CN103204897A - 3,12位修饰的蜀羊泉碱衍生物、其制备方法、制剂及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类3，12位修饰的蜀羊泉碱衍生物(I)，本发明还公开了这些蜀羊泉碱衍生物的制备方法和含有所述化合物的药物组合物以及所述化合物在治疗肿瘤疾病或病症中的应用。

Description

3,12位修饰的蜀羊泉碱衍生物、其制备方法、制剂及其医药用途

技术领域

本发明涉及天然药物及药物化学领域，具体涉及一类经修饰的蜀羊泉碱衍生物。本发明还公开了这些蜀羊泉碱衍生物的制备方法、含有这些蜀羊泉碱衍生物的药物组合物及这类蜀羊泉碱衍生物在抗肿瘤方面的用途。

背景技术

蜀羊泉(千年不烂心、白毛藤、苦茄)，为植物茄科千年不烂心Solanum dulcamaraL.的全草，产于全国大部分地区。夏秋季采收，洗净，晒干，生用，亦用鲜品，含蜀羊泉碱、澳洲茄胺、苦茄碱及茄解碱等成分。

蜀羊泉碱(soladulcidine，1)，又称蜀羊泉次碱，是一类C27的甾体生物碱，具有抗真菌(Planta Med，1996，14：392-401)和诱导先天性颅面畸形等作用(J Nat Toxins，1990，5：25-38)。

已有文献报道了2α-蜀羊泉碱(Phytochemistry，1992，31，725～726)、15α-羟基蜀羊泉碱(Tetrahedron Lett，1965，6，1947～1952)和23-羟基蜀羊泉碱(Phytochemistry，1993，32，1607～1609)，但均未给出生物活性数据。Solalyratines A和solalyratines B为两个甾体生物碱糖苷，其苷元均为蜀羊泉碱，也未报道生物活性(Chem.Pharm.Bull.1997，45，1381-1382)。以海柯吉宁(hecogenin)为起始原料，经5步反应制备得蜀羊泉碱，其中一个化合物对人前列腺癌细胞PC-3具有较好的增殖抑制活性(IC₅₀＝4.8μmol/L)，该化合物为C3-OH位置修饰的蜀羊泉碱E环开环产物(中国药科大学学报，2010，41，693-698)。

澳洲茄胺(solasodine，2)与蜀羊泉碱结构类似，两者仅在C5，C6位上存在区别，具有抗肿瘤、抗炎等活性。澳洲茄胺是许多甾体药物的重要前体，以单体或皂苷形式广泛存在于茄属植物中。澳洲茄胺的无机酸和有机酸盐具有抗肿瘤活性(CN1552724A、CN1345728A、C1546518A)。BEC(Coramsine)为含有澳洲茄胺苷元的solamargine和solasonine的等量混合物，用于治疗恶性黑色素瘤，目前处于临床IIb期(Cncer Lett，1990，55，209～220；Cancer Lett，1990，55，221～225)。澳洲茄胺-3-O-α-L-鼠李糖苷对人口腔上皮癌细胞KB、人前列腺癌细胞PC3等肿瘤细胞及其耐药株具有较强的细胞毒活性(CN101974067A)。

发明内容

为寻找具有更强抗肿瘤活性的新药，本发明选取甾体生物碱类的天然产物蜀羊泉碱进行结构改造研究，从而提供了一系列具有通式(I)结构特性的衍生物。通式(I)拓展了现有的蜀羊泉碱衍生物的结构特征和结构范围。

本发明要解决的技术问题是研究具有新结构类型的具有抗肿瘤活性的蜀羊泉碱衍生物，并进一步提供一种治疗肿瘤及其疾病或病症的药物组合物。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

通式(I)所示蜀羊泉碱衍生物或其可药用盐：

其中R¹代表OH、OCOR³；

R²代表XR⁴；

R³代表H、C₁-C₁₄的烷烃、C₂-C₁₄的烯烃、C₂-C₁₄的炔烃、C₅-C₈的环烷烃、苯基、苄基、萘基、联苯甲基，所述基团为非取代或Y取代；

X代表C₁-C₁₄的亚烷基；

R⁴代表H、C₁-C₁₄的烷烃、C₂-C₁₄的烯烃、C₂-C₁₄的炔烃、C₅-C₈的环烷烃、苯基、苄基、萘基、吡唑基、联苯甲基，苯甲酰基、萘甲酰基、苯磺酰基、

呋喃甲酰基、噻吩甲酰基，所述基团为非取代或Y取代；

Y代表H、Cl、Br、F、I、CN、NH₂、NO₂、CF₃、OH、OCH₃、COOH、COOCH₃、C₁-C₁₄的烷烃、C₂-C₁₄的烯烃、C₂-C₁₄的炔烃、C₅-C₈的环烷烃、苯基、苄基、萘基；

R⁵代表Cl、Br、F、I、CN、NH₂、NO₂、CF₃、OH、OCH₃、COOH、COOCH₃；

L代表CH₂、O、N、S；

n代表0、1、2；

M代表CH₂、S、O、NH。

本发明通式(I)的蜀羊泉碱衍生物或其盐，其中：

R¹优选OH、OAc；

R²优选

NH₂CH₂-、CH₃NHCH₂-、CH₃CH₂NHCH₂-、CH₃(CH₂)₂NHCH₂-、(CH₃)₂CHNHCH₂-、CH₃(CH₂)₃NHCH₂-、CH₃(CH₂)₄NHCH₂-、CH₃(CH₂)₅NHCH₂-、CH₃(CH₂)₆NHCH₂-、CH₃(CH₂)₇NHCH₂-、CH₃(CH₂)₈NHCH₂-、CH₃(CH₂)₉NHCH₂-、NH₂CH(CH₃)-、CH₃NHCH(CH₃)-、CH₃CH₂NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₂NHCH(CH₃)-、(CH₃)₂CHNHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₃NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₄NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₅NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₆NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₇NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₈NHCH(CH₃)-、

