CN109096194B - 一种双胍衍生物、药物组合物、制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药领域，具体是涉及到一种双胍衍生物、药物组合物、制备方法和用途，所述双胍衍生物为如下化合物的结构，
Figure DDA0001823047340000011
或者其药学可接受的盐、溶剂化合物、异构体、酯、前药；本发明的化合物能显著抑制肿瘤细胞的增殖和迁移，IC50大大低于衍生化前的二甲双胍和苯乙双胍，以化合物11的活性最好，在UMUC3，T24，A2780细胞中活性是二甲双胍300‑800多倍，具有良好抗肿瘤药物的应用前景。

Description

一种双胍衍生物、药物组合物、制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体是涉及到一种双胍衍生物、药物组合物、制备方法和用途。
背景技术
双胍类药物是临床上治疗糖尿病的常用药物，其中，二甲双胍是一种代谢类的药物，多年来一直作为2型糖尿病的一线治疗药物，其在治疗糖尿病中的有效性主要归因于其抑制肝脏糖异生。除了降低葡萄糖的作用外，二甲双胍还具有其他多效促进健康的作用，包括降低癌症风险和肿瘤发生。近些年它的抗肿瘤作用也引起的广泛的关注。其作用机制的了解和研究也比较多。最近的数据显示，二甲双胍通过多种互不干扰的机制提高AMP/ATP比率，导致AMPK激活和mTORC1抑制。在细胞学和动物实验水平已经证实双胍类药物通过影响肿瘤细胞代谢发挥抗癌效应。在细胞学和动物实验水平已经证实双胍类药物通过影响肿瘤细胞代谢发挥抗癌效应。与二甲双胍相似，苯乙双胍是一种复合物I抑制剂，它以更大的亲和力和动力学运输到细胞中，作为AMPK的激动剂可以抑制肿瘤细胞的合成代谢，促进分解代谢，抑制肿瘤的生长。双胍类药物虽然显示出抗肿瘤作用，也有多项临床试验正在开展，但是至今没有开发出合适的药物。由于使用剂量过大导致乳酸中毒和胃肠道反应等副作用也一直是限制它在临床上使用的主要原因。
开发有较高生物活性和较低副作用的抗癌药物非常重要和迫切。胍基具有良好的降血糖、抗癌、抗菌的药理作用，但具有抗肿瘤活性所需要的浓度较高，因此需要进一步提升活性效力。
中国专利申请号为200910068498.4的专利公开了一种双取代苯基双胍诱导恶性肿瘤细胞失巢凋亡的用途，其化合物主要为苯基和双胍结合，双取代为苯环2、3、4、5、6位中任意两个位置的取代；取代基为卤素、烷基或卤素取代的烷基，其用于诱导恶性肿瘤细胞失巢凋亡。
吡唑拥有多种生理作用，包括止痛、抗发炎、退烧、抗心律失常、镇静、松弛肌肉、精神兴奋、抗痉挛、一元胺氧化酶抑制剂，抗糖尿病和抗菌。吡唑可作为某些医药、农药的中间体，在医药、农药的研究开发中占有十分重要的地位。吡唑衍生物在抗肿瘤方面的研究进展，杨涛涛等，中国药科大学，亚太传统医药，第8卷第5期，2012年5月，公开了具有抗肿瘤活性的多种吡唑衍生物，包括：噁二唑、噻二唑类吡唑化合物，酰胺类吡唑化合物，嘧啶类吡唑化合物，苯并咪唑类吡唑化合物，碳酸酯类吡唑化合物，二茂铁类吡唑化合物，二环吡唑化合物，查尔酮类吡唑化合物，1,5－二苯基取代吡唑化合物，硫脲类吡唑化合物，3,4－二芳基吡唑化合物，通过此类取代基加强其抗肿瘤的效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种双胍衍生物、药物组合物、制备方法和用途，其可以显著抑制肿瘤细胞的增殖和迁移，IC50大大低于衍生化前的二甲双胍和苯乙双胍，在UMUC3，T24，A2780细胞中活性是二甲双胍300-800多倍，具有良好抗肿瘤药物的应用前景。
本发明的内容为，所述双胍衍生物为如下化合物的结构，
Figure BDA0001823047320000021
或者其药学可接受的盐、溶剂化合物、异构体、酯、前药；所述盐由双胍衍生物与酸的加成盐，采用公知的成盐方法制备得到。所述酸优选盐酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、氢溴酸、酒石酸、富马酸、马来酸、枸橼酸、对甲苯磺酸或甲磺酸，最优选为盐酸盐。
上述药物可以制成注射剂、粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、外用贴剂等多种剂型，上述剂型的药物均可按照药学领域的常规方法制备。
所述R1、R2或R3选自氢、羟基、卤代基、氰基、硝基、C1‐C4的烷基、卤代C1‐C4的烷基、C3‐C8的环烷基、C1‐C4的烷氧基、C1‐C4的卤代烷氧基、C1‐C4的烷硫基、C1‐C4的卤代烷硫基、C1‐C4的烯基、C1‐C4的卤代烯基、C1‐C4的炔基、C1‐C4的卤代炔基，未取代或被1‐5个如下基团取代的芳基：羟基、卤代、氰基、硝基、C1‐C4的烷基、卤代C1‐C4的烷基、C3‐C8的环烷基、C1‐C4的烷氧基、C1‐C4的卤代烷氧基、C1‐C4的烷硫基、C1‐C4的卤代烷硫基、C1‐C4的烯基、C1‐C4的卤代烯基、C1‐C4的炔基、C1‐C4的卤代炔基。
优选的，所述R1为甲基，R2为氢或者甲基，R3为苯基、卤代苯基、卤代对甲基苯基或甲氧基苯基。
