CN101570562A - 介芬胺类甾体生物碱衍生物及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了介芬胺类甾体生物碱衍生物，以甾体生物碱藜芦胺、介芬胺和环杷明为原料，经化学修饰，得到93个衍生物，包括N－烃化物、N－酰化物。本发明选用人胰腺癌细胞BxPC－3和SW1990，小细胞肺癌细胞NCI－H466和非小细胞肺癌细胞NCI－H157等细胞系，采用MTT法评价所有化合物的抗肿瘤活性，结果显示41，43，58具有显著的抗肿瘤活性，其他8个衍生物：10，18，1938，45，48，50，92也表现出中等的抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。

Description

介芬胺类甾体生物碱衍生物及其制备与应用

技术领域

本发明涉及药物，具体涉及新型介芬胺类甾体生物碱衍生物及其制备与它们在制备抗肿瘤药物的应用。

背景技术

藜芦属(Veratrum)为百合科(Liliaceae)植物，世界上约有40种。中医用藜芦(V.nigrum L.)、兴安藜芦(V.dahuricum(Turcz.)Loes.f.)、天目藜芦(V.SchindleriLoes.f.)、毛穗藜芦(V.maackii Regel)、大理藜芦(V..taliense Loes.f.)、毛叶藜芦(V.grandiflorum(Maxim.)Loes.f.)等的根和根茎入药，用于中风痰壅，癫痫、喉痹不通，及疥癣和恶疮(中华本草(八).上海科学技术出版社，1999，183-188)。现代药理学研究表明，藜芦生物碱具有降血压和抗肿瘤作用(中药辞海(第四卷).中国医药科技出版社，1998，8-13；徐国钧，徐珞珊，王峥涛，等.常用中药材品种整理和质量研究(第四册).福建：福建科学技术出版社，2001，121-178)。甾体生物碱环杷明最初从毛叶藜芦(Veratrum grandiflorum)中分离并鉴定，最新研究表明它是一种Hedgehog通路抑制剂，对多种肿瘤有良好的抑制作用(Hammerschmidt，M.，et al.，Trends Genet.1997，13(1)：14-21)。环杷明作为一种潜在的抗肿瘤新药在世界范围内掀起了研究热潮。从藜芦中分离得到的另一种甾体生物碱-藜芦胺具有显著的抗肿瘤活性，但该化合物的毒性较大，小鼠静脉和皮下给药，其LD₅₀分别为3.1mg/kg和4.5mg/kg(Kiyoshi Tanaka，J.Pharma.Exp.Therapeutics.1955，113(1)：89-99)。介芬胺自身的抗肿瘤活性不及环杷明和藜芦胺显著，但其结构与环杷明和藜芦胺相近，经还原可以得到环杷明(Masamune，T，et al.，Bull.Chem.Soc.Jap.，1965，38(8)：1374-1378)。

藜芦胺        介芬胺        环杷明

因此，对上述三种生物碱进行结构修饰与改造，期望从中发现新的具有良好抗肿瘤活性的化合物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，以藜芦中分离得到的甾体生物碱藜芦胺、介芬胺及环杷明为原料制备其衍生物，并研究这些衍生物在抗肿瘤方面的应用。

本发明提供了一种介芬胺类甾体生物碱衍生物A，包括化合物：Δ⁴-藜芦胺-3-肟1，Δ⁴-介芬胺-3-肟2，Δ⁴-环杷明-3-肟3，Δ⁴-藜芦胺-3-(4-硝基)苯腙4，Δ⁴-介芬胺-3-(4-硝基)苯腙5，3-甲基-N-甲基藜芦胺6，3，23-二甲基-N-甲基藜芦胺7，3-甲基-N-甲基介芬胺8，3-甲基-N-甲基环杷明9，3α-氯-藜芦胺10，3α-氯-介芬胺11，3α-氯-环杷明12，N-棕榈酰基藜芦胺13，N-棕榈酰基介芬胺14，N-棕榈酰基环杷明15，N-棕榈酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺16，N-棕榈酰基-3-羰基-Δ⁴-环杷明17，N-氯代乙酰基藜芦胺18，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基藜芦胺19，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基藜芦胺20，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基藜芦胺21，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基藜芦胺22，N-氯代乙酰基介芬胺23，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基介芬胺24，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基介芬胺25，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基介芬胺26，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基介芬胺27，N-氯代乙酰基环杷明28，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基环杷明29，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基环杷明30，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基环杷明31，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基环杷明32，N-(N-环己基哌嗪)乙酰基环杷明33，N-(环丙胺)乙酰基环杷明34，N-氯代乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺35，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺36，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺37，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺38，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺39，N-(环丙胺)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺40，N-二氯代乙酰基藜芦胺41，N-二氯代乙酰基介芬胺42，N-二氯代乙酰基环杷明43，N-二氯代乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺44，N-二(二氯代)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-环杷明45，N-2′，4′-二氟苯甲酰基环杷明46，2′，4′-二氟苯甲酰基-3-羰基-Δ⁴-环杷明47，N-溴代乙基藜芦胺48，N-(N-乙基哌嗪)乙基藜芦胺49，N-(环丙胺)乙基藜芦胺50，N-氯代乙基介芬胺51，N-溴代乙基介芬胺52，N-(N-乙基哌嗪)乙基介芬胺53，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙基介芬胺54，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙基藜芦胺55，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙基介芬胺56，N-(N-环己基哌嗪)乙基介芬胺57，N-(环丙胺)乙基介芬胺58，N-氯代乙基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺59，N-溴代乙基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺60，N-溴代乙基环杷明61，N-(N-乙基哌嗪)乙基环杷明62，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙基环杷明63，N-(N-(2-吡嗪)哌嗪)乙基环杷明64，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙基环杷明65，N-(环丙胺)乙基环杷明66，N-氯代乙基-3-羰基-Δ⁴-环杷明67，N-溴代乙基-3-羰基-Δ⁴-环杷明68，碘化N，N-二甲基介芬铵69，碘化N，N-二甲基环杷明铵70，N-甲基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺71，碘化N，N-二甲基-3-羰基-Δ⁴-藜芦铵72，N-乙基介芬胺73，N-辛基介芬胺74，N-乙基环杷明75，N-辛基环杷明76，N-二甲胺基乙基介芬胺77，N-二甲胺基乙基环杷明78，N-二甲胺基乙基-3-羰基-Δ⁴-环杷明79，N-(4-硝基苄基)介芬胺80，N-(4-硝基苄基)环杷明81，N-(4-硝基苄基)-3-羰基-Δ⁴-环杷明82，N-(4-氟苄基)介芬胺83，N-(4-氟苄基)环杷明84，N-(4-氟苄基)-3-羰基-Δ⁴-环杷明85，N-OH藜芦胺86，N-OH介芬胺87，N-OH环杷明88，N-OH-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺89，N-OH-3-羰基-Δ⁴-介芬胺90，N-OH-3-羰基-Δ⁴-环杷明91，5，6-二溴藜芦胺92，5，6-二溴介芬胺93。共93个衍生物，所述衍生物包括N-烃化物、N-酰化物等。