NH₂CH(C₂H₅)-、CH₃NHCH(C₂H₅)-、CH₃CH₂NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₂NHCH(C₂H₅)-、(CH₃)₂CHNHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₃NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₄NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₅NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₆NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₇NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₈NHCH(C₂H₅)-、CH₂OOCPh。

本发明的部分化合物为：

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-醇

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-哌嗪基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吡唑基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-哌啶甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-丁氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-戊氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-己氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

本发明包括一种用于治疗哺乳动物，优选于治疗人类疾病或病症的药物组合物，其包括治疗肿瘤疾病的有效量的通式(I)的化合物、其盐或酯和可药用载体。

本发明还包括通式(I)的化合物、其盐或酯在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、黑色素瘤、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病或脑瘤病症的药物中的应用。

本发明通式(I)的蜀羊泉碱衍生物可用下列方法制备得到：

反应式1

参照反应式1，将海柯吉宁(1)溶于吡啶中，与Ac₂O、NH₄Cl在151℃下回流反应5h，残留物用甲醇3次重结晶，将所得白色固体溶于甲醇中，加KOH，室温反应2h，得到化合物(2)。将2溶于CH₂Cl₂中，加入TEA和DMAP，冰浴下分批加入TsCl，得化合物(3)。将3与NaN₃和DMF在60℃反应2h制备得化合物(4)，4经乙酰化得到5，5溶于THF/MeOH中，加入CeCl₃·7H₂O，冰浴下加NaBH₄，反应2h得到化合物(6)，将6依次与溴乙酰溴、不同的胺、酸或醇反应、随后经TMSCl/NaI还原环合得到通式(I)化合物。

下面是本发明部分化合物的药理实验数据。

1.体外肿瘤细胞增殖抑制实验(MTT法)

仪器超净工作台(苏州艾可林净化设备有限公司)

恒温CO2培养箱(德国Heraeus)

酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD)

倒置生物显微镜(日本OLYMPUS)

平板摇床(江苏省光明实验仪器厂)

试剂  RPMI1640(GIBCO)

胰蛋白酶(SIGMA)

胎牛血清(GIBCO)

MTT(SIGMA)

DMSO(SIGMA)

细胞株  人肺癌细胞株A549

人肝癌细胞株BEL-7402

人乳腺癌细胞株MDA-MB-231

方法

(1)取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数2～4×10⁴个/ml，制成细胞悬液。

(2)取细胞悬液接种于96孔板上，180μl/孔，置恒温CO₂培养箱中培养24小时。

(3)换液，加入受试药物，20μl/孔，培养72小时。

(4)将MTT试剂加入96孔板中，20μl/孔，培养箱中反应4小时。

(5)MTT法，吸去上清液，加入DMSO，150μl/孔，平板摇床上振摇5分钟。

(6)用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸光值，并计算细胞抑制。

结果

2.实施例13的体内人肺癌HepG2裸小鼠移植瘤抑制实验

受试物与试剂  多西他赛注射液、实施例13自制。

多西他赛注射液：0.5ml：20mg，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号10060411。

0.9％生理盐水：500ml，南京小营药业集团有限公司，批号2011042808。

蓖麻油聚氧乙烯醚：250g，美国Acros公司，批号397282500。

95％乙醇：上海久亿化学试剂有限公司，批号20100320。

配法

多西他赛注射液：临用前将专用溶剂全部加入到对应的溶液中，轻轻振摇混合均匀(此时浓度为10mg/ml)，室温放置5min，取出0.6ml加5％葡萄糖注射液1.4ml，混匀即为3mg/ml剂量应用液，60min内使用完毕。

实施例13：依次精确称取粉末，按溶剂(v∶v  蓖麻油聚氧乙烯醚∶95％乙醇∶0.9％生理盐水＝10％∶10％∶80％)进行配制，超声振摇混合均匀，药物浓度为80mg/ml、40mg/ml和20mg/ml，为高、中、低剂量浓度。

移植瘤

人肺癌HepG2裸小鼠移植瘤，由人肺癌HepG2细胞株接种于裸小鼠皮下建立。细胞接种量为3×10⁶个，接种形成移植瘤后在裸小鼠体内传3代后使用。

动物

雌性BALB/cA裸小鼠，日龄35-40天，体重18-22g，实验动物由扬州大学实验动物中心提供，合格证编号：SCXK(苏)2007-0001。每组动物数分别为阴性对照组8只，给药组6只。

试验方法

取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm³左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至60～200mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察受试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次，每次测量同时还需称鼠重。多西他赛注射液腹腔注射给药，给药剂量分别为30mg/kg，每周1次。实施例13灌胃给药，给药剂量分别为80mg/kg、40mg/kg和20mg/kg，每日1次。空白对照(蓖麻油聚氧乙烯醚∶95％乙醇∶0.9％生理盐水＝10％∶10％∶80％)灌胃给药，每日1次。

检测指标及计算方法

(1)肿瘤体积(tumor volume，TV)，计算公式为：

TV＝1/2×a×b²

其中a、b分别表示长宽。

(2)相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：

RTV＝TV_t/TV₀。

其中TV₀为分笼给药时(即d₀)肿瘤体积，TV_t为每一次测量时的肿瘤体积。

(3)相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式为：

$T/C(\%)=\frac{T_{\mathrm{RTV}}}{C_{\mathrm{RTV}}}\×100$

T_RTv：治疗组RTV；C_RTv：空白对照组RTV。

试验结果以相对肿瘤增殖率T/C(％)作为抗肿瘤活性的评价指标。

统计方法

实验数据以平均值和标准差表示，统计方法采用t-检验。

结果

多西他赛注射液腹腔注射给药30mg/kg对人肺癌HepG2裸小鼠移植瘤有很强的生长抑制作用，T/C(％)分别为20.45；实施例13灌胃给药80mg/kg、40mg/kg和20mg/kg对人肺癌HepG2裸小鼠移植瘤有生长抑制作用，T/C(％)分别为45.81、75.24和61.00，见表1。

表1.实施例13对人肺癌HepG2裸小鼠移植瘤的治疗作用

d0：分笼给药时间**P＜0.01

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实例是为了更好地阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。

