TW201625241A - 使用１，２，４－二唑苯甲酸之治療方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供治療、預防、改善或管理黏多糖病(nmMPS)疾病之方法，其包含向患有nmMPS之患者投與1,2,4-□二唑苯甲酸。特別地，本發明提供治療、預防、改善或管理MPS之方法。

Description

使用1,2,4- 二唑苯甲酸之治療方法

本申請案主張2014年6月6日申請之美國臨時申請案第62/009,100號之優先權，其出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。

本文提供治療、預防、改善或管理無意義突變介導之黏多糖病(nmMPS)疾病之方法，其包含向患有nmMPS之患者投與1,2,4-二唑苯甲酸。特定言之，本文提供治療、預防、改善或管理與無意義突變或過早終止密碼子相關之I型nmMPS病(例如nmMPS I：無意義突變介導之賀勒症候群(Hurler syndrome)、無意義突變介導之賀勒-沙伊症候群(Hurler-Scheie syndrome)或無意義突變介導之沙伊症候群(Scheie syndrome))之方法，其包含向患有與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I的患者投與1,2,4-二唑苯甲酸。

產生α-L-艾杜糖醛酸酶之基因中的無意義突變產生具有一系列嚴重性之無意義突變介導之黏多糖病疾病，包括(但不限於)無意義突變介導之賀勒症候群：MPS IH、無意義突變介導之賀勒-沙伊症候群：MPS IH/S或無意義突變介導之沙伊症候群：MPS IS(以前之MPS V)。一或多個無意義突變之存在可進一步產生一系列無意義突變介導之黏多糖病疾病，包括在產生以下蛋白質之基因中具有一或多個無意義突 變之黏多糖病疾病：i).艾杜糖醛硫酸酯酶，產生亨特症候群(Hunter syndrome)(MPS II)；ii).乙醯肝素硫酸醯胺酶，產生聖菲利波症候群(Sanfilippo syndrome)A(MPS IIIA，亦稱為硫酸醯胺酶缺乏症)；iii).N-乙醯基胺基葡糖苷酶(N-acetylglucosaminidase)，產生聖菲利波症候群B(MPS IIIB，亦稱為NAGLU缺乏症)；iv).肝素-α-胺基葡糖苷-N-乙醯基轉移酶(heparin-α-glucosaminide-N-acetyltransferase)，產生聖菲利波症候群C(MPS IIIC)；v).N-乙醯基葡糖胺-6-硫酸酯酶，產生聖菲利波症候群D(MPS IIID)；vi).半乳糖-6-硫酸-硫酸酯酶，產生莫奎症候群(Morquio syndrome)A(MPS IVA)；vii).β-半乳糖苷酶，產生莫奎症候群B(MPS IVB)；viii).N-乙醯基半乳糖胺-4-硫酸酯酶，產生馬洛特-拉米症候群(Maroteaux-Lamy syndrome)A(MPS VI，亦稱為ARSB缺乏症)；ix).β-葡糖醛酸酶，產生斯利症候群(Sly syndrome)(MPS VII，亦稱為GUSB缺乏症)；或x).玻尿酸酶，產生納托維症候群(Natowicz syndrome)：MPS IX(亦稱為玻尿酸酶缺乏症)。

特定言之，無意義突變介導之I型黏多糖病(亦即nmMPS I：無意義突變介導之賀勒症候群、無意義突變介導之賀勒-沙伊症候群或無意義突變介導之沙伊症候群)為由α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)之酶(EC3.2.1.76)活性不足或缺乏活性產生的慢性、進行性、多系統溶酶體儲存疾病(Campos D,Monaga M.Mucopolysaccharidosis type I：current knowledge on its pathophysiological mechanisms.Metabolic Brain Disease.2012；27(2)：121-129)。nmMPS I具有常染色體隱性遺傳模式(Muenzer J,Wraith JE,Clarke LA,International Consensus Panel on M,Treatment of Mucopolysaccharidosis I.Mucopolysaccharidosis I：management and treatment guidelines.Pediatrics.2009；123(1)：19-29)。黏多糖症狀在出生後不久出現且缺乏IDUA導致葡糖胺聚糖(GAG)、硫酸乙醯肝素(HS)及硫酸皮膚素(DS)在整個身體中積累，產生分佈廣泛 之細胞、組織及器官功能障礙。患有nmMPS I之兒童平均壽命一般為11.6歲，且具有嚴重身體及認知殘疾(Moore D,Connock MJ,Wraith E,Lavery C.The prevalence of and survival in Mucopolysaccharidosis I：Hurler,Hurler-Scheie and Scheie syndromes in the UK.Orphanet journal of rare diseases.2008；3：24)。nmMPS I具有兩個主要分類：衰減形式及嚴重形式，各形式中之症狀不同(Muenzer J,Wraith JE,Clarke LA,International Consensus Panel on M,Treatment of Mucopolysaccharidosis I.Mucopolysaccharidosis I：management and treatment guidelines.Pediatrics.2009；123(1)：19-29)。

本文提供治療、預防、改善或管理無意義突變介導之黏多糖病(nmMPS)疾病之方法，其包含向患有nmMPS疾病之患者投與1,2,4-二唑苯甲酸。特定言之，本文提供治療、預防、改善或管理與無意義突變或過早終止密碼子相關之無意義突變介導之I型nmMPS(nmMPS I：無意義突變介導之賀勒症候群、無意義突變介導之賀勒-沙伊症候群或無意義突變介導之沙伊症候群)之方法，其包含向患有與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I的患者投與1,2,4-二唑苯甲酸。

圖1(A及B)表明化合物1減少自同型接合無意義突變小鼠(稱為Idua-W402X(-/-)或Idua-W392X(-/-)小鼠)分離之小鼠胚胎纖維母細胞(MEF)中之組織葡糖胺聚糖(GAG)及劑量反應。用化合物1(1、2.5、5、10、20及40μg/mL)治療MEF 24小時。對照物包括來自野生型小鼠之MEF(+/+)及來自Idua-W402X(-/-)MEF之未治療MEF。圖1(A)描繪絕對GAG含量。圖1(B)描繪Idua-W402X(-/-)MEF中過量組織GAG減少之百分比，其藉由首先扣除來自野生型小鼠之MEF中量測之背景GAG含量接著相較於未治療同型接合MEF對照物計算GAG減少百分比來計 算。SD係指標準差。