本发明所述介芬胺类甾体生物碱衍生物的基本结构如下式A：

本发明所述93个化合物的结构式如下：

本发明的另一目的是提供了上述介芬胺类甾体生物碱衍生物的制备方法，该方法包括下列步骤：

(1)分别以甾体生物碱藜芦胺、介芬胺及环杷明为原料，经Oppennauer氧化反应制备化合物：3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺，3-羰基-Δ⁴-环杷明；所述

反应中使用异丙醇铝/环己酮，或异丙醇铝/丁酮，或异丙醇铝/丁酮与环己酮氧化体系。异丙醇铝/环己酮氧化体系中环己酮用量与原料的摩尔比为5-12，优选8-10；丙醇铝/丁酮氧化体系中丁酮的用量与原料的摩尔比为10-20，优选12-15；两种氧化体系中异丙醇铝与原料的摩尔比均为1-8，优选2；溶剂选用甲苯或苯，每g原料需要溶剂15-30mL，优选18-20mL，反应须在无水反应体系中进行；反应温度为90-130℃，优选110±5℃；反应时间为2-5h，优选3-4h；反应结束蒸除甲苯，剩余的环己酮和产生的环己醇，直接加入石油醚静置析出淡黄色块状结晶除去，或将蒸除溶剂得到的黄色液体直接经短硅胶柱纯化剩余的环己酮和产生的环己醇，得到白色的粉末或针晶，分别制得化合物3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺，3-羰基-Δ⁴-环杷明。

(2)分别取步骤(1)3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经与盐酸羟胺或对硝基苯肼缩合，制备化合物1，2，3，4，5；所述反应中采用甲醇或乙醇为溶剂，盐酸羟胺与原料的摩尔比为1.5-10，优选3-5；反应温度为10-85℃，优选60-85℃；反应时间为2-8h，优选3-4h；

(3)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明采用硫酸二甲酯进行甲基化反应，制备化合物6，7，8，9；所述反应中采用K₂CO₃或Na₂CO₃为缚酸剂、丙酮、THF或二氧六环为溶剂；硫酸二甲酯与原料的摩尔比为1.2-5，优选1.2-2；反应温度为10-60℃，优选15-45℃；反应时间为4-16h，优选8-12h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(4)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明采用SOCl₂进行氯代反应，制备化合物10，11，12；所述反应体系采用吡啶为溶剂，得到一构型翻转为主的产物；滴加SOCl₂的反应温度为0-5℃，滴加完毕反应温度15-35℃；反应时间为4-16h，优选8-12h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(5)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经N酰化制备化合物：13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47；所述反应中以CH₃(CH₂)₁₄COCl，ClCH₂COCl和Cl₂CHCOCl为酰化剂，酰化剂与原料的摩尔比为1∶5-20，优选1∶8-10；溶剂选用CH₂Cl₂、CHCl₃、CCl₄或(CH₂)₂Cl₂中的一种或几种，每g原料用溶剂100-300mL，优选150-200mL；反应温度为-5-40℃，优选以冰浴条件下滴加酰化剂，再在10-15℃下反应；反应时间为4-20h，优选8-14h；当原料结构中存在3-OH(如：藜芦胺，介芬胺，环杷明)，反应结束后加入过量甲醇和3-8倍摩尔量的金属钠在45℃左右搅拌1h，或直接加入过量甲醇反应回流0.5h，醇解生成的酯；(由于以ClCH₂COCl和Cl₂CHCOCl为酰化剂与生物碱反应时，如果生物碱存在3-OH时，则会生成3-OH的酯：ClCH₂COOR和Cl₂CHCOOR，该类酯化合物不稳定，加入甲醇回流即可醇解得到3-OH。在Na/CH₃OH条件下也可得到3-OH产物)。

(6)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经N烃化制备化合物：48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85；所述反应中卤代烷为1，2-二氯乙烷或1，2-二溴乙烷，卤代烷与原料的摩尔比为1.2-20，优选2-5；反应体系以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，每g原料用DMF5-15mL，或直接以过量的卤代烷为溶剂；缚酸剂选用K₂CO₃、Na₂CO₃、NaHCO₃、NaOH或KOH中的一种或几种；反应温度为0-50℃，优选室温；反应时间为12-48h，优选32-40h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(7)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经N羟基化制备化合物：86，87，88，89，90，91；采用过氧苯甲酸或间氯过氧苯甲酸为氧化剂氧化剂与原料的摩尔比为1.2-3，优选1.2-1.5；加入氧化剂过程的反应温度为冰浴，加毕后反应温度为5-20℃，优选10-15℃；以二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或丙酮为溶剂，优选二氯甲烷、氯仿；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种。

(8)分别取步骤(1)藜芦胺与Br₂发生亲电加成，制备化合物92，93；所述反应中以醋酸为溶剂，用量为4-20mg/mL，藜芦胺与Br₂原料的摩尔比为5-50，优选20-30；加毕后反应温度为5-50℃，优选10-25℃；反应时间12-48h，优选18-24h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯的一种或多种。

本发明的又一目的是提供了上述介芬胺类甾体生物碱衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明选用人胰腺癌细胞BxPC-3和SW1990，小细胞肺癌细胞NCI-H466和非小细胞肺癌细胞NCI-H157等细胞系，采用MTT法评价所有化合物的抗肿瘤活性，。结果显示衍生物41，43，58具有显著的抗肿瘤活性，其他8个衍生物：10，18，1938，45，48，50，92也表现出中等的抗肿瘤活性。

具体实施方式

通过以下实施例对本发明进一步说明。

实施例1：

将25mg(0.06mmol)3-羰基-Δ⁴-藜芦胺溶于15mL甲醇中，加入盐酸羟胺18mg(0.25mmol)。回流反应4h。反应结束后浓缩至2mL，静置于冰箱内，析出白色结晶111mg，收率42.4％。

化合物1：

白色粉末，ESI-MS：m/z 423.3[M+H]⁺，1H-NMR(400MHz，CD₃OD，J/Hz)δ：7.11(d，1H，J＝13，H-16)，6.97(d，1H，J＝13，H-15)，5.85(s，1H，H-4)，3.53(m，1H，H-20)，3.16(m，1H，H-23)，3.05(t，1H，J＝7，H-6a)，2.98(t，1H，H-8)，2.85(dd，1H，J＝4，H-26a)，2.77(dd，1H，H-11)，2.48(m，1H，H-23)，2.31(s，3H，H-18)，2.08(t，1H，J＝4，H-26b)，2.00(brs，1H，H-24a)，1.50(d，3H，H-21)，1.18(s，3H，H-19)，1.05(dd，1H，H-24b)0.83(d，3H，H-27)；13C-NMR(400MHz，CD₃OD)δ：157.5(C-5)，154.9(C-3)，144.7(C-12)，143.7(C-14)，141.2(C-17)，133.9(C-13)，126.5(C-16)，120.5(C-15)，119.7(C-4)，71.7(C-23)，67.9(C-22)，61.5(C-9)，54.5(C-26)，45.3(C-8)，44.9(C-24)，39.1(C-10)，37.3(C-20)，36.3(C-7)，33.8(C-6)，32.4(C-25)，31.3(C-1)，31.3(C-11)，21.3(C-21)，19.6(C-2)，19.2(C-27)，17.6(C-19)，16.0(C-18).