实施例1

(3β，5α，25R)-呋喃甾体-20(22)-12-氧代-3，26-二醇的合成

500ml茄形瓶中加入海柯吉宁(21.5g，0.05mol)，乙酸酐(200ml)，吡啶(8ml，0.1mol)和氯化铵(5.4g，0.1mol)，151℃回流反应5h，直到TLC检测反应结束。减压蒸干溶剂，残留物溶于200mlCH₂Cl₂，用饱和食盐水洗，提取有机层，减压蒸干溶剂，残留物用甲醇3次重结晶，每次甲醇用量70ml，得12.3g白色固体。将所得白色固体溶于150ml甲醇中，滴加KOH溶液(56％，20ml)，室温搅拌2h，将反应液倾倒于500ml冰水中，剧烈搅拌，静置，过滤得10.3g白色固体，收率48％。¹H和¹³C-NMR数据与文献报道一致，M.p.173-175℃.MS(m/z)：431.2([M+H]⁺).

实施例2

(3β，5α，25R)-3-羟基呋喃甾体-20(22)-烯-12-氧代-26-基4-甲苯磺酸酯的合成

将(3β，5α，25R)-呋喃甾体-20(22)-12-氧代-3，26-二醇(4.30g，0.01mol)溶于60ml CH₂Cl₂中，依次加入TEA(6.9ml)和DMAP(0.3g，2mmol)，冰浴搅拌下将TsCl(5.73g，0.03mol)在4h内分4次加入。反应液用饱和食盐水洗，提取有机层，减压蒸干溶剂。经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯∶二氯甲烷＝20∶6∶3)得3.4g白色固体，收率58％。¹H和¹³C-NMR数据与文献报道一致，M.p.156-158℃.MS(m/z)：585.5([M+H]⁺).

实施例3

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮基-20(22)-烯-12-氧代-3-醇的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-3-羟基呋喃甾体-20(22)-烯-12-氧代-26-基4-甲苯磺酸酯(3.5g，6mmol)、NaN₃(1.56g，0.024mol)和80ml DMF，60℃搅拌2h直到TLC检测反应完全，向反应液中加入大量冰水，剧烈搅拌，静置，过滤，烘干得2.4g白色固体，收率90％。¹H和¹³C NMR数据与文献报道一致，M.p.157-159℃.MS(m/z)：456.3([M+H]⁺).

实施例4

(3β，5α，25R)-26-叠氮基呋喃甾体-20(22)-烯-12-氧代-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮基-20(22)-烯-12-氧代-3-醇(4.55g，0.01mol)溶于20ml吡啶，向此混悬液中缓慢滴加20mlAc₂O，室温搅拌6h，直到TLC检测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物溶于40mlAcOEt，依次用5％HCl及饱和食盐水洗，提取有机层，Na₂SO₄干燥，过滤，减压除去溶剂，得白色固体4.2g，不经纯化直接用于下一步反应。

实施例5

(3β，5α，25R)-26-叠氮基呋甾-20(22)-烯-12β-醇-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-26-叠氮基呋喃甾体-20(22)-烯-12-氧代-3-基乙酸酯(4.98g，0.01mol)溶解在THF/MeOH(1∶1，30ml)，加入CeCl₃·7H₂O(3.74g，0.1mol)，冰浴下慢慢加入NaBH₄(1.5g，0.04mol)，室温搅拌2h，减压除去溶剂，残留物溶于40mlCH₂Cl₂，依次用5％HCl及饱和食盐水洗，提取有机层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯∶＝20∶4)，得白色固体4g，收率80％。M.p.118-120℃.IR(KBr)：v_max3531.6，2926.9，2851.3，2100.1，1718.5，1460.2，1379.9，1263，4，1023.4，998.5cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：4.74-4.73(m，1H，H-16α)；4.73-4.68(m，1H，H-3α)；3.36-3.31(dd，1H，J₁＝4.6Hz，J₂＝11.0Hz，H-12)；3.26-3.20(dd，1H，J₁＝5.6Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；3.13-3.06(dd，1H，J₁＝7.0Hz，J₂＝12.01Hz，H-26)；2.66-2.62(d，1H，J＝10.3Hz，H-11)；2.01(s，3H，AcO-)；1.64(s，3H，Me-21)；0.94-0.92(d，3H，J＝6.4Hz，Me-27)；0.84(s，3H，Me-18)；0.62(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：170.6；151.9；103.6；84.1；78.9；73.5；63.9；57.6；53.2；53.1；49.2；44.6；36.7；35.5；33.8；33.7；33.6；33.0；31.9；31.4；30.8；28.4；27.4；23.3；21.4；17.5；12.1；11.9；8.7.MS(m/z)：500.2([M+H]⁺).

实施例6

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-26-叠氮基呋甾-20(22)-烯-12β-醇-3-基乙酸酯(2.50g，5mmol)溶解在30mlCH₂Cl₂，缓慢滴加TEA(2ml，15mmol)，冰浴下慢慢滴加溴乙酰溴(1.3ml，15mmol)，半小时内滴加完毕，继续冰浴搅拌4h，反应液用饱和NaHCO₃洗，提取有机层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯∶＝20∶3)，得油状物2.1g，收率68％。IR(KBr)：v_max3444.6，2956.4，2857.7，2097.9，1731.9，1281.1，1247.2，978.5cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：4.78-4.73(m，1H，H-16α)；4.78-4.73(m，1H，H-3α)；4.69-4.64(dd，1H，J₁＝4.6Hz，J₂＝11.1Hz，H-12)；3.88-3.77(q，2H，J₁＝12.8Hz，J₂＝17.0Hz，-COCH ₂ -)；3.25-3.19(dd，1H，J₁＝5.7Hz，J₂＝11.9Hz，H-26)；3.13-3.07(dd，1H，J₁＝6.9Hz，J₂＝12.1Hz，H-26)；2.68-2.64(d，1H，J＝10.4Hz，H-23)；2.01(s，3H，AcO-)；1.54(s，3H，Me-21)；0.98-0.95(d，3H，J＝6.7Hz，Me-27)；0.85(s，3H，Me-18)；0.74(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：170.6；166.5；152.5；102.9；83.8；83.1；73.3；63.3；57.6；53.2；52.8；47.9；44.5；36.6；35.6；33.8；33.7；33.5；33.0；31.7；31.4；28.3；27.3；26.8；26.5；23.2；21.4；17.5；12.1；11.9；9.7.MS(m/z)：620.4([M+H]⁺).

