ES2710854T3 - Compuesto útil para el tratamiento de enfermedades mediadas por una mutación sin sentido y composición farmacéutica que comprende dicho compuesto - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I)**Fórmula** o una sal, solvato, clatrato, hidrato o polimorfo del mismo para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad genética, siendo dicha enfermedad genética una enfermedad mediada por una mutación sin sentido.

Description

DESCRIPCION

Compuesto util para el tratamiento de enfermedades mediadas por una mutacion sin sentido y composicion farmaceutica que comprende dicho compuesto

La presente invencion se refiere a un compuesto usado para el tratamiento, la prevencion o el diagnostico de una enfermedad genetica causada por una mutacion sin sentido tambien denominada "enfermedad mediada por una mutacion sin sentido". La presente invencion tambien se refiere a una composicion farmaceutica que comprende el compuesto mencionado anteriormente. La presente invencion se refiere ademas a un metodo para la determinacion de la presencia de una mutacion sin sentido en un gen dado.

Una mutacion sin sentido es una mutacion genetica en marco que conduce a la transformacion de un codon sentido en un codon de terminacion prematura en el ARN mensajero (en lo sucesivo en el presente documento ARNm). Un codon de terminacion prematura (en lo sucesivo en el presente documento PTC) se define como un codon de terminacion situado en la secuencia codificante de un gen, corriente arriba del codon de terminacion normal. El codon de terminacion normal detiene la traduccion genica y permite la smtesis de protemas de tipo natural de longitud completa. El PTC evita la smtesis de protemas de tipo natural y conduce al silenciamiento del gen mutado. La carencia de una protema (carencia parcial o total) conduce a una patologfa. Por ejemplo, un PTC en el gen que codifica la protema distrofina causa Distrofia Muscular de Duchenne mediada por una mutacion sin sentido.

Se conoce que los canceres prostaticos mediados por una mutacion sin sentido estan causados por un PTC en los genes JAK1, SYNJ2 o CLPTM1 (vease "Identification of inactivating mutations in the JAK1, SYNJ2 and CLPTM1 genes in prostate cancer cells, using inhibition of nonsense-mediated decay and mieroarray analysis" en Cancer genetics and cytogenetics (2005)). Tambien se conoce que la epilepsia mediada por una mutacion sin sentido esta causada por un PTC en el gen de la subunidad receptora de Ga BAa (vease "Making sense of nonsense GABAa receptor mutations associated with genetic epilepsies" en Cell (2010)).

El documento de Patente WO 2008/101935 desvela compuestos utiles para el tratamiento de enfermedades mediadas por una mutacion sin sentido. Los compuestos que se desvelan en este documento son derivados de indol y se han sometido a ensayo en celulas cancengenas HeLa transfectadas previamente con dos plasmidos y en dos lmeas celulares linfoblasticas provenientes de pacientes con DMD (distrofia muscular de Duchenne). El documento de Patente WO 2004/091502 desvela compuestos utiles en el tratamiento de enfermedades geneticas causadas por una PTC que proviene de una mutacion sin sentido. Uno de los compuestos que se desvelan en el documento de Patente WO 2004/091502 (ataluren) se esta estudiando en la actualidad en un ensayo clmico en fase 2a como tratamiento oral para hemofilia A y B mediada por una mutacion sin sentido, en un ensayo en fase 2 en Acidemia Metilmalonica mediada por una mutacion sin sentido y en un ensayo en fase 3 en sujetos con fibrosis qrnstica mediada por una mutacion sin sentido. Ya se ha completado un ensayo en fase 2a en sujetos con distrofia muscular de Duchenne/Becker mediada por una mutacion sin sentido.

Un fin de la presente invencion es proporcionar un compuesto que permite el tratamiento de enfermedades geneticas, causadas por una mutacion sin sentido.

Por lo tanto, la presente invencion proporciona el compuesto de fórmula (I)

o una sal, solvato, clatrato, hidrato o polimorfo del mismo para su uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad genetica, siendo dicha enfermedad genetica una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido. El compuesto de Formula (I) (acido 2-amino-7-isopropil-5-oxo-5H-cromeno[2,3-d]piridina-3-carboxflico) se denomina habitualmente amlexanox. En la actualidad, se usa como agente terapeutico para el tratamiento de asma y rinitis alergica cuando se administra por via oral, y para el tratamiento de ulceras bucales cuando se usa por via topica. Tambien se usa para el tratamiento de ulcera aftosa (Aphthasol®). Se conoce por sus propiedades antiinflamatorias y antialergicas. Tambien se usa en el tratamiento de asma bronquial. Su perfil seguro se conoce bien.

El documento de Patente WO2009/151589 se refiere a un metodo de tratamiento de un trastorno proliferativo de linfocitos B mediante la administracion a un paciente de un agonista de BAR (receptor Beta(2)-adrenergico). El agonista de BAR se puede administrar como una monoterapia o en combinacion con uno o mas de otros agentes, tales como un inhibidor enzimatico de PDE. El compuesto de acuerdo con la invencion se cita en una larga lista de compuestos como inhibidor de PDE. El documento de Patente WO2009/151569 no indica ni sugiere que este implicada una mutacion genetica en el mecanismo proliferativo mencionado anteriormente.

El documento de Patente WO 2008/021210 se refiere a un metodo para el tratamiento de un trastorno neurodegenerativo usando los compuestos enumerados en diversas tablas. El compuesto de acuerdo con la presente invencion se desvela en la Tabla 1a como un antihistammico (H1), un antagonista del receptor de leucotrieno, un antialergico y un antiinflamatorio. El documento de Patente WO 2008/021210 no desvela ni sugiere que una mutacion genetica desempene un papel en las enfermedades tratadas.

El documento de Patente WO 2010/139985 desvela el uso del compuesto de acuerdo con la presente invencion para el tratamiento de una enfermedad asociada a neutrofilia. La neutrofilia es un termino usado para una afeccion en un paciente en la que dicho paciente tiene un gran numero de neutrofilos granulocitos en la sangre. Los neutrofilos son el tipo mas abundante de leucocitos en los mairnferos. Los neutrofilos estan asociados a enfermedades inflamatorias. Los neutrofilos son la primera respuesta en el proceso inflamatorio, en particular, en una infeccion bacteriana, exposicion ambiental y algunos canceres. El documento de Patente WO 2010/139985 no desvela ni sugiere el uso del compuesto mencionado anteriormente para el tratamiento de una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido.

Ademas, el documento de Patente US 2007/0135473 desvela el uso del compuesto de acuerdo con la presente invencion para el tratamiento de enfermedades asociadas a celulas tumorales que expresan una o mas protemas de la familia S100. El compuesto mencionado anteriormente se considera eficaz en retrasar el progreso y/o la metastasis de estos tumores. Las protemas S100 se han visto implicadas en una diversidad de funciones intracelulares y extracelulares. Las protemas S100 se ven implicadas en la regulacion de la fosforilacion de protemas, factores de transcripcion, homeostasis de Ca++, la dinamica de los constituyentes del citoesqueleto, actividades enzimaticas, crecimiento y diferenciacion celular, y la respuesta inflamatoria. Sin embargo, el documento de Patente US 2007/0135473 no desvela ni sugiere el uso del compuesto de Formula (I) para el tratamiento de una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido. Ademas, no existe ninguna evidencia de que las protemas S100 esten implicadas en una enfermedad causada por una mutacion sin sentido.

Los Solicitantes han descubierto que el compuesto de Formula (I) es capaz de inhibir el decaimiento del ARNm mediado sin sentido (en lo sucesivo en el presente documento denominado NMD) y/o tiene un efecto de lectura a traves, dependiendo de los genes multados, como se explica posteriormente en el presente documento. Por lo tanto, el compuesto de la invencion permite la smtesis funcional de protemas.

Teoricamente, cuando esta presente un PTC en un ARNm, los ribosomas debenan sintetizar una protema truncada. Las protemas truncadas tienen una cadena peptfdica mas corta en comparacion con las protemas de tipo natural. Una protema de tipo natural se define como una protema sintetizada cuando los genes correspondientes no comprenden ninguna mutacion. Las protemas truncadas pueden ser funcionales o no. En otras palabras, las protemas truncadas pueden producir o no producir los mismos efectos en las celulas o el cuerpo completo que los efectos producidos por las protemas de tipo natural. Los ARNm que contienen un PTC se erradican por parte del organismo antes de que se produzca una traduccion estable. Este decaimiento del ARNm que contiene PTC tambien se denomina decaimiento de ARNm mediado sin sentido (NMD). NMD es un mecanismo de supervivencia cualitativo natural que existe en todos los organismos eucariotas. NMD se dirige a la degradacion de los ARN que contienen PTC.