圖2描繪具有0.1重量%至1.0重量%遞增劑量之化合物1血漿濃度。符號表示4隻小鼠之平均值±平均值之標準誤差。C_p係指血漿濃度且SEM係指平均值之標準誤差。

圖3描繪在用化合物1治療之後保持穩定之細胞總蛋白質濃度。治療野生型(+/+)及突變(-/-)MEF 24小時，化合物1濃度在0至40μg/mL範圍內，且測定總蛋白質濃度。

圖4描繪化合物1對自同型接合Idua-W392X(-/-)小鼠分離之MEF中之GAG含量的作用。在化合物1存在下分離及生長細胞24小時。治療之後，收集細胞且測定GAG含量及總蛋白質含量。結果呈現為ng GAG/mg總蛋白質。所有實驗一式三份地進行且將平均值用於圖形呈現。誤差條表示標準差。為了參考，自野生型(+/+)細胞測定之GAG含量由+/+標記。

圖5(A-F)描繪化合物1對GAG含量之作用。分離組織且測定GAG含量及總蛋白質含量。結果呈現為GAG/mg總蛋白質(ng)。誤差條表示標準差。圖5(A)腦，圖5(B)脾，圖5(C)心臟，圖5(D)肺，圖5(E)肝，圖5(F)腎。+/+：野生型或-/-：Idua-W392X。使用史都登氏t檢驗測定統計顯著性。

1.定義

如本文所用，術語「過早轉譯終止」係指將對應於胺基酸之密碼子改變為終止密碼子之突變結果。

如本文所用，術語「無意義介導之mRNA衰減」係指介導含過早轉譯終止密碼子之mRNA衰減之任何機制。在一個實施例中，無意義介導之mRNA衰減由DNA之無意義突變產生。

如本文所用，術語「過早終止密碼子(premature termination codon/premature stop codon)」係指在對應於胺基酸之密碼子應在之處出現終止密碼子。

如本文所用，術語「無意義突變」係指將對應於胺基酸之密碼子改變為終止密碼子之突變。在一個實施例中，無意義突變為出現於DNA中且接著轉錄成mRNA之突變。

如本文所用，術語「無意義抑止」係指過早轉譯終止及/或無意義介導之mRNA衰減之抑制或抑止。在一個實施例中，mRNA衰減由DNA之無意義突變產生。

如本文所用，術語「調節過早轉譯終止及/或無意義介導之mRNA衰減」係指在無意義抑止劑存在下上調基因表現。舉例而言，若希望提高由具有過早終止密碼子之基因編碼的缺陷蛋白質之產量，亦即准許通讀疾病基因之過早終止密碼子因此可出現mRNA之轉譯，則調節過早轉譯終止及/或無意義介導之mRNA衰減需要使用無意義抑止劑。

如本文所用，術語「活性劑」、「藥物」及「原料藥」係指本文提供之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽(在本文中統稱為「化合物1」)。

如本文所用，術語「劑量」意謂一次投與之活性劑之量。

如本文所用，術語「單位劑型」包括固體劑型，諸如錠劑、囊劑、膠囊、口含錠、分散體、散劑、顆粒或凝膠及其類似物；或液體劑型，諸如溶液、懸浮液、乳液或酏劑及其類似物；及可復水以提供此類液體劑型之固體形式，其中此類單位劑型適用於經口或非經腸向患者投與。

如本文所用，術語「給藥方案」及「劑量」意謂每時間單位給與之活性劑之量及投與之持續時間。

如本文所用，術語「個體」及「患者」可互換使用以指具有感覺及自主運動能力且其存在需要氧氣及有機食物之動物或任何活有機 體。非限制性實例包括人類、靈長類、馬類、豬類、牛類、兔類、鼠屬、鼠類、犬類及貓類物種之成員。在一些實施例中，個體為哺乳動物或溫血脊椎動物。在某些實施例中，個體為非人類動物。在特定實施例中，個體為人類。在某些實施例中，個體為胎兒、胚胎、嬰兒、兒童、青年或成人。在一個實施例中，已經由預篩選確定個體具有無意義突變。在另一實施例中，已經由基因預篩選確定患者具有之過早終止密碼子(亦即UAA、UGA或UAG)。

如本文所用，術語「有效量」在功能性通讀蛋白質之情形中係指對個體具有預防及/或治療效益之功能性通讀蛋白質之量。在特定實施例中，功能性通讀蛋白質之有效量為具有一種、兩種或更多種以下作用之蛋白質之量：(1)預防與無意義突變相關之nmMPS疾病之發作、發展及/或進展，預防一或多種與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之發作、發展及/或進展，(3)降低與無意義突變相關之nmMPS疾病之持續時間及/或嚴重性，(4)減少與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之數量，(5)降低一或多種與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之持續時間，(6)降低一或多種與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之嚴重性及(7)改善個體生活品質。nmMPS疾病症狀包括認知障礙、胖大舌、聽覺損失、發育延緩、交通性水腦、竇症狀(包括衰減形式之竇感染，及慢性反覆性鼻炎、鼻溢液，及嚴重形式之耳感染)、聽覺損失(包括衰減患者中較不嚴重之聽覺損失)、視覺損傷(包括角膜混濁及其他視覺症狀，包括周邊視覺損失及夜盲)、呼吸道表現、心臟表現、骨胳表現、牙齒表現、歸因於限制性肺病之嚴重呼吸功能不全、嚴重睡眠呼吸暫停、哮喘、扁桃體肥大、腺樣體肥大、氣管變窄、氣管組織過多、聲帶變厚、瓣膜疾病、心律不整、心肌病、充血性心臟衰竭、冠狀動脈疾病、肺部及全身性高血壓、肺原性心臟病、膠質異常、牙齒異常、牙釉質異常、齲齒頻繁、含齒囊腫 及膿腫。

