CN103189060A - 用于对无义突变介导的疾病进行治疗的化合物和含有所述化合物的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于对无义突变介导的遗传性疾病进行治疗的式（I）化合物。

Description

用于对无义突变介导的疾病进行治疗的化合物和含有所述化合物的药物组合物
技术领域
本发明涉及用于对由无义突变引起的遗传性疾病（也称为“无义突变介导（nonsense-mutation-mediated）的疾病”）进行治疗、预防或诊断的化合物。本发明还涉及包含上述化合物的药物组合物。本发明进一步涉及在给定基因中测定无义突变存在的方法。
背景技术
无义突变是一种读码框内（in-frame）的突变，所述突变导致信使RNA（以下称为mRNA）中的有义密码子转变为提前终止密码子（premature stop codon）。提前终止密码子（以下称为PTC）被定义为在基因编码序列中，位于正常终止密码子上游的终止密码子。正常终止密码子终止基因的翻译，并能使全长野生型蛋白得以合成。PTC阻止野生型蛋白合成，并导致突变基因沉默（silencing）。蛋白的缺损（部分缺损或全部缺损）导致病变（pathology）。例如，编码肌营养不良蛋白（dystrophin）的基因中的PTC在男孩中引起无义突变介导的Duchenne型肌营养不良症。
已知无义突变介导的前列腺癌由JAK1、SYNJ2或CLPTM1基因中的PTC引起（参见，Cancer genetics and cytogenetics（2005）中的“Identification of inactivating mutations in the JAK1,SYNJ2and CLPTM1genes in prostate cancer cells,using inhibition of nonsense-mediated decayand microarray analysis”）。还已知无义突变介导的癫痫是由GABAA受体亚基基因中的PTC引起的（参见，Cell（2010）中的“Making sense ofnonsense GABAA receptor mutations associated with genetic epilepsies”）。
文件WO 2008/101935公开了用于对无义突变介导的疾病进行治疗的化合物。在这一文件中所公开的化合物为吲哚衍生物，并已在预先转染有两个质粒的HeLa癌细胞和来自DMD（Duchene型肌营养不良症）患者的两种淋巴母细胞（lymphoblastic）细胞系上进行了测试。文件WO2004/091502公开了用于治疗由来自无义突变的PTC所引起的遗传性疾病的化合物。WO 2004/091502所公开的化合物中的一种（ataluren）目前正在进行作为无义突变介导的血友病（hemophilia）A和B口服治疗的2a期临床试验、无义突变介导的甲基丙二酸血症（MethylmalonicAcidemia）的2期试验、以及在无义突变介导的囊性纤维化（cysticfibrosis）患者中的3期试验。在无义突变介导的Duchenne/Becker型肌营养不良症患者中的2a期试验已完成。
发明内容
本发明的一个目的为提供能够对由无义突变引起的遗传性疾病进行治疗的化合物。
因此，本发明提供了用于遗传性疾病治疗或预防的式（I）化合物或其盐、溶剂化物、包合物（clathrate）、水合物或多晶型物（polymorph），所述遗传性疾病为无义突变介导的疾病。
Figure BDA00003001738200021
式（I）化合物（(2-氨基-7-异丙基-5-氧代-5H-色烯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸）通常被称为氨来呫诺（amlexanox）。目前，将它在口服给药时用作治疗哮喘和变应性鼻炎的治疗剂，在局部使用时用作治疗口疮（cankersores）的治疗剂。
还将它用于口腔溃疡（aphthous ulcer）的治疗（
Figure BDA00003001738200022
）。它以其抗炎和抗过敏特性为人们所熟知。还将它用于支气管哮喘（bronchicasthma）的治疗。它的安全性是众所周知的。
WO2009/151569涉及通过向患者给予BAR激动剂（β(2)-肾上腺素能受体）来对B细胞增殖紊乱进行治疗的方法。可将所述BAR激动剂作为单一疗法来给药，或者与一种或多种其他药剂（如PDE酶抑制剂）联合进行给药。本发明的化合物在一长串作为PDE抑制剂的化合物列表中被列举出。WO2009/151569并未指出或暗示上述增殖机制与基因突变有关。
WO 2008/021210涉及使用各个表中所列出的化合物对神经退行性紊乱进行治疗的方法。本发明的化合物在表1a中作为抗组胺药（H1）、白三烯受体拮抗剂、抗过敏药和抗炎药被公开。WO 2008/021210并未公开或暗示基因突变在所治疗的疾病中起到了作用。
文件WO 2010/139985公开了本发明的化合物用于对与中性粒细胞增多（neutrophilia）相关的疾病进行治疗的用途。中性粒细胞增多是当患者血液中有大量中性粒细胞时用于所述患者病症的术语。中性粒细胞是哺乳动物中最丰富的一类白血球。中性粒细胞与炎性疾病相关。在炎症过程（尤其是细菌感染）、环境暴露（environmental exposure）和一些癌症中，中性粒细胞是首先响应的。WO 2010/139985并未公开或暗示上述化合物用于对无义突变介导的疾病进行治疗的用途。
此外，文件US 2007/0135473公开了本发明的化合物用于对与肿瘤细胞相关的疾病进行治疗的用途，所述肿瘤细胞表达一种或多种S100家族蛋白。认为上述化合物在延缓这些肿瘤的发展和/或转移中有效。S100蛋白牵涉到多种细胞内和细胞外功能。S100蛋白涉及蛋白磷酸化的调节、转录因子、Ca++稳态、细胞骨架成分的变化、酶活性、细胞生长和分化、以及炎性反应。然而，US 2007/0135473并未公开或暗示式（I）化合物用于对无义突变介导的疾病进行治疗的用途。而且，也没有证据表明S100蛋白涉及由无义突变引起的疾病。
如下文所述，本申请人发现式（I）化合物能抑制无义介导的mRNA衰变（以下称NMD）、和/或具有通读（readthrough）作用，这取决于突变的基因。因此，本发明的化合物能使功能性蛋白得以合成。
从理论上讲，当mRNA上存在有PTC时，核糖体应该合成出截短蛋白。相比野生型蛋白，截短蛋白具有较短的肽链。野生型蛋白被定义为相应的基因不包含任何突变时所合成的蛋白。截短蛋白可能是功能性的，也可能不是。换句话说，截短蛋白在细胞或整个身体上可能产生或可能不产生与由野生型蛋白所产生的效果相同的效果。含有PTC的mRNA在稳态翻译（steady-state translation）发生之前便被机体消除。这种含PTC的mRNA的衰变也被称为无义介导的mRNA衰变（NMD）。NMD是一种存在于所有真核细胞生物中的天然质量监控机制。NMD引导含PTC的mRNA降解。
在一些情况下，由含有无义突变的基因翻译而来的截短蛋白是功能性的。尽管事实上截短蛋白比野生型蛋白短，截短蛋白的功能也可能存在。换句话说，即使截短蛋白与野生型蛋白不同，它也可能在细胞和机体中产生与由野生型蛋白所产生的效果相同的效果。在这些情况下，截短蛋白产生出野生型表型。因此，在这种情况下，如果对NMD进行抑制，功能性截短蛋白留在细胞中，并在细胞以及这样的机体中具有与野生型蛋白相同的功能，就好像相应的基因不藏有任何无义突变。
NMD机制是众所周知的，并在一些出版物中进行了描述（参见，Conti,E.和E.Izaurralde，Nonsense-mediated mRNA decay:molecular insights andmechanistic variations across species.Curr Opin Cell Biol，2005.17（3）：p.316-25；和Maquat,L.E.，Nonsense-mediated mRNA decay:splicing,translation and mRNP dynamics.Nat Rev Mol Cell Biol，2004.5（2）：p.89-99）。
