、吡唑环、咪唑环、三氮唑环，四氮唑环，噁嗪环，噻嗪环。

特别优选的化合物如下：

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-氨基-1H-咪唑-5-酮（5a）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-甲氨基-1H-咪唑-5-酮（5b）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-乙氨基-1H-咪唑-5-酮（5c）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-正丙氨基-1H-咪唑-5-酮（5d；）

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-正丁氨基-1H-咪唑-5-酮（5e）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-羟乙氨基-1H-咪唑-5-酮（5f）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-羟丙氨基-1H-咪唑-5-酮（5g）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-(2-羟基丙氨基)-1H-咪唑-5-酮（5h）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-(二(2-羟乙基)氨基)-1H-咪唑-5-酮（5i）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3-羟基苯基亚甲基)-2-(2，3-二羟基丙氨基)-1H-咪唑-5-酮（5j）；

(Z)-4- (4-二氟甲基-3-羟基苯基亚甲基)-2-(N-甲基-2，3-二羟基丙氨基)-1H-咪唑-5-酮 (5k)。

本发明化合物的制备方法为：

具体操作为：

1）香豆素（1）在NaOH作用下，与二氟氯甲烷反应获得3-甲氧基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛(2)；

2） 3-甲氧基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛 2 在溴化硼和NMP作用下，在-40⁰C下，获得3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛(3)；

3） 3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛与3-乙酰基2-硫代海因在乙酸和乙酸钠中回流反应生成4-[3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯亚甲基]-2-硫代海因(4)；

4） 4-[3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯亚甲基]-2-硫代海因在TBHP作用下室温与取代胺反应，获得目标产物4-[3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯亚甲基]-2-取代胺基咪唑啉-5-酮(5a-5k)。

本发明的再一目的是提供本发明通式5a-5k化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。

本发明的进一步目的在于提供一种含有效剂量的本发明通式5a-5k化合物或其医学上可接受的盐及药学上可接受的载体或辅料的药物组合物。

本发明的再一目的是提供本发明通式5a-5k化合物在制备抗肿瘤药物和神经保护药物中的应用，尤其是治疗肝癌，胰腺癌，肺癌，乳腺癌，脑癌，结肠癌及胃癌等肿瘤药物中的应用和脑损伤神经保护药物中的应用。

本发明化合物可以单独或与一种或一种以上的药学上可接受的载体组合制成制剂以供给药。例如，溶剂、稀释剂等，可以用口服剂型给药，如片剂、胶囊、可分散粉末、颗粒剂等。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。这些药用制剂中可以含有与载体组合的例如0.05%~90%重量的活性成分，更常见约15%~60%之间重量的活性成分。本发明化合物剂量可以是0.005~5000 mg/kg/天，也可根据疾病严重程度或剂型的不同使用剂量超出此剂量范围。

本发明化合物可以与其他抗肿瘤药物例如烷化剂（如环磷酰胺或顺铂）、抗代谢药（如5-氟尿嘧啶或羟基脲）、拓扑异构酶抑制剂（如喜树碱）、有丝分裂抑制剂（如紫杉醇或长春碱）、DNA插入剂（如阿霉素）联合应用，另外还可以与放射治疗联合应用。这些其他抗肿瘤药物或放射治疗可以与本发明化合物同时或在不同时间给予。这些联合治疗可以产生协同作用从而有助于改善治疗效果。

本发明化合物的部分药理试验结果如下：

经过6种人肿瘤细胞株测试，发现大部分受试药物都在低微摩尔水平上表现出明显的抗肿瘤活性，许多受试药物的细胞毒性已与阳性对照药5-氟尿嘧啶(5-FU)相当，甚至更好。

在人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721中，很多化合物IC₅₀值小于5-FU，其中化合物5c，5f，5g，5k活性与3-氟尿嘧啶相当，化合物5a，5b，5j的IC₅₀值略小于5-FU。

在人乳腺癌细胞Mcf-7，胰腺癌细胞Panc-1和人结肠癌细胞SW480中，除了5d,5e,5h,5i样品外，大部分受试化合物的IC₅₀值和5-氟尿嘧啶在一个水平。