如本文所用，術語「有效量」在投與本文所述化合物之情形中係指對個體具有預防及/或治療效益之化合物之量。在特定實施例中，有效量之本文所述之化合物具有一種、兩種或更多種以下作用：(1)預防與無意義突變相關之nmMPS疾病之發作、發展及/或進展，(2)預防一或多種與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之發作、發展及/或進展，(3)降低與無意義突變相關之nmMPS疾病之持續時間及/或嚴重性，(4)減少與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之數量，(5)降低一或多種與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之持續時間，(6)降低一或多種與與無意義突變相關之nmMPS疾病相關的症狀之嚴重性及/或(7)改善個體生活品質。有效量之本文所述化合物之實例提供於下文章節5.4中。

如本文所用，術語「功能性」在功能性通讀蛋白質之情形中係指蛋白質具有足夠之相應野生型蛋白質之功能以在由於編碼蛋白質之核酸序列(例如基因)中之突變(例如無意義突變)而不產生野生型蛋白質或產生不足量之野生型蛋白質之細胞或個體中具有有益作用。在一特定實施例中，功能性通讀蛋白質具有全長野生型蛋白質之一種、兩種、三種或三種以上功能。在某些實施例中，產生之功能性通讀蛋白質為功能性非野生型蛋白質。在某些實施例中，產生之功能性通讀蛋白質為功能性野生型蛋白質。在一些實施例中，產生之功能性非野生型蛋白質為全長的。在一些實施例中，產生之功能性野生型蛋白質為全長的。在其他實施例中，功能性非野生型蛋白質不為全長的。在其他實施例中，產生之功能性野生型蛋白質不為全長的。

如本文所用，術語「nmMPS疾病」係指直接或間接由基因中之無意義突變產生之疾病或病狀，其中該等無意義突變妨礙受感染細胞中野生型蛋白質之產生。在一nmMPS I之特定實施例中，基因為IDUA基 因。與IDUA基因中之無意義突變相關之MPS I涵蓋基因含有一個、兩個、三個或三個以上無意義突變之疾病。在一特定實施例中，產生α-L-艾杜糖醛酸酶之基因中之無意義突變產生具有一系列嚴重性之無意義突變介導之黏多糖病疾病，包括(但不限於)無意義突變介導之賀勒症候群：nmMPS IH、無意義突變介導之賀勒-沙伊症候群：nmMPS IH/S或無意義突變介導之沙伊症候群：nmMPS IS(以前之MPS V)。在其他實施例中，無意義突變在兩個、三個或三個以上(多個)基因(例如，含有產生一系列黏多糖病之一個、兩個、三個或三個以上無意義突變的基因)中。在此類特定實施例中，產生艾杜糖醛硫酸酯酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之亨特症候群：nmMPS II。在另一特定實施例中，產生乙醯肝素硫酸醯胺酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之聖菲利波症候群A：nmMPS IIIA(亦稱為硫酸醯胺酶缺乏症)。在另一特定實施例中，產生N-乙醯基胺基葡糖苷酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之聖菲利波症候群B：nmMPS IIIB(亦稱為NAGLU缺乏症)。在另一特定實施例中，產生肝素-α-胺基葡糖苷-N-乙醯基轉移酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之聖菲利波症候群C：nmMPS IIIC。在另一特定實施例中，產生N-乙醯基葡糖胺-6-硫酸酯酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之聖菲利波症候群D：nmMPS IIID。在另一特定實施例中，產生半乳糖-6-硫酸-硫酸酯酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之莫奎症候群A：nmMPS IVA。在另一特定實施例中，產生β-半乳糖苷酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之莫奎症候群B：nmMPS IVB。在另一特定實施例中，產生N-乙醯基半乳糖胺-4-硫酸酯酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之馬洛特-拉米症候群A：nmMPS VI(亦稱為ARSB缺乏症)。在另一特定實施例中，產生β-葡糖醛酸酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之斯利症候群：nmMPS VII(亦稱 為GUSB缺乏症)。在另一特定實施例中，產生玻尿酸酶之基因中之無意義突變產生無意義突變介導之納托維症候群：nmMPS IX(亦稱為玻尿酸酶缺乏症)。

如本文所用，「組合」在投與療法之情形中係指使用一種以上療法。使用術語「組合」不限制向患有疾病之個體投與療法之次序。在某些實施例中，向患有疾病之個體投與一或多種療法包括(但不限於)可在向曾患有、患有或易患疾病之個體投與第二治療之前(例如，1分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之前)、與其同時或在其之後(例如，1分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後)投與之第一療法。療法以某一次序且在某一時間間隔內向個體投與，使得本文所述之單位劑型可與另一療法共同起作用以提供比單獨投與該等療法增加之益處。

如本文所用，術語「管理(manage/managing/management)」係指患者由投與本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽之醫藥組合物得到的有益作用，該醫藥組合物不導致治療、預防或改善無意義突變介導之疾病。

如本文所用，術語「預防(prevent/preventing/prevention)」係指由向患有無意義突變介導之疾病之患者投與本文所提供之醫藥組合物(包含投與3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽)而預防患者體內此類疾病或其症狀之發作、復發、擴散或惡化(且因此治療或至少改善此類疾病)。由於與無意義突變相關之疾病具有遺傳基礎，因此可針對無意義突變之存在來篩選患者。當經由篩選確定患者具有無意義突變時，可向患者投與包含有效量之本文所提供之3-[5-(2-氟-苯 基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽的有效量之醫藥組合物來預防疾病或其症狀之發作、復發、擴散或惡化。

如本文中所用，術語「治療(treat/treating/treatment)」係指根除或改善疾病或與疾病相關之症狀。在某些實施例中，此類術語係指由向患有疾病之患者投與本文所提供之包含本文所提供之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽的醫藥組合物來使患者體內此類疾病之擴散或惡化降至最小。當確定患者患有與無意義突變相關之疾病時，可向患者投與包含有效量之本文所提供之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽的有效量之醫藥組合物來根除、改善疾病或其症狀，使其擴散或惡化降至最小。

如本文所用，術語「約」或「大致」意謂如由一般熟習此項技術者所測定之特定值的可接受誤差，其部分取決於如何量測或測定該值。在某些實施例中，術語「約」或「大致」意謂在1、2、3或4個標準差內。在某些實施例中，術語「約」或「大致」意謂在給定值或範圍之50%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.05%內。

2.化合物

用於製備本文所提供之醫藥組合物及鹽之化合物為3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸，一般亦稱為阿塔路壬(ataluren)，其具有式(I)之結構：