实施例7

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-吗啉基酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.55g，2.5mmol)溶解在20mlTHF中，依次滴加吗啉(0.65ml，7.5mmol)，DIPEA(1.31ml，7.5mmol)，室温搅拌2小时，反应液用水洗，提取有机层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯∶＝20∶5)，得油状物1.28g，收率82％。IR(KBr)：v_max3443.6，2954.7，2099.8，1730.4，1250.2，1115.1，1035.0，865.7cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：4.76-4.65(m，1H，H-3α)；4.76-4.65(m，1H，H-16α)；4.65-4.60(dd，1H，J₁＝4.5Hz，J₂＝11.0Hz，H-12)；3.75-3.72(t，4H，J＝4.7Hz

)；3.23-3.15(m，1H，H-26)；3.17-3.15(m，2H，-COCH ₂ -)；3.11-3.05(dd，1H，J₁＝6.8Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；2.63-2.58(m，1H，H-23)；2.59-2.50(m，4H，

)；1.99(s，3H，AcO-)；1.52(s，3H，Me-21)；0.95-0.93(d，3H，J＝6.7Hz，Me-27)；0.81(s，3H，Me-18)；0.70(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：170.5；169.4；152.2；103.3；87.8；83.5；81.1；73.3；66.7；63.3；59.7；57.5；56.2；53.3；53.1；52.7；52.2；47.7；44.4；36.5；35.5；33.7；33.7；33.4；32.9；31.7；31.4；28.2；27.2；27.1；23.1；21.3；17.5；12.0；9.7.MS(m/z)：627.3([M+H]⁺)，649.3([M+Na]⁺).

实施例8

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-醇的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-吗啉基酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(0.94g，1.5mmol)溶解在20ml MeOH中，加入K₂CO₃(0.21g，1.5mmol)，室温搅拌5小时，反应结束后往反应液加入大量冰水，静置，抽滤，得白色固体经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯＝20∶8)，得白色固体0.75g，收率86％。M.p.178-180℃.IR(KBr)：v_max3397.5，2925.5，2095.8，1735.8，1454.5，1204.6，866.3cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：4.75-4.72(m，1H，H-16α)；4.66-4.63(dd，1H，J₁＝4.6Hz，J₂＝11.2Hz，H-12)；3.79-3.77(m，4H，

)；3.64-3.57(m，1H，H-3α)；3.24-3.20(m，2H，-COCH ₂ -)；3.24-3.20(dd，1H，J₁＝5.8Hz，J₂＝12.1Hz，H-26)；3.12-3.09(dd，1H，J₁＝7.0Hz，J₂＝12Hz，H-26)；2.64-2.54(m，4H，

)；1.51(s，3H，Me-21)；0.97-0.95(d，3H，J＝6.7Hz，Me-27)；0.82(s，3H，Me-18)；0.72(s，3H，Me-19).MS(m/z)：607.4([M+H]⁺).

实施例9

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-醇的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-醇(0.88g，1.5mmol)，KI(498mg，3mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.57ml，4.5mmol)，继续搅拌直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，继续搅拌1h。乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和NaCl溶液洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝40∶1∶0.02)得白色固体0.53g，收率63％。M.p.111-113℃.IR(KBr)：v_max3442.0，2926.4，1740.3，1452.8，1116.1，866.6cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：4.62-4.57(dd，J₁＝4.7Hz，J₂＝11.0Hz，H-12)；4.28-4.26(m，1H，H-16α)；3.76-3.73(t，4H，J＝4.7Hz，

)；3.60-3.57(m，1H，H-3α)；3.24-3.11(q，2H，J₁＝16.9Hz，J₂＝4.2Hz，-COCH ₂ -)；2.65-2.52(m，2H，H-26)；2.65-2.52(m，4H

)；0.88-0.87(d，3H，J＝4.3Hz，Me-27)；0.87(s，3H，Me-18)；0.87-0.85(d，3H，J＝4.7Hz，Me-27)；0.82(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：169.6；98.6；82.2；78.5；71.0；66.8；61.9；59.8；54.8；53.3；52.8；47.6；44.8；44.7；41.7；37.9；36.8；35.6；34.1；34.0；31.7；31.4；31.3；30.2；29.7；23.4；26.9；19.2；14.6；12.2；11.8.MS(m/z)：559.4([M+H]⁺).

实施例10

(3β，5α，22α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-吗啉基酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.55g，2.5mmol)溶解在20mlTHF中，依次滴加吗啉(0.65ml，7.5mmol)，DIPEA(1.31ml，7.5mmol)，室温搅拌2小时，反应液用水洗，提取有机层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯∶＝20∶5)，得油状物1.28g，收率82％。IR(KBr)：v_max3443.6，2954.7，2099.8，1730.4，1250.2，1115.1，1035.0，865.7cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：4.76-4.65(m，1H，H-3α)；4.76-4.65(m，1H，H-16α)；4.65-4.60(dd，1H，J₁＝4.5Hz，J₂＝11.0Hz，H-12)；3.75-3.72(t，4H，J＝4.7Hz

)；3.23-3.15(m，1H，H-26)；3.17-3.15(m，2H，-COCH ₂ -)；3.11-3.05(dd，1H，J₁＝6.8Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；2.63-2.58(m，1H，H-23)；2.59-2.50(m，4H，

)；1.99(s，3H，AcO-)；1.52(s，3H，Me-21)；0.95-0.93(d，3H，J＝6.7Hz，Me-27)；0.81(s，3H，Me-18)；0.70(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：170.5；169.4；152.2；103.3；87.8；83.5；81.1；73.3；66.7；63.3；59.7；57.5；56.2；53.3；53.1；52.7；52.2；47.7；44.4；36.5；35.5；33.7；33.7；33.4；32.9；31.7；31.4；28.2；27.2；27.1；23.1；21.3；17.5；12.0；9.7.MS(m/z)：627.3([M+H]⁺)，649.3([M+Na]⁺).