经类似操作，分别以3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明为原料与与盐酸羟胺反应，得到2，3，以3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺为原料与对硝基苯肼反应得到4，5。

化合物2：白色粉末，ESI-MS：m/z 439.6[M+H]⁺；

化合物3：白色粉末，ESI-MS：m/z 425.6[M+H]⁺；

化合物4：白色粉末，ESI-MS：m/z 543.7[M+H]⁺；

化合物5：白色粉末，ESI-MS：m/z 559.7[M+H]⁺；

实施例2：

将100mg(0.24mmol)藜芦胺溶于10mL丙酮中，加入0.3gK₂CO₃(2.4mmol)和硫酸二甲酯(DMS)0.5mL(5.2mmol)，于25℃反应过夜。蒸除溶剂后加入水30mL，用乙酸乙酯3×30mL萃取，有机层用30mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物102mg，经硅胶柱分离得到化合物6(31mg)、7(8mg)。

化合物6：白色粉末，ESI-MS：m/z 438.3[M+H]⁺；

化合物7：白色粉末，ESI-MS：m/z 452.4[M+H]⁺；

相同的实验操作，只是将反应物分别改为介芬胺和环杷明，相应的得到8，9。

化合物8：白色粉末，ESI-MS：m/z 454.3[M+H]⁺；

化合物9：白色粉末，ESI-MS：m/z 440.4[M+H]⁺；

实施例3：

将41mg(0.1mmol)藜芦胺溶于8mL吡啶中，冰水冷却后滴加SOCl₂0.2mL(2.8mmol)，逐渐升温至25℃，反应过夜。TLC表明反应结束，加入50mL乙酸乙酯，用3×30mL的水洗涤，有机层用30mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物40mg，经硅胶柱分离得到化合物10(20mg)。

相同的实验操作，只是将反应物分别改为介芬胺和环杷明，相应的得到11、12。

化合物10：白色粉末，ESI-MS：m/z 428.3[M+H]⁺；

化合物11：白色粉末，ESI-MS：m/z 444.3[M+H]⁺；

化合物12：白色粉末，ESI-MS：m/z 430.4[M+H]⁺；

实施例4：

将0.82g(2.0mmol)藜芦胺溶于50mL CH₂Cl₂中，冰水冷却后滴加氯乙酰氯(CH2ClCOCl)4mL(50mmol)，逐渐升温至25℃，反应4h，TLC表明反应结束，加入10mL甲醇继续反应0.5h，蒸除溶剂，加入200mL乙酸乙酯，用3×80mL的水洗涤，有机层用80mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物0.76g，经硅胶柱分离得到化合物18(0.65g)，收率66.8％。

化合物18：

白色粉末，ESI-MS：m/z 486[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：6.93(d，1H，J＝7.8，H-16)，6.84(d，1H，J＝7.2，H-15)，5.39(d，1H，J＝4.8，H-6)，3.83(m，1H，H-20)，3.53(brs，3H，COCH ₂Cl)，3.44(m，1H，H-3)，3.25(m，1H，H-23)，2.85(m，1H，H-26_b)，2.82(m，1H，H-8)，2.70(m，1H，H-11_b)，2.67(m，1H，H-1_b)，2.50(m，1H，H-2_b)，2.50(m，1H，H-22)，2.21(brs，3H，H-18)，1.10(d，3H，J＝7.2，H-21)，1.06(brs，3H，H-19)，1.03(d，3H，J＝6.6，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：167.4(COCH₂Cl)，143.9(C-14)，142.5(C-5)，142.3(C-17)，138.5(C-12)，131.4(C-13)，124.8(C-16)，121.7(C-6)，120.0(C-15)，71.2(C-3)，67.2(C-23)，60.4(C-22)，56.9(C-9)，47.1(C-26)，43.2(C-4)，41.3(C-24)，41.0(C-8)，40.9(COCH₂Cl)，37.8(C-1)，36.7(C-10)，34.2(C-20)，30.7(C-7)，30.2(C-11)，30.1(C-2)，27.2(C-25)，20.8(C-27)，20.2(C-21)，19.0(C-19)，15.1(C-18).

相同的实验操作，以介芬胺、环杷明和3-羰基-Δ⁴-藜芦胺味原料与氯乙酰氯反应，制备化合物23，28，35。以藜芦胺、介芬胺、环杷明、3-羰基-Δ⁴-藜芦胺及3-羰基-Δ⁴-环杷明与二氯乙酰氯反应制备化合物41，42，43，44，45。

化合物23：白色粉末，ESI-MS：m/z 502.3[M+H]⁺；

化合物35：白色粉末，ESI-MS：m/z 484.2[M+H]⁺；

化合物42：白色粉末，ESI-MS：m/z 536.2[M+H]⁺；

化合物44：白色粉末，ESI-MS：m/z 518.2[M+H]⁺；

化合物45：白色粉末，ESI-MS：m/z 520.1[M+H]⁺；

化合物28：

白色粉末，ESI-MS：m/z 488[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：5.35(d，1H，J＝1.8，H-6)，3.78(s，2H，COCH ₂Cl)，3.48(m，1H，H-3)，3.28(m，1H，H-23)，3.15(m，1H，H-26_b)，2.74(dd，1H，J＝19.2，3.6，H-22)，2.28(m，1H，H-20)，1.59(brs，3H，H-18)，1.23(d，3H，J＝7.2，H-21)，1.13(brs，3H，H-19)，1.08(d，1H，J＝6.6，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：166.8(COCH₂Cl)，144.2(C-5)，137.8(C-13)，125.2(C-12)，119.1(C-6)，87.0(C-17)，75.7(C-23)，71.8(C-3)，56.3(C-22)，51.6(C-9)，46.3(C-26)，43.2(C-14)，42.0(C-8)，41.9(C-20)，41.2(C-4)，40.8(COCH₂Cl)，37.7(C-24)，35.0(C-10)，33.4(C-1)，33.1(C-2)，30.3(C-11)，29.6(C-7)，27.0(C-25)，26.5(C-16)，24.4(C-15)，19.6(C-19)，19.1(C-27)，15.3(C-18)，13.1(C-21).