或者，优选的，R1为苯基、卤代苯基或C1‐C4的烷基取代的苯基，R2为氢或者甲基，R3为氢或者甲基。
优选的，所述双胍衍生物为如下化合物的结构，
Figure BDA0001823047320000031
最优选的化合物为化合物2、4、10和11。更优选的，为上述混合物的二盐酸盐。
本发明还提供一种药物组合物，包括双胍衍生物，以及任选的药学可接受的载体或辅料。一种双胍衍生物的制备方法，包括如下步骤：
Figure BDA0001823047320000032
所述溶剂优选为无水乙腈和三甲基氯硅烷，反应最好在微波中进行。
上述产物的制备方法包括如下步骤：
Figure BDA0001823047320000041
本发明还提供一种双胍衍生物或药物组合物在制备用于预防或治疗肿瘤和/或癌症的药物中的应用，其具体的应用为制备抑制肿瘤和/或癌症细胞的药物。
所述肿瘤和/或癌症选自肺癌、食道癌、胃癌、膀肌癌、黑色素瘤、胰腺癌、肾癌、白血病、前列腺癌、膀胱癌、神经母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、鼻咽癌，效果最明显的肿瘤为卵巢癌、膀胱癌。
本发明的有益效果是，本发明首次合成了12个含吡唑或苯基吡唑环的双胍类化合物，并对这些化合物的抗肿瘤活性进行了系统的测试。结果显示含吡唑和苯基吡唑的双胍衍生物能显著抑制肿瘤细胞的增殖和迁移，IC50大大低于衍生化前的二甲双胍和苯乙双胍，也明显优于双胍类物质和吡唑类物质的混合物，其中以化合物11的活性最好，在UMUC3，T24，A2780细胞中活性是二甲双胍300‐800多倍，具有良好抗肿瘤药物的应用前景。
附图说明
图1a为不同化合物对人膀胱癌细胞系UMUC3的抑制效果染色图。
图1b为不同化合物对人膀胱癌细胞系UMUC3的抑制效果柱状图。
图2a为不同化合物对人膀胱癌细胞系T24的抑制效果染色图。
图2b为不同化合物对人膀胱癌细胞系T24的抑制效果柱状图。
图3a为不同化合物对人卵巢癌细胞系A2780的抑制效果染色图。
图3b为不同化合物对人卵巢癌细胞系A2780的抑制效果柱状图。
图4为不同化合物对人膀胱癌细胞系UMUC3迁移的抑制效果图。
图5为不同化合物对人膀胱癌细胞系T24迁移的抑制效果图。
图6为不同化合物对人膀胱癌细胞系UMUC3和T24迁移的抑制效果柱状图。
具体实施方式
以下具体的实例用详细说明本发明，但本发明绝非仅限于这些例子(除另有注明外，所用原料均有市售)。
实施例1：中间体1‐苯基‐1H‐吡唑‐3‐醇的制备
Figure BDA0001823047320000051
将苯肼2.16g(0.02mol)与丙烯酸乙酯2.00g(0.02mol)置于乙酸乙酯中，室温反应4‐10小时，制得1‐苯基‐4,5‐二氢‐1H‐吡唑‐3‐醇2.71g，收率83.6％；再经氧化反应制得1‐苯基‐1H‐吡唑‐3‐醇2.40g，收率88.5％。
实施例2：中间体1‐(4‐氯苯基)‐1H‐吡唑‐4‐醇的制备
Figure BDA0001823047320000052
将4‐2‐(4,4,5,5‐四甲基‐1,3,2‐二氧杂硼杂环戊烷基)‐1H‐吡唑3.88g(0.02mol)与1‐溴‐4‐氯苯3.83g(0.02mol)溶于50mL甲醇和51.5mLNaOH(1mol/L)中室温搅拌2天，硅胶柱色谱法纯化后得到白色固体1‐苄基‐4‐2(4,4,5,5‐四甲基‐1,3,2‐二氧杂硼杂环戊烷基)‐1H‐吡唑2.55g，收率41.9％。
将1‐苄基‐4‐2(4,4,5,5‐四甲基‐1,3,2‐二氧杂硼杂环戊烷基)‐1H‐吡唑3.04g(0.01mol)溶于50mL四氢呋喃中，并冷却至0℃。加入6mL NaOH溶液(2mol/L)和1.22mL30％H2O2溶液(0.012mol)，并将反应物在室温下搅拌40分钟。用HCl(2mol/L)溶将反应调节至pH＝2，用有机相萃取、浓缩并纯化，得到1‐(4‐氯苯基)‐1H‐吡唑‐4‐醇1.48g，收率76.2％。
实施例3：中间体3‐(4‐氟苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐醇的制备
Figure BDA0001823047320000053
将3‐(4‐氟苯基)‐3‐氧代丙醛3.32g(0.02mol)与0.92g(0.02mol)甲基肼置于乙酸乙酯中，室温反应4‐10小时，制得3‐(4‐氟苯基)‐1‐甲基‐4,5‐二氢‐1H‐吡唑‐5‐醇2.80g，收率72.1％。经氧化反应制得3‐(4‐氟苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐醇1.93g，收率69.0％。
实施例4：中间体N‐Boc‐2‐溴乙胺的制备
Figure BDA0001823047320000054
将10.25g(0.05mol)溴乙胺溴酸盐溶解于160ml四氢呋喃中，按顺序加入20.16g碳酸氢钠、50ml水，室温搅拌下滴加42.60g(0.2mol)二碳酸二叔丁酯，滴毕，继续反应5‐12个小时。反应完全后，减压整除溶剂，加入(3×100ml)乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水100ml洗涤，脱溶后得无声油状液体43.37g，收率96.8％。