可根據美國專利第6,992,096號及美國專利第7,678,922號中描述之方法製備式(I)化合物，該等專利中每一者之揭示內容以全文引用之 方式併入本文中。或者，式(I)化合物亦可根據熟習此項技術者基於本文之教示顯而易知之其他方法製備。所有此類替代方法意欲包括於本文所述方法之範圍內。本文所提供之式(I)化合物及鹽統稱為「化合物1」。

在一個實施例中，用於本文所提供之醫藥組合物、製程及方法之化合物1為游離酸。在一個實施例中，游離酸為固體。在另一實施例中，固體游離酸為美國專利第7,863,456號中描述之結晶形式，該專利之揭示內容以全文引用之方式併入本文中。在另一實施例中，固體游離酸為結晶形式A。在另一實施例中，固體游離酸為結晶形式B。式(I)化合物之此等固體形式亦可根據美國專利第7,863,456號中描述之方法製備，該專利之揭示內容以全文引用之方式併入本文中。或者，式(I)化合物之固體形式亦可根據熟習此項技術者基於本文之教示顯而易知之其他方法製備。

在另一實施例中，式(I)化合物之游離酸為醫藥學上可接受之溶劑合物。在一個實施例中，游離酸為水合物。在另一實施例中，式(I)化合物為醫藥學上可接受之無水形式。在另一實施例中，式(I)化合物之游離酸為醫藥學上可接受之共晶體形式，諸如晶籠化合物或與環糊精形成之錯合物。

在另一實施例中，用於本文所提供之醫藥組合物、製程及方法之化合物1為式(I)化合物之醫藥學上可接受之游離酸。在另一實施例中，用於本文所提供之醫藥組合物、製程及方法之化合物1為式(I)化合物之醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，用於本文所提供之醫藥組合物、製程及方法之化合物1為式(I)化合物之醫藥學上可接受之無水游離酸或鹽。

3.鹽形式

在某些實施例中，本文所提供之方法包含使用化合物1之鹽形 式，包括選自L-精胺酸、L-組胺酸、L-離胺酸、N-甲基葡糖胺、甲醇鎂、氫氧化鉀、氫氧化鈉或胺基丁三醇之鹽(2015年3月5日申請之PCT申請案第PCT/US2015/18889號，其以全文引用之方式併入本文中)。更特定言之，本文所提供之方法包含使用選自L-離胺酸、氫氧化鈉及胺基丁三醇之化合物1之鹽形式。

4.醫藥組合物

本文所提供之方法中可使用包含有效量化合物1之醫藥組合物及單一單位劑型。個別劑型可適用於經口、經皮、經黏膜(包括(但不限於)舌下、經頰、經直腸、經鼻或經陰道)或非經腸(包括(但不限於)皮下、肌內、動脈內、腹膜內、鞘內、室內、尿道內、胸骨內、顱內、滑膜內、膀胱內或靜脈內)或經眼投與。較佳醫藥組合物及單一單位劑型適用於經口投與。

在某些實施例中，醫藥組合物包含約0.1%至約99%、約5%至約90%、約5%至約50%、約10%至約40%、約20%至約30%、約0.1%至約5%、約0.1%至約2.5%、約0.1%至約1%或約0.25%至約0.5重量%之化合物1。在某些實施例中，醫藥組合物包含約0.1%、約0.25%、約0.5%、約1%、約2%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90重量%之化合物1。在某些實施例中，醫藥組合物包含約0.25%、約0.5%或約1重量%之化合物1。

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約1mg至約5,000mg、約10mg至約2,000mg、約50mg至約1,000mg、約100mg至約1,000mg或約100mg至約500mg之化合物1。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約125mg、約200mg、約325mg、約400mg或約500mg之化合物1。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約120mg至約130mg、約195mg至約205mg、約320mg至約330mg、約395mg 至約405mg或約495mg至約505mg之化合物1。

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中之化合物1為本文所提供之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸之游離酸或3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸之鹽。

本文所提供之醫藥組合物可以單位劑型或多次劑型提供。如本文所用，單位劑型係指適於使用此項技術中已知之封裝向人類及動物個體投與之物理離散單位。各單位劑量含有預定量足以產生所要治療作用之活性成份，其與所需醫藥載劑或賦形劑締合。單位劑型之實例包括(但不限於)個別封裝之封包、藥囊或瓶或滴管。單位劑型可以其分數份或倍數份投與。多次劑型為複數個封裝於待以分離或組合單位劑型投與之單一容器中的相同單位劑型。多次劑型之實例包括顆粒劑或散劑之封包或藥囊，錠劑或膠囊之小瓶或瓶，或以流體盎司、品脫或加侖為單位用於藉助於滴管非經腸、經口或經眼投與之液體溶液之瓶。

本文所提供之醫藥組合物可在某一時段內以分次劑量投與。應理解治療之精確劑量及持續時間可隨所治療患者之年齡、體重及病狀變化，且可使用已知測試方案憑經驗，或由活體內或活體外測試或診斷資料外推法，或藉由觀測某些臨床因素來確定。另外應理解，對於任何特定個體，可根據個體需要及投與或監督投與醫藥組合物之人員的專業判斷隨時間調節特定劑量方案。

4.1局部用調配物

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度提高之微粒化(micronized)形式之化合物1。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度及/或溶解率提高之奈米粒子形式之化合物1。

在特定實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度提高之微粒化形式之化合物1，其中>90%化合物1粒子之直徑(D₉₀值)在約1-10微米之間。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度提高 之微粒化形式之化合物1，其D₉₀值為約10微米、約9微米、約8微米、約7微米、約6微米、約5微米、約4微米、約3微米、約2微米或約1微米。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度及/或溶解率提高之微粒化形式之化合物1，其D₉₀值在約1-5微米之間。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度及/或溶解率提高之微粒化形式之化合物1，其D₉₀值為約5微米、約4微米、約3微米、約2微米或約1微米。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含溶解度提高之奈米粒子形式之化合物1。在特定實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含奈米粒子形式之化合物1，其中>90%化合物1粒子之D₉₀值為約0.1微米、約0.09微米、約0.08微米、約0.07微米、約0.06微米、約0.05微米、約0.04微米、約0.03微米、約0.02微米或約0.01微米。