En algunos casos, la protema truncada que provendna de la traduccion de un gen que contiene una mutacion sin sentido sena funcional. Se puede conseguir la funcionalidad de la protema truncada a pesar del hecho de que la protema truncada sea mas corta que la protema de tipo natural. En otras palabras, incluso si la protema truncada es diferente de la de tipo natural, puede producir en las celulas y el organismo los mismos efectos que los que producina la protema de tipo natural. En estos casos, las protemas truncadas producen el fenotipo de tipo natural. Por lo tanto, en este caso, si se inhibe NMD, las protemas truncadas funcionales permanecen en la celula y tienen la misma funcion en la celula y de ese modo en el organismo que la protema de tipo natural, justo como si el gen correspondiente no albergara ninguna mutacion sin sentido.

El mecanismo del NMD se conoce bien y se describe en varias publicaciones (veanse Conti, E. y E, izaurralde. Nonsense-mediated mRNA decay: molecular insights and mechanistic variations across species. Curr Opin Cell Biol, 2005. 17(3): pag. 316-25 y Maquat, L.E., Nonsense-mediated mRNA decay: splicing, translation and mRNP dynamics. Nat Rev Mol Cell Biol, 2004. 5(2): pag. 89-99).

Se conoce que, en condiciones espedficas, a pesar de la presencia de un codon de terminacion (prematuro o no) alojado en el ARNm, el ribosoma continua la traduccion de dicho ARNm en protema mediante la incorporacion de un aminoacido en la posicion del codon de terminacion. Este fenomeno se denomina "lectura a traves". El aminoacido incorporado a la posicion sin sentido puede ser identico al aminoacido presente en la protema de tipo natural o distinto. Por lo tanto, la protema resultante puede ser funcional o no dependiendo del papel del aminoacido situado en la posicion sin sentido, para la funcion de la protema.

En los ultimos anos se ha producido un intento de desarrollar enfoques farmacologicos para las mutaciones que generan los PTC en marco. Estos enfoques terapeuticos se dirigen a estimular la lectura a traves traduccional de los PTC para permitir la smtesis y la expresion de protemas funcionales de longitud completa a niveles suficientes. En la mayona de estos estudios, los farmacos de lectura a traves fueron aminoglucosidos, principalmente gentamicina. El beneficio clmico de la gentamicina es limitado dado que los tratamientos a altas concentraciones y/o a largo plazo tienen graves efectos secundarios tales como lesion renal y perdida de la audicion. Recientemente, se ha identificado PTC124 o ataluren como un compuesto organico pequeno capaz de estimular la lectura a traves de los PTC. El documento de Patente WO2004/091502 desvela PTC124 y derivados del acido 1,2,4-oxadiazol benzoico. De acuerdo con la presente invencion, "inhibicion de NMD" significa la inhibicion parcial o total del NMD y "lectura a traves de PTC" significa la lectura parcial o total a traves de un PTC. Se ha descubierto que el compuesto de acuerdo con la invencion tiene un efecto de lectura a traves. Por lo tanto, el compuesto de acuerdo con la invencion se puede usar para el tratamiento de una enfermedad genetica causada por una mutacion sin sentido (tambien denominada enfermedad mediada por una mutacion sin sentido). Dicha mutacion sin sentido se define como una mutacion que activa el NMD.

De acuerdo con la presente invencion, una "protema funcional" se define como una protema truncada o no truncada capaz de tener las mismas funciones celulares que la protema de tipo natural. Cuando el compuesto de acuerdo con la invencion inhibe el NMD, se puede obtener una protema truncada funcional. Cuando el compuesto de acuerdo con la invencion estimula la lectura a traves del PTC, se puede obtener una protema no truncada funcional. La inhibicion de NMD puede ser una inhibicion completa o solo una inhibicion parcial. En el caso de una inhibicion parcial, el compuesto de acuerdo con la invencion puede no suprimir completamente el NMD. Cuando el compuesto de acuerdo con la invencion inhibe NMD parcial o totalmente, aumenta la cantidad de ARNm que contiene PTC, de un modo tal que se puede ver favorecida la estimulacion de la lectura a traves por parte del compuesto.

Se conoce que una pequena cantidad de protema funcional puede ser suficiente para permitir una actividad normal en las celulas, tejido y/o el organismo completo. En ocasiones, una baja concentracion de protema funcional puede ser suficiente para obtener un fenotipo de tipo natural en los pacientes. De acuerdo con la presente invencion, el termino "paciente" se refiere a cualquier tipo de organismo vivo, mas particularmente un animal tal como un mairnfero y mas particularmente un ser humano.

El compuesto de acuerdo con la invencion permite tratar y/o prevenir una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido. El compuesto de la invencion permite eliminar o atenuar uno o mas de los smtomas de la enfermedad. El compuesto de acuerdo con la invencion se puede administrar a cualquier paciente como se ha definido anteriormente en el presente documento, estando dicho paciente afectado por una enfermedad que se ha definido anteriormente en el presente documento. Se pueden usar sales del compuesto de formula (I) y no se limitan de acuerdo con la invencion. Por ejemplo, las sales obtenidas por reaccion del compuesto de formula (I) con un compuesto alcalino tambien estan incluidas en la presente invencion. Se pueden obtener sales de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio y cloruro mediante tal reaccion. La reaccion entre el compuesto de formula (I) y al menos un acido organico o inorganico tambien puede proporcionar otras sales.

De acuerdo con la presente invencion, el termino polimorfo se refiere a cualquier mezcla de formas amorfas o cristalinas del compuesto de acuerdo con la invencion.

De acuerdo con la invencion, la enfermedad causada por una mutacion sin sentido no se limita. Se han descrito numerosas enfermedades mediadas por una mutacion sin sentido. Numerosos organos o funciones del cuerpo se pueden ver afectados por una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido, tales como la funcion hepatica o gastrointestinal, o las funciones, metabolismo, organogenesis, inflamacion e inmunidad renales, cardiovasculares, pulmonares, musculares, de la medula osea, y del sistema nervioso central.

Por ejemplo, dicha enfermedad mediada por una mutacion sin sentido se puede elegir entre:

beta-talasemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Ehlers-Danlos Mediado por una Mutacion Sin Sentido, epilepsia mioclonica grave de la infancia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, acromatopsia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, retinitis pigmentosa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de Usher de tipo 1C Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de pulgar-pie equinovaro aducido Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alagille Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alstrom Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de antitrombina Mediada por una Mutacion Sin Sentido, complejo de Carney Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Currarino Mediado por una Mutacion Sin Sentido, anemia de Diamond-Blackfan Mediada por una Mutacion Sin Sentido, protoporfiria eritropoyetica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Fabry Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de Factor XIII Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Fanconi-Bickel Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de olor a pescado Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Gaucher Mediada por una Mutacion Sin Sentido, telangiectasia hemorragica hereditaria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, homocistinuria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Joubert Mediado por una Mutacion Sin Sentido y trastornos relacionados, enfermedad de Krabbe Mediada por una Mutacion Sin Sentido, aciduria L-2-hidroxiglutarica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Acidemia metilmalonica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Niemann-Pick Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Peters plus Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Townes-Brocks Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Von Willebrand Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Wiskott-Aldrich Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Kabuki Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Chanarin-Dorfman Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de lecitina colesterol aciltransferasa/enfermedad de ojo de pez Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de Marfan Mediado por una Mutacion Sin Sentido, Mucopolisacaridosis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Amiloidiosis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil tardfa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Deficiencia de coenzima Q10 Mediada por una Mutacion Sin Sentido, trastornos de la biogenesis peroxisomal Mediados por una Mutacion Sin Sentido, trastornos de almacenamiento lisosomal Mediados por una Mutacion Sin Sentido, cancer colorrectal Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia congenita de enteropeptidasa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Fibrosis qrnstica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de Peutz-Jeghers hungaro Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Jervell y Lange-Nielsen Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Lynch Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de inclusiones en microvellosidades Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Peutz-Jeghers Mediado por una Mutacion Sin Sentido, xantinuria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Acidosis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alport Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Bardet-Biedl Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Birt-Hogg-Dube Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Dent Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Gitelman Mediado por una Mutacion Sin Sentido, leiomiomatosis hereditaria y cancer de celulas renales Mediados por una Mutacion Sin Sentido, esferocitosis hereditaria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, amaurosis congenita de Leber Mediada por una Mutacion Sin Sentido, intolerancia a la protema lisinurica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Nefronoftisis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad del rinon poliqrnstico Mediada por una Mutacion Sin Sentido, pseudohipoaldosteronismo Mediado por una Mutacion Sin Sentido, hipodisplasia renal Mediada por una Mutacion Sin Sentido, carcinoma de celulas renales con celulas claras esporadico Mediado por una Mutacion Sin Sentido, canceres de celulas renales papilar de tipo 2 Mediados por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome Urofacial Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de von Hippel-Lindau Mediada por una Mutacion Sin Sentido, tumor de Wilms Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alport ligado al cromosoma X Mediado por una Mutacion Sin Sentido, raquitismo hipofosfatemico ligado al cromosoma X Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Nefropatfa hiperuricemica (enfermedad juvenil/de rinon qrnstico medular) Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Esclerosis tuberosa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico/smdrome nefrotico congenito Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico de tipo finlandes Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico 3 Mediado por una Mutacion Sin Sentido resistente a esteroides, smdrome nefrotico/smdrome de Pierson Mediado por una Mutacion Sin Sentido de inicio temprano, smdrome de Denys-Drash Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico/displasia inmuno osea de Schimke Mediado por una Mutacion Sin Sentido, resistencia primaria a glucocorticoides Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hipofosfatemia ligada al cromosoma X Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hiperoxaluria primaria de tipo 1 Mediada por una Mutacion Sin Sentido, pseudohipoaldosteronismo de tipo 1 Mediado por una Mutacion Sin Sentido, acidosis tubular renal proximal Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Abetalipoproteinemia e Hipobetalipoproteinemia familiar homocigotica Mediadas por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alpers Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de carbamoil fosfato sintetasa I Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad por almacenamiento de esteres de colesterol Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de citrina Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Dubin-Johnson Mediado por una Mutacion Sin Sentido, protoporfiria eritropoyetica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de Factor V Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad de almacenamiento de glucogeno Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Hemofilia A (deficiencia de factor VIII) Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Hemofilia B (deficiencia de factor IX) Mediada por una Mutacion Sin Sentido, carcinoma hepatocelular Mediado por una Mutacion Sin Sentido, Porfiria hepatoeritropoyetica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, paraplejias espasticas hereditarias Mediadas por una Mutacion Sin Sentido, Hipobetalipoproteinemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia hereditaria de factor XI Mediada por una Mutacion Sin Sentido, diabetes de la edad madura presentada en la juventud Mediada por una Mutacion Sin Sentido, anemia microdtica y deficiencia de hierro Mediadas por una Mutacion Sin Sentido, Agotamiento de ADN Mitocondrial Mediado por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de agotamiento de ADN Mitocondrial Mediado por una Mutacion Sin Sentido, fenilcetonuria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad del hfgado poliqrnstico Mediada por una Mutacion Sin Sentido, porfiria cutanea tarda Mediada por una Mutacion Sin Sentido, colestasis intrahepatica familiar progresiva Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad de Wilson Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hipercolesterolemia autosomica dominante Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Deficiencia de factor XII Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Deficiencia de factor X Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hipofibrinogenemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Afibrinogenemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de factor VII Mediada por una Mutacion Sin Sentido, agammaglobulinemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, trombocitopenia amegacariodtica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, anemia diseritropoyetica de tipo II Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Distrofia muscular de Duchenne y Becker Mediada por una Mutacion Sin Sentido, miopatfa centronuclear Mediada por una Mutacion Sin Sentido, distrofia muscular de cinturas o miopatfa de Miyoshi Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Ullrich Mediada por una Mutacion Sin Sentido, atrofia muscular espinal Mediada por una Mutacion Sin Sentido, epidermolisis ampollar distrofica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad de Hailey-Hailey Mediada por una Mutacion Sin Sentido, epidermolisis ampollar articular de Herlitz Mediada por una Mutacion Sin Sentido, y smdrome de Netherton Mediado por una Mutacion Sin Sentido. En una realización, la enfermedad mediada por una mutacion sin sentido se selecciona entre beta-talasemia, smdrome de Marfan, Distrofia muscular de Duchenne, Distrofia muscular de Becker, enfermedad de Ullrich, smdrome de Hurler, cancer, fibrosis qmstica, Atrofia muscular espinal, amitosis, LINCL (Lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil tardfa), Hemofilia, enfermedad de Alzheimer, Aterosclerosis, Gigantismo, Enanismo, Hipotiroidismo, Hipertiroidismo, Obesidad, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Niemann Pick, hipercolesterolemia familiar, y retinitis pigmentosa.

Diversos estudios han mostrado que el compuesto de Formula (I) se distribuye preferentemente en el hngado, los rinones y el intestino. Los pulmones, el corazon, los musculos y la piel estan ligeramente menos expuestos por parte del compuesto de Formula (I) despues de administracion oral. Considerando la fisiopatologfa de las enfermedades y los organos afectados por cada enfermedad citada anteriormente en el presente documento, y de acuerdo con la presente invencion, dichas enfermedades mediadas por una mutacion sin sentido se pueden elegir preferentemente entre:

Enfermedades que afectan al higado:

Abetalipoproteinemia e Hipobetalipoproteinemia familiar homocigotica Mediadas por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alpers Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de carbamoil fosfato sintetasa I Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad por almacenamiento de esteres de colesterol Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de citrina Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Dubin-Johnson Mediado por una Mutacion Sin Sentido, protoporfiria eritropoyetica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de Factor V Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad del almacenamiento de glucogeno Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Hemofilia A (Deficiencia de factor VIII) Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Hemofilia B (Deficiencia de factor IX) Mediada por una Mutacion Sin Sentido, carcinoma hepatocelular Mediado por una Mutacion Sin Sentido, Porfiria hepatoeritropoyetica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, paraplejias espasticas hereditarias Mediadas por una Mutacion Sin Sentido, Hipobetalipoproteinemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia hereditaria de factor XI Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Diabetes de la edad madura presentada en la juventud Mediada por una Mutacion Sin Sentido, anemia microcftica y deficiencia de hierro Mediadas por una Mutacion Sin Sentido, agotamiento de ADN mitocondrial Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de agotamiento de ADN mitocondrial Mediado por una Mutacion Sin Sentido, fenilcetonuria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad del fngado poliqrnstico Mediada por una Mutacion Sin Sentido, porfiria cutanea tarda Mediada por una Mutacion Sin Sentido, colestasis intrahepatica familiar progresiva Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad de Wilson Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hipercolesterolemia autosomica dominante Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Deficiencia de factor XII Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Deficiencia de factor X Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hipofibrinogenemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Afibrinogenemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de Factor VII Mediada por una Mutacion Sin Sentido.

Enfermedades que afectan a los rinones:

Acidosis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alport Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Bardet-Biedl Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Birt-Hogg-Dube Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Dent Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Gitelman Mediado por una Mutacion Sin Sentido, leiomiomatosis hereditaria y cancer de celulas renales Mediados por una Mutacion Sin Sentido, esferocitosis hereditaria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, amaurosis congenita de Leber Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Intolerancia a la protema lisinurica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Nefronoftisis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad del rinon poliqrnstico Mediada por una Mutacion Sin Sentido, pseudohipoaldosteronismo Mediado por una Mutacion Sin Sentido, hipodisplasia renal Mediada por una Mutacion Sin Sentido, carcinoma de celulas renales con celulas claras esporadico Mediado por una Mutacion Sin Sentido, canceres de celulas renales papilares de tipo II Mediados por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome Urofacial Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de von Hippel-Lindau Mediada por una Mutacion Sin Sentido, tumor de Wilms Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alport ligado al cromosoma X Mediado por una Mutacion Sin Sentido, raquitismo hipofosfatemico ligado al cromosoma X Mediado por una Mutacion Sin Sentido, Nefropatfa hiperuricemica (enfermedad juvenil/de rinon qrnstico medular) Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Esclerosis tuberosa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico/smdrome nefrotico congenito Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico de tipo finlandes Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico 3 Mediado por una Mutacion Sin Sentido resistente a esteroides, smdrome nefrotico/smdrome de Pierson Mediado por una Mutacion Sin Sentido de inicio temprano, smdrome de Denys-Drash Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome nefrotico/displasia inmuno osea de Schimke Mediado por una Mutacion Sin Sentido, resistencia primaria a glucocorticoides Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hipofosfatemia ligada al cromosoma X Mediada por una Mutacion Sin Sentido, hiperoxaluria primaria de tipo 1 Mediada por una Mutacion Sin Sentido, pseudohipoaldosteronismo de tipo 1 Mediado por una Mutacion Sin Sentido, acidosis tubular renal proximal Mediada por una Mutacion Sin Sentido.