已知在特定条件下，尽管有藏于mRNA中的终止密码子（提前的或非提前的）的存在，核糖体通过在终止密码子位点加入氨基酸继续将所述mRNA翻译成蛋白。这种现象被称为“通读”。在无义位点处加入的氨基酸可与存在于野生型蛋白中的氨基酸相同或不同。因此，所得到的蛋白可为功能性的或非功能性的，这取决于位于无义位点的氨基酸对蛋白功能的作用。
在过去几年里，已尝试开发了用于形成读码框内PTC的突变的药理学方法。这些治疗方法旨在促进PTC的翻译通读，以使全长功能性蛋白以足够的水平合成和表达。在大多数研究中，通读药物为氨基糖甙类（aminoglycosides），以庆大霉素（gentamicin）为主。庆大霉素的临床收效有限，因为高浓度和/或长期治疗具有严重的副作用，例如肝损伤和听力丧失。最近，PTC124或ataluren已被确认为能促进PTC通读的小分子有机化合物。WO2004/091502公开了PTC124和1,2,4-噁二唑苯甲酸衍生物。
具体实施方式
根据本发明，“NMD抑制”指对NMD的部分或全部抑制，“PTC通读”指对PTC的部分或全部通读。已发现本发明的化合物具有通读作用。因此，可将本发明的化合物用于治疗由无义突变引起的遗传性疾病（也称为无义突变介导的疾病）。所述无义突变被定义为NMD激活突变（NMD activating mutation）。
根据本发明，“功能性蛋白”被定义为能够具有与野生型蛋白相同的细胞功能的截短或未截短蛋白。当本发明的化合物抑制NMD时，可获得功能性截短蛋白。当本发明的化合物促进PTC通读时，可获得功能性未截短蛋白。NMD抑制可为完全抑制或仅部分抑制。在部分抑制的情况下，本发明的化合物可不完全抑制NMD。当本发明的化合物部分或全部抑制NMD时，含PTC的mRNA量增加，这样可有利于由所述化合物产生的通读促进作用。
已知少量的功能性蛋白质可足以在细胞、组织和/或整个机体中进行正常活动。有时，在患者中低浓度的功能性蛋白就足够获得野生型表型。根据本发明，术语“患者”涉及任何类型的活体、尤其是动物（例如哺乳动物，尤其是人）。
本发明的化合物能够治疗和/或预防无义突变介导的疾病。本发明的化合物能够消除或减弱一种或多种疾病症状。
本发明的化合物可向如上所定义的任何患者给药，所述患者受如上所定义的疾病影响。根据本发明，可使用式（I）化合物的盐，且并不作限定。例如，本发明中还涵盖通过将式（I）化合物与碱性化合物进行反应所得到的盐。钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐和氯化物均可通过此类反应获得。式（I）化合物与至少一种有机酸或无机酸之间的反应可提供其它盐。
根据本发明，术语多晶型物涉及无定形形式或结晶形式的本发明化合物的任何混合物。
根据本发明，不限定由无义突变引起的疾病。已描述了许多无义突变介导的疾病。机体的许多器官或功能（例如，肝脏或肠胃功能、肾脏、心血管、肺、肌肉、骨髓、中枢神经系统功能、代谢、器官发生、炎症和免疫）可受无义突变介导的疾病所影响。
例如，所述无义突变介导的疾病可选自：无义突变介导的β-地中海贫血（beta-thalassemia）、无义突变介导的Ehlers-Danlos综合征、无义突变介导的婴儿严重肌阵挛癫痫（Severe myoclonic epilepsy）、无义突变介导的色盲（achromatopsia）、无义突变介导的色素性视网膜炎（retinitispigmentosa）、无义突变介导的Usher综合征1C型、无义突变介导的拇指内收-马蹄内翻足综合征（Adducted thumb-clubfoot syndrome）、无义突变介导的Alagille综合征、无义突变介导的
Figure BDA00003001738200061
综合征、无义突变介导的抗凝血酶缺乏症（antithrombin deficiency）、无义突变介导的Carney综合征（Carney complex）、无义突变介导的Currarino综合征、无义突变介导的Diamond-Blackfan贫血、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病（erythropoietic protoporphyria）、无义突变介导的法布里病（fabrydisease）、无义突变介导的凝血因子XIII缺乏症（factor XIII deficiency）、无义突变介导的Fanconi-Bickel综合征、无义突变介导的鱼腥味综合征（fish odor syndrome）、无义突变介导的Gaucher病、无义突变介导的遗传性出血性毛细血管扩张症（Hereditary hemorrhagic telangiectasia）、无义突变介导的高胱氨酸尿症（homocystinuria）、无义突变介导的Joubert综合征及相关紊乱、无义突变介导的Krabbe病、无义突变介导的L-2-羟基戊二酸尿症（L-2-hydroxyglutaric aciduria）、无义突变介导的甲基丙二酸血症（MethylMalonic academia）、无义突变介导的Niemann-Pick病、无义突变介导的Peters plus综合征、无义突变介导的Townes-Brocks综合征、无义突变介导的von Willebrand病、无义突变介导的Wiskott-Aldrich综合征、无义突变介导的Kabuki综合征、无义突变介导的Chanarin-Dorfman综合征、无义突变介导的卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症（Lecithin:cholesterol acyltransferase deficiency）/鱼眼病（fish-eyedisease）、无义突变介导的Marfan综合征、无义突变介导的粘多糖贮积症（Mucopolysaccharidiosis）、无义突变介导的淀粉样变性（Amyloidiosis）、无义突变介导的晚期婴儿神经元蜡样质脂褐质沉积症（Late InfantileNeuronal Ceroid Lipofuscinosis）、无义突变介导的辅酶Q10缺乏症、无义突变介导的过氧化物酶体的生物合成紊乱（Peroxisome biogenesisdisorders）、无义突变介导的溶酶体贮积症（lysosomal storage disorders）、无义突变介导的结直肠癌（colorectal cancer）、无义突变介导的先天性肠肽酶缺乏症（congenital enteropeptidase deficiency）、无义突变介导的囊性纤维化、无义突变介导的Hungarian Peutz-Jeghers综合征、无义突变介导的Jervell和Lange-Nielsen综合征、无义突变介导的Lynch综合征、无义突变介导的微绒毛包涵体病（microvillus inclusion disease）、无义突变介导的Peutz-Jeghers综合征、无义突变介导的黄嘌呤尿症（xanthinuria）、无义突变介导的酸中毒（Acidosis）、无义突变介导的Alport综合征、无义突变介导的Bardet-Biedl综合征、无义突变介导的Birt-Hogg-Dubé综合征、无义突变介导的Dent氏病、无义突变介导的Gitelman综合征、无义突变介导的遗传性平滑肌瘤（Hereditary leiomyomatosis）和肾细胞癌（renal cell cancer）、无义突变介导的遗传性球形红细胞增多症（hereditaryspherocytosis）、无义突变介导的Leber先天性黑蒙（leber congenitalamaurosis）、无义突变介导的赖氨酸尿蛋白不耐受（Lysinuric