实施例5：中间体N‐Boc‐2‐(1‐苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺的制备
Figure BDA0001823047320000061
将4.48g(0.02mol)N‐Boc‐2‐溴乙胺与3.17g(0.02mol)1‐苯基‐1H‐3‐羟基吡唑(制备方法参考Organic Preparations and Procedure International，34(1)，98‐102；2002)加入150ml丁酮中，加入5.52g(0.04mol)碳酸钾，搅拌下加热至回流，反应5‐9小时，TLC监测反应完毕后，减压蒸除溶剂，加入(3×100ml)乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水150ml洗涤，脱溶后残余物柱层析(洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚，体积比是1:6)得黄色固体2.48g，收率82.5％。
实施例6：中间体N‐Boc‐2‐(1‐氯苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺的制备
Figure BDA0001823047320000062
将4.48g(0.02mol)N‐Boc‐2‐溴乙胺与3.88g(0.02mol)1‐苯基‐1H‐3‐羟基吡唑加入150ml丁酮中，加入5.52g(0.04mol)碳酸钾，搅拌下加热至回流，反应5‐9小时，TLC监测反应完毕后，减压蒸除溶剂，加入(3×100ml)乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水150ml洗涤，脱溶后残余物柱层析(洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚，体积比是1:6)得固体5.57g，收率86.0％。
实施例7：中间体N‐Boc‐2‐(1‐氯苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺的制备
Figure BDA0001823047320000063
将4.48g(0.02mol)N‐Boc‐2‐溴乙胺与3.86g(0.02mol)1‐(4‐氯苯基)‐1H‐4‐羟基吡唑加入150ml丁酮中，加入5.52g(0.04mol)碳酸钾，搅拌下加热至回流，反应5‐9小时，TLC监测反应完毕后，减压蒸除溶剂，加入(3×100ml)乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水150ml洗涤，脱溶后残余物柱层析(洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚，体积比是1:6)得固体5.03g，收率78.2％。
实施例8：中间体2‐(1‐氯苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺的制备
Figure BDA0001823047320000064
将6.03g(0.01mol)N‐Boc‐2‐(1‐苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺加入100ml乙酸乙酯中，室温搅拌滴加12ml浓盐酸，固体溶解，继续搅拌5‐6小时，TLC监测反应完毕后，减压蒸除溶剂。加入20ml二氯甲烷搅拌60分钟，过滤，并用二氯甲烷洗涤滤饼得3.97g白色固体。
实施例9：化合物1的制备
Figure BDA0001823047320000071
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(3‐苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐氧基)乙胺4.35g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得淡黄色固体4.86g，收率72％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.73(d,J＝7.9Hz,2H),7.37(t,J＝7.5Hz,2H),7.27(t,J＝7.2Hz,1H),6.26(s,1H),4.34(t,J＝4.8Hz,2H),3.67(s,3H),3.24(s,2H).
实施例10：化合物2的制备
Figure BDA0001823047320000072