化合物41：

白色粉末，ESI-MS：m/z 520[M+H]⁺，542[M+Na]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：6.85(d，1H，J＝7.2，H-16)，6.76(d，1H，J＝7.2，H-15)，6.02(brs，1H，COCHCl₂)，5.32(brs，1H，H-6)，3.94(m，1H，H-20)，3.48(m，1H，H-3)，3.37(m，1H，H-23)，3.05(m，1H，H-26_b)，2.60(m，1H，H-22)，2.14(brs，3H，H-18)，1.02(d，3H，J＝7.2，H-21)，0.98(brs，3H，H-19)，0.93(d，3H，J＝6.6，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：165.1(COCHCl₂)，144.4(C-14)，142.9(C-5)，142.8(C-17)，138.5(C-12)，131.5(C-13)，122.1(C-16)，121.4(C-6)，120.6(C-15)，71.6(C-3)，67.7(C-23)，64.6(C-22)，63.9(COCHCl₂)，57.2(C-9)，47.7(C-26)，44.3(C-4)，41.7(C-24)，41.4(C-8)，38.3(C-1)，37.1(C-10)，34.9(C-20)，31.0(C-7)，30.6(C-11)，30.4(C-2)，27.5(C-25)，20.8(C-27)，20.4(C-21)，19.4(C-19)，15.6(C-18).

化合物43：

白色粉末，ESI-MS：m/z 522.3[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：6.11(s，1H，N-CHCl₂)，5.93(s，1H，O-CHCl₂)，5.55(d，1H，J＝5.4，H-6)，4.79(m，1H，H-3)，4.22(m，1H，H-23)，3.17(m，1H，H-26_b)，2.46(m，1H，H-22)，2.13(m，1H，H-20)，1.60(brs，3H，H-18)，1.33(d，3H，J＝7.2，H-21)，1.20(d，1H，J＝6.6，H-27)，1.18(brs，3H，H-19)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：164.4(O-COCHCl₂)，163.9(N-COCHCl₂)，140.4(C-5)，138.3(C-13)，123.6(C-12)，120.6(C-6)，85.0(C-17)，76.9(C-23)，76.8(C-3)，67.4(C-22)，64.64(O-COCHCl₂)，64.56(N-COCHCl₂)，56.8(C-9)，49.6(C-14)，47.4(C-26)，41.1(C-8)，37.5(C-4)，37.4(C-20)，37.1(C-24)，36.9(C-10)，34.7(C-1)，32.9(C-2)，30.2(C-11)，29.7(C-7)，27.3(C-25)，27.0(C-16)，22.7(C-15)，20.8(C-19)，19.1(C-27)，15.5(C-18)，14.1(C-21).

实施例5：

将48.5mg(0.1mmol)18溶于10mLDMF中，加入乙基哌嗪0.5mL(40mmol)，逐渐升温至45℃，反应过夜，反应结束后加入80mL乙酸乙酯，用3×40mL的水洗涤，有机层用40mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物45mg，经硅胶柱分离得到化合物19(34mg)，收率60.0％。

相同的实验操作，化合物18与N-(2-吡啶)哌嗪，N-(2-吡嗪基)哌嗪，N-(2-胡椒基)哌嗪反应，制备化合物20～22；化合物23与乙基哌嗪，N-(2-吡啶)哌嗪，N-(2-吡嗪基)哌嗪，N-(2-胡椒基)哌嗪反应得24～27；化合物28与乙基哌嗪，N-(2-吡啶)哌嗪，N-(2-吡嗪基)哌嗪，N-(2-胡椒基)哌嗪，N-环己基哌嗪，环丙胺反应得化合物29～34。化合物35与乙基哌嗪，N-(2-吡啶)哌嗪，N-(2-吡嗪基)哌嗪，N-(2-胡椒基)哌嗪，环丙胺反应得化合物36～40。

化合物19：白色粉末，ESI-MS：m/z 564.1[M+H]⁺；

化合物20：白色粉末，ESI-MS：m/z 613.4[M+H]⁺；

化合物21：白色粉末，ESI-MS：m/z 614.3[M+H]⁺；

化合物22：白色粉末，ESI-MS：m/z 670.4[M+H]⁺；

化合物24：白色粉末，ESI-MS：m/z 580.2[M+H]⁺；

化合物25：白色粉末，ESI-MS：m/z 629.4[M+H]⁺；

化合物26：白色粉末，ESI-MS：m/z 630.4[M+H]⁺；

化合物27：白色粉末，ESI-MS：m/z 686.2[M+H]⁺；

化合物29：白色粉末，ESI-MS：m/z 566.2[M+H]⁺；

化合物30：白色粉末，ESI-MS：m/z 615.1[M+H]⁺；

化合物31：白色粉末，ESI-MS：m/z 616.2[M+H]⁺；

化合物32：白色粉末，ESI-MS：m/z 672.2[M+H]⁺；

化合物33：白色粉末，ESI-MS：m/z 620.5[M+H]⁺；

化合物34：白色粉末，ESI-MS：m/z 509.4[M+H]⁺；

化合物36：白色粉末，ESI-MS：m/z 562.3[M+H]⁺；

化合物37：白色粉末，ESI-MS：m/z 611.2[M+H]⁺；

化合物38：白色粉末，ESI-MS：m/z 612.4[M+H]⁺；

化合物39：白色粉末，ESI-MS：m/z 668.4[M+H]⁺；

化合物40：白色粉末，ESI-MS：m/z 507.3[M+H]⁺；

实施例6：

将45mg(0.11mmol)环杷明溶于5mL CHCl₃中，加入2′，4′-二氟苯甲酰氯0.2mL(1.6mmol)，TEA0.5mL，室温反应12h，反应结束后，加入80mL乙酸乙酯，用3×30mL的水洗涤，有机层用30mL饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物55mg，经硅胶短柱纯化得到化合物46(32.3mg)，收率53.5％。

相同的操作，以3-羰基-Δ⁴-环杷明为原料反应得到47。

化合物46：白色粉末，ESI-MS：m/z 552.1[M+H]⁺；

化合物47：

白色粉末，ESI-MS：m/z 550[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：7.12(dd，1H，J＝11.4，3.6，H-6′)，7.09(d，1H，J＝4.8，H-5′)，7.07(d，1H，J＝4.8，H-3′)，5.78(brs，1H，H-4)，3.80(d，1H，J＝4.8，H-23)，3.56(m，1H，H-3_b)，3.51(m，1H，H-3_a)，3.04(brs，1H，H-26_b)，2.93(m，1H，H-22)，1.77(s，3H，H-18)，1.16(d，1H，J＝6.6，H-21)，1.15(d，3H，H-27)，1.11(s，3H，H-19)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：199.5(3-C＝O)，172.1(C＝O)，170.7(C-5)，166.1(C-4′)，160.2(C-2′)，142.1(C-13)，127.6(C-12)，124.7(C-4)，116.3(C-1′)，105.3(C-3′)，85.6(C-17)，71.4(C-23)，63.0(C-22)，54.8(C-9)，48.0(C-14)，45.2(C-26)，44.6(C-8)，38.3(C-10)，36.3(C-1)，33.8(C-6)，32.8(C-2)，32.3(C-16)，30.5(C-7)，28.8(C-11)，28.1(C-25)，24.4(C-15)，16.2(C-27)，16.2(C-19)，13.6(C-18)，10.2(C-21).