proteinintolerance）、无义突变介导的肾消耗病（Nephronophthisis）、无义突变介导的多囊肾病（polycystic kidney disease）、无义突变介导的假醛固酮减少症（pseudohypoaldosteronism）、无义突变介导的肾发育不全（renalhypodysplasia）、无义突变介导的散发性肾透明细胞癌（Sporadic clear cellrenal cell carcinoma）、无义突变介导的2型乳头状肾细胞癌（type 2papillary renal cell cancers）、无义突变介导的Urofacial综合征、无义突变介导的von Hippel-Lindau病、无义突变介导的Wilms氏瘤、无义突变介导的X-连锁Alport综合征（X-linked Alport syndrome）、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症性佝偻病（X-linked hypophosphatemic rickets）、无义突变介导的高尿酸血症肾病（Hyperuricaemic nephropathy）（少年/髓质囊性肾病（juvenile/medullary cystic kidney disease））、无义突变介导的结节性硬化症（Tuberous sclerosis）、无义突变介导的肾病综合征（Nephroticsyndrome）/先天性肾病综合征、芬兰型无义突变介导的肾病综合征、类固醇抵抗型无义突变介导的肾病综合征3、早发性无义突变介导的肾病综合征/Pierson综合征、无义突变介导的Denys–Drash综合征、无义突变介导的肾病综合征/Schimke免疫-骨发育不良（Schimke immuno-osseousdysplasia）、无义突变介导的原发性糖皮质激素抵抗（Primaryglucocorticoid resistance）、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症（X-linked hypophosphatemia）、无义突变介导的原发性高草酸尿症1型（Primary hyperoxaluria type 1）、无义突变介导的假醛固酮减少症1型（pseudohypoaldosteronism type 1）、无义突变介导的近端肾小管性酸中毒（proximal renal tubular acidosis）、无义突变介导的无β脂蛋白血症（Abetalipoproteinemia）和纯合子家族性低β脂蛋白血症（HomozygousFamilial Hypobetalipoproteinemia）、无义突变介导的Alpers综合征、无义突变介导的氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症（carbamyl phosphate synthetase Ideficiency）、无义突变介导的胆固醇酯沉积病（Cholesteryl Ester StorageDisease）、无义突变介导的希特林蛋白缺乏症（citrin deficiency）、无义突变介导的Dubin-Johnson综合征、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病（erythropoietic protoporphyria）、无义突变介导的凝血因子V缺乏症（Factor V deficiency）、无义突变介导的糖原贮积病（Glycogen storagedisease）、无义突变介导的血友病A（凝血因子VIII缺乏症）、无义突变介导的血友病B（凝血因子IX缺乏症）、无义突变介导的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma）、无义突变介导的肝红细胞生成性卟啉症（Hepatoerythropoietic porphyria）、无义突变介导的遗传性痉挛性截瘫（hereditary spastic paraplegias）、无义突变介导的低β脂蛋白血症（Hypobetalipoproteinemia）、无义突变介导的遗传性凝血因子XI缺乏症、无义突变介导的青少年成年发病型糖尿病（Maturity-onset diabetes of theyoung）、无义突变介导的小红细胞性贫血和铁缺乏症（microcytic anemiaand iron deficiency）、无义突变介导的线粒体DNA缺失（mitochondrialDNA depletion）、无义突变介导的线粒体DNA缺失综合征、无义突变介导的苯丙酮尿症（phenylketonuria）、无义突变介导的多囊肝病（polycysticliver disease）、无义突变介导的迟发性皮肤卟啉症（porphyria cutaneatarda）、无义突变介导的进行性家族性肝内胆汁淤积症（progressivefamilial intrahepatic cholestasis）、无义突变介导的Wilson病、无义突变介导的常染色体显性高胆固醇血症（autosomal dominanthypercholesterolemia）、无义突变介导的凝血因子XII缺乏症、无义突变介导的凝血因子X缺乏症、无义突变介导的低纤维蛋白原血症（hypofibrinogenaemia）、无义突变介导的无纤维蛋白原血症（Afibrinogenaemia）、无义突变介导的凝血因子VII缺乏症、无义突变介导的无丙种球蛋白血症（agammaglobulinemia）、无义突变介导的无巨核细胞性血小板减少症（amegakaryocytic thrombocytopenia）、无义突变介导的红细胞生成障碍贫血II型（dyserythropoietic anemia type II）、无义突变介导的Duchenne和Becker型肌营养不良症、无义突变介导的中央核肌病（Centronuclear myopathies）、无义突变介导的肢带型肌营养不良症（limb girdle muscular dystrophy）或Miyoshi肌病、无义突变介导的Ullrich病、无义突变介导的脊髓性肌萎缩症（Spinal muscular atrophy）、无义突变介导的营养不良型大疱性表皮松解症（dystrophic epidermolysisbullosa）、无义突变介导的Hailey-Hailey病、无义突变介导的Herlitz交界性大疱性表皮松解症（Herlitz junctional epidermolysis bullosa）和无义突变介导的Netherton综合征。
在一个实施方式中，所述无义突变介导的疾病选自：β-地中海贫血、Marfan综合征、Duchenne型肌营养不良症、Becker型肌营养不良症、Ullrich病、Hurler综合征、癌症、囊性纤维化、脊髓性肌萎缩症、淀粉样变性、LINCL（晚期婴儿神经元蜡样质脂褐质沉积症）、血友病、阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease）、动脉粥样硬化（Atherosclerosis）、巨人症（Gigantism）、侏儒症（Dwarfism）、甲状腺功能减退症（Hypothyroidism）、甲状腺功能亢进症（Hyperthyroidism）、肥胖、帕金森氏病（Parkinson’s disease）、Niemann Pick病、家族性高胆固醇血症（Family hypercholesterolemia）和色素性视网膜炎。
一些研究表明，式（I）化合物优选分布于肝脏、肾脏和肠。口服给药后，肺、心脏、肌肉和皮肤稍少暴露于式（I）化合物。考虑到上文所述的疾病的生理病理学和各疾病所影响的器官，并根据本发明，所述无义突变介导的疾病可优选选自：
影响肝脏的疾病：