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(3‐(4‐氯苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐氧基)乙胺5.03g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得淡黄色固体5.06g，收率68％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.74(d,J＝8.4Hz,4H),7.43(d,J＝8.4Hz,4H),6.27(s,1H),4.33(t,J＝4.9Hz,4H),3.66(s,6H),3.24(s,4H).
实施例11：化合物3的制备
Figure BDA0001823047320000073
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(3‐(4‐氟苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐氧基)乙胺4.71g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得黄色固体5.02g，收率70.5％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.75(dd,J＝8.1,5.8Hz,2H),7.20(t,J＝8.7Hz,2H),6.24(s,1H),4.33(t,J＝4.8Hz,2H),3.65(s,3H),3.24(s,2H).
实施例12：化合物4的制备
Figure BDA0001823047320000081
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(3‐(4‐(三氟甲基)苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐氧基)乙胺5.71g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得淡黄色固体5.34g，收率65.8％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.93(d,J＝8.1Hz,2H),7.72(d,J＝8.2Hz,2H),6.38(s,1H),4.35(t,J＝4.8Hz,2H),3.69(s,3H),3.25(s,2H).
实施例13：化合物5的制备
Figure BDA0001823047320000082
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(3‐(2‐苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐氧基)乙胺5.03g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得白色固体5.35，收率71.8％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.75–7.67(m,1H),7.48(d,J＝7.7Hz,1H),7.38–7.29(m,2H),6.19(s,1H),4.34(t,J＝4.8Hz,2H),3.77–3.63(m,3H),3.19(d,J＝33.7Hz,2H).
实施例14：化合物6的制备
Figure BDA0001823047320000083
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(5‐(4‐苯基)‐1,4‐二甲基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺4.95g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得淡黄色固体4.56g，收率62％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.65(d,J＝8.5Hz,2H),6.94(d,J＝8.5Hz,2H),6.17(s,H),4.32(t,J＝4.9Hz,2H),3.76(s,3H),3.64(s,3H),3.25(s,2H).
实施例15：化合物7的制备
Figure BDA0001823047320000091
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅烷缓慢滴加到2‐(3‐(2‐苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐5‐氧基)乙胺5.31g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得白色固体5.91g，收率76.5％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 7.58(t,J＝15.2Hz,2H),7.42(t,J＝11.1Hz,2H),4.31(t,J＝5.1Hz,2H),3.54(s,3H),3.19(s,2H),1.81(s,3H).