4.2經口調配物

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物調配用於經口投與。在某些實施例中，用於經口投與之本文所提供之醫藥組合物以固體、半固體或液體劑型提供用於經口投與。如本文所用，經口投與亦包括經頰、經舌及舌下投與。適合經口劑型包括(但不限於)錠劑、舌下或經頰薄膜(亦即速融劑)、咀嚼錠劑、發泡錠劑、微錠劑、膠囊、丸劑、條、糖衣錠、口含錠、片劑、扁囊劑、丸粒、藥用口嚼錠、散裝散劑或顆粒劑、發泡或非發泡散劑或顆粒劑、經口噴霧、溶液、乳液、懸浮液、粉片、撒劑、酏劑及糖漿劑。除活性成份以外，醫藥組合物可含有一或多種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑，包括(但不限於)黏合劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、濕潤劑、界面活性劑、潤滑劑、滑動劑、pH調節劑、著色劑、染料遷移抑制劑、甜味劑、調味劑、乳化劑、懸浮及分散劑、防腐劑、溶劑、溶劑化劑、非水性液體、有機酸及二氧化碳源。

黏合劑或粒化劑賦予錠劑內聚性以確保錠劑在壓縮後保持完 整。適合黏合劑或粒化劑包括(但不限於)澱粉，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉及預膠凝澱粉(例如STARCH 1500)；明膠；糖，諸如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糖蜜及乳糖；天然及合成膠，諸如阿拉伯膠、褐藻酸、海藻酸鹽、鹿角菜(Irish moss)提取物、潘沃膠(panwar gum)、哥地膠(ghatti gum)、車前子殼(isabgol husk)之膠漿、羧甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、維格姆(Veegum)、落葉松阿拉伯半乳聚糖(larch arabogalactan)、粉末狀黃蓍及瓜爾膠；纖維素，諸如乙基纖維素、乙酸纖維素、羧甲基纖維素(CMC)、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)；微晶纖維素，諸如AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105(FMC Corp.,Marcus Hook,PA)；及其混合物。適合填充劑包括(但不限於)滑石、碳酸鈣、微晶纖維素、粉末狀纖維素、葡萄糖結合劑、高嶺土、甘露糖醇、矽酸、山梨糖醇、澱粉、預膠凝澱粉及其混合物。

適合稀釋劑包括(但不限於)磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、山梨糖醇、蔗糖、肌醇、纖維素、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、無水澱粉及粉末狀糖。當以足夠量存在時，某些稀釋劑(諸如甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、蔗糖及肌醇)可賦予一些壓縮錠劑准許藉由咀嚼在口中崩解之特性。此類壓縮錠劑可用作咀嚼錠。

適合崩解劑包括(但不限於)瓊脂；膨潤土；纖維素，諸如甲基纖維素及羧甲基纖維素；木材產品；天然海綿；陽離子交換樹脂；褐藻酸；膠，諸如瓜爾膠及維格姆HV；柑桔渣；交聯纖維素，諸如交聯羧甲纖維素；交聯聚合物，諸如交聯聚維酮；交聯澱粉；碳酸鈣；微晶纖維素，諸如羥基乙酸澱粉鈉；波拉克林鉀；澱粉，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、木薯澱粉及預膠凝澱粉；黏土；對準劑；及其混合物。 本文所提供之醫藥組合物可含有約0.5%至約15%或約1%至約5重量%之崩解劑。

適合潤滑劑包括(但不限於)硬脂酸鈣；硬脂酸鎂；礦物油；輕質礦物油；甘油；山梨糖醇；甘露糖醇；二醇，諸如二十二酸甘油酯及聚乙二醇(PEG)；硬脂酸；月桂基硫酸鈉；滑石；氫化植物油，包括花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；硬脂酸鋅；油酸乙酯；月桂酸乙酯；瓊脂；澱粉；石松；二氧化矽或矽膠，諸如AEROSIL^® 200(W.R.Grace Co.，Baltimore，MD)及CAB-O-SIL^®(Boston，MA之Cabot Co.)；及其混合物。本文所提供之醫藥組合物可含有約0.1%至約5重量%之潤滑劑。

適合滑動劑包括(但不限於)膠態二氧化矽、CAB-O-SIL^®(Boston,MA之Cabot Co.)及無石棉滑石。適合著色劑包括(但不限於)經批准、經檢定之水溶性FD&C染料及懸浮於水合氧化鋁上之水不溶性FD&C染料及其色澱(color lake)及混合物中之任一者。色澱為水溶性染料吸附至重金屬水合氧化物從而產生染料之不可溶形式的組合。適合調味劑包括(但不限於)自植物(諸如果實)提取之天然調味劑，及產生合意口感之化合物(諸如胡椒薄荷及柳酸甲酯)之合成摻合物。適合甜味劑包括(但不限於)蔗糖、乳糖、甘露糖醇、糖漿、甘油及人工甜味劑，諸如糖精及阿斯巴甜糖。適合乳化劑包括(但不限於)明膠、阿拉伯膠、黃蓍、膨潤土及界面活性劑，諸如聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯(TWEEN^® 20)、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯80(TWEEN^® 80)及油酸三乙醇胺。適合懸浮及分散劑包括(但不限於)羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethylcellulose)、果膠、黃蓍、維格姆、阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉(sodium carbomethylcellulose)、羥丙基甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。適合防腐劑包括(但不限於)甘油、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸添加劑、苯甲酸鈉及乙醇。適合濕潤 劑包括(但不限於)單硬脂酸丙二醇酯、單油酸脫水山梨糖醇酯、單月桂酸二甘醇酯及聚氧化乙烯月桂基醚。適合溶劑包括(但不限於)甘油、山梨糖醇、乙醇及糖漿。適用於乳液中之非水性液體包括(但不限於)礦物油及棉籽油。適合有機酸包括(但不限於)檸檬酸及酒石酸。適合二氧化碳源包括(但不限於)碳酸氫鈉及碳酸鈉。