无义突变介导的无β脂蛋白血症和纯合子家族性低β脂蛋白血症、无义突变介导的Alpers综合征、无义突变介导的氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、无义突变介导的胆固醇酯沉积病、无义突变介导的希特林蛋白缺乏症、无义突变介导的Dubin-Johnson综合征、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病、无义突变介导的凝血因子V缺乏症、无义突变介导的糖原贮积病、无义突变介导的血友病A（凝血因子VIII缺乏症）、无义突变介导的血友病B（凝血因子IX缺乏症）、无义突变介导的肝细胞癌、无义突变介导的肝红细胞生成性卟啉症、无义突变介导的遗传性痉挛性截瘫、无义突变介导的低β脂蛋白血症、无义突变介导的遗传性凝血因子XI缺乏症、无义突变介导的青少年成年发病型糖尿病、无义突变介导的小红细胞性贫血和铁缺乏症、无义突变介导的线粒体DNA缺失、无义突变介导的线粒体DNA缺失综合征、无义突变介导的苯丙酮尿症、无义突变介导的多囊肝病、无义突变介导的迟发性皮肤卟啉症、无义突变介导的进行性家族性肝内胆汁淤积症、无义突变介导的Wilson病、无义突变介导的常染色体显性高胆固醇血症、无义突变介导的凝血因子XII缺乏症、无义突变介导的凝血因子X缺乏症、无义突变介导的低纤维蛋白原血症、无义突变介导的无纤维蛋白原血症、无义突变介导的凝血因子VII缺乏症。
影响肾脏的疾病：
无义突变介导的酸中毒、无义突变介导的Alport综合征、无义突变介导的Bardet-Biedl综合征、无义突变介导的Birt-Hogg-Dubé综合征、无义突变介导的Dent氏病、无义突变介导的Gitelman综合征、无义突变介导的遗传性平滑肌瘤和肾细胞癌、无义突变介导的遗传性球形红细胞增多症、无义突变介导的Leber先天性黑蒙、无义突变介导的赖氨酸尿蛋白不耐受、无义突变介导的肾消耗病、无义突变介导的多囊肾病、无义突变介导的假醛固酮减少症、无义突变介导的肾发育不全、无义突变介导的散发性肾透明细胞癌、无义突变介导的2型乳头状肾细胞癌、无义突变介导的Urofacial综合征、无义突变介导的von Hippel-Lindau病、无义突变介导的Wilms氏瘤、无义突变介导的X-连锁Alport综合征、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症性佝偻病、无义突变介导的高尿酸血症肾病（少年/髓质囊性肾病）、无义突变介导的结节性硬化症、无义突变介导的肾病综合征/先天性肾病综合征、芬兰型无义突变介导的肾病综合征、类固醇抵抗型无义突变介导的肾病综合征3、早发性无义突变介导的肾病综合征/Pierson综合征、无义突变介导的Denys–Drash综合征、无义突变介导的肾病综合征/Schimke免疫-骨发育不良、无义突变介导的原发性糖皮质激素抵抗、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症、无义突变介导的原发性高草酸尿症1型、无义突变介导的假醛固酮减少症1型、无义突变介导的近端肾小管性酸中毒。
影响肠的疾病：
无义突变介导的结直肠癌、无义突变介导的先天性肠肽酶缺乏症、无义突变介导的囊性纤维化、无义突变介导的Hungarian Peutz-Jeghers综合征、无义突变介导的Jervell和Lange-Nielsen综合征、无义突变介导的Lynch综合征、无义突变介导的微绒毛包涵体病、无义突变介导的Peutz-Jeghers综合征、无义突变介导的黄嘌呤尿症。
影响若干器官的疾病：
无义突变介导的β-地中海贫血、无义突变介导的Ehlers-Danlos综合征、无义突变介导的拇指内收-马蹄内翻足综合征、无义突变介导的Alagille综合征、无义突变介导的
Figure BDA00003001738200111
综合征、无义突变介导的抗凝血酶缺乏症、无义突变介导的Carney综合征、无义突变介导的Currarino综合征、无义突变介导的Diamond-Blackfan贫血、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病、无义突变介导的法布里病、无义突变介导的凝血因子XIII缺乏症、无义突变介导的Fanconi-Bickel综合征、无义突变介导的鱼腥味综合征、无义突变介导的Gaucher病、无义突变介导的遗传性出血性毛细血管扩张症、无义突变介导的高胱氨酸尿症、无义突变介导的Joubert综合征及相关紊乱、无义突变介导的Krabbe病、无义突变介导的L-2-羟基戊二酸尿症、无义突变介导的甲基丙二酸血症、无义突变介导的Niemann-Pick病、无义突变介导的Peters plus综合征、无义突变介导的Townes-Brocks综合征、无义突变介导的von Willebrand病、无义突变介导的Wiskott-Aldrich综合征、无义突变介导的Kabuki综合征、无义突变介导的Chanarin-Dorfman综合征、无义突变介导的卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症/鱼眼病、无义突变介导的Marfan综合征、无义突变介导的粘多糖贮积症、无义突变介导的淀粉样变性、无义突变介导的晚期婴儿神经元蜡样质脂褐质沉积症、无义突变介导的辅酶Q10缺乏症、无义突变介导的过氧化物酶体生物合成紊乱、无义突变介导的溶酶体贮积症。
考虑到根据式（I）所述的化合物可局部给药，并根据本发明，所述无义突变介导的疾病还可选自如下影响皮肤或眼睛的疾病：
无义突变介导的色盲、无义突变介导的色素性视网膜炎、无义突变介导的Usher综合征1C型、无义突变介导的营养不良型大疱性表皮松解症、无义突变介导的Hailey-Hailey病、无义突变介导的Herlitz交界性大疱性表皮松解症、无义突变介导的Netherton综合征。
通常，将单独的本发明化合物（以如上所述的任何形式）或与另外的活性试剂联合的本发明化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合来向患者进行给药。根据给药方式和赋形剂对化合物溶解度和稳定性的影响，来对赋形剂进行适当地选择。草本（galenic）形式也可能相关。
因此，本发明的第二方面涉及用于对遗传性疾病进行治疗和/或预防的药物组合物，所述遗传性疾病为无义突变介导的疾病。本发明的药物组合物含有至少式（I）化合物（作为活性成分）以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。本发明的组合物含有本发明的化合物，并因此具有与所述化合物本身相同的毒理学特性。此外，还指出已对本发明化合物口服给药的毒性进行了评价；可注射剂型的毒性应该不会不同，因为评估的是分子本身（任选发生代谢）在血液中的毒性。因此，本发明的组合物可作为药物被迅速地使用和商业化。
根据一个实施方式，可将本发明的组合物进行注射。在这种情况下，赋形剂为液体。活性分子溶于或悬浮于赋形剂中。然而，本发明的组合物不限于这一类型的组合物。
本发明还涉及如本文上述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含通读药剂。所述通读药剂能促进PTC通读。PTC藏于由藏有所述无义突变的基因转录而来的mRNA中。本发明人已观察到本发明的化合物与至少一种特定PTC通读分子之间的协同作用。
有利地，所述通读药剂为3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸（WO 2004/091502中公布的PTC124）。这种通读药剂不是很有效，并且必须以强剂量向患者给药（16-40mg/kg/天）。在某些情况下，这种通读药剂和本发明的化合物之间的协同作用可增强所述通读药剂的活性。因此，需要较低剂量的所述通读药剂。
因此，本发明的另一方面涉及如下的复合物：（i）式（I）化合物或其盐、溶剂化物、包合物、水合物或多晶型物；以及（ii）3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸。活性药物试剂（i）和（ii）可同时给药、顺序给药或者在一个时间段内给药。