Table1. 部分化合物对六种人类肿瘤细胞株的细胞毒性 (IC₅₀, μmol/L)

Figure 2013101643795100002DEST_PATH_IMAGE006

具体实施方式

为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-氨基-1H-咪唑-5-酮（5a）

4-(二氟甲氧基)-3-甲氧基苯甲醛（2）

将香兰素(1) (1.52g, 10mol)溶于乙醇(20ml)，搅拌溶解，加入固体NaOH(0.8g, 20mol)，搅拌均匀，通入二氟一氯甲烷，50℃下搅拌4h，过滤，蒸除滤液，将剩余残渣倒入0.8mol/L NaOH(50ml)溶液中，边倒边搅拌，析出大量固体，过滤，水洗至中性，干燥，得黄色粉末1.57g，收率84.4%。

4-(二氟甲氧基)-3-羟基苯甲醛（3）

将化合物9(0.9g, 5mmol)溶解于NMP(30mL)中，氮气保护下冷却至-40℃，逐滴加入1M/L三溴化硼的NMP溶液(20mL)，搅拌2h后加入100mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取（3×50mL），干燥，过滤，蒸干得类白色固体0.76g，收率88.3%。

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-硫杂-1H-咪唑-5-酮（4）

参照(2a)的合成方法，由2-硫代海因（1.83g, 11.6mmol）与化合物10（2.18, 11.6mmol）反应得到深褐色固体2.41g，收率84.8%，mp：190-197℃。

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-氨基-1H-咪唑-5-酮（5a）

将2.86g(10mmol)化合物11 溶解于80mL甲醇中，向其中滴加3.2mL（32mmol）TBHP，室温搅拌2h后，向反应液中加入25mL(200mmol)氨水,此时反应液由褐色变为大红色，室温搅拌10h后TLC监控反应(展开剂为甲醇：乙酸乙酯=1：10)，原料点消失反应停止，蒸除甲醇和过量的TBHP。用甲醇：乙酸乙酯=1：20过柱得白色固体1.56g，收率53.9%，mp：>250℃。

IR(KBr, cm^-1):3142cm^-1(氨基), 2757cm^-1(二氟甲氧基), 1716cm^-1(羰基), 1624cm^-1(碳碳双键), 1527～1434cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz):7.60 (s, 1H, C=CH), 7.33(s, 1H, CF₂H), 7.11(S, 1H, Ar-H), 7.02(d, 1H, Ar-H), 6.74(d, 1H, Ar-H); MS(ESI)m/z = 270[M+1]⁺.

实施例2 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-甲氨基-1H-咪唑-5-酮（5b）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与甲胺(3.1g, 100mmol)反应得黄色固体2.02g，收率71.4%，mp：>250℃。

IR (KBr, cm^-1): 3031cm^-1(羟基), 2738cm^-1(二氟甲氧基), 1697cm^-1(羰基), 1636cm^-1(碳碳双键), 1540～1437cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.80 (s, 1H, C=CH), 7.43(s, 1H, CF₂H), 7.26(S, 1H, Ar-H), 7.01(d, 1H, Ar-H), 6.82(d, 1H, Ar-H), 2.48-2.47(d, 3H, CH₃); MS(ESI)m/z=284[M+1]⁺.

实施例3 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-乙氨基-1H-咪唑-5-酮（5c）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与乙胺(2.25g, 50mmol)反应得淡黄色固体2.54g，收率85.5%，mp：>250℃。

IR (KBr, cm^-1): 3328cm^-1(羟基), 2973cm^-1(二氟甲氧基), 1697cm^-1(羰基), 1617cm^-1(碳碳双键), 1534～1372 cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.71 (s, 1H, C=CH), 7.40(s, 1H, CF₂H), 7.21(S, 1H, Ar-H), 7.05(d, 1H, Ar-H), 6.93(d, 1H, Ar-H), 2.48-2.47(d, 3H, CH₃); MS(ESI)m/z=298[M+1]⁺.