應理解，許多載劑及賦形劑可發揮複數種功能，即使在同一調配物內。

本文提供為經口投與之錠劑的醫藥組合物可提供為壓縮錠劑、錠劑研磨物、咀嚼口含錠、快速溶解錠劑、多重壓縮錠劑或腸衣錠劑、糖衣或膜衣錠劑。腸衣錠劑為壓縮錠劑，其包覆有抵抗胃酸作用但在腸中溶解或崩解之物質，由此保護活性成份不受胃之酸性環境影響。腸衣包括(但不限於)脂肪酸、脂肪、柳酸苯酯、蠟、蟲膠、氨化蟲膠及鄰苯二甲酸乙酸纖維素。糖衣錠劑為由糖衣包裹之壓縮錠劑，其可有利地遮蓋令人不快之口味或氣味且保護錠劑免於氧化。膜衣錠劑為壓縮錠劑，其由水溶性材料之薄層或薄膜包覆。膜衣包括(但不限於)羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙二醇4000及鄰苯二甲酸乙酸纖維素。膜衣賦予與糖衣相同之一般特性。多重壓縮錠劑為藉由一個以上壓縮週期製造之壓縮錠劑，包括分層錠劑及壓縮包衣或乾燥包衣錠劑。

錠劑劑型可由呈粉末狀、結晶或顆粒形式之活性成份單獨或與一或多種本文所述載劑或賦形劑(包括黏合劑、崩解劑、控制釋放聚合物、潤滑劑、稀釋劑及/或著色劑)組合來製備。調味劑及甜味劑尤其可用於形成咀嚼錠及口含錠。

本文所提供之用於經口投與之醫藥組合物可提供為軟或硬膠囊，其可由明膠、甲基纖維素、澱粉或海藻酸鈣製造。硬明膠膠囊(亦稱為乾填膠囊(DFC))由兩部分組成，一部分在另一部分上滑動，由此 完全封閉活性成份。軟彈性膠囊(SEC)為軟球狀殼(諸如明膠殼)，其藉由添加甘油、山梨糖醇或類似多元醇而塑化。軟明膠殼可含有防腐劑以防止微生物生長。適合防腐劑為如本文所述之防腐劑，包括對羥苯甲酸甲酯及對羥苯甲酸丙酯及山梨酸。本文所提供之液體、半固體及固體劑型可囊封於膠囊中。適合液體及半固體劑型包括碳酸伸丙酯、植物油或甘油三酯中之溶液及懸浮液。膠囊亦可如熟習此項技術者所知加以包覆以改良或維持活性成份之溶解。

本文所提供之用於經口投與之醫藥組合物可以液體及半固體劑型提供，包括乳液、溶液、懸浮液、酏劑及糖漿。乳液為兩相系統，其中一種液體以小球體形式分散於另一液體中，其可為水包油或油包水。乳液可包括醫藥學上可接受之非水性液體或溶劑、溶劑化劑或乳化劑及防腐劑。懸浮液可包括醫藥學上可接受之懸浮劑及防腐劑。水溶醇溶液可包括醫藥學上可接受之縮醛，諸如低碳烷基醛之二(低碳烷基)縮醛，例如乙醛二乙醇縮乙醛；及具有一或多個羥基之水可混溶性溶劑，諸如丙二醇及乙醇。酏劑為透明甜味水醇溶液。糖漿為糖(例如蔗糖)之濃縮水溶液且亦可含有防腐劑。對於例如液體劑型，聚乙二醇中之溶液可用足量之醫藥學上可接受之液體載劑(例如水)稀釋以方便地量測用於投藥。

其他有用液體及半固體劑型包括(但不限於)含有本文所提供之活性成份及二烷基化單或聚伸烷基二醇之劑型，後者包括1,2-二甲氧甲烷、二乙二醇二甲醚、三乙二醇二甲醚、四乙二醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550及750係指聚乙二醇之大致平均分子量。此等調配物可進一步包含一或多種抗氧化劑，諸如丁基化羥基甲苯(BHT)、丁基化羥基甲氧苯(BHA)、沒食子酸丙酯、維生素E、乙二胺四乙酸(EDTA)、對苯二酚、羥基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、腦磷脂、抗壞血酸、蘋果酸、山梨糖 醇、磷酸、亞硫酸氫鹽、偏亞硫酸氫鈉、硫二丙酸及其酯及二硫代胺基甲酸鹽。

本文所提供之用於經口投與之醫藥組合物亦可以脂質體、微胞、微球體或奈米系統形式提供。

本文所提供之用於經口投與之醫藥組合物可提供為待復水成液體劑型之非發泡或發泡錠劑或顆粒劑及散劑。用於非發泡顆粒劑或散劑之醫藥學上可接受之載劑及賦形劑可包括稀釋劑、甜味劑及濕潤劑。用於發泡顆粒劑或散劑之醫藥學上可接受之載劑及賦形劑可包括有機酸及二氧化碳源。

在某些實施例中，醫藥組合物調配為固體口服劑型。在某些實施例中，醫藥組合物調配為液體口服劑型。在某些實施例中，單位劑型在混合於醫藥學上可接受之液體或半固體溶劑化劑中之後提供為懸浮液，該溶劑化劑包括(但不限於)水、牛奶、碳酸化飲料、汁液、果汁、果汁潘趣、蘋果糊、優格、布丁、霜淇淋、嬰兒食品、嬰兒配方乳品或基於大豆或穀物之產品。

在某些實施例中，本文提供醫藥組合物，其包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種其他醫藥學上可接受之賦形劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。在另一實施例中，一或多種賦形劑係選自由以下組成之群：聚右旋糖、甘露糖醇、泊洛沙姆、聚乙二醇、羥乙基纖維素、交聯聚維酮、人工調味劑及硬脂酸鎂。在某些實施例中，人工調味劑為人工香草香料。