Figure BDA00003001738200131
然而，根据本发明，还可将任何其它通读药剂与本发明的化合物或组合物“PTC124/式（I）化合物”进行混合或复合。因此，这种通读药剂包含于本发明的组合物中。还可对上述通读药剂进行独立调整，以便与本发明的分子同时给药或按延迟给予进行给药。
本领域技术人员能确定疾病是否由无义突变所引起。对于给定蛋白，可以研究所述蛋白浓度是否与疾病有关。按照下文所述的步骤，本领域技术人员能确定由蛋白浓度过低所引起的给定疾病是否为无义突变介导的疾病：
-鉴定对所述给定蛋白进行编码的基因，以及鉴定由所述基因转录而来的mRNA；以及
-将正常基因或正常mRNA与来自患有所述疾病的患者的基因和mRNA进行比较。
本发明还涉及对给定基因中是否藏有无义突变进行测定的方法。将这一给定基因转录成mRNA。转录后的mRNA藏有PTC，并编码给定的已知蛋白。根据本发明的方法，
-将患者的细胞用本发明的化合物或组合物进行孵育，以获得RNA合成；
-从细胞中提取合成的RNA和/或蛋白，并纯化；
-然后将纯化的RNA逆转录并扩增，从而进行RNA定量。
在一个实施方式中，患者的细胞为来自被认为受无义突变影响的器官的细胞，或者为由患者产生的诱导多能干细胞分化而来的细胞。在另一实施方式中，纯化后的RNA和/或蛋白量的增加表明NMD抑制和/或通读，因此存在无义突变。
因此，本发明的方法能够测定遗传性疾病是否至少部分由无义突变引起。因此，这能够对治疗进行调节。
在另一方面，本发明涉及对式（I）化合物或含有式（I）化合物的药物组合物在治疗被诊断为无义突变介导的遗传性疾病的患者中是否有效进行评估的方法，所述方法包括如下步骤：
-用所述化合物或所述组合物对患者进行治疗；
-对患者中的至少一种疾病指标进行观察，或从所述患者细胞中提取合成的RNA和/或蛋白，其中，疾病指标改善或者纯化后的RNA和/或蛋白量的增长表明NMD抑制和/或通读，因此治疗有效。
疾病指标可为由于PTC而未正常合成的蛋白（截短或未截短）。疾病指标也可为涉及疾病机理的任何其它物质、以及特别是通常用于疾病诊断的任何物质。例如，就血友病A来说，指标可为凝血因子VIII；就血友病B来说，指标可为凝血因子IX；就Duchene型肌营养不良症来说，指标可为肌营养不良蛋白自身；就囊性纤维化来说，指标可为汗中所排出的氯的浓度。
本发明还涉及式（I）化合物在药物制造方面的用途，所述药物用于对无义突变介导的遗传性疾病进行治疗和/或预防。
本发明还涉及对无义突变介导的遗传性疾病进行治疗的治疗方法，所述治疗方法包括给予式（I）化合物或本发明的药物组合物的步骤。
附图说明
将基于如下实施例和附图，对本发明的特征和优点进行解释，其中：
图1使用萤火虫荧光素酶示出了本发明的组合物在HeLa细胞中的NMD抑制活性；
图2示出了在Calu-6细胞（来自患有遗传性无义介导的肺癌患者的细胞）中P53mRNA稳定作用随活性分子浓度的变化情况，所述稳定作用通过本发明组合物的NMD抑制获得；
图3为示出了比值P53mRNA/GADPH mRNA随本发明组合物的活性分子浓度变化的曲线图。
图4示出了在有本发明的组合物存在的情况下，在Calu-6细胞中所合成的全长P53蛋白；
图5示出了小鼠脑细胞中的mRNA MOR浓度随小鼠模型中活性化合物浓度的变化情况，其中MOR基因藏有无义突变；
图6示出了本发明的组合物与PTC124（提前终止密码子通读试剂）之间的协同作用；
图7示出了用本发明的组合物孵育的IB3细胞（来自无义突变介导的囊性纤维化患者的细胞）中的CFTR mRNA，所述组合物具有不同的活性分子浓度；
图8示出了在有本发明的组合物存在的情况下所孵育的IB3细胞中，CFTR mRNA浓度随所述组合物的活性分子浓度的变化情况。
图9示出了在用三种不同组合物孵育的Calu-6细胞中的P53mRNA，各组合物含有25μmol/l本发明的活性化合物。
图10示出了本发明的化合物对于6-CFSMEo-细胞（来自无义突变介导的囊性纤维化患者的细胞）中的碘外排作用（iodide efflux）的量效反应（dose-response effect）；以及
图11a和图11b示出了在DMD细胞中，本发明化合物的几个剂量对含有PTC的肌营养不良蛋白基因表达的影响，所述DMD细胞来自患有无义介导的Duchenne型肌营养不良症的患者。
实施例
在下列实施例中，将式（I）化合物称为G07分子。还将相关化合物G08和G09用于测试。
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实施例1：通过使用萤火虫荧光素酶进行的NMD抑制测定
在mRNA3′UTR部分上，下列UPF蛋白（UPF1、UPF2、UPF3（也称为UPF3a）或UPF3X（也称为UPF3b））之一的存在激活这一特定mRNA上的NMD。当UPF蛋白位于正常终止密码子的下游时，所述正常终止密码子被认为是PTC。因此，含有UPF蛋白的mRNA将通过NMD被降解。
使用表达萤火虫荧光素酶mRNA的HeLa细胞系。萤火虫荧光素酶mRNA在3′UTR中含有MS2结合位点。上述细胞进一步含有融合蛋白，所述融合蛋白为四种UPF蛋白之一和所述MS2。这一融合蛋白能使UPF定位于正常终止密码子的下游（即，在这一mRNA的3′UTR部分上）。因此，正常终止密码子被认为是PTC。所以，NMD被激活，并降解萤火虫荧光素酶mRNA。
因此，上述细胞中的荧光素酶活性与NMD活性直接相关。低荧光表明NMD被激活，而高荧光表示NMD抑制。在有G07存在的情况下，荧光素酶活性比对照孔高。这证明了G07的NMD抑制活性。
将HeLa细胞培养在补充有10%FBS且含有10μmol/l G07的DMEM（Gibco）中。
不管位于mRNA上的UPF蛋白类型如何，G07都抑制NMD，因此，G07被认为是通用NMD抑制剂。
实施例2：G07对来自患有无义突变介导的肺癌患者的细胞的有益效果
Calu-6细胞（ATCC）在P53基因的密码子196处藏有UGA PTC。这些Calu-6细胞从肺癌患者中分离。在有放射性标记的核苷酸存在的情况下，将所述Calu-6细胞的RNA通过PCR（PT-PCR）进行逆转录和扩增，以测量P53mRNA和GAPDH mRNA的水平（将GAPDH用作内参对照）。Calu-6细胞在P53基因中藏有无义突变。因此，由于在P53mRNA上的NMD活性，所述P53基因在Calu-6细胞中不表达。将经扩增和逆转录的mRNA上样至丙烯酰胺凝胶上，并使其进行电泳。然后，将丙烯酰胺凝胶在Whatman纸上进行干燥，并放在磷屏（phosphoscreen）（KodaK）上。将Personal Molecular Imager（Bio-Rad）用于对扩增的放射性标记种类进行定量。将Calu-6细胞用处于DMSO中浓度递增的G07孵育约20小时。这是为了证实G07的NMD抑制活性而进行的。孵育后，将RNA通过使用TriReagent（MRC）进行纯化，然后逆转录成可在有放射性标记核苷酸存在的情况下进行PCR扩增的cDNA。相应的结果在图2中示出。
图2显示当G07的浓度增加时，P53mRNA的量增加。P53mRNA经NMD正常降解。因此，P53mRNA量的增加是由其稳定作用引起的。因此，G07似乎在NMD机制上具有量效活性。这一实验证实了G07的NMD抑制活性，并进一步证明G07能够抑制内源性mRNA的NMD。对GAPDH（甘油醛3-磷酸脱氢酶）mRNA进行扩增，以对两个泳道间的P53mRNA测量进行归一化。
图3显示出G07浓度越高，细胞中的P53mRNA量越多。