实施例7：

将1.23g(3.0mmol)藜芦胺溶于15mL DMF中，加入BrCH₂CH₂Br6mL(69mmol)，K₂CO₃1.0g(7.2mmol)和催化量的KI，反应36h，反应结束后，加入200mL乙酸乙酯，用3×100mL的水洗涤，有机层用100mL饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物1.30g，经硅胶短柱纯化得到化合物48(1.12g)，收率73.5％。

类似的操作，介芬胺与3-羰基-Δ⁴-藜芦胺分别与ClCH₂CH₂Cl和BrCH₂CH₂Br反应得到51，52和59，60；环杷明与3-羰基-Δ⁴-环杷明与ClCH₂CH₂Cl或BrCH₂CH₂Br反应61和67，68。

化合物48：白色粉末，ESI-MS：m/z 516.2[M+H]⁺；

化合物51：白色粉末，ESI-MS：m/z 488.3[M+H]⁺；

化合物59：白色粉末，ESI-MS：m/z 532.2[M+H]⁺；

化合物60：白色粉末，ESI-MS：m/z 514.2[M+H]⁺；

化合物67：白色粉末，ESI-MS：m/z 472.3[M+H]⁺；

化合物68：白色粉末，ESI-MS：m/z 516.2[M+H]⁺；

化合物52：

白色粉末，ESI-MS：m/z 532[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：5.36(t，1H，J＝2.4，H-6)，3.53(m，1H，H-3)，3.51(m，1H，H-23)，3.51(m，2H，H-2′)，3.07(m，1H，H-26_b)，3.02(m，1H，H-1′)，2.57(d，1H，J＝7.8，H-22)，2.48(m，1H，H-20)，2.46(m，1H，H-1_b)，2.37(d，1H，J＝1.8，H-4_b)，2.35(dd，1H，J＝4.8，2.4，H-26_a)，2.00(brs，1H，H-26_a)，2.28(m，1H，H-4_a)，2.05(s，3H，H-18)，2.18(d，1H，J＝4.2，H-24_b)，1.97(m，1H，H-1_a)，1.36(m，1H，H-25)，1.22(d，1H，J＝3.0，H-24_a)，1.04(d，1H，J＝7.2，H-27)，1.02(s，3H，H-19)，0.98(d，3H，J＝6.6，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：206.9(11-C＝O)，144.0(C-13)，142.3(C-5)，136.0(C-12)，121.0(C-6)，85.0(C-17)，74.8(C-23)，71.7(C-3)，71.5(C-22)，52.6(C-9)，61.8(C-26)，57.4(C-1′)，44.8(C-14)，41.4(C-4)，40.4(C-8)，37.7(C-24)，37.0(C-10)，36.8(C-1)，31.6(C-16)，31.2(C-7)，30.7(C-2)，29.3(C-25)，29.3(C-2′)，24.3(C-15)，19.0(C-27)，18.5(C-19)，12.2(C-18)，10.8(C-21).

化合物61：

白色粉末，ESI-MS：m/z 518[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：5.38(d，1H，J＝5.4，H-6)，3.52(m，1H，H-3)，3.45(m，2H，H-CH ₂Br)，3.10(m，1H，H-23)，3.01(m，1H，H-26_b)，2.86(m，2H，H-CH ₂CH₂Br)，2.41(m，1H，H-22)，2.25(m，1H，H-4_b)，2.21(m，1H，H-4_a)，2.18(m，1H，H-20)，1.68(brs，3H，H-18)，1.02(m，3H，H-21)，0.98(d，1H，J＝6.6，H-27)，0.94(brs，3H，H-19).

实施例8：

将50.7mg(0.1mmol)48溶于10mL DMF中，加入乙基哌嗪0.5mL(40mmol)，K₂CO₃140mg(1.0mmol)，逐渐升温至65℃，反应过夜，反应结束后加入80mL乙酸乙酯，用3×40mL的水洗涤，有机层用40mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物45mg，经硅胶柱分离得到化合物49(30mg)，收率54.6％。

类似的操作，化合物48与环丙胺反应得到50；化合物52与乙基哌嗪，N-(2-吡啶)哌嗪，N-(2-吡嗪基)哌嗪，N-(2-胡椒基)哌嗪，N-环己基哌嗪，环丙胺反应的化合物53～58；化合物61乙基哌嗪，N-(2-吡啶)哌嗪，N-(2-吡嗪基)哌嗪，N-(2-胡椒基)哌嗪，环丙胺反应的化合物62～66；化合物52，61，68与二甲胺反应得到77～79。

化合物49：白色粉末，ESI-MS：m/z 550.4[M+H]⁺；

化合物50：白色粉末，ESI-MS：m/z 493.3[M+H]⁺；

化合物53：白色粉末，ESI-MS：m/z 566.4[M+H]⁺；

化合物54：白色粉末，ESI-MS：m/z 615.2[M+H]⁺；

化合物55：白色粉末，ESI-MS：m/z 616.1[M+H]⁺；

化合物56：白色粉末，ESI-MS：m/z 672.2[M+H]⁺；

化合物57：白色粉末，ESI-MS：m/z 620.5[M+H]⁺；

化合物62：白色粉末，ESI-MS：m/z 552.5[M+H]⁺；

化合物63：白色粉末，ESI-MS：m/z 601.4[M+H]⁺；

化合物64：白色粉末，ESI-MS：m/z 602.4[M+H]⁺；

化合物65：白色粉末，ESI-MS：m/z 672.3[M+H]⁺；

化合物66：白色粉末，ESI-MS：m/z 509.4[M+H]⁺；

化合物77：白色粉末，ESI-MS：m/z 497.4[M+H]⁺；

化合物78：白色粉末，ESI-MS：m/z 483.4[M+H]⁺；

化合物79：白色粉末，ESI-MS：m/z 481.3[M+H]⁺；

化合物58：

白色粉末，ESI-MS：m/z 509[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：5.38(d，1H，J＝5.4，H-6)，3.53-3.54(m，2H，H-3，23)，3.10(m，2H，H-2′)，3.05(d，1H，J＝17.4，H-26_b)，3.01(m，2H，H-1′)，2.59(d，1H，J＝2.4，H-22)，2.48(m，1H，H-20)，2.35(m，1H，H-26_a)，2.28(brs，3H，H-18)，1.35(m，1H，H-1″)，1.08(d，3H，J＝6.6，H-27)，1.02(brs，3H，H-19)，0.99(d，1H，J＝6.6，H-21)，0.57(m，4H，H-2″，3″).