Enfermedades que afectan al intestino:

Cancer colorrectal Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia congenita de enteropeptidasa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Fibrosis qmstica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de Peutz-Jeghers hungaro Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Jervell y Lange-Nielsen Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Lynch Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de inclusiones en microvellosidades Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Peutz-Jeghers Mediado por una Mutacion Sin Sentido, xantinuria Mediada por una Mutacion Sin Sentido.

Enfermedades que afectan a varios organos:

Beta-talasemia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Ehlers-Danlos Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de pulgar-pie equinovaro aducido Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alagille Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Alstrom Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de antitrombina Mediada por una Mutacion Sin Sentido, complejo de Carney Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Currarino Mediado por una Mutacion Sin Sentido, anemia de Diamond-Blackfan Mediada por una Mutacion Sin Sentido, protoporfiria eritropoyetica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Fabry Mediada por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de Factor XIII Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Fanconi-Bickel Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de olor a pescado Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Gaucher Mediada por una Mutacion Sin Sentido, telangiectasia hemorragica hereditaria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, homocistinuria Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Joubert Mediado por una Mutacion Sin Sentido y trastornos relacionados, enfermedad de Krabbe Mediada por una Mutacion Sin Sentido, aciduria L-2-hidroxiglutarica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Acidemia metilmalonica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Niemann-Pick Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Peters plus Mediado por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Townes-Brocks Mediada por una Mutacion Sin Sentido, enfermedad de Von Willebrand Mediada por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Wiskott-Aldrich Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Kabuki Mediado por una Mutacion Sin Sentido, smdrome de Chanarin-Dorfman Mediado por una Mutacion Sin Sentido, deficiencia de lecitina colesterol aciltransferasa/enfermedad de ojo de pez Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de Marfan Mediado por una Mutacion Sin Sentido, Mucopolisacaridosis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Amiloidiosis Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil tardfa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Deficiencia de coenzima Q10 Mediada por una Mutacion Sin Sentido, trastornos de la biogenesis peroxisomal Mediados por una Mutacion Sin Sentido, trastornos de almacenamiento lisosomal Mediados por una Mutacion Sin Sentido.

Considerando que el compuesto de acuerdo con la Formula (I) se puede administrar por via topica, y de acuerdo con la presente invencion, dichas enfermedades mediadas por una mutacion sin sentido tambien se pueden elegir entre las siguientes enfermedades que afectan a los ojos:

acromatopsia Mediada por una Mutacion Sin Sentido, retinitis pigmentosa Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Smdrome de Usher de tipo 1C Mediado por una Mutacion Sin Sentido, epidermolisis ampollar distrofica Mediada por una Mutacion Sin Sentido, Enfermedad de Hailey-Hailey Mediada por una Mutacion Sin Sentido, epidermolisis ampollar articular de Herlitz Mediada por una Mutacion Sin Sentido, y smdrome de Netherton Mediado por una Mutacion Sin Sentido.

Habitualmente, el compuesto de acuerdo con la presente invencion, ya sea solo (en cualquiera de las formas que se han descrito anteriormente) o en combinacion con otro agente activo, se administra a los pacientes en una mezcla con uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. Los excipientes se eligen de forma adecuada dependiendo del modo de administracion y de la influencia del excipiente en la solubilidad y la estabilidad del compuesto. La forma galenica tambien puede ser pertinente.

Por lo tanto, un segundo aspecto de la invencion se refiere a una composicion farmaceutica para su uso en el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad genetica, siendo dicha enfermedad genetica una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido. La composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion comprende, como ingrediente activo, al menos el compuesto de fórmula (I) y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. La composicion de acuerdo con la presente invencion contiene el compuesto de la invencion y de ese modo tiene las mismas propiedades toxicologicas que el propio compuesto. Ademas, se ha de observar que la toxicidad del compuesto de la invencion ya se ha evaluado para una administracion oral; la toxicidad de una formulacion inyectable no debena diferir dado que lo que se evalua es la toxicidad de la propia molecula opcionalmente metabolizada en la sangre. Por lo tanto, la composicion de la invencion se puede usar y comercializar rapidamente como un farmaco.

De acuerdo con una realización, la composicion de acuerdo con la invencion se puede inyectar. En este caso, el excipiente es lfquido. La molecula activa se disuelve o se suspende en el excipiente. Sin embargo, la composicion de acuerdo con la invencion no se limita a este tipo de composicion.

La presente invencion tambien se refiere a una composicion farmaceutica como se ha descrito anteriormente en el presente documento, que comprende ademas un agente de lectura a traves. El agente de lectura a traves es capaz de estimular la lectura de PTC. El PTC esta alojado en el ARNm que proviene de la transcripcion del gen que alberga dicha mutacion sin sentido. Los inventores han observado un efecto sinergico entre el compuesto de la invencion y al menos una molecula de lectura a traves de PTC particular.

De forma ventajosa, el agente de lectura a traves es acido 3-[5-(2-fluorofenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico (PTC124 desvelado en el documento de Patente WO 2004/091502). Este agente de lectura a traves no es muy eficaz y se tienen que administrar dosis elevadas a los pacientes (de 16 a 40 mg/kgMa). La sinergia entre este agente de lectura a traves y el compuesto de acuerdo con la invencion puede mejorar la actividad de dicho agente de lectura a traves en algunos casos. Por lo tanto, son necesarias dosis inferiores de dicho agente de lectura a traves.

Por lo tanto, otro aspecto de la invencion se refiere a una combinacion de (i) un compuesto de fórmula (I);

o una sal, solvato, clatrato, hidrato o polimorfo del mismo, y (ii) acido 3-[5-(2-fluorofenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico. Los agentes farmaceuticamente activos (i) y (ii) se pueden administrar de forma simultanea, secuencial o durante un periodo de tiempo.

Sin embargo, de acuerdo con la invencion, tambien se puede mezclar o combinar cualquier otro agente de lectura a traves con el compuesto de acuerdo con la presente invencion o con la combinacion PTC124/compuesto de Formula (I). De ese modo, este agente de lectura a traves se incluye en la composicion de acuerdo con la invencion. El agente de lectura a traves mencionado anteriormente tambien se puede determinar por separado con el fin de administrarse con la molecula de la invencion, al mismo tiempo o de acuerdo con una administracion retrasada. El experto en la materia es capaz de determinar si una enfermedad esta causada por una mutacion sin sentido. Es posible, para una protema dada, estudiar si dicha concentracion de protema es pertinente para la enfermedad. El experto en la materia es capaz de determinar si una enfermedad dada causada por una concentracion demasiado baja de protema es una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido siguiendo las etapas que se mencionan en lo sucesivo en el presente documento:

- Identificacion del gen que codifica dicha protema dada e identificacion del ARNm que procede de la transcripcion de dicho gen; y

- Comparacion de los genes normales o los ARNm normales con los genes y los ARNm que provienen de un paciente que padece dicha enfermedad.

La presente invencion tambien se refiere a un metodo para determinar si existe una mutacion sin sentida alojada en un gen dado. Este gen dado se transcribe a ARNm. El ARNm transcrito alberga un PTC y codifica una protema conocida dada. De acuerdo con el metodo de la presente invencion,

-Las celulas del paciente se incuban con el compuesto o una composicion de la invencion con el fin de obtener smtesis de ARN;

- Los ARN y/o las protemas sintetizados se extraen de las celulas y se purifican;

- Se realiza la transcripcion inversa de los ARN y se amplifican con el fin de permitir la cuantificacion de ARN.

En una realización, las celulas del paciente son celulas de un organo que se piensa que esta afectado por la mutacion sin sentido o celulas diferenciadas de celulas madre pluripotentes inducidas producidas por el paciente. En otra realización, un aumento de la cantidad de los ARN y/o las protemas purificados indica inhibicion de NMD y/o lectura a traves y por lo tanto la presencia de una mutacion sin sentido.

Por lo tanto, el metodo de acuerdo con la invencion permite determinar si una enfermedad genetica esta causada al menos parcialmente por una mutacion sin sentido. Por lo tanto, esto permite el ajuste del tratamiento.