此外，G07能使Calu-6细胞中的截短P53蛋白以及全长P53蛋白得以合成。因此，G07不同于WO 2008/101935中所公开的分子。对于上述文件中所公开的分子，仅检出截短蛋白。这一结果显示在图4中。将用G07孵育过或未用G07孵育过的Calu-6细胞蛋白提取物上样至电泳凝胶上，然后转移至硝酸纤维膜上，从而在用抗P53抗体（抗P53抗体为抗P53氨基末端部分的抗体（Santa Cruz））孵育后对P53蛋白进行检测。所获得的结果显示在图4中。根据图4，当将Calu-6细胞用G07孵育20小时，全长的P53蛋白和截短的P53蛋白均被细胞合成出。
为了检查全长P53蛋白是否为功能性的，图4还示出了对P21蛋白的存在进行的分析。当P53蛋白被合成时，P53激活P21表达。免疫印迹分析显示，当使用浓度递增的G07（25μM和125μM）时存在P21。因此，如WT P53蛋白一样，由于G07而合成的P53蛋白诱导了P21表达。所以，本申请人因此证实了G07使功能性的全长P53蛋白得以合成。
因此，G07能使全长蛋白得以合成。G07可使PTC通读。在其中的关键阶段，G07还可抑制NMD，从而使全长蛋白得以合成。所合成的全长蛋白可为野生型蛋白。
实施例3：体内NMD抑制
在KIM小鼠中，MOR基因藏有激活NMD的无义突变。MOR基因在神经中枢系统中表达。将含有0.2mg/kg、2mg/kg或20mg/kg溶于DMSO中的G07的溶液（分别为1Q、2Q或3Q）注射入KIM小鼠中。对照组由用纯DMSO处理的动物组成。然后在注射后6、24或32小时，将动物处以安乐死。将从脑匀浆中提取的RNA使用TriReagent（MRC）进行纯化，然后参考图2所述进行分析。与参考图2所述的实验之间的差异在于，在当前的情况下，所分析的mRNA为MOR基因的mRNA以及GAPDH基因的mRNA（作为对照用来对测量的MOR mRNA进行定量）。从左边开始的前3个孔对应于来自野生型小鼠脑的样品的半倍稀释（halfdilution）。这3个孔用于检测PCR条件，这在定量上有用。
图5示出了对MOR mRNA水平和GADPH mRNA水平的测量（后者用作对照）。除实际上RNA来自KIM小鼠的脑之外，使用与参考图2所述的技术相同的技术。这些KIM小鼠中的一些用G07进行注射。
对于1Q和2Q浓度，在24小时后观察到MOR mRNA的稳定作用。这表明NMD抑制。因此，这一实验证实了G07的体内NMD抑制活性。
实施例4：G07与通读药剂联合的用途
PTC124（ataluren或3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸）为激活通读的分子。该分子不具有NMD抑制活性。将Calu-6细胞在如下物质中进行孵育：在DMSO中，作为对照（-）；在含有浓度递增的PTC124的DMSO溶液中；以及在含有浓度递增的PTC124和另外的25μM G07的DMSO溶液中。在孵育开始后的24小时，对这些细胞的蛋白提取物进行制备，并通过免疫印迹进行分析。根据如图6所示的免疫印迹（即，在极短的暴露时间后），仅在用含有G07和PTC124的培养基孵育过的细胞中观察到了全长P53蛋白。因此，当将两种分子一起使用时具有协同作用。图6显示在含有PTC124和G07的混合物的培养基中孵育Calu-6细胞改善了全长P53蛋白的合成。这一改善比单独使用各分子所获的改善更加有效。因此，G07和PTC124之间存在协同作用。
实施例5：在IB3（囊性纤维化模型）中的NMD抑制
IB3细胞在CFTR基因的色氨酸密码子处的1282位点中藏有PTC。
在20小时期间，将IB3细胞（ATCC）在分别含有纯DMSO（作为对照）或浓度递增的G07的DMSO溶液中进行孵育。
将孵育后获得的RNA进行纯化，并进行RT-PCR以测量CFTR mRNA（含有PTC）的量和GADPH mRNA（用作对照）的量。基于所示的CFTRmRNA的量/GADPH mRNA的量这一比值，我们可以得出结论：存在CTFR mRNA稳定作用的增强。这一结果在图7中示出。这一结果证实了G07的NMD抑制活性，与已在Calu-6细胞中观察到的一样。这一实验显示出G07在几种不同类型细胞中抑制NMD的活性。
如图8所示，培养基中G07的浓度越高，通过NMD正常降解的mRNA越稳定。
这表明，NMD抑制取决于培养基中G07的浓度。
实施例6：分别含有G07、G08和G09的组合物的NMD抑制活性
将Calu-6细胞用分别含有25μM G07、G08和G09的组合物进行孵育。用各组合物进行实验，所述实验与之前参考在Calu-6细胞中对NMD抑制进行验证所描述的实验相同。结果在图9中示出。各25μM组合物在Calu-6细胞中抑制NMD并使P53mRNA稳定。
实施例7：G07对6-CFSMEo-细胞（来自患有囊性纤维化的患者的细胞）中碘外排作用的量效反应
6-CFSMEo-细胞在CFTR基因的谷氨酰胺2密码子处藏有PTC。
将6-CFSMEo-细胞接种于96孔板中，并用卤化物敏感的荧光染料6-甲氧基-N-(3-磺丙基)-喹啉鎓（quinolinium）（SPQ，Invitrogen）整夜加载。将细胞用碘缓冲液（135mM NaI、2.4mM K2HPO4、0.6mM KH2PO4、1mM MgSO4、1mM CaSO4、10mM右旋葡萄糖（dextrose）和10mMHepes，pH7.3）洗涤两次，然后在碘缓冲液中孵育30分钟。检测基底荧光2分钟，然后，将碘缓冲液用含有20μM毛喉素（forskolin）和200μMIBMX的硝酸盐缓冲液（用135mM NaNO3代替NaI）置换，并进一步测量荧光10分钟。使用装备有340nm激发滤光片和450nm发射滤光片的Tristar LB941酶标仪（Berthold）每15秒对荧光强度进行测量。如上所述，图10中的箭头显示含有20μM毛喉素和200μM IBMX的硝酸盐缓冲液的添加。使用的G07浓度分别为0.2μM、1μM、5μM和25μM。碘外排作用的增加以至少4个独立实验的平均值±SEM显示。Ft是指在读数时间时的荧光；F0是指在加入上述含有20μM毛喉素和200μM IBMX的硝酸盐缓冲液前的平均荧光。
根据图10中所示的结果，很显然，G07对于6-CFSMEo-细胞具有量效反应，并使得含PTC的CFTR基因合成功能性的CFTR蛋白。
实施例8：G07对来自患有无义突变介导的Duchenne型肌营养不良症患者细胞（即DMD细胞）中的含PTC的肌营养不良蛋白基因表达的影响
关于图11a的结果，将DMD细胞用递增量的G07分子孵育或作为对照用DMSO孵育。使用RNazol试剂（MRC）将RNA纯化，并使用Superscript II（Life technologies）和随机引物（random hexamer）进行逆转录。使用放射性标记的CTP进行PCR，以扩增肌营养不良蛋白cDNA或GAPDH cDNA。将扩增产物上样至5%的聚丙烯酰胺凝胶上。然后将所述凝胶干燥并在磷屏上曝光，从而通过Personal Molecular Imager（Biorad）对各扩增物质进行定量。
关于图11b的结果，将DMD细胞用量递增的G07分子孵育或作为对照用DMSO孵育。将来自这些细胞的蛋白提取物上样至10%SDS-PAGE上，并转至硝化纤维素膜上。然后将硝化纤维素膜暴露于一抗（针对肌营养不良蛋白的氨基部分的抗肌营养不良蛋白抗体（Santa-Cruz），或抗微管蛋白抗体）以详细标明各泳道的上样蛋白量。
图11a和图11b显示，G07能挽救来自患有无义突变介导的Duchenne型肌营养不良症患者的细胞中，含PTC的肌营养不良蛋白基因的表达。
如图11a所示，G07的量增加使得肌营养不良蛋白mRNA保持稳定。这一结果通过RT-PCR获得。在5μM浓度处获得最大效力。
如图11b所示，G07的量增加使得肌营养不良蛋白合成（结果通过使用针对肌营养不良蛋白氨基末端部分的抗体的免疫印迹而获得）。G07效力的最大值为5μM，这与图11a中所示的结果一致。

Claims (21)

1.一种用于遗传性疾病治疗或预防的式（I）化合物或其盐、溶剂化物、包合物、水合物或多晶型物，所述遗传性疾病为无义突变介导的疾病
Figure FDA00003001738100011