实施例9：

将82mg(0.2mmol)3-羰基-Δ⁴-藜芦胺溶于15mL乙醇中，加入K₂CO₃140mg(1.0mmol)和0.5mL CH₃I(1.6mmol)。于40℃反应过夜。用3×50mL乙酸乙酯萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥，蒸除溶剂得到78mg粗品，经硅胶柱纯化得到白色晶体(化合物71)26mg；水层浓缩至1mL，经Sephadex LH-20柱层析，以甲醇洗脱，得到颗粒状的晶体(化合物72)15mg。

类似的操作，介芬胺，环杷明与CH₃I得到化合物69，70。

化合物69：白色粉末，ESI-MS：m/z 454.3[M]⁺；

化合物70：白色粉末，ESI-MS：m/z 440.4[M]⁺；

化合物71：白色粉末，ESI-MS：m/z 422.3[M+H]⁺；

化合物72：白色粉末，ESI-MS：m/z 436.3[M]⁺；

实施例10：

将82mg(0.2mmol)藜芦胺溶于15mL CH₂Cl₂中，加入75％的间氯过氧苯甲酸(mPCA)92mg(0.4mmol)。于10℃以下反应过夜。反应结束后加入5％的Na₂CO₃溶液调pH至7-8，用3×50mL CH₂Cl₂萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得78mg粗品，经硅胶柱纯化得白色晶体8651mg。

类似的操作，分别以介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺，3-羰基-Δ⁴-环杷明为原料，经间氯过氧苯甲酸氧化得到化合物87～91。

化合物86：

白色粉末，ESI-MS：m/z 426[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：7.31(brs，1H，H-16)，6.90(d，1H，J＝8.4，H-15)，5.45(t，1H，J＝2.4，H-6)，3.96(m，1H，H-20)，3.65(m，1H，H-23)，3.45(m，1H，H-3)，3.17(m，1H，H-26_b)，2.90(td，1H，J＝12.0，5.4，H-8)，2.76(q，1H，J＝7.2，H-11_b)，2.57(m，1H，H-11_a)，2.54(m，1H，H-7_b)，2.44(d，1H，H-22)，2.36(m 1H，H-4_b)，2.33(brs，3H，H-18)，2.21(m，1H，H-4_a)，2.20(m，1H，H-26_b)，1.96(tt，1H，J＝14.4，2.4，H-7_a)，1.86(d，1H，J＝3.0，H-1_b)，1.84(m，1H，H-2_b)，1.82(m，1H，H-24_b)，1.77(m，1H，H-9)，1.65(m，1H，H-25)，1.96(dd，1H，J＝12.0，3.0，H-2a)，1.43(d，3H，J＝6.6，H-21)，1.27(d，1H，J＝3.6，H-1_a)，1.12(brs，3H，H-19)，0.90(m，1H，H-24_a)，0.87(d，3H，J＝6.0，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：144.4(C-14)，143.7(C-12)，143.5(C-5)，142.4(C-17)，133.4(C-13)，126.7(C-16)，122.6(C-6)，120.3(C-15)，75.8(C-22)，72.2(C-3)，58.2(C-9)，43.1(C-24)，42.3(C-4)，42.1(C-8)，40.0(C-1)，37.8(C-10)，34.7(C-20)，31.7(C-7)，31.3(C-11)，31.0(C-2)，27.6(C-25)，19.6(C-19)，19.3(C-27)，16.2(C-18)，14.6(C-21).

化合物87：

白色粉末，ESI-MS：m/z442[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：5.38(brs，1H，H-6)，3.50(m，1H，H-3)，3.48(m，1H，H-23)，2.85(dd，1H，J＝10.0，4.0，H-26_b)，2.66(m，1H，H-22)，2.64(m，1H，H-20)，2.57(dd，1H，J＝13.0，3.0，H-1_b)，2.34(m，1H，H-4_b)，2.23(m，1H，H-26_a)，2.21(brs，3H，H-18)，2.17(brs，1H，H-4_a)，2.05(m，1H，H-24_b)，1.94(m，1H，H-14)，1.92(m，1H，H-15_b)，1.85(m，1H，H-7_b)，1.78(m，1H，H-25)，1.62(m，1H，H-9)，1.56(m，1H，H-8)，1.35(m，1H，H-15_a)，1.19(d，1H，J＝3.0，H-1_a)，1.13(s，1H，H-24_a)，1.10(d，3H，J＝7.0，H-21)，1.03(brs，3H，H-19)，1.02(d，1H，J＝7.0，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：206.8(C-11)，145.9(C-13)，142.3(C-5)，137.2(C-12)，120.9(C-6)，85.5(C-17)，76.1(C-22)，74.2(C-23)，71.7(C-3)，67.6(C-26)，62.6(C-9)，44.8(C-14)，41.4(C-4)，40.8(C-20)，37.9(C-8)，37.3(C-24)，37.0(C-10)，36.8(C-1)，31.2(C-2)，31.1(C-7)，30.7(C-16)，28.8(C-25)，24.4(C-15)，18.7(C-27)，18.5(C-19)，12.3(C-18)，11.1(C-21).

化合物88：

白色粉末，ESI-MS：m/z428[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：5.37(brs，1H，H-6)，3.53(d，1H，J＝5.4，H-3)，3.39(m，1H，H-23)，3.27(d，1H，J＝8.4，H-26_b)，2.60(m，1H，H-22)，2.14(m，1H，H-20)，2.10(m，1H，H-1_b)，2.44(m，1H，H-4_b)，2.35(m，1H，H-26_a)，1.67(brs，3H，H-18)，2.20(brs，1H，H-4_a)，1.25(m，1H，H-24_b)，1.46(m，1H，H-14)，1.38(m，1H，H-25)，1.29(d，1H，J＝3.0，H-1_a)，1.18(s，1H，H-24_a)，1.08(d，3H，J＝7.2，H-21)，1.00(d，1H，J＝8.4，H-27)，0.93(brs，3H，H-19).

化合物89：白色粉末，ESI-MS：m/z 424.3[M+H]⁺；

化合物90：白色粉末，ESI-MS：m/z 440.3[M+H]⁺；

化合物91：白色粉末，ESI-MS：m/z 426.3[M+H]⁺；

实施例11：

将41mg(0.1mmol)藜芦胺溶于5mLAcOH中，加入液溴0.1mL(3.9mmol)。于25℃以下反应24h。反应结束后加入饱和的Na₂CO₃溶液调pH至7-8，用3×50mL乙酸乙酯萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得到38mg粗品，经硅胶柱纯化得到黄白色粉末9231mg，收率54.5％。

类似的操作，以介芬胺为原料加成反应得到化合物93。

化合物92：白色粉末，ESI-MS：m/z 568.1[M+H]⁺；

化合物93：白色粉末，ESI-MS：m/z 584.3[M+H]⁺；

实施例12：

体外化合物对胰腺癌细胞和肺癌细胞增殖的抑制作用

样品配制：将本发明各化合物用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/mL的溶液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。

细胞株：

1)BxPC-3(人胰腺癌细胞)       2)SW1990(人胰腺癌细胞)

3)NCI-H157(非小细胞肺癌细胞) 4)NCI-H466(小细胞肺癌细胞)