实施例11

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-N-吗啉基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-吗啉基酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(0.94g，1.5mmol)，KI(498mg，3mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.57ml，4.5mmol)，继续搅拌直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，继续搅拌1h。乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝40∶1∶0.02)得白色固体0.59g，收率65％。M.p.115-117℃.IR(KBr)：v_max3444.6，2935.0，1735.7，1453.2，1245.8，1117.4cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：4.70-4.66(m，1H，H-3α)；4.62-4.59(dd，1H，J₁＝4.7Hz，J₂＝11.2Hz，H-12)；4.30-4.26(m，1H，H-16α)；3.75-3.73(t，J＝4.7Hz，4H，

)；3.22-3.14(q，2H，J₁＝16.8Hz，J₂＝8.8Hz，-COCH ₂ -)；2.67-2.54(m，4H，

)；2.01(s，3H，AcO-)；2.67-2.54(m，2H，H-26)；0.90-0.88(d，3H，J＝6.2Hz，Me-21)；0.88(s，3H，Me-18)；0.85-0.83(d，3H，J＝6，3Hz，Me-27)；0.84(s，3H，Me-19).MS(m/z)：601.4([M+H]⁺).

实施例12

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-哌嗪基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.55g，2.5mmol)溶解在20mlTHF中，依次滴加哌嗪(0.65g，7.5mmol)，DIPEA(1.31ml，7.5mmol)，室温搅拌2小时，反应液用水洗，提取有机层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH＝50∶1)，得白色固体1.22g，收率78％。M.p.80-82℃.IR(KBr)：v_max3441.4，2928.3，2097.5，1733.6，1247.3，1182.9，1031.8，962.6cm^-1.¹H(CDCl₃，500MHz)：4.76(m，1H，H-3α)；4.71-4.68(m，1H，H-12α)；4.66-4.63(m，1H，H-16α)；3.24-3.20(dd，1H，J₁＝5.7Hz，J₂＝11.8Hz，H-26)；3.18-3.16(q，2H，-COCH ₂ N-)；3.12-3.08(dd，1H，J₁＝7.0Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；2.96-2.95(

m，4H，)；2.64-2.62(d，J＝10.4Hz，1H，H-11)；2.60-2.54(m，4H，

)；2.01(s，3H，AcO-)；1.54(s，3H，Me-21)；0.97-0.96(d，327)；0.84(s，3H，Me-18)；0.72(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，75MHz)：170.6；169.9；152.2；103.1；83.8；81.0；73.3；63.3；69.9；57.5；53.8；53.1；52.7；47.7；45.6；44.4；36.5；35.5；33.7；33.7；33.4；32.9；31.7；31.4；28.2；27.2；27.1；23.2；21.3；17.5；12.0；12.0；9.8.MS(m/z)：628.4([M+H]⁺).

实施例13

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-哌嗪基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-哌嗪基甲酰氧基)-3-基乙酸酯(0.94g，1.5mmol)，KI(498mg，3mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.57ml，4.5mmol)，继续搅拌直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，继续搅拌1h。乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和NaCl溶液洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝40∶1∶0.02)得白色固体0.54g，收率60％。M.p.207-209℃.IR(KBr)：v_max3448.9，2926.9，2854.6，1735.4，1453.3，1247.6，1185.0cm^-1.¹H(CDCl₃，500MHz)：4.70-4.65(m，1H，H-3α)；4.61-4.58(m，1H，H-12α)；4.29-4.26(m，1H，H-16α)；3.21-3.12(q，2H，-COCH ₂ N-)；2.94-2.92(m，4H，

)；2.66-2.64(m，2H，H-26)；2.60-2.52(m，4H，

)；2.01(s，3H，AcO-)；0.88-0.87(m，3H，Me-21)；0.87(s，3H，Me-18)；0.84-0.81(m，3H，Me-27)；0.83(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，75MHz)：170.6；169.7；98.3；81.9；78.4；73.4；61.9；60.0；54.6；54.0；52.6；47.6；45.7；44.8；44.5；41.7；36.5；35.6；34.1；34.0；33.8；31.6；31.4；31.3；30.2；28.3；27.2；26.8；21.4；19.2；14.6；12.1；11.7.MS(m/z)：600.7([M+H]⁺).

实施例14

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-吡唑基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.55g，2.5mmol)溶解在20mlTHF中，依次滴加咪唑(0.51g，7.5mmol)，DIPEA(1.31ml，7.5mmol)，室温搅拌2小时，反应液用水洗，提取有机层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH＝50∶1)，得白色固体1.2g，收率79％。M.p.83-85℃.IR(KBr)：v_max3436.5，2929.6，2098.0，1735.5，1247.5，1033.5，661.8cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300M Hz)：7.49(s，1H，

)；7.10(s，1H，)；6.95(s，1H，

)；4.73-4.67(m，1H，H-3α)；4.73-4.67(m，1H，H-16α)；4.73-4.67(m，1H，H-12)；4.73-4.67(m，2H，-COCH ₂ -)；3.25-3.19(dd，1H，J₁＝5.6Hz，J₂＝11.9Hz，H-26)；3.14-3.07(dd，1H，J₁＝6.8Hz，J₂＝11.9Hz，H-26)；2.68-2.64(d，J＝10.3Hz，1H，H-11)；2.01(s，3H，AcO-)；1.50(s，3H，Me-21)；0.98-0.96(d，3H，J＝6.6Hz，Me-27)；0.84(s，3H，Me-18)；0.71(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：170.6；166.9；152.8；137.9；129.8；120.0；102.6；83.9，83.0；73.3；63.3；57.6；53.2；52.9；48.5；48.0；44.5；36.7；35.6；33.8；33.7；33.5；33.0；31.7；31.5；28.3；27.3；27.2；23.3；21.4；17.6；12.2；12.1；9.8.MS(m/z)：608.2([M+H]⁺)，630.3([M+Na]⁺).