La presente invencion, sus caractensticas y sus ventajas se explicaran basandose en los siguientes Ejemplos y Figuras, en las que:

- la Figura 1 muestra la actividad de inhibicion de NMD de una composicion de acuerdo con la presente invencion en celulas HeLa, usando luciferasa de luciernaga;

- la Figura 2 muestra la estabilizacion de ARNm de p53 en celulas Calu-6 (celulas que provienen de un paciente que padece un cancer de pulmon genetico mediado por una mutacion sin sentido) frente a la concentracion de molecula activa, obteniendose dicha estabilizacion a traves de la inhibicion de NMD por parte de una composicion de acuerdo con la invencion;

- la Figura 3 es un grafico que muestra la proporcion de ARNm de p53/ARNm de GADPH frente a la concentracion de molecula activa de una composicion de acuerdo con la invencion;

- la Figura 4 muestra la protema p53 de longitud completa sintetizada en las celulas Calu-6 en presencia de una composicion de acuerdo con la invencion;

- la Figura 5 muestra la concentracion de ARNm de MOR en celulas de cerebro de raton frente a la concentracion de compuesto activo en un modelo de raton en el que el gen MOR alberga una mutacion sin sentido;

- la Figura 6 muestra la sinergia entre la composicion de la invencion y PTC124 (agente de lectura a traves de codon de terminacion prematuro);

- la Figura 7 muestra ARNm de CFTR de celulas IB3 (celulas que provienen de un paciente que padece fibrosis qrnstica mediada por una mutacion sin sentido) incubadas con composiciones de acuerdo con la presente invencion que tienen diferentes concentraciones de molecula activa;

- la Figura 8 muestra la concentracion de ARNm de CFTR de celulas IB3 incubadas en presencia de una composicion de acuerdo con la presente invencion frente a la concentracion de molecula activa de dicha composicion;

- la Figura 9 muestra ARNm de p53 en celulas Calu-6 incubadas con tres composiciones diferentes, conteniendo cada composicion 25 pmol/l de compuesto activo de acuerdo con la invencion;

- la Figura 10 muestra el efecto de respuesta a dosis del compuesto de la invencion en flujo de salida de yoduro en celulas 6-CFSMEo (celulas que provienen de un paciente que padece fibrosis qrnstica mediada por una mutacion sin sentido); y

- las Figuras 11 a y b muestran el efecto de diversas dosis del compuesto de la invencion en la expresion del gen de distrofina que contiene PTC en celulas DMD que provienen de un paciente que padece distrofia muscular de Duchenne mediada por una mutacion sin sentido.

Ejemplos

En los siguientes ejemplos se hara referencia al compuesto de fórmula (I) como la molecula G07. Tambien se usaron en los ensayos los compuestos relacionados G08 y G09.

Ejemplo 1: determinacion de la inhibicion de NMD mediante el uso de luciferasa de luciernaga

La presencia de una de las siguientes protemas UPF (UPF1, UPF2, UPF3 (tambien denominadas UPF3a) o UPF3X (tambien denominada UPF3b)) en la parte 3'UTR de un ARNm, activa NMD en este ARNm particular. Cuando una protema UPF esta situada corriente abajo de un codon de terminacion normal, dicho codon de terminacion normal se reconoce como un PTC. Por lo tanto, el ARNm que comprende la protema UPF se degradara a traves de NMD. Se uso una lmea celular HeLa que expresa luciferasa de luciernaga. El ARNm de la luciferasa de luciernaga alberga sitios de union MS2 en el 3'UTR. Las celulas mencionadas anteriormente contienen ademas una protema de fusion que consiste en dicha protema MS2 y una de las cuatro protemas UPF. La protema de fusion permite la ubicacion de UPF corriente abajo del codon de terminacion normal (es dedr, en la parte 3'UTR de este ARNm). Por lo tanto, el codon de terminacion normal se reconoce como un PTC. Por lo tanto, NMD se activa y degrada el ARNm de la luciferasa de luciernaga.

La actividad de la luciferasa en las celulas mencionadas anteriormente esta de ese modo directamente relacionada con la actividad de NMD. Una luminiscencia baja indica que NMD se activa y una luminiscencia elevada indica la inhibicion de NMD. En presencia de G07, la actividad de luciferasa es mayor que en los pocillos de control. Esto muestra la actividad de inhibicion de NMD de G07.

Las celulas HeLa se cultivaron en DMEM (Gibco) complementado con un 10% de FBS y que contema 10 jmol/l de G07.

Dado que G07 inhibe NMD independientemente del tipo de protema UPF situada en el ARNm, G07 se puede considerar como un inhibidor general de NMD.

Ejemplo 2: efecto beneficioso de G07 en celulas de un paciente que alberga cancer de pulmon mediado por una mutacion sin sentido

Las celulas Calu-6 (ATCC) albergan un PTC UGA en el codon 196 del gen P53. Estas celulas Calu-6 se aislaron de un paciente con cancer de pulmon. Se realizo la transcripcion inversa de los ARN de dichas celulas Calu-6 y se amplificaron a traves de PCR (RT-PCR) en presencia de un nucleotido con una marca radiactiva con el fin de medir los niveles de ARNm de P53 y ARNm de ^gA^p DH (usandose GAPDH como un control de carga). Las celulas Calu-6 albergan una mutacion sin sentido en el gen P53. Por lo tanto, el gen P53 no se expresa en las celulas Calu-6 debido a la actividad de NMD sobre el ARNm de P53. Los ARNm transcritos inversamente amplificados se cargaron sobre un gel de acrilamida y se sometieron a electroforesis. El gel de acrilamida se seco a continuacion sobre papel de Whatman y se aplico sobre un tamiz de fosforo (KodaK). Se uso un formador de imagenes Personal Molecular Imager (Bio-Rad) para cuantificar las especies radiomarcadas amplificadas. Las celulas Calu-6 se incubaron con concentraciones crecientes de G07 en d Ms O durante aproximadamente veinte horas. Esto se llevo a cabo con el fin de confirmar la actividad de inhibicion de NMD de G07. Despues de la incubacion, los ARN se purificaron mediante el uso de TriReagent (MRC) y a continuacion se realizo la transcripcion inversa a ADNc que se puede amplificar por PCR en presencia de un nucleotido radiomarcado. Los resultados correspondientes se muestran en la Figura 2. La Figura 2 muestra un aumento de la cantidad de ARNm de P53 cuando la concentracion de G07 aumenta. El ARNm de P53 se degrada normalmente a traves de NMD. De ese modo, una cantidad en aumento de ARNm de P53 resulta de la estabilizacion del mismo. Por lo tanto, G07 parece tener una actividad de respuesta a dosis en el mecanismo de NMD. Este experimento confirma la actividad de inhibicion de NMD de G07 y prueba ademas que G07 es capaz de inhibir n Md frente a un ARNm endogeno. El ARNm de GAPDH (gliceraldetndo 3-fosfato deshidrogenasa) se amplifico con el fin de normalizar la medicion de ARNm de P53 entre dos carriles.

La Figura 3 muestra que cuanto mayor es la concentracion de G07, mayor es la cantidad de ARNm de P53 en las celulas.

Ademas, G07 permite la smtesis de una protema P53 truncada y una protema P53 de longitud completa en las celulas Calu-6. De ese modo, G07 es diferente de las moleculas que se describen en el documento de Patente WO 2008/101935. En lo que respecta a las moleculas que se desvelan en el documento mencionado anteriormente, solo se ha detectado la protema truncada. Este resultado se muestra en la Figura 4. Se cargaron extractos de protema de celulas Calu-6 incubadas o no con G07 sobre un gel de electroforesis y a continuacion se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa con el fin de detectar la protema P53 despues de incubacion con un anticuerpo anti-P53 (un anticuerpo anti-P53 es un anticuerpo dirigido frente a la parte amino terminal de P53 (Santa Cruz)). El resultado obtenido se muestra en la Figura 4. De acuerdo con la Figura 4, cuando se incuban las celulas Calu-6 con G07 durante aproximadamente 20 horas, las celulas sintetizan protemas P53 de longitud completa y truncadas.

La Figura 4 tambien muestra un analisis de la presencia de la protema P21 con el fin de comprobar si la protema P53 de longitud completa es funcional. Cuando se sintetiza la protema P53, P53 activa la expresion de P21. El analisis de transferencia de Western muestra la presencia de P21 cuando se usan concentraciones de G07 en aumento (de 25 a 125 ^j M). De ese modo, la protema P53 sintetizada gracias a G07 induce la expresion de P21 al igual que lo hace la protema P53 WT. Por lo tanto, los Solicitantes han confirmado de ese modo que G07 permite la smtesis de una protema P53 de longitud completa funcional.