培养液RPMI1640+15％NBS+双抗

试验方法

MTT法：96孔板每孔加入浓度为3～4×104个/mL的细胞悬液100μL，置37℃，5％CO2培养箱内。24h后，加入样品液，10μL/孔，设双复孔，37℃，5％CO2作用72h。每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，作用4h后加入溶解液，100μL/孔，置培养箱内，溶解后用MK-2全自动酶标仪测570nm OD值。

结果见表1。结果表明化合物对胰腺癌细胞和肺癌细胞具有一定的抑制作用，并且呈一定的选择性。绝大部分化合物对胰腺癌BxPC-3和小细胞肺癌NCI-H446细胞系敏感，表现出良好的抑制细胞增殖的活性，而对胰腺癌细胞SW1990和非小细胞肺癌NCI-H157细胞系敏感程度相对较差。部分化合物对于胰腺癌肺癌细胞的抑制作用明显强于阳性对照药环杷明。

尤其化合物41，43，58具有显著的抗肿瘤活性，其他8个衍生物：10，18，19，38，45，48，50，65也表现出明显的抗肿瘤活性。

并且表现出一定的选择性：对于胰腺癌BxPC-3和小细胞肺癌NCI-H446细胞系的敏感性大于胰腺癌细胞SW1990和非小细胞肺癌NCI-H157细胞。

表1.介芬胺类生物碱衍生物对胰腺癌、肺癌细胞瘤株增殖抑制作用

环杷明^*：阳性对照药

实施例13：

化合物41，44，58对裸鼠体内人体胰腺癌PANC-1瘤的抑制作用

受试样品：化合物41，44，58，纯度均＞95％，用数滴土温-80助溶后加0.5％CMC制成所需浓度

阳性对照药物：cyclopamine(自制，纯度＞98.5％)

实验动物：BALB/C裸鼠(SPF级)，雄性，18-20g，由上海斯莱克实验动物责任有限公司购得。

移植性肿瘤：人体胰腺癌PANC-1，由上海医药工业研究院药理室提供。

实验方法：

取生长良好的PANC-1实体瘤，无菌条件下切割成2-3mm大小的均匀小块，用套管针每只小鼠右腋皮下接种一块，随机分为5组，分别为：

(1)Control(生理盐水)         (2)cyclopamine(20mg/kg，ip×10)

(3)41(2mg/kg，ip×10)        (4)41(5mg/kg，ip×10)

(5)41(10mg/kg，ip×10)       (6)43(3mg/kg，ip×10)

(7)43(10mg/kg，ip×10)       (8)43(20mg/kg，ip×10)

(9)58(3mg/kg，ip×10)        (10)58(10mg/kg，ip×10)

(11)58(20mg/kg，ip×10)

接种后10日开始给药，各给药组分别连续腹腔注射给药10天(d0-d9)，给药体积为0.5mL/20g体重，并用电子数显游标卡尺每4天测瘤块的长径(a)、短径(b)，计算肿瘤体积(tumor volume，TV)计算公式为：TV＝1/2×a×b²，相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)计算公式为：RTV＝Vt/Vo，Vo为分笼时(即do)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖抑制率(％)：(1-T/C)×100％，并进行T检验。接种后30天脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑瘤率。

结果与讨论：

选取体外细胞毒实验中有较强抑制作用的化合物：41，43，58进行体内抗肿瘤活性研究，结果见表2。

表2.化合物41，44，58对裸鼠体内人体胰腺癌PANC-1瘤的抑制作用

环杷明^*：阳性对照药

从表2.可以看出，41在低、中、高三个剂量时的抑制率分别为28.11％，28.61％，40.02％，和空白组比较其抑制作用非常显著，其p＜0.01，高剂量时的效果和阳性对照药相当，并且高剂量组中未发现小鼠死亡现象，其生理状态正常，说明41体内的毒性较轻；

58在低、中、高三个剂量时的抑制率分别为14.98％，34.35％，39.52％，中、高剂量组和空白组比较其抑制作用非常显著，其p＜0.01，高剂量时的效果和阳性对照药相当，并且高剂量组中未发现小鼠死亡现象，其生理状态正常，说明58体内的毒性较轻；

43在低、中、高三个剂量时的抑制率分别为12.90％，29.19％，39.45％，只有高剂量组和空白组比较其抑制作用非常显著，其p＜0.01，高剂量时的效果和阳性对照药相当，并且高剂量组中未发现小鼠死亡现象，其生理状态正常，说明43体内的毒性较轻，并且表现出较好的量效关系。

Claims (6)

1、一种介芬胺类甾体生物碱衍生物，其特征在于所述衍生物如下式A：

2、一种如权利要求1所述的介芬胺类甾体生物碱衍生物，其特征在于所述衍生物包括化合物：Δ⁴-藜芦胺-3-肟1，Δ⁴-介芬胺-3-肟2，Δ⁴-环杷明-3-肟3，Δ⁴-藜芦胺-3-(4-硝基)苯腙4，Δ⁴-介芬胺-3-(4-硝基)苯腙5，3-甲基-N-甲基藜芦胺6，3，23-二甲基-N-甲基藜芦胺7，3-甲基-N-甲基介芬胺8，3-甲基-N-甲基环杷明9，3α-氯-藜芦胺10，3α-氯-介芬胺11，3α-氯-环杷明12，N-棕榈酰基藜芦胺13，N-棕榈酰基介芬胺14，N-棕榈酰基环杷明15，N-棕榈酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺16，N-棕榈酰基-3-羰基-Δ⁴-环杷明17，N-氯代乙酰基藜芦胺18，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基藜芦胺19，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基藜芦胺20，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基藜芦胺21，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基藜芦胺22，N-氯代乙酰基介芬胺23，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基介芬胺24，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基介芬胺25，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基介芬胺26，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基介芬胺27，N-氯代乙酰基环杷明28，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基环杷明29，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基环杷明30，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基环杷明31，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基环杷明32，N-(N-环己基哌嗪)乙酰基环杷明33，N-(环丙胺)乙酰基环杷明34，N-氯代乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺35，N-(N-乙基哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺36，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺37，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺38，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺39，N-(环丙胺)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺40，N-二氯代乙酰基藜芦胺41，N-二氯代乙酰基介芬胺42，N-二氯代乙酰基环杷明43，N-二氯代乙酰基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺44，N-二(二氯代)乙酰基-3-羰基-Δ⁴-环杷明45，N-2′，4′-二氟苯甲酰基环杷明46，2′，4′-二氟苯甲酰基-3-羰基-Δ⁴-环杷明47，N-溴代乙基藜芦胺48，N-(N-乙基哌嗪)乙基藜芦胺49，N-(环丙胺)乙基藜芦胺50，N-氯代乙基介芬胺51，N-溴代乙基介芬胺52，N-(N-乙基哌嗪)乙基介芬胺53，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙基介芬胺54，N-(N-(2-吡嗪基)哌嗪)乙基藜芦胺55，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙基介芬胺56，N-(N-环己基哌嗪)乙基介芬胺57，N-(环丙胺)乙基介芬胺58，N-氯代乙基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺59，N-溴代乙基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺60，N-溴代乙基环杷明61，N-(N-乙基哌嗪)乙基环杷明62，N-(N-(2-吡啶)哌嗪)乙基环杷明63，N-(N-(2-吡嗪)哌嗪)乙基环杷明64，N-(N-(2-胡椒基)哌嗪)乙基环杷明65，N-(环丙胺)乙基环杷明66，N-氯代乙基-3-羰基-Δ⁴-环杷明67，N-溴代乙基-3-羰基-Δ⁴-环杷明68，碘化N，N-二甲基介芬铵69，碘化N，N-二甲基环杷明铵70，N-甲基-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺71，碘化N，N-二甲基-3-羰基-Δ⁴-藜芦铵72，N-乙基介芬胺73，N-辛基介芬胺74，N-乙基环杷明75，N-辛基环杷明76，N-二甲胺基乙基介芬胺77，N-二甲胺基乙基环杷明78，N-二甲胺基乙基-3-羰基-Δ⁴-环杷明79，N-(4-硝基苄基)介芬胺80，N-(4-硝基苄基)环杷明81，N-(4-硝基苄基)-3-羰基-Δ⁴-环杷明82，N-(4-氟苄基)介芬胺83，N-(4-氟苄基)环杷明84，N-(4-氟苄基)-3-羰基-Δ⁴-环杷明85，N-OH藜芦胺86，N-OH介芬胺87，N-OH环杷明88，N-OH-3-羰基-Δ⁴-藜芦胺89，N-OH-3-羰基-Δ⁴-介芬胺90，N-OH-3-羰基-Δ⁴-环杷明91，5，6-二溴藜芦胺92，5，6-二溴介芬胺93：