实施例15

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吡唑基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-12β-(N-吡唑基甲酰氧基)-22(20)-烯-26-叠氮-3-基乙酸酯(0.91g，1.5mmol)，KI(498mg，3mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.57ml，4.5mmol)，继续搅拌直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，继续搅拌1h。乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和NaCl溶液洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝40∶1∶0.02)得白色固体0.55g，收率63％。M.p.130-132℃.IR(KBr)：v_max3424.5，2926.9，1710.6，1256.7，978.8cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：7.49(s，1H，

)；7.09(s，1H，

)；6.93(s，1H，)；4.67-4.63(m，2H，-COCH ₂ -)；4.67-4.63(m，1H，H-12)；4.67-4.63(m，1H，H-3α)；4.31-4.28(m，1H，H-16α)；2.69-2.54(m，2H，H-26)；2.01(s，3H，AcO-)；0.88-0.84(m，3H，Me-21)；0.84(s，3H，Me-18)；0.84-0.81(m，3H，Me-27)；0.81(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：170.7；166.8；138.0；129.9；120.0；98.4；83.9；78.7；73.4；62.1；54.8；52.8；48.6；47.7；45.1；44.6；41.7；36.7；35.6；34.2；34.0；33.9；31.6；31.5；31.2；30.2；28.3；27.3；26.9；21.5；19.3；15.0；12.2；11.6.MS(m/z)：582.2([M+H]⁺)，604.2([M+Na]⁺).

实施例16

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-哌啶甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.24g，2mmol)溶解于15ml无水THF中，先后缓慢滴加DIPEA(1ml，6mmol)，哌啶(0.6ml，6mmol)，室温搅拌2h，TLC检测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物溶解在CH₂Cl₂(30ml)中，水洗，提取有机层，浓缩，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯＝20∶3)得无色油状物1.1g，收率86％。IR(KBr)：v_max2934.2，2855.0，2097.5，1735.3，1453.8，1246.0，1176.5，1034.1，962.3cm^-1.¹H(CDCl₃，300MHz)：4.77(m，1H，H-3α)；4.71-4.66(m，1H，H-12α)；4.66-4.61(m，1H，H-16α)；3.25-3.20(dd，1H，J₁＝5.6Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；3.17-3.15(q，2H，-COCH ₂ N-)；3.13-3.07(dd，1H，J₁＝6.8Hz，J₂＝11.8Hz，H-26)；2.65-2.61(d，J＝10.3Hz，1H，H-11)；2.55-2.49(m，4H，

)；2.01(s，3H，AcO-)；1.54(s，3H，Me-21)；0.98-0.95(d，3H，J＝6.5Hz，Me-27)；0.83(s，3H，Me-18)；0.72(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，75MHz)：170.5；169.9；152.1；103.2；83.8；80.8；73.3；63.3；60.3；57.5；54.2；53.1；52.7；47.7；44.4；36.5；35.5；33.8；33.7；33.5；32.9；31.7；31.5；31.4；28.3；27.2；27.1；25.8；23.8；23.2；22.6；21.3；17.5；12.0；12.0；9.8.MS(m/z)：625.2([M+H]⁺).

实施例17

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-哌啶甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-22(20)-烯-12β-(N-哌啶甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(0.97g，1.56mmol)，KI(0.52g，3.12mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl (0.6ml，4.68mmol)，继续搅拌6h直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和食盐水洗，提取有机层，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝20∶0.5∶0.02)得无色油状物0.60g，收率65％。M.p.105-107℃.IR(KBr)：v_max2934.1，2854.4，1736.3，1454.0，1245.8，1177.5，1033.0cm^-1.¹H(CDCl₃，300MHz)：4.67(m，1H，H-3α)；4.62-4.56(m，1H，H-12α)；4.25(m，1H，H-16α)；3.21-3.08(q，2H，-COCH ₂ N-)；2.64-2.57(m，2H，H-26)；2.53-2.46(m，4H，

)；2.01(s，3H，AcO-)；0.88-0.86(m；3H；Me-21)；0.86(s，3H，Me-18)；0.86-0.85(m，3H，Me-27)；0.84(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，75MHz)：170.6；170.2；98.3；81.8；78.5；73.4；62.0；60.4；54.7；54.3；52.7；47.7；44.9；44.5；41.8；36.6；35.6；34.2；34.1；33.9；31.7；31.5；31.4；30.3；28.4；27.3；26.9；25.9；24.0；21.4；19.3；14.6；12.2；11.8.MS(m/z)：599.3([M+H]⁺).

实施例18

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-丁氨基甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.24g，2mmol)溶解于15ml无水THF中，先后缓慢滴加TEA(0.87ml，6mmol)，正己胺(0.79ml，6mmol)，室温搅拌2h，TLC检测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物溶解在CH₂Cl₂(30ml)中，水洗，提取有机层，浓缩，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯＝20∶3)得无色油状物1.1g，收率87％。IR(KBr)：v_max2956.3，2925.5，2873.6，2099.6，1734.2，1252.3，1183.5，1030.3cm^-1.¹H(CDCl₃，300MHz)：4.78-4.75(m，1H，H-3α)，4.72-4.68(m，1H，H-12α)；4.67-4.63(m，1H，H-16α)；3.43-3.31(q，2H，-COCH ₂ NH-)；3.25-.19(dd，1H，J₁＝5.6Hz，J₂＝11.9Hz，H-26)；3.13-3.07(dd，1H，J₁＝6.9Hz，J₂＝12.1Hz，H-26)；2.66(d，1H，H-11)；2.63-2.56(m，2H，-COCH₂NHCH ₂ -)；2.01(s，3H，AcO-)；1.52(s，3H，Me-21)；0.97-0.95(d，3H，J＝6.6Hz，Me-27)；0.84(s，3H，Me-18)；0.72(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，75MHz)：171.6；170.1；151.8；102.6；83.4；80.7；72.9；62.9；57.1；52.7；52.3；50.9；48.8；47.3；44.0；36.1；35.1；55.2；33.0；52.5；31.7；31.3；31.0；27.8；26.8；26.7；22.7；20.9；19.8；17.0；13.4；11.6；11.4；9.3.MS(m/z)：535.2([M+Na]⁺).