本文另外提供醫藥組合物，其包含約25重量%之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽；約1重量% 之膠態二氧化矽；及一或多種其他醫藥學上可接受之賦形劑。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種選自以下之賦形劑：聚右旋糖、泊洛沙姆(例如泊洛沙姆407)、聚乙二醇(例如聚乙二醇3350)、甘露糖醇、羥乙基纖維素、人工香草調味劑、交聯聚維酮、膠態二氧化矽及硬脂酸鎂(例如，來源於植物)。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種選自以下之賦形劑：懸浮劑、亦可提供味覺遮蔽之結合劑、界面活性劑、崩解劑及其他可存在之賦形劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。在另一實施例中，3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽以諸如約25重量%之量存在。在另一實施例中，一或多種賦形劑係選自由以下組成之群：聚右旋糖、甘露糖醇、泊洛沙姆、聚乙二醇、羥乙基纖維素、交聯聚維酮、人工香草香料及硬脂酸鎂。在另一實施例中，一或多種賦形劑(及其在總調配物重量中之比例)係選自由以下組成之群：懸浮劑，諸如約26重量%之Litesse® Ultra[精製聚右旋糖]；結合劑，諸如約26重量%之甘露糖醇；界面活性劑，諸如約10.0重量%之聚乙二醇3350及約4重量%之Lutrol®微F127[泊洛沙姆407散劑]；崩解劑，諸如約5重量%之交聯聚維酮；及其他賦形劑，各小於約2重量%，諸如卡博特(cab-o-sil)、羥乙基纖維素、約1重量%之硬脂酸鎂[非牛類]及約1重量%之膠態二氧化矽。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約25重量%之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約26重量%之聚右旋糖、約26重量%之甘露糖醇、約3重量%之泊洛沙姆、約10重 量%之聚乙二醇、約2重量%之羥乙基纖維素、約5重量%之交聯聚維酮、約1重量%之人工香草香料、約1重量%之膠態二氧化矽及約1重量%之硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約120mg至約1005mg範圍內之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約133mg至約1030mg範圍內之聚右旋糖、約137mg至約901mg範圍內之甘露糖醇、約19mg至約147mg範圍內之泊洛沙姆、約52mg至約402mg範圍內之聚乙二醇、約7mg至約59mg範圍內之羥乙基纖維素、約26mg至約201mg範圍內之交聯聚維酮、約3mg至約29mg範圍內之人工香草香料、約5mg至約39mg範圍內之膠態二氧化矽及約5mg至約39mg範圍內之硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約130mg 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約133mg聚右旋糖、約137mg甘露糖醇、約19mg泊洛沙姆、約52mg聚乙二醇、約7mg羥乙基纖維素、約26mg交聯聚維酮、約3mg人工香草香料、約5mg膠態二氧化矽及約5mg硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約205mg 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約210mg聚 右旋糖、約216mg甘露糖醇、約30mg泊洛沙姆、約82mg聚乙二醇、約12mg羥乙基纖維素、約41mg交聯聚維酮、約6mg人工香草香料、約8mg膠態二氧化矽及約8mg硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約330mg 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約338mg聚右旋糖、約348mg甘露糖醇、約48mg泊洛沙姆、約132mg聚乙二醇、約19mg羥乙基纖維素、約66mg交聯聚維酮、約9mg人工香草香料、約13mg膠態二氧化矽及約13mg硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約405mg 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約415mg聚右旋糖、約427mg甘露糖醇、約59mg泊洛沙姆、約162mg聚乙二醇、約24mg羥乙基纖維素、約81mg交聯聚維酮、約12mg人工香草香料、約16mg膠態二氧化矽及約16mg硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約505mg 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約518mg聚右旋糖、約453mg甘露糖醇、約74mg泊洛沙姆、約202mg聚乙二醇、約30mg羥乙基纖維素、約101mg交聯聚維酮、約15mg人工香草香料、 約20mg膠態二氧化矽及約20mg硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

本文進一步提供醫藥組合物，其包含約1005mg 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽、約1030mg聚右旋糖、約901mg甘露糖醇、約147mg泊洛沙姆、約402mg聚乙二醇、約59mg羥乙基纖維素、約201mg交聯聚維酮、約29mg人工香草香料、約39mg膠態二氧化矽及約39mg硬脂酸鎂。在一個實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在一個實施例中，醫藥組合物調配為顆粒劑。

在某些實施例中，單位劑型包含約35mg至約5,600mg化合物1、約35mg至約2800mg化合物1、約35mg至約1,400mg化合物1、約125mg至約1,000mg化合物1、約250mg至約1,000mg化合物1、約325mg至約1,000mg化合物1或約500mg至約1,000mg化合物1。

在某些實施例中，單位劑型包含約35mg、約50mg、約70mg、約100mg、約125mg、約140mg、約175mg、約200mg、約250mg、約280mg、約325mg、約350mg、約400mg、約450mg、約500mg、約560mg、約700mg、約750mg、約1,000mg、約1,400mg、約2800mg或約5600mg化合物1。

在某些實施例中，醫藥組合物調配為散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為微粒化散劑。在一個實施例中，醫藥組合物調配為奈米粒子。在另一實施例中，本文所提供之醫藥組合物調配為顆粒劑。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物封裝於封包或藥囊中。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物封裝於熱密封層合鋁封包或 藥囊中。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物封裝於防止兒童開啟之封包或藥囊中。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物封裝於封包或藥囊中，其包含聚對苯二甲酸乙二酯、聚乙烯、鋁箔、黏著劑及密封膜之層。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物封裝於瓶中，包括(但不限於)高密度聚乙烯(HDPE)瓶。

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物調配為用於復水之顆粒劑。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物調配為用於復水為口服懸浮液之顆粒劑。

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物藉由與醫藥學上可接受之液體或半固體溶劑化劑混合為懸浮液來在投與之前復水，該溶劑化劑包括(但不限於)水、牛奶、碳酸化飲料、汁液、果汁、果汁潘趣、蘋果糊、優格、布丁、霜淇淋、嬰兒食品或嬰兒配方乳品或基於大豆或穀物之產品。

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物藉由與水混合為懸浮液來在投與之前復水。在一個實施例中，化合物1之125mg單位劑量調配物藉由向含化合物1之瓶中直接添加至少約5mL水來復水，以在懸浮液總體積中獲得至少約25mg/mL之標稱濃度。在另一實施例中，化合物1之250mg單位劑量調配物藉由向含化合物1之瓶中直接添加至少約10mL水來復水，以在懸浮液總體積中獲得至少約25mg/mL之標稱濃度。在另一實施例中，化合物1之500mg單位劑量調配物藉由向含化合物1之瓶中直接添加至少約20mL水來復水，以在懸浮液總體積中獲得至少約25mg/mL之標稱濃度。在另一實施例中，化合物1之1000mg單位劑量調配物藉由向含化合物1之瓶中直接添加至少約40mL水來復水，以在懸浮液總體積中獲得至少約25mg/mL之標稱濃度。