实施例4 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-正丙氨基-1H-咪唑-5-酮（5d）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与丙胺(2.36g, 40mmol)反应得黄色固体1.98g，收率63.6%，mp：>250℃。

IR (KBr, cm^-1): 3311cm^-1(羟基), 2989cm^-1(二氟甲氧基), 1694cm^-1(羰基), 1620cm^-1(碳碳双键), 1537～1371cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.41 (s, 1H, C=CH), 7.27(s, 1H, CF₂H), 7.12(S, 1H, Ar-H), 7.06(d, 1H, Ar-H), 6.78(d, 1H, Ar-H), 2.88-2.67(m, 3H, NHCH₂), 1.70(d, 2H, CH₂CH ₂), 1.10-0.99(m, 3H,CH₃); MS(ESI)m/z=312[M+1]⁺.

实施例5 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-正丁氨基-1H-咪唑-5-酮（5e）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与丁胺(2.92g, 40mmol)反应得淡黄色固体1.87g，收率57.3%。

IR (KBr, cm^-1): 3239cm^-1(羟基), 2982cm^-1(二氟甲氧基), 1710cm^-1(羰基), 1621cm^-1(碳碳双键), 1557～1376cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.57 (s, 1H, C=CH), 7.29(s, 1H, CF₂H), 7.22(S, 1H, Ar-H), 7.01(d, 1H, Ar-H), 6.71(d, 1H, Ar-H), 2.97-2.47(m, 3H, NHCH₂), 1.60-1.34(m, 4H, CH ₂CH ₂CH₃), 1.10-0.99(m, 3H,CH₃); MS(ESI)m/z=326[M+1]⁺.

实施例6 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-羟乙氨基-1H-咪唑-5-酮（5f）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与乙醇胺(1.53g, 25mmol)反应得淡黄色固体2.31g，收率73.8%。

IR (KBr, cm^-1): 3332cm^-1(羟基), 2981cm^-1(二氟甲氧基), 1692cm^-1(羰基), 1616cm^-1(碳碳双键), 1553～1372cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.36-7.33(s, 1H, C=CH), 7.20 (s, 1H, CF₂H), 7.03-7.01(m, 2H, Ar-H), 6.63(d, 1H, Ar-H), 3.19-3.05(m, 2H, HOCH ₂), 2.48(m, 2H, NHCH ₂); MS(ESI)m/z=314 [M+1]⁺.

实施例7 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-羟丙氨基-1H-咪唑-5-酮（5g）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与丙醇胺(1.88g, 25mmol)反应得淡黄色固体2.10g，收率64%。

IR (KBr, cm^-1): 3323cm^-1(羟基), 2985cm^-1(二氟甲氧基), 1697cm^-1(羰基), 1612cm^-1(碳碳双键), 1543～1381cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.39(s, 1H, C=CH), 7.22(s, 1H, CF₂H), 7.05-7.014(m, 2H, Ar-H), 6.26(d, 1H, Ar-H), 3.49-3.35(m, 2H, HOCH ₂), 2.81(m, 2H, NHCH ₂), 1.87-1.65(m, 2H, CH₂CH ₂CH₂); MS(ESI)m/z=328[M+1]⁺.

实施例8 (Z)-4-（4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基）-2-（2-羟基丙氨基）-1H-咪唑-5-酮（5h）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与异丙醇胺(1.88g, 25mmol)反应得淡黄色油状物1.77g，收率54.1%。

IR (KBr, cm^-1): 3320cm^-1(羟基), 2981cm^-1(二氟甲氧基), 1721cm^-1(羰基), 1618cm^-1(碳碳双键), 1542～1373cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.39-7.23(s, 1H, C=CH), 7.21(s, 1H, CF₂H), 7.10-7.02(m, 2H, Ar-H), 6.68(d, 1H, Ar-H), 3.49-3.35(m, 1H, HOCH), 2.78-2.66(m, 2H, NHCH ₂), 1.10-1.05(m, 3H, CH ₃); MS(ESI)m/z=328 [M+1]⁺.