实施例19

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-丁氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-丁氨基甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(0.96g，1.56mmol)，KI(0.52g，3.12mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.6ml，4.68mmol)，继续搅拌6h直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和食盐水洗，提取有机层，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝20∶0.5∶0.02)得无色油状物0.60g，收率60％。IR(KBr)：v_max3349.4，2927.6，2856.9，1735.5，1455.8，1379.1，1247.1，1193.6，1032.0cm^-1.¹H(CD Cl₃，300MHz)：4.69-4.64(m，1H，H-3α)；4.61-4.56(m，1H，H-12α)；4.26-4.24(m，1H，H-16α)；3.41-3.29(q，2H，-COCH ₂ NH-)；2.65-2.61(m，2H，H-26)；2.60-2.49(m，2H，-COCH₂NHCH ₂ -)；2.00(s，3H，AcO-)；0.89-0.86(m，3H，Me-21)；0.85(s，3H，Me-18)；0.85-0.83(m，3H，Me-27)；0.82(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，75MHz)：172.1；170.5；98.3；82.1；78.4；73.3；61.9；54.7；52.6；51.3；49.3；47.6；44.9；44.4；41.7；36.5；35.6；34.1；34.0；33.8；32.1；31.6；31.4；31.3；30.2；28.3；27.2；26.8；21.4；20.5；19.2；14.5；13.9；12.0；11.7.MS(m/z)：587.6([M+H]⁺).

实施例20

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-戊氨基甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.24g，2mmol)溶解于15ml无水THF中，先后缓慢滴加TEA(0.87ml，6mmol)，正戊胺(0.69ml，6mmol)，室温搅拌2h，TLC检测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物溶解在CH₂Cl₂(30ml)中，水洗，提取有机层，浓缩，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯＝20∶3)得无色油状物1.0g，收率80％。IR(KBr)：v_max2955.5，2925.4，2098.8，1731.0，1466.9，1249.8，1182.0，1030.9，962.4cm^-1.¹H(CDCl₃，300MHz)；4.78-4.72(m，1H，H-3α)；4.70-4.67(m，1H，H-12α)；4.67-4.63(m，1H，H-16α)；3.43-3.31(q，2H，-COCH ₂ NH-)；3.25-3.19(dd，1H，J₁＝5.6Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；3.13-3.07(dd，1H，J₁＝6.9Hz，J₂＝11.9Hz，H-26)；2.66-2.62(d，1H，J＝10.8Hz，H-11)；2.62-2.52(m，2H，-COCH₂NHCHH ₂ -)；2.01(s，3H，AcO-)；1.52(s，3H，Me-21)；0.97-0.95(d，3H，J＝6.7Hz，Me-27)；0.84(s，3H，Me-18)；0.72(s，3H，Me-19).¹³C(CDC1₃，75MHz)：171.6；170.1；151.8；102.6；83.4；80.7；72.9；62.9；57.1；52.7；52.3；50.9；49.2；47.3；44.0；36.1；35.1；33.3；33.3；33.0；32.5；31.3；31.0；29.2；28.9；27.8；26.8；26.7；22.7；22.1；20.9；17.0；13.5；11.6；11.4；9.3.MS(m/z)：527.4([M+H]⁺).

实施例21

(3β，5α，22α，25R)-螺甾-12β-(N-戊氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-戊氨基甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(0.98g，1.56mmol)，KI(0.52g，3.12mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.6ml，4.68mmol)，继续搅拌6h直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和食盐水洗，提取有机层，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝20∶0.5∶0.02)得无色油状物0.62g，收率66％。IR(KBr)：v_max2927.5，2856.2，1735.7，1455.7，1246.7，1031.9cm^-1.¹H(CDCl₃，500MHz)：4.71-4.64(m，1H，H-3α)；4.62-4.59(m，1H，H-12α)；4.28-4.27(m，1H，H-16α)；3.40-3.32(q，2H，-COCH ₂ NH-)；2.66-2.63(m，2H，H-26)；2.61-2.54(m，2H，-NHCH ₂ CH₂-)；2.00(s，3H，AcO-)；0.90-0.88(m，3H，Me-21)；0.87(s，3H，Me-18)；0.85-0.84(m，3H，Me-27)；0.83(s，3H，Me-19).¹³C(CDCl₃，125MHz)：172.1；170.5；98.3；82.1；78.4；73.3；62.0；54.7；52.7；51.3；49.6；47.6；44.9；44.5；41.7；36.5；35.6；34.1；34.0；33.8；31.6；31.4；31.3；30.2；29.7；29.4；28.3；27.2；26.8；22.5；21.3；19.2；14.5；13.9；12.1；11.7.MS(m/z)：601.3([M+H]⁺).

实施例22

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-己氨基甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯的合成

(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(溴甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1.24g，2mmol)溶解于15ml无水THF中，先后缓慢滴加TEA(0.87ml，6mmol)，正己胺(0.79ml，6mmol)，室温搅拌2h，TLC检测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物溶解在CH₂Cl₂(30ml)中，水洗，提取有机层，浓缩，经快速柱层析(展开剂石油醚∶乙酸乙酯＝20∶3)得无色油状物1.1g，收率87％。IR(KBr)：v_max3441.9，2955.0，2926.3，2856.3，2098.7，1735.3，1247.9，1182.8cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：4.76-4.64(m，3H，H-3α)；4.76-4.64(m，3H，H-12α)；4.76-4.64(m，3H，H-16α)；3.41-3.33(q，2H，-COCH ₂ NH-)；3.24-3.20(dd，1H，J₁＝5.7Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；3.12-3.08(dd，1H，J₁＝7.0Hz，J₂＝12.0Hz，H-26)；2.65-2.63(m，1H，H-11)；2.62-2.54(m，2H，-COCH₂NHCH ₂ -)；2.00(s，3H，AcO-)；1.51(s，3H，Me-21)；0.97-0.96(d，3H，J＝6.7Hz，Me-27).¹³C-NMR(CDCl₃，125MHz)：172.0；170.5；152.2；103.1；83.8；81.2；73.3；63.3；57.5；53.2；52.7；51.3；49.6；47.8；44.4；36.5；35.5；33.8；33.7；33.5；32.9；31.7；31.7；31.4；29.9；28.3；27.2；27.1；26.8；23.2；22.5；21.3；17.5；14.0；12.0；11.8；9.7.MS(m/z)：641.3([M+H]⁺).