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述遗传性疾病选自如下遗传性疾病：无义突变介导的β-地中海贫血、无义突变介导的Ehlers-Danlos综合征、无义突变介导的婴儿严重肌阵挛癫痫、无义突变介导的色盲、无义突变介导的色素性视网膜炎、无义突变介导的Usher综合征1C型、无义突变介导的拇指内收-马蹄内翻足综合征、无义突变介导的Alagille综合征、无义突变介导的
Figure FDA00003001738100012
综合征、无义突变介导的抗凝血酶缺乏症、无义突变介导的Carney综合征、无义突变介导的Currarino综合征、无义突变介导的Diamond-Blackfan贫血、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病、无义突变介导的法布里病、无义突变介导的凝血因子XIII缺乏症、无义突变介导的Fanconi-Bickel综合征、无义突变介导的鱼腥味综合征、无义突变介导的Gaucher病、无义突变介导的遗传性出血性毛细血管扩张症、无义突变介导的高胱氨酸尿症、无义突变介导的Joubert综合征及相关紊乱、无义突变介导的Krabbe病、无义突变介导的L-2-羟基戊二酸尿症、无义突变介导的甲基丙二酸血症、无义突变介导的Niemann-Pick病、无义突变介导的Peters plus综合征、无义突变介导的Townes-Brocks综合征、无义突变介导的von Willebrand病、无义突变介导的Wiskott-Aldrich综合征、无义突变介导的Kabuki综合征、无义突变介导的Chanarin-Dorfman综合征、无义突变介导的卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症/鱼眼病、无义突变介导的Marfan综合征、无义突变介导的粘多糖贮积症、无义突变介导的淀粉样变性、无义突变介导的晚期婴儿神经元蜡样质脂褐质沉积症、无义突变介导的辅酶Q10缺乏症、无义突变介导的过氧化物酶体的生物合成紊乱、无义突变介导的溶酶体贮积症、无义突变介导的结直肠癌、无义突变介导的先天性肠肽酶缺乏症、无义突变介导的囊性纤维化、无义突变介导的HungarianPeutz-Jeghers综合征、无义突变介导的Jervell和Lange-Nielsen综合征、无义突变介导的Lynch综合征、无义突变介导的微绒毛包涵体病、无义突变介导的Peutz-Jeghers综合征、无义突变介导的黄嘌呤尿症、无义突变介导的酸中毒、无义突变介导的Alport综合征、无义突变介导的Bardet-Biedl综合征、无义突变介导的Birt-Hogg-Dubé综合征、无义突变介导的Dent氏病、无义突变介导的Gitelman综合征、无义突变介导的遗传性平滑肌瘤和肾细胞癌、无义突变介导的遗传性球形红细胞增多症、无义突变介导的Leber先天性黑蒙、无义突变介导的赖氨酸尿蛋白不耐受、无义突变介导的肾消耗病、无义突变介导的多囊肾病、无义突变介导的假醛固酮减少症、无义突变介导的肾发育不全、无义突变介导的散发性肾透明细胞癌、无义突变介导的2型乳头状肾细胞癌、无义突变介导的Urofacial综合征、无义突变介导的von Hippel-Lindau病、无义突变介导的Wilms氏瘤、无义突变介导的X-连锁Alport综合征、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症性佝偻病、无义突变介导的高尿酸血症肾病（少年/髓质囊性肾病）、无义突变介导的结节性硬化症、无义突变介导的肾病综合征/先天性肾病综合征、无义突变介导的芬兰型肾病综合征、无义突变介导的类固醇抵抗型肾病综合征3、无义突变介导的早发性肾病综合征/Pierson综合征、无义突变介导的Denys-Drash综合征、无义突变介导的肾病综合征/Schimke免疫-骨发育不良、无义突变介导的原发性糖皮质激素抵抗、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症、无义突变介导的原发性高草酸尿症1型、无义突变介导的假醛固酮减少症1型、无义突变介导的近端肾小管性酸中毒、无义突变介导的无β脂蛋白血症和纯合子家族性低β脂蛋白血症、无义突变介导的Alpers综合征、无义突变介导的氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、无义突变介导的胆固醇酯沉积病、无义突变介导的希特林蛋白缺乏症、无义突变介导的Dubin-Johnson综合征、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病、无义突变介导的凝血因子V缺乏症、无义突变介导的糖原贮积病、无义突变介导的血友病A（凝血因子VIII缺乏症）、无义突变介导的血友病B（凝血因子IX缺乏症）、无义突变介导的肝细胞癌、无义突变介导的肝红细胞生成性卟啉症、无义突变介导的遗传性痉挛性截瘫、无义突变介导的低β脂蛋白血症、无义突变介导的遗传性凝血因子XI缺乏症、无义突变介导的青少年成年发病型糖尿病、无义突变介导的小红细胞性贫血和铁缺乏症、无义突变介导的线粒体DNA缺失、无义突变介导的线粒体DNA缺失综合征、无义突变介导的苯丙酮尿症、无义突变介导的多囊肝病、无义突变介导的迟发性皮肤卟啉症、无义突变介导的进行性家族性肝内胆汁淤积症、无义突变介导的Wilson病、无义突变介导的常染色体显性高胆固醇血症、无义突变介导的凝血因子XII缺乏症、无义突变介导的凝血因子X缺乏症、无义突变介导的低纤维蛋白原血症、无义突变介导的无纤维蛋白原血症、无义突变介导的凝血因子VII缺乏症、无义突变介导的无丙种球蛋白血症、无义突变介导的无巨核细胞性血小板减少症、无义突变介导的红细胞生成障碍贫血II型、无义突变介导的Duchenne和Becker型肌营养不良症、无义突变介导的中央核肌病、无义突变介导的肢带型肌营养不良症或Miyoshi肌病、无义突变介导的Ullrich病、无义突变介导的脊髓性肌萎缩症、无义突变介导的营养不良型大疱性表皮松解症、无义突变介导的Hailey-Hailey病、无义突变介导的Herlitz交界性大疱性表皮松解症以及无义突变介导的Netherton综合征。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述遗传性疾病选自如下遗传性疾病：无义突变介导的无β脂蛋白血症和纯合子家族性低β脂蛋白血症、无义突变介导的Alpers综合征、无义突变介导的氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、无义突变介导的胆固醇酯沉积病、无义突变介导的希特林蛋白缺乏症、无义突变介导的Dubin-Johnson综合征、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病、无义突变介导的凝血因子V缺乏症、无义突变介导的糖原贮积病、无义突变介导的血友病A（凝血因子VIII缺乏症）、无义突变介导的血友病B（凝血因子IX缺乏症）、无义突变介导的肝细胞癌、无义突变介导的肝红细胞生成性卟啉症、无义突变介导的遗传性痉挛性截瘫、无义突变介导的低β脂蛋白血症、无义突变介导的遗传性凝血因子XI缺乏症、无义突变介导的青少年成年发病型糖尿病、无义突变介导的小红细胞性贫血和铁缺乏症、无义突变介导的线粒体DNA缺失、无义突变介导的线粒体DNA缺失综合征、无义突变介导的苯丙酮尿症、无义突变介导的多囊肝病、无义突变介导的迟发性皮肤卟啉症、无义突变介导的进行性家族性肝内胆汁淤积症、无义突变介导的Wilson病、无义突变介导的常染色体显性高胆固醇血症、无义突变介导的凝血因子XII缺乏症、无义突变介导的凝血因子X缺乏症、无义突变介导的低纤维蛋白原血症、无义突变介导的无纤维蛋白原血症以及无义突变介导的凝血因子VII缺乏症。