实施例16：化合物8的制备
Figure BDA0001823047320000092
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅缓慢滴加到2‐(1‐苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺4.06g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得白色固体5.09g，收率78.8％。
结构验证：
1HNMR(600MHz,DMSO)6 8.37(d,J＝2.0Hz,H),7.72(d,J＝8.1Hz,2H),7.45(t,J＝7.5Hz,2H),7.23(t,J＝7.4Hz,1H),6.06(d,J＝2.0Hz,1H),4.39(t,J＝5.0Hz,2H),3.22(s,2H).
实施例17：化合物9的制备
Figure BDA0001823047320000093
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅缓慢滴加到2‐(1‐(4‐氟苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺4.42g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得褐色固体5.27g，收率77.1％。
结构验证：
1HNMR(600MHz,DMSO)6 8.33(dd,J＝9.0,2.3Hz,1H),7.75(dt,J＝8.6,4.3Hz,2H),7.30(t,J＝8.7Hz,2H),6.05(dd,J＝11.4,2.3Hz,1H),4.38(t,J＝5.1Hz,2H),3.22(s,2H).
实施例18：化合物10的制备
Figure BDA0001823047320000101
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅缓慢滴加到2‐(1‐(4‐异丁基苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺5.19g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得白色固体4.56g，收率81.5％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 8.30(dd,J＝10.0,2.1Hz,1H),7.62(t,J＝6.0Hz,2H),7.45(d,J＝8.5Hz,2H),6.03(dd,J＝12.8,2.2Hz,1H),4.37(t,J＝5.1Hz,2H),3.36–3.09(m,2H),1.28(s,9H).
实施例19：化合物11的制备
Figure BDA0001823047320000102
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅缓慢滴加到2‐(1‐(3‐氯苯基‐1H‐吡唑‐3‐氧基)乙胺4.75g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得白色固体5.15g，收率71.9％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 8.45(dd,J＝9.7,2.4Hz,1H),7.82(d,J＝5.2Hz,1H),7.75–7.68(m,1H),7.46(t,J＝8.1Hz,1H),7.26(d,J＝6.7Hz,1H),6.09(dd,J＝9.8,2.4Hz,1H),4.41(t,J＝5.1Hz,2H),3.21(s,2H).
实施例20：化合物12的制备
Figure BDA0001823047320000103
将30mL无水乙腈和40mL三甲基氯硅(1.1当量)缓慢滴加到2‐(1‐(4‐苯基)‐1‐甲基‐1H‐吡唑‐4‐氧基)乙胺4.75g(0.02mol)和双氰胺1.58g(0.02mol)的混合物中。使用微波反应器(200W，2.45GHz)在150℃照射10分钟的环境下搅拌混合物。将混合物冷却至约50℃后，缓慢加入120mL异丙醇，进一步搅拌混合物并在125℃下照射1分钟。最后用乙腈洗涤双胍氢氯化物盐的沉淀两次得淡黄色固体5.59g，收率78.1％。
结构验证：
1H NMR(600MHz,DMSO)6 8.41(s,1H),7.80(d,J＝8.7Hz,2H),7.62(s,1H),7.53(d,J＝8.7Hz,2H),4.17(t,J＝5.0Hz,2H),3.18(s,2H).