实施例23

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-己氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯的合成

250ml茄形瓶中加入(3β，5α，25R)-呋甾-26-叠氮-12β-(N-己氨基甲酰氧基)-20(22)-烯-3-基乙酸酯(1g，1.56mmol)，KI(0.52g，3.12mmol)和60ml无水乙腈，室温搅拌30min，向此悬浊液中滴加TMSCl(0.6ml，4.68mmol)，继续搅拌6h直到TLC检测反应完全。向此反应液中加入10％Na₂S₂O₃溶液淬灭反应，加入5％NaOH溶液调节PH至7，乙酸乙酯萃取水相，合并的有机相用饱和食盐水洗，提取有机层，减压蒸去溶剂，经快速柱层析(展开剂CH₂Cl₂∶MeOH∶TEA＝20∶0.5∶0.02)得无色油状物0.61g，收率62％。IR(KBr)：v_max3437.3，2927.0，2855.7，1735.7，1454.5，1246.3，1184.0，978.1cm^-1.¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：4.71-4.66(m，1H，H-3α)；4.63-4.58(m，1H，H-12α)；4.31-4.24(m，1H，H-16α)；3.43-3.31(q，2H，-COCH ₂ NH-)；2.66-2.64(m，2H，H-26)；2.63-2.50(m，2H，-NHCH ₂ CH₂-)；2.01(s，3H，AcO-)；0.88-0.87(m，3H，Me-21)；0.87(s，3H，Me-18)；0.87-0.84(m，3H，Me-27)；0.83(s，3H，Me-19).¹³C-NMR(CDCl₃，75MHz)：172.1；170.5；98.3；82.1；78.4；73.3；61.9；54.7；52.7；51.3；49.7；47.6；44.9；44.5；41.7；36.5；35.6；34.1；34.0；33.8；31.7；31.6；31.4；31.3；30.2；30.0；29.6；28.3；27.3；26.9；22.5；21.4；19.2；14.5；14.0；12.1；11.7.MS(m/z)：615.3([M+H]⁺).

实施例24

片剂

Claims (6)

1.通式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐或酯

其中R¹代表OH、OCOR³；

R²代表XR⁴；

R³代表H、C₁-C₁₄的烷烃、C₂-C₁₄的烯烃、C₂-C₁₄的炔烃、C₅-C₈的环烷烃、苯基、苄基、萘基、联苯甲基，所述基团为非取代或Y取代；

X代表C₁-C₁₄的亚烷基；

R⁴代表H、C₁-C₁₄的烷烃、C₂-C₁₄的烯烃、C₂-C₁₄的炔烃、C₅-C₈的环烷烃、苯基、苄基、萘基、吡唑基、联苯甲基，苯甲酰基、萘甲酰基、苯磺酰基、 

呋喃甲酰基、噻吩甲酰基，所述基团为非取代或Y取代；

Y代表H、Cl、Br、F、I、CN、NH₂、NO₂、CF₃、OH、OCH₃、COOH、COOCH₃、C₁-C₁₄的烷烃、C₂-C₁₄的烯烃、C₂-C₁₄的炔烃、C₅-C₈的环烷烃、苯基、苄基、萘基；

R⁵代表Cl、Br、F、I、CN、NH₂、NO₂、CF₃、OH、OCH₃、COOH、COOCH₃；

L代表CH₂、O、N、S；

n代表0、1、2；

M代表CH₂、S、O、NH。

2.权利要求1的化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于：

R¹代表OH、OAc；

R²代表 

NH₂CH₂-、CH₃NHCH₂-、CH₃CH₂NHCH₂-、CH₃(CH₂)₂NHCH₂-、(CH₃)₂CHNHCH₂-、CH₃(CH₂)₃NHCH₂-、CH₃(CH₂)₄NHCH₂-、CH₃(CH₂)₅NHCH₂-、CH₃(CH₂)₆NHCH₂-、CH₃(CH₂)₇NHCH₂-、CH₃(CH₂)₈NHCH₂-、CH₃(CH₂)₉NHCH₂-、 

NH₂CH(CH₃)-、CH₃NHCH(CH₃)-、CH₃CH₂NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₂NHCH(CH₃)-、(CH₃)₂CHNHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₃NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₄NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₅NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₆NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₇NHCH(CH₃)-、CH₃(CH₂)₈NHCH(CH₃)-、 

NH₂CH(C₂H₅)-、CH₃NHCH(C₂H₅)-、CH₃CH₂NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₂NHCH(C₂H₅)-、(CH₃)₂CHNHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₃NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₄NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₅NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₆NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₇NHCH(C₂H₅)-、CH₃(CH₂)₈NHCH(C₂H₅)-、CH₂OOCPh。

3.权利要求1的化合物，其中化合物可以是下列任一化合物及其药用盐或酯：

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-醇

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吗啉基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-哌嗪基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-吡唑基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-哌啶甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-丁氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-戊氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯

(3β，5α，22α，25R)-螺甾碱-12β-(N-己氨基甲酰氧基)-3-基乙酸酯。

4.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体。

5.权利要求1至3的化合物用于制备治疗肿瘤疾病的药物的用途。

6.权利要求5的用途，其中肿瘤疾病是肺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤、宫颈癌、乳腺癌、白血病、脑瘤、胰腺癌、前列腺癌或卵巢癌。