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述遗传性疾病选自如下遗传性疾病：无义突变介导的酸中毒、无义突变介导的Alport综合征、无义突变介导的Bardet-Biedl综合征、无义突变介导的Birt-Hogg-Dubé综合征、无义突变介导的Dent氏病、无义突变介导的Gitelman综合征、无义突变介导的遗传性平滑肌瘤和肾细胞癌、无义突变介导的遗传性球形红细胞增多症、无义突变介导的Leber先天性黑蒙、无义突变介导的赖氨酸尿蛋白不耐受、无义突变介导的肾消耗病、无义突变介导的多囊肾病、无义突变介导的假醛固酮减少症、无义突变介导的肾发育不全、无义突变介导的散发性肾透明细胞癌、无义突变介导的2型乳头状肾细胞癌、无义突变介导的Urofacial综合征、无义突变介导的vonHippel-Lindau病、无义突变介导的Wilms氏瘤、无义突变介导的X-连锁Alport综合征、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症性佝偻病、无义突变介导的高尿酸血症肾病（少年/髓质囊性肾病）、无义突变介导的结节性硬化症、无义突变介导的肾病综合征/先天性肾病综合征、无义突变介导的芬兰型无义突变介导的肾病综合征、无义突变介导的类固醇抵抗型肾病综合征3、无义突变介导的早发性肾病综合征/Pierson综合征、无义突变介导的Denys-Drash综合征、无义突变介导的肾病综合征/Schimke免疫-骨发育不良、无义突变介导的原发性糖皮质激素抵抗、无义突变介导的X-连锁低磷酸盐血症、无义突变介导的原发性高草酸尿症1型、无义突变介导的假醛固酮减少症1型以及无义突变介导的近端肾小管性酸中毒。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述遗传性疾病选自如下遗传性疾病：无义突变介导的结直肠癌、无义突变介导的先天性肠肽酶缺乏症、无义突变介导的囊性纤维化、无义突变介导的HungarianPeutz-Jeghers综合征、无义突变介导的Jervell和Lange-Nielsen综合征、无义突变介导的Lynch综合征、无义突变介导的微绒毛包涵体病、无义突变介导的Peutz-Jeghers综合征以及无义突变介导的黄嘌呤尿症。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述遗传性疾病选自如下遗传性疾病：无义突变介导的β-地中海贫血、无义突变介导的Ehlers-Danlos综合征、无义突变介导的拇指内收-马蹄内翻足综合征、无义突变介导的Alagille综合征、无义突变介导的
Figure FDA00003001738100051
综合征、无义突变介导的抗凝血酶缺乏症、无义突变介导的Carney综合征、无义突变介导的Currarino综合征、无义突变介导的Diamond-Blackfan贫血、无义突变介导的红细胞生成性原卟啉病、无义突变介导的法布里病、无义突变介导的凝血因子XIII缺乏症、无义突变介导的Fanconi-Bickel综合征、无义突变介导的鱼腥味综合征、无义突变介导的遗传性出血性毛细血管扩张症、无义突变介导的高胱氨酸尿症、无义突变介导的Joubert综合征及相关紊乱、无义突变介导的Krabbe病、无义突变介导的L-2-羟基戊二酸尿症、无义突变介导的甲基丙二酸血症、无义突变介导的Niemann-Pick病、无义突变介导的Peters plus综合征、无义突变介导的Townes-Brocks综合征、无义突变介导的von Willebrand病、无义突变介导的Wiskott-Aldrich综合征、无义突变介导的Kabuki综合征、无义突变介导的Chanarin-Dorfman综合征、无义突变介导的卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症/鱼眼病、无义突变介导的Marfan综合征、无义突变介导的粘多糖贮积症、无义突变介导的淀粉样变性、无义突变介导的晚期婴儿神经元蜡样质脂褐质沉积症、无义突变介导的辅酶Q10缺乏症、无义突变介导的过氧化物酶体的生物合成紊乱、无义突变介导的溶酶体贮积症以及无义突变介导的色盲。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述遗传性疾病选自如下遗传性疾病：无义突变介导的色素性视网膜炎、无义突变介导的Usher综合征1C型、无义突变介导的营养不良型大疱性表皮松解症、无义突变介导的Hailey-Hailey病、无义突变介导的Herlitz交界性大疱性表皮松解症以及无义突变介导的Netherton综合征。
8.一种用于遗传性疾病治疗或预防的药物组合物，所述遗传性疾病为无义突变介导的疾病，所述药物组合物含有权利要求1所定义的式（I）化合物作为活性分子、以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述组合物通过注射进行给药。
10.根据权利要求8或9所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含能增强mRNA提前终止密码子通读的药剂，所述mRNA提前终止密码子由含有所述无义突变的基因翻译而来。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中，所述药剂为3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸。
12.根据权利要求8-11中任一项所述的药物组合物，其中，所述无义突变介导的遗传性疾病如权利要求2-7中的任一项所定义。
13.一种如下物质的复合物：（i）式（I）化合物或其盐、溶剂化物、包合物、水合物或多晶型物；以及（ii）3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸
Figure FDA00003001738100061
14.一种对无义突变介导的遗传性疾病进行治疗或预防的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予式（I）化合物或其盐、溶剂化物、包合物、水合物或多晶型物
Figure FDA00003001738100071
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述式（I）化合物通过注射进行给药。
16.根据权利要求14或15所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者给予能增强mRNA提前终止密码子通读的药剂，所述mRNA提前终止密码子由含有所述无义突变的基因翻译而来。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述药剂为3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中，将所述式（I）化合物和所述药剂顺序给药。
19.式（I）化合物或其盐、溶剂化物、包合物、水合物或多晶型物在药物制造方面的用途，所述药物用于对无义突变介导的遗传性疾病进行治疗和预防
20.一种对患者基因是否藏有无义突变进行诊断的方法，所述方法包括如下步骤：
-将所述患者的细胞用权利要求1所定义的式（I）化合物或权利要求8所定义的药物组合物进行孵育；
-从所述患者细胞中提取所合成的RNA和/或蛋白，其中，纯化后的RNA和/或蛋白的量增加表明所述患者藏有无义突变。
21.一种对被诊断患有无义突变介导的遗传性疾病的患者的治疗效力进行评估的方法，所述方法包括如下步骤：
-用权利要求1所定义的式（I）化合物或权利要求8所定义的药物组合物对所述患者进行治疗；
-对所述患者中的至少一种疾病指标进行观察，或从所述患者的细胞中提取所合成的RNA和/或蛋白，其中，所述疾病指标减轻或者纯化后的RNA和/或蛋白的量增加表明所述化合物或药物组合物对治疗所述患者有效。
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