实施例9 (Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-(二(2-羟乙基)氨基)-1H-咪唑-5-酮（5i）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与二乙醇胺(3.15g, 30mmol)反应得淡黄色油状物2.87g，收率80.2%。

IR (KBr, cm^-1): 3302cm^-1(羟基), 2982cm^-1(二氟甲氧基), 1701cm^-1(羰基), 1620cm^-1(碳碳双键), 1539～1381cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz): 7.36-7.30(s, 1H, C=CH), 7.25(s, 1H, CF₂H), 7.06-7.01 (m, 2H, Ar-H), 6.63(d, 1H, Ar-H), 3.49-3.25(m, 4H, 2HOCH ₂), 2.61(m, 4H, 2NHCH ₂); MS(ESI)m/z=358 [M+1]⁺.

实施例10 (Z)-4-(4-二氟甲基-3-羟基苯基亚甲基)-2-(2，3-二羟基丙氨基)-1H-咪唑-5-酮（5j）

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与2，3-二羟基丙胺(2.73g, 30mmol)反应得淡黄色油状物2.43g，收率70.6%。

IR (KBr, cm^-1): 3318cm^-1(羟基), 2980cm^-1(二氟甲氧基), 1713cm^-1(羰基), 1618cm^-1(碳碳双键), 1540～1380cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz):7.46-7.33(s, 1H, C=CH), 7.21(s, 1H, CF₂H), 7.02-7.00 (m, 2H, Ar-H), 6.16(d, 1H, Ar-H), 3.79-3.55(m, 3H, HOCH ₂, HOCH), 2.81-2.71(m, 2H, NHCH ₂); MS(ESI)m/z = 344[M+1]⁺.

实施例11 (Z)-4- (4-二氟甲基-3-羟基苯基亚甲基)-2-(N-甲基-2，3-二羟基丙氨基)-1H-咪唑-5-酮 (5k)

参照(5a)的合成方法，由化合物11(2.86g, 10mmol)与N-甲基-2，3-二羟基丙胺(3.15g, 30mmol)反应得淡黄色油状物2.05g，收率57.4%。

IR (KBr, cm^-1): 3312cm^-1(羟基), 2982cm^-1(二氟甲氧基), 1703cm^-1(羰基), 1621cm^-1(碳碳双键), 1543～1378cm^-1(芳环骨架振动); ¹H NMR(CDCl₃, 300MHz):7.41-7.30(s, 1H, C=CH), 7.21 (s, 1H, CF₂H), 7.09-7.04(m, 2H, Ar-H), 6.46(d, 1H, Ar-H), 3.72-3.60 (m, 3H, HOCH ₂, HOCH), 3.07(d, 3H, CH₃), 2.80-2.72(m, 2H, NHCH ₂); MS(ESI)m/z = 358[M+1]⁺.

实施例12 肿瘤细胞抑制率测定方法

取对数生长期的细胞，胰酶+EDTA消化。消化后加10%小牛血清的完全培养液洗涤，悬浮，配制5×10⁴个/mL，每孔100 μL接种于96孔板中，于培养箱内常规培养24 h。吸弃上清，每孔加入200 μL含有不同浓度药物的完全培养基(含10%小牛血清，1%双抗)，每种浓度设3个平行孔，空白对照组只加完全培养基。药物终浓度为2.5×10^-5M，1.25×10^-5M。于培养箱内培养24 h、48 h后检测，按以下步骤进行：每孔加入5mg/mL的 MTT 20 μL，继续培养4 h，弃上清；每孔加入150 μL DMSO，振荡10 min后，于酶标仪上490 nm波长读取光密度值(OD值)。