实施例21：药物IC50值测定
一、实验材料
人膀胱癌细胞系UMUC3购自上海兴泊生物科技有限公司；
人膀胱癌细胞系T24购自上海兴泊生物科技有限公司；
人卵巢癌细胞系A2780购自上海兴泊生物科技有限公司；
二甲双胍、苯乙双胍购自Sigma‐Aldrich公司；
MTT购自Sigma‐Aldrich公司。
二、实验方法及结果
取处于对数期的人膀胱癌细胞系UMUC3、人膀胱癌细胞系T24和人卵巢癌细胞系A2780，分别按照每孔8000个细胞进行种板，将接种完的培养板均放置于培养箱中过夜，然后分别用0μM、6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM的药物处理，处理完成后将培养板均放回培养箱中培养72小时，然后用MTT比色法检测细胞生存率，并分别计算IC50值，实验结果如表1所示。
表1不同化合物的IC50值
Figure BDA0001823047320000111
Figure BDA0001823047320000121
实施例22：细胞克隆试验
一、实验材料
10％的福尔马林购自国药集团化学试剂有限公司；
结晶紫染液购自Sigma‐Aldrich公司。
二、实验方法及结果
取处于对数生长期的人膀胱癌细胞系UMUC3、人膀胱癌细胞系T24和人卵巢癌细胞系A2780，分别按照每孔8000个细胞接种于24孔培养板，将接种完的培养板均放置在培养箱中过夜，使细胞贴壁；然后分别给予0μM、5μM、10μM、20μM的药物处理，处理完后将培养板均放回培养箱中继续培养两周；待细胞融合至80％后，倒掉培养液，用PBS洗一遍，10％的福尔马林固定1个小时，用并500μL结晶紫染液染色一个小时，最后回收结晶紫染液；之后，分别将24孔板流水冲洗干净，并将24孔板倒置放在滤纸上，干燥后用相机拍摄图像并用酶标仪(Biotek，SYNERGY HTX，Vermont，USA)进行定量分析，实验结果如图1‐3所示。由图1‐3可以看出，化合物对人膀胱癌细胞系UMUC3、人膀胱癌细胞系T24和人卵巢癌细胞系A2780的集落形成均具有明显的抑制作用，并且随着化合物浓度的升高，对人膀胱癌细胞系UMUC3、人膀胱癌细胞系T24和人卵巢癌细胞系A2780的集落形成的抑制作用增强，即化合物对人膀胱癌细胞系UMUC3、人膀胱癌细胞系T24和人卵巢癌细胞系A2780的集落形成的集落形成的抑制作用呈现浓度依赖性。
实施例23：细胞划痕试验
一、实验方法及结果
取处于对数生长期的人膀胱癌细胞系UMUC3、人膀胱癌细胞系T24，分别按照每孔6X105个细胞接种于6孔培养板，将接种完的培养板均放置在培养箱中使细胞融合至70％‐80％。用marker笔在6孔板背后用直尺在中间划一个十字作为固定监测点，使前后观察时位置固定。用10μL枪头比着直尺于背后的横线划痕。PBS洗细胞一次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。然后分别给予20μM的药物处理，放入37度5％CO2培养箱培养。分别于0，24，48小时用显微镜(Leica，DFC450C，Wetzlar，Germany)拍摄图像。实验结果如图4‐5所示。由图可以看出，化合物对人膀胱癌细胞系T24、人膀胱癌细胞系UMUC3迁移均具有明显的抑制作用，其中化合物4，11对T24细胞迁移能力抑制程度最佳，化合物2,11对UMUC3细胞迁移能力抑制程度最佳。

Claims (7)

1.一种双胍衍生物，其特征是，所述双胍衍生物为如下化合物的结构，
Figure FDA0003268207630000011
或者其药学可接受的盐；
所述R1为甲基，R2为氢或者甲基，R3为苯基、卤代苯基、卤代对甲基苯基或甲氧基苯基；
或者，所述R1为苯基、卤代苯基或C1-C4的烷基取代的苯基，R2为氢或者甲基，R3为氢或者甲基。
2.如权利要求1所述的双胍衍生物，其特征是，所述双胍衍生物为如下化合物的结构，
Figure FDA0003268207630000021
3.一种药物组合物，其特征是，包括如权利要求1-2任一项所述的双胍衍生物，以及任选的药学可接受的辅料。
4.一种如权利要求1-2任一项所述的双胍衍生物的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
Figure FDA0003268207630000031
所述R1为甲基，R2为氢或者甲基，R3为苯基、卤代苯基、卤代对甲基苯基或甲氧基苯基；
或者，所述R1为苯基、卤代苯基或C1-C4的烷基取代的苯基，R2为氢或者甲基，R3为氢或者甲基。
5.如权利要求4所述的双胍衍生物的制备方法，其特征是，还包括如下步骤：
Figure FDA0003268207630000032
6.一种如权利要求1-2任一项所述的双胍衍生物或如权利要求3所述药物组合物在制备用于预防或治疗肿瘤的药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征是，所述肿瘤选自肺癌、食道癌、胃癌、膀肌癌、黑色素瘤、胰腺癌、肾癌、白血病、前列腺癌、膀胱癌、神经母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、鼻咽癌。
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