Por lo tanto, G07 permite la smtesis de protemas de longitud completa. G07 puede permitir la lectura a traves de PTC. G07 tambien puede inhibir NMD en una etapa cntica de la misma permitiendo por lo tanto la smtesis de protemas de longitud completa. La protema de longitud completa sintetizada puede ser la protema de tipo natural. Ejemplo 3: inhibicion de NMD in vivo

En los ratones KIM, el gen MOR alberga una mutacion sin sentido que activa NMD. El gen MOR se expresa en el sistema nervioso central. Se inyectaron soluciones que conteman 0,2, 2 o 20 mg/kg de G07 (1Q, 2Q o 3Q respectivamente) disuelto en DMSO en ratones KIM. Un grupo de control consiste en animales tratados con DMSO puro. A continuacion, se realizo la eutanasia de los animales 6, 24 o 32 horas despues de la inyeccion. Los ARN extrafdos de los homogenatos de cerebro se purificaron usando TriReagent (MRC) y a continuacion se analizaron como se ha descrito por referencia a la Figura 2. La diferencia entre los experimented que se han descrito por referencia a la Figura 2 es que en el caso presente los ARNm analizados son el ARNm que codifica el gen MOR y el ARNm que codifica el gen GAPDH usado como control para cuantificar el ARNm de MOR medido. Los primeros 3 pocillos de la izquierda corresponden a una dilucion media de una muestra que proviene de un cerebro de raton de tipo natural. Estos 3 pocillos se usaron para comprobar las condiciones de PCR para que sea cuantitativamente util. La Figura 5 muestra las mediciones de los niveles de ARNm de MOR y GAPDH (el ultimo usado como control). Se uso la misma tecnica que se ha descrito por referencia a la Figura 2 excepto por el hecho de que el ARN proviene de los cerebros de ratones KIM. Algunos de estos ratones KIM se inyectaron con G07.

Se observo una estabilizacion de ARNm de MOR despues de 24 horas para las concentraciones 1Q y 2Q. Esto indica la inhibicion de NMD. Por lo tanto, este experimento confirma la actividad de inhibicion de NMD in vivo de G07.

Ejemplo 4: uso de G07 en combinacion con un agente de lectura a traves

PTC124 (ataluren o acido 3-[5-(2-fluorofenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico) es una molecula que activa la lectura a traves. Esta molecula no tiene ninguna actividad de inhibicion de NMD. Se incubaron celulas Calu-6 en DMSO como control (-), en soluciones en DMSO que conteman concentraciones en aumento de PTC124 y en soluciones en DMSO que conteman concentraciones en aumento de PTC124 y ademas G0725 |^j M. Los extractos de protema de estas celulas se prepararon 24 horas despues del inicio de la incubacion y se analizaron a traves de transferencia de Western. De acuerdo con la transferencia de Western que se muestra en la Figura 6 (es decir, despues de un tiempo de exposicion muy corto) se puede observar protema P53 de longitud completa solo en las celulas incubadas con un medio que contiene G07 y PTC124. De ese modo, las dos moleculas tienen un efecto sinergico cuando se usan conjuntamente. La Figura 6 muestra que la incubacion de las celulas Calu-6 en un medio que contiene una mezcla de PTC124 y G07 mejora la smtesis de protema P53 de longitud completa. Esta mejora es mas eficaz que la mejora obtenida para cada molecula usada por separado. De ese modo, existe una sinergia entre G07 y PTC124.

Ejemplo 5: inhibicion de NMD en IB3 (modelo de fibrosis qmstica)

Las celulas IB3 albergan un PTC en la posicion 1282 en lugar del codon de triptofano del gen CFTR.

Se incubaron celulas IB3 (ATCC) en soluciones en DMSO que conteman DMSO puro (como control) o concentraciones de G07 en aumento, respectivamente, durante 20 horas.

Los ARN obtenidos despues de la incubacion se purificaron y se llevo a cabo RT-PCR para medir la cantidad de ARNm de CFTR (que contiene un PTC) y la cantidad de ARNm de GAPDH (usado como control). Basandose en el promedio de la cantidad de ARNm de CFTR/cantidad de ARNm de GAPDH mostrado, los presentes inventores pueden concluir que existe un aumento de la estabilizacion del ARNm de CFTR. Este resultado se muestra en la Figura 7. Este resultado confirma la actividad de inhibicion de NMD de G07 que ya se habfa observado en celulas Calu-6. Este experimento muestra la capacidad de G07 para inhibir NMD en diversos y diferentes tipos de celulas. Como se muestra en la Figura 8, cuanto mayor es la concentracion de G07 en el medio de cultivo, mas estabilizado esta el ARNm degradado normalmente a traves de NMD.

Esto indica que la inhibicion de NMD depende de la concentracion de G07 en el medio de cultivo.

Ejemplo 6: actividad de inhibicion de NMD de composiciones que contienen G07, G08 y G09, respectivamente

Se incubaron celulas Calu-6 con composiciones que conteman G07, G08 y G0925 j M, respectivamente. Se llevo a cabo el mismo experimento que se ha descrito anteriormente por referencia a la confirmacion de la inhibicion de NMD en celulas Calu-6 con cada composicion. Los resultados se muestran en la Figura 9. Cada composicion 25 ^j M inhibe NMD y permite una estabilizacion del ARNm de P53 en celulas Calu-6.

Ejemplo 7: efecto de respuesta a dosis de G07 en flujo de salida de yoduro en celulas 6-CFSMEo- (celulas que provienen de un paciente que padece fibrosis qmstica).

Las celulas 6-CFSMEo' albergan un PTC en el lugar del codon 2 de glutamina del gen de CFTR.

Se sembraron celulas 6-CFSMEo- en placas de 96 pocillos y se cargaron durante una noche con 10 mM del colorante fluoroforo sensible a haluros 6-metoxi-N-(3-sulfopropiI)-quinolinio (SPG, Invitrogen). Las celulas se lavaron dos veces con tampon de yoduro (Nal 135 mM, K²HPO⁴2,4 mM, KH²PO⁴0,6 mM, MgSO⁴ 1 mM, CaSO⁴ 1 mM, dextrosa 10 mM y Hepes 10 mM, pH 7,3) y a continuacion se incubaron en tampon de yoduro durante 30 min. Despues de que se midiera la fluorescencia basal durante 2 min, el tampon de yoduro se reemplazo con tampon de nitrato (con NaNO³135 mM en lugar de Nal) que contema 20 pM de forskolina y 200 pM de IBMx , y la fluorescencia se midio adicionalmente durante 10minutos. Las intensidades de fluorescencia se midieron cada 15 segundos usando el lector de microplacas Tristar LB 941 (Berthold) equipado con un filtro de excitacion de 340 nm y un filtro de emision de 450 nm. La flecha en la Figura 10 muestra la adicion de tampon nitrato que contema 20 pM de forskolina y 200 pM de IBMX, como se ha explicado anteriormente. Las concentraciones de G07 usadas fueron 0,2 pM, 1 pM, 5 pM y 25 pM, respectivamente. El aumento en el flujo de salida de yoduro se muestra como el valor medio ± SEM de al menos cuatro ensayos independientes. Ft se refiere a la fluorescencia en el tiempo de lectura; F0 se refiere a la fluorescencia media antes de la adicion del tampon de nitrato mencionado anteriormente que contema 20 pM de forskolina y 200 pM de IBMX.

Basandose en los resultados que se muestran en la Figura 10, es evidente que G07 tiene un efecto de respuesta a dosis en celulas 6-CFSMEo- y conduce a la smtesis de protema CFTR funcional a partir de un gen ^c F^t R que contiene PTC.

Ejemplo 8: efecto de G07 en la expresion del gen de distrofina que contiene PTC en celulas de un paciente que padece distrofia muscular de Duchenne mediada por una mutacion sin sentido (es dedr, celulas DMD) En lo que respecta a los resultados de la Figura 11 a, se incubaron celulas DMD con cantidades crecientes de la molecula G07 o con DMSO como control. Los ARN se purificaron usando el reactivo RNazol (MRC) y se realizo la transcripcion inversa usando Superscript II (Life technologies) y un hexamero aleatorio. Se llevo a cabo PCR usando CTP radiomarcado con el fin de amplificar el ADNc de distrofina o GAPDH. Los productos de amplificacion se cargaron en gel de poliacrilamida al 5%. A continuacion, el gel se seco y se expuso a un tamiz de fosforo con el fin de permitir la cuantificacion de cada especie de amplificacion mediante el formador de imagenes Personal Molecular Imager (Biorad).