抑制率计算方法：

阴性对照孔相对OD值 = 阴性对照孔绝对OD值 — 空白对照孔绝对OD值

药敏孔相对OD值 = 药敏孔绝对OD值 — 空白对照孔绝对OD值

计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率以及IC₅₀值。

Claims

1.一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：所述取代胺基咪唑酮衍生物化合物通式为：

所述式中

Figure 2013101643795100001DEST_PATH_IMAGE001

所述通式中Y基团代表含氮原子的取代基。

2.根据权利要求1所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：在化合物通式中， Y基团为

Figure 2013101643795100001DEST_PATH_IMAGE002

形式时， R¹或R²可以分别独立地选自基团选自H，或C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或带有O, N, S，卤素等（不能用等，删除）杂原子的C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或苯基、苄基, 或取代苯基或各种杂环基团。

3.根据权利要求2所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：在化合物通式中， Y基团为

形式时，R¹或R²尤其可独立地选自：H或 X(CH₂)_m- (m=0,1,2,3,4; X=H, NH₂, SH, OH)。

4.根据权利要求3所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：在化合物通式中， Y基团为

中，基团为-NH₂, CH₃NH-, CH₃CH₂NH-, CH₃CH₂CH₂NH-, CH₃CH₂CH₂CH₂NH-, HOCH₂CH₂NH-, HOCH₂CH₂CH₂NH-, CH₃CH(CH₂OH)NH-, HOCH₂CH(CH₂OH)NH-, [HOCH₂(CHOH)CH₂]CH₃N-, (HOCH₂CH₂)₂N-。

5.根据权利要求1所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：在化合物通式中，Y基团为

Figure 2013101643795100001DEST_PATH_IMAGE003

形式时，可为饱和或不饱和的环状基团；其中R3可以分别独立地选自基团选自H，或C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或带有O, N, S，卤素等删除）杂原子的C1~ C12 的饱和或不饱和的烷基、环烷基、链烯基, 或苯基、取代苯基，及各种杂环基团；X可以为O，或S，或 NH，或取代的N原子等删除）。

6.根据权利要求5所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：在化合物通式中， Y基团为

形式时，Y基团含有各种羟基、巯基、氨基、卤素及烷基取代的饱和含氮杂环如哌啶环、吡咯环、哌嗪环、吗啉环，以及含有各种羟基、巯基、氨基、卤素及烷基取代的不饱和含氮杂环如噻唑环、噁唑环、吡唑环、咪唑环、三氮唑环，四氮唑环，噁嗪环，噻嗪环。

7.根据权利要求1所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：所述取代胺基咪唑酮衍生物化合物为：

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-正丙氨基-1H-咪唑-5-酮（5d）；

(Z)-4-（4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基）-2-（2-羟基丙氨基）-1H-咪唑-5-酮（5h）；

(Z)-4-(4-二氟甲基-3羟基苯基亚甲基)-2-[二(2-羟乙基)氨基]1H-咪唑-5-酮（5i）；

8.根据权利要求1所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物，其特征在于：取代胺基咪唑酮衍生物是在咪唑酮的4-位取代苯亚基里，取代苯为3-羟基-4-二氟取代甲氧基苯基。

9.一种实现权利要求1所述的一种取代胺基咪唑酮衍生物的制备方法，其特征为：

1）在NaOH作用下，与二氟氯甲烷反应获得3-甲氧基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛(2)；

2）3-甲氧基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛2在溴化硼和NMP作用下，在-40⁰C下，获得3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛(3)；

3）3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯甲醛与3-乙酰基2-硫代海因在乙酸和乙酸钠中回流反应生成4-[3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯亚甲基]-2-硫代海因(4)；

4）3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯亚甲基]-2-硫代海因在TBHP作用下室温与取代胺反应，获得目标产物4-[3-羟基-4-二氟代甲氧基-苯亚甲基]-2-取代胺基咪唑啉-5-酮(5a-5k)

一种药物组合物，由治疗上有效剂量的权利要求1-4所述的取代胺基咪唑酮衍生物及其医学上可接受的剂型和药学上可接受的载体或辅料组成。

10.根据权利要求10所述的取代胺基咪唑酮衍生物及其医学上可接受的剂型在制备肝癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、肠癌、胃癌、鼻咽癌、卵巢癌、脑癌、骨癌、前列腺癌症等常见癌症药物中的应用。