3、一种如权利要求1或2所述介芬胺类甾体生物碱衍生物的制备方法，该方法包括下列步骤：

(1)分别以甾体生物碱藜芦胺、介芬胺及环杷明为原料，经Oppennauer氧化反应制备化合物：3-羰基-Δ4-藜芦胺，3-羰基-Δ4-介芬胺，3-羰基-Δ4-环杷明；

所述反应中使用异丙醇铝/环己酮，或异丙醇铝/丁酮，或异丙醇铝/丁酮与环己酮氧化体系；异丙醇铝/环己酮氧化体系中环己酮用量与原料的摩尔比为5-12，优选8-10；丙醇铝/丁酮氧化体系中丁酮的用量与原料的摩尔比为10-20，优选12-15；两种氧化体系中异丙醇铝与原料的摩尔比均为1-8，优选2；溶剂选用甲苯或苯，每g原料需要溶剂15-30mL，优选18-20mL，反应须在无水反应体系中进行；反应温度为90-130℃，优选110±5℃；反应时间为2-5h，优选3-4h；反应结束蒸除甲苯，剩余的环己酮和产生的环己醇，直接加入石油醚静置析出淡黄色块状结晶除去，或将蒸除溶剂得到的黄色液体直接经短硅胶柱纯化剩余的环己酮和产生的环己醇，得到白色的粉末或针晶，分别制得化合物3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺，3-羰基-Δ⁴-环杷明；

(2)分别取步骤(1)3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经与盐酸羟胺或对硝基苯肼缩合，制备化合物1，2，3，4，5；

所述反应中采用甲醇或乙醇为溶剂，盐酸羟胺与原料的摩尔比为1.5-10，优选3-5；反应温度为10-85℃，优选60-85℃；反应时间为2-8h，优选3-4h；

(3)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明采用硫酸二甲酯进行甲基化反应，制备化合物6，7，8，9；

所述反应中采用K₂CO₃或Na₂CO₃为缚酸剂、丙酮、THF或二氧六环为溶剂；硫酸二甲酯与原料的摩尔比为1.2-5，优选1.2-2；反应温度为10-60℃，优选15-45℃；反应时间为4-16h，优选8-12h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(4)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明采用SOCl₂进行氯代反应，制备化合物10，11，12；

所述反应体系采用吡啶为溶剂，得到一构型翻转为主的产物；滴加SOCl₂的反应温度为0-5℃，滴加完毕反应温度15-35℃；反应时间为4-16h，优选8-12h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(5)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经N酰化制备化合物：13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47；

所述反应中以CH₃(CH₂)₁₄COCl，ClCH₂COCl和Cl₂CHCOCl为酰化剂，酰化剂与原料的摩尔比为1∶5-20，优选1∶8-10；溶剂选用CH₂Cl₂、CHCl₃、CCl₄或(CH₂)₂Cl₂中的一种或几种，每g原料用溶剂100-300mL，优选150-200mL；反应温度为-5-40℃，优选以冰浴条件下滴加酰化剂，再在10-15℃下反应；反应时间为4-20h，优选8-14h；当原料为结构中存在3-OH的藜芦胺，介芬胺，环杷明化合物时，反应结束后加入过量甲醇和3-8倍摩尔量的金属钠在45℃左右搅拌1h，或直接加入过量甲醇反应回流0.5h，醇解生成的酯；

(6)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经N烃化制备化合物：48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85；所述反应中卤代烷为1，2-二氯乙烷或1，2-二溴乙烷，卤代烷与原料的摩尔比为1.2-20，优选2-5；反应体系以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，每g原料用DMF5-15mL，或直接以过量的卤代烷为溶剂；缚酸剂选用K₂CO₃、Na₂CO₃、NaHCO₃、NaOH或KOH中的一种或几种；反应温度为0-50℃，优选室温；反应时间为12-48h，优选32-40h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(7)分别取步骤(1)藜芦胺，介芬胺，环杷明，3-羰基-Δ⁴-藜芦胺，3-羰基-Δ⁴-介芬胺和3-羰基-Δ⁴-环杷明经N羟基化制备化合物：86，87，88，89，90，91；采用过氧苯甲酸或间氯过氧苯甲酸为氧化剂氧化剂与原料的摩尔比为1.2-3，优选1.2-1.5；加入氧化剂过程的反应温度为冰浴，加毕后反应温度为5-20℃，优选10-15℃；以二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或丙酮为溶剂，优选二氯甲烷、氯仿；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种；

(8)分别取步骤(1)藜芦胺与Br₂发生亲电加成，制备化合物92，93；

所述反应中以醋酸为溶剂，用量为4-20mg/mL，藜芦胺与Br₂原料的摩尔比为5-50，优选20-30；加毕后反应温度为5-50℃，优选10-25℃；反应时间12-48h，优选18-24h；反应结束后萃取用的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯的一种或多种。

4、一种如权利要求1或2所述介芬胺类甾体生物碱衍生物1-93化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

5、根据权利要求4的应用，其特征在于所述药物为权利要求1所述介芬胺类甾体生物碱衍生物1-93化合物与药用辅料制成的药物组合物。

6、根据权利要求4的应用，其特征在于所述药物为抗胰腺癌或肺癌的药物。