En lo que respecta a los resultados de la Figura 11 b, se incubaron celulas DMD con cantidades crecientes de la molecula G07 o con DMSO como control. Los extractos de protema de estas celulas se cargaron sobre SDS-PAGE al 10% y se transfirieron sobre una membrana de nitrocelulosa. La membrana de nitrocelulosa se expuso a continuacion a un anticuerpo primario (un anticuerpo anti-distrofina elaborado frente a la parte amino de la protema distrofina (Santa-Cruz), o un anticuerpo anti-tubulina con el fin de especificar la cantidad de protema cargada en cada carril.

Las Figuras 11 a y b muestran que G07 es capaz de en rescatar la expresion del gen de distrofina que contiene PTC en celulas que provienen de un paciente que padece distrofia muscular de Duchenne mediada por una mutacion sin sentido.

Como se muestra en la Figura 11 a, las cantidades crecientes de G07 conducen a la estabilizacion del ARNm de distrofina. Este resultado se obtiene a traves de RT-PCR. El maximo de eficacia se obtiene a una concentracion de 5 pM.

Como se muestra en la Figura 11 b, las cantidades crecientes de G07 conducen a la smtesis de protema distrofina (resultados obtenidos a traves de transferencia de Western con un anticuerpo obtenido frente a la parte amino terminal de la protema distrofina). El maximo de eficacia de G07 es 5 pM que es consistente con los resultados que se muestran en la Figura 11 a.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I)

o una sal, solvato, clatrato, hidrato o polimorfo del mismo para su uso en el tratamiento o la prevencion de una enfermedad genetica, siendo dicha enfermedad genetica una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido.

2. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad genetica se elige entre las siguientes enfermedades geneticas: beta-talasemia mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Ehlers-Danlos mediado por una mutacion sin sentido, epilepsia mioclonica grave de la infancia mediada por una mutacion sin sentido, acromatopsia mediada por una mutacion sin sentido, retinitis pigmentosa mediada por una mutacion sin sentido, Smdrome de Usher de tipo 1C mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de pulgar-pie equinovaro aducido mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Alagille mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Alstrom mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia de antitrombina mediada por una mutacion sin sentido, complejo de Carney mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Currarino mediado por una mutacion sin sentido, anemia de Diamond-Blackfan mediada por una mutacion sin sentido, protoporfiria eritropoyetica mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Fabry mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de Factor XIII mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Fanconi-Bickel mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de olor a pescado mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de Gaucher mediada por una mutacion sin sentido, telangiectasia hemorragica hereditaria mediada por una mutacion sin sentido, homocistinuria mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Joubert mediado por una mutacion sin sentido y trastornos relacionados, enfermedad de Krabbe mediada por una mutacion sin sentido, aciduria L-2-hidroxiglutarica mediada por una mutacion sin sentido, acidemia metilmalonica mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Niemann-Pick mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Peters plus mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de Townes-Brocks mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de von Willebrand mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Wiskott-Aldrich mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Kabuki mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Chanarin-Dorfman mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia de lecitina colesterol aciltransferasa/enfermedad de ojo de pez mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Marfan mediado por una mutacion sin sentido, mucopolisacaridosis mediada por una mutacion sin sentido, amiloidiosis mediada por una mutacion sin sentido, Lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil tardfa mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de coenzima Q10 mediada por una mutacion sin sentido, trastornos de la biogenesis peroxisomal mediados por una mutacion sin sentido, trastornos de almacenamiento lisosomal mediados por una mutacion sin sentido, cancer colorrectal mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia congenita de enteropeptidasa mediada por una mutacion sin sentido, Fibrosis qrnstica mediada por una mutacion sin sentido, Smdrome de Peutz-Jeghers hungaro mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Jervell y Lange-Nielsen mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Lynch mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de inclusiones en microvellosidades mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Peutz-Jeghers mediado por una mutacion sin sentido, xantinuria mediada por una mutacion sin sentido, Acidosis mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Alport mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Bardet-Biedl mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Birt-Hogg-Dube mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de Dent mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Gitelman mediado por una mutacion sin sentido, leiomiomatosis hereditaria y cancer de celulas renales mediados por una mutacion sin sentido, esferocitosis hereditaria mediada por una mutacion sin sentido, amaurosis congenita de Leber mediada por una mutacion sin sentido, intolerancia a la protema lisinurica mediada por una mutacion sin sentido, Nefronoftisis mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad del rinon poliqrnstico mediada por una mutacion sin sentido, pseudohipoaldosteronismo mediado por una mutacion sin sentido, hipodisplasia renal mediada por una mutacion sin sentido, carcinoma de celulas renales con celulas claras esporadico mediado por una mutacion sin sentido, canceres de celulas renales papilares de tipo 2 mediados por una mutacion sin sentido, Smdrome Urofacial mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de von Hippel-Lindau mediada por una mutacion sin sentido, tumor de Wilms mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Alport ligado al cromosoma X mediado por una mutacion sin sentido, raquitismo hipofosfatemico ligado al cromosoma X mediada por una mutacion sin sentido, nefropatfa hiperuricemica (enfermedad juvenil/de rinon qrnstico medular) mediada por una mutacion sin sentido, esclerosis tuberosa mediada por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico/smdrome nefrotico congenito mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico de tipo finlandes mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico 3 mediado por una mutacion sin sentido resistente a esteroides, smdrome nefrotico/smdrome de Pierson mediado por una mutacion sin sentido de inicio temprano, smdrome de Denys-Drash mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico/displasia inmuno-osea de Schimke mediado por una mutacion sin sentido, resistencia primaria a glucocorticoides mediada por una mutacion sin sentido, hipofosfatemia ligada al cromosoma X mediada por una mutacion sin sentido, hiperoxaluria primaria de tipo 1 mediada por una mutacion sin sentido, pseudohipoaldosteronismo de tipo 1 mediado por una mutacion sin sentido, acidosis tubular renal proximal mediada por una mutacion sin sentido, Abetalipoproteinemia e Hipobetalipoproteinemia familiar homocigotica mediadas por una mutacion sin sentido, smdrome de Alpers mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia de carbamoil fosfato sintetasa I mediada por una mutacion sin sentido, Enfermedad por almacenamiento de esteres de colesterol mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de citrina mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Dubin-Johnson mediado por una mutacion sin sentido, protoporfiria eritropoyetica mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de Factor V mediada por una mutacion sin sentido, Enfermedad de almacenamiento de glucogeno mediada por una mutacion sin sentido, Hemofilia A (deficiencia de factor VIII) mediada por una mutacion sin sentido, Hemofilia B (deficiencia de factor IX) mediada por una mutacion sin sentido, carcinoma hepatocelular mediado por una mutacion sin sentido, Porfiria hepatoeritropoyetica mediada por una mutacion sin sentido, paraplejias espasticas hereditarias mediadas por una mutacion sin sentido, Hipobetalipoproteinemia mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia hereditaria de factor XI mediada por una mutacion sin sentido, diabetes de la edad madura presentada en la juventud mediada por una mutacion sin sentido, anemia microcftica y deficiencia de hierro mediadas por una mutacion sin sentido, Agotamiento de ADN Mitocondrial mediado por una mutacion sin sentido, Smdrome de agotamiento de ADN Mitocondrial mediado por una mutacion sin sentido, fenilcetonuria mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad del fftgado poliqrnstico mediada por una mutacion sin sentido, porfiria cutanea tarda mediada por una mutacion sin sentido, colestasis intrahepatica familiar progresiva mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Wilson mediada por una mutacion sin sentido, hipercolesterolemia autosomica dominante mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de factor XII mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de factor X mediada por una mutacion sin sentido, hipofibrinogenemia mediada por una mutacion sin sentido, Afibrinogenemia mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de factor VII mediada por una mutacion sin sentido, agammaglobulinemia mediada por una mutacion sin sentido, trombocitopenia amegacariocftica mediada por una mutacion sin sentido, anemia diseritropoyetica de tipo II mediada por una mutacion sin sentido, Distrofia muscular de Duchenne y Becker mediada por una mutacion sin sentido, miopatfas centronucleares mediadas por una mutacion sin sentido, distrofia muscular de cintura o miopafta de Miyoshi mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Ullrich mediada por una mutacion sin sentido, atrofia muscular espinal mediada por una mutacion sin sentido, epidermolisis ampollar distrofica mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Hailey-Hailey mediada por una mutacion sin sentido, epidermolisis ampollar articular de Herlitz mediada por una mutacion sin sentido, y smdrome de Netherton mediado por una mutacion sin sentido.

3. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad genetica se elige entre las siguientes enfermedades geneticas: abetalipoproteinemia e hipobetalipoproteinemia familiar homocigotica mediadas por una mutacion sin sentido, smdrome de Alpers mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia de carbamoil fosfato sintetasa I mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad por almacenamiento de esteres de colesterol mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de citrina mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Dubin-Johnson mediado por una mutacion sin sentido, protoporfiria eritropoyetica mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de Factor V mediada por una mutacion sin sentido, Enfermedad del almacenamiento de glucogeno mediada por una mutacion sin sentido, Hemofilia A (Deficiencia de factor VIII) mediada por una mutacion sin sentido, Hemofilia B (Deficiencia de factor IX) mediada por una mutacion sin sentido, carcinoma hepatocelular mediado por una mutacion sin sentido, Porfiria hepatoeritropoyetica mediada por una mutacion sin sentido, paraplejias espasticas hereditarias mediadas por una mutacion sin sentido, hipobetalipoproteinemia mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia hereditaria de factor XI mediada por una mutacion sin sentido, Diabetes de la edad madura presentada en la juventud mediada por una mutacion sin sentido, anemia microcftica y deficiencia de hierro mediadas por una mutacion sin sentido, agotamiento de ADN mitocondrial mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de agotamiento de ADN mitocondrial mediado por una mutacion sin sentido, fenilcetonuria mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad del fftgado poliqrnstico mediada por una mutacion sin sentido, porfiria cutanea tarda mediada por una mutacion sin sentido, colestasis intrahepatica familiar progresiva mediada por una mutacion sin sentido, Enfermedad de Wilson mediada por una mutacion sin sentido, hipercolesterolemia autosomica dominante mediada por una mutacion sin sentido, Deficiencia de factor XII mediada por una mutacion sin sentido, Deficiencia de factor X mediada por una mutacion sin sentido, hipofibrinogenemia mediada por una mutacion sin sentido, Afibrinogenemia mediada por una mutacion sin sentido, y deficiencia de Factor VII mediada por una mutacion sin sentido.

4. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad genetica se elige entre las siguientes enfermedades geneticas: acidosis mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Alport mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Bardet-Biedl mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Birt-Hogg-Dube mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de Dent mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Gitelman mediado por una mutacion sin sentido, leiomiomatosis hereditaria y cancer de celulas renales mediados por una mutacion sin sentido, esferocitosis hereditaria mediada por una mutacion sin sentido, amaurosis congenita de Leber mediada por una mutacion sin sentido, intolerancia a la protema lisinurica mediada por una mutacion sin sentido, nefronoftisis mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad del rinon poliqrnstico mediada por una mutacion sin sentido, pseudohipoaldosteronismo mediado por una mutacion sin sentido, hipodisplasia renal mediada por una mutacion sin sentido, carcinoma de celulas renales con celulas claras esporadico mediado por una mutacion sin sentido, canceres de celulas renales papilares de tipo II mediados por una mutacion sin sentido, Smdrome Urofacial mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de von Hippel-Lindau mediada por una mutacion sin sentido, tumor de Wilms mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Alport ligado al cromosoma X mediado por una mutacion sin sentido, raquitismo hipofosfatemico ligado al cromosoma X mediado por una mutacion sin sentido, Nefropatfa hiperuricemica (enfermedad juvenil/de rinon qmstico medular) mediada por una mutacion sin sentido, Esclerosis tuberosa mediada por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico/smdrome nefrotico congenito mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico de tipo finlandes mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico 3 resistente a esteroides mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico/smdrome de Pierson de inicio temprano mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Denys-Drash mediado por una mutacion sin sentido, smdrome nefrotico/displasia inmuno-osea de Schimke mediado por una mutacion sin sentido, resistencia primaria a glucocorticoides mediada por una mutacion sin sentido, hipofosfatemia ligada al cromosoma X mediada por una mutacion sin sentido, hiperoxaluria primaria de tipo 1 mediada por una mutacion sin sentido, pseudohipoaldosteronismo de tipo 1 mediado por una mutacion sin sentido, y acidosis tubular renal proximal mediada por una mutacion sin sentido.

5. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad genetica se elige entre las siguientes enfermedades geneticas: cancer colorrectal mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia congenita de enteropeptidasa mediada por una mutacion sin sentido, fibrosis qmstica mediada por una mutacion sin sentido, Smdrome de Peutz-Jeghers hungaro mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Jervell y Lange-Nielsen mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Lynch mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de inclusiones en microvellosidades mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Peutz-Jeghers mediado por una mutacion sin sentido, y xantinuria mediada por una mutacion sin sentido.

6. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad genetica se elige entre las siguientes enfermedades geneticas: beta-talasemia mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Ehlers-Danlos mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de pulgar-pie equinovaro aducido mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Alagille mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Alstrom mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia de antitrombina mediada por una mutacion sin sentido, complejo de Carney mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Currarino mediado por una mutacion sin sentido, anemia de Diamond-Blackfan mediada por una mutacion sin sentido, protoporfiria eritropoyetica mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Fabry mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de Factor XlII mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Fanconi-Bickel mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de olor a pescado mediado por una mutacion sin sentido, telangiectasia hemorragica hereditaria mediada por una mutacion sin sentido, homocistinuria mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Joubert mediado por una mutacion sin sentido y trastornos relacionados, enfermedad de Krabbe mediada por una mutacion sin sentido, aciduria L-2-hidroxiglutarica mediada por una mutacion sin sentido, acidemia metilmalonica mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Niemann-Pick mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Peters plus mediado por una mutacion sin sentido, enfermedad de Townes-Brocks mediada por una mutacion sin sentido, enfermedad de Von Willebrand mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Wiskott-Aldrich mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Kabuki mediado por una mutacion sin sentido, smdrome de Chanarin-Dorfman mediado por una mutacion sin sentido, deficiencia de lecitina colesterol aciltransferasa/enfermedad de ojo de pez mediada por una mutacion sin sentido, smdrome de Marfan mediado por una mutacion sin sentido, mucopolisacaridosis mediada por una mutacion sin sentido, amiloidiosis mediada por una mutacion sin sentido, lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil tardfa mediada por una mutacion sin sentido, deficiencia de coenzima Q10 mediada por una mutacion sin sentido, trastornos de la biogenesis peroxisomal mediados por una mutacion sin sentido, trastornos de almacenamiento lisosomal mediados por una mutacion sin sentido, y acromatopsia mediada por una mutacion sin sentido.

7. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad genetica se elige entre las siguientes enfermedades geneticas: retinitis pigmentosa mediada por una mutacion sin sentido, Smdrome de Usher de Tipo 1C mediado por una mutacion sin sentido, epidermolisis ampollar distrofica mediada por una mutacion sin sentido, Enfermedad de Hailey-Hailey mediada por una mutacion sin sentido, epidermolisis ampollar articular de Herlitz mediada por una mutacion sin sentido, y smdrome de Netherton mediado por una mutacion sin sentido.

8. Una composicion farmaceutica para su uso en el tratamiento o la prevencion de una enfermedad genetica, siendo dicha enfermedad genetica una enfermedad mediada por una mutacion sin sentido, comprendiendo dicha composicion farmaceutica el compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 como molecula activa, y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.

9. La composicion farmaceutica para el uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que dicha composicion se administra a traves de inyeccion.

10. La composicion farmaceutica para el uso de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, que comprende ademas un agente capaz de mejorar la lectura a traves del codon de terminacion prematura de ARNm, proviniendo dicho codon de terminacion prematura de ARNm de la traduccion del gen que comprende la mutacion sin sentido.

11. La composicion farmaceutica para el uso de acuerdo con la reivindicación 10 en la que dicho agente es acido 3

[5-(2-fluorofenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico.

12. La composicion farmaceutica para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que dicha enfermedad genetica mediada por una mutacion sin sentido es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7.

13. Una combinacion de (i) un compuesto de fórmula (I):

o una sal, solvato, clatrato, hidrato o polimorfo del mismo, y (ii) acido 3-[5-(2-fluorofenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico.

14. Un metodo ex vivo para diagnosticar si un gen de un paciente alberga una mutacion sin sentido, comprendiendo dicho metodo las etapas de:

- incubar dichas celulas del paciente con un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 o una composicion farmaceutica como se define en la reivindicación 8;

- extraer los ARN y/o las protemas sintetizados de dichas celulas del paciente, en el que una cantidad aumentada de los ^a Rⁿ y/o las protemas purificados indica que el paciente alberga una mutacion sin sentido.