在其他實施例中，含本文所提供之醫藥組合物之單位劑型僅在劑量製備時打開。各單位劑型之全部內容物與液體或半固體溶劑化劑混 合為懸浮液，其中液體為至少30mL(1盎司)或半固體為至少3湯匙。所製備劑量應在投與之前充分混合。液體或半固體溶劑化劑之量可基於患者偏好增加。

在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含呈游離酸或醫藥學上可接受之鹽形式的化合物1，其中醫藥學上可接受之鹽為鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽、胺基丁三醇鹽、L-離胺酸鹽、L-精胺酸鹽、N-甲基葡糖胺鹽或L-組胺酸鹽。

4.3非經腸調配物及投與

包含化合物1之本文所提供之醫藥組合物可非經腸藉由注射、輸注或植入投與，用於局部或全身投藥。如本文所用，非經腸投與包括(但不限於)靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內、室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌內、滑膜內、膀胱內及皮下投與。

本文所提供之用於非經腸投與之醫藥組合物可調配成適用於非經腸投與之任何劑型，包括(但不限於)溶液、懸浮液、乳液、微胞、脂質體、微球體、奈米系統，及適於注射前於液體中形成溶液或懸浮液之固體形式。可根據熟習醫藥科學技術者已知之習知方法製備此等劑型(參見Remington：The Science and Practice of Pharmacy，同上)。

意欲非經腸投與之醫藥組合物可包括一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑，包括(但不限於)水性媒劑、水可混溶性媒劑、非水性媒劑、抗微生物生長之抗微生物劑或防腐劑、穩定劑、溶解度增強劑、等張劑、緩衝劑、抗氧化劑、局部麻醉劑、懸浮劑及分散劑、潤濕劑或乳化劑、錯合劑、鉗合劑或螯合劑、低溫保護劑、凍乾保護劑、增稠劑、pH調節劑及惰性氣體。

適合水性媒劑包括(但不限於)水、鹽水、生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、氯化鈉注射液、林格氏注射液(Ringers injection)、等張右旋糖注射液、無菌水注射液、右旋糖及乳酸(lactated)林格氏注射液。 適合非水性媒劑包括(但不限於)植物來源之不揮發性油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄欖油、花生油、薄荷油、紅花油、芝麻油、大豆油、氫化植物油、氫化大豆油，及椰子油之中鏈三酸甘油酯，及棕櫚籽油(palm seed oil)。適合水可混溶性媒劑包括(但不限於)乙醇、1,3-丁二醇、液體聚乙二醇(例如聚乙二醇300及聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯啶酮、N,N-二甲基乙醯胺及二甲亞碸。

適合抗微生物劑或防腐劑包括(但不限於)酚類、甲酚類、汞劑、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯紮氯銨(例如苄索氯銨)、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯及山梨酸。適合等張劑包括(但不限於)氯化鈉、甘油及右旋糖。適合緩衝劑包括(但不限於)磷酸鹽及檸檬酸鹽。適合抗氧化劑為如本文所述之抗氧化劑，包括亞硫酸氫鹽及偏亞硫酸氫鈉。適合局部麻醉劑包括(但不限於)鹽酸普魯卡因。適合懸浮劑及分散劑為如本文所述之懸浮劑及分散劑，包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。適合乳化劑為本文所述之乳化劑，包括聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯80及油酸三乙醇胺。適合鉗合劑或螯合劑包括(但不限於)EDTA。適合pH調節劑包括(但不限於)氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸及乳酸。適合錯合劑包括(但不限於)環糊精，包括α-環糊精、β-環糊精、羥丙基-β-環糊精、磺基丁醚-β-環糊精及磺基丁醚7-β-環糊精(CAPTISOL^®,CyDex,Lenexa,KS)。

當本文所提供之醫藥組合物調配用於多劑量投與時，多劑量非經腸調配物必須含有抑制細菌或抑制真菌濃度之抗微生物劑。如此項技術中所已知及實施，所有非經腸調配物須為無菌的。

在一個實施例中，用於非經腸投與之醫藥組合物提供為即用型無菌溶液。在另一實施例中，醫藥組合物提供為在使用之前用媒劑復水之無菌乾燥可溶產品，包括凍乾散劑及皮下錠劑。在另一實施例中， 醫藥組合物提供為即用型無菌懸浮液。在另一實施例中，醫藥組合物提供為在使用前用媒劑復水之無菌乾燥不可溶產品。在另一實施例中，醫藥組合物提供為即用型無菌乳液。

本文所提供之用於非經腸投與之醫藥組合物可調配為立即釋放或修改釋放劑型，包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋放、控制釋放、靶向釋放及程式化釋放形式。

本文所提供之用於非經腸投與之醫藥組合物可調配為懸浮液、固體、半固體或搖溶性液體，用於以植入儲槽形式投藥。在一個實施例中，本文所提供之醫藥組合物分散於由外部聚合膜包圍之固體內部基質中，該外部聚合膜在體內不可溶，但允許醫藥組合物中之活性成份以滲透或離子方式擴散。

適合內部基質包括(但不限於)聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、塑化或非塑化聚氯乙烯、塑化耐綸、塑化聚對苯二甲酸乙二酯、天然橡膠、聚異戊二烯、聚異丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚矽氧橡膠、聚二甲基矽氧烷、聚矽氧碳酸酯共聚物、親水性聚合物(諸如丙烯酸及甲基丙烯酸之酯之水凝膠)、膠原蛋白、交聯聚乙烯醇及交聯部分水解聚乙酸乙烯酯。

適合外部聚合膜包括(但不限於)聚乙烯，聚丙烯，乙烯/丙烯共聚物，乙烯/丙烯酸乙酯共聚物，乙烯/乙酸乙烯酯共聚物，聚矽氧橡膠，聚二甲基矽氧烷，氯丁橡膠，氯化聚乙烯，聚氯乙烯，氯乙烯與乙酸乙烯酯、偏二氯乙烯、乙烯及丙烯之共聚物，離聚物聚對苯二甲酸乙二酯，丁基橡膠表氯醇橡膠，乙烯/乙烯醇共聚物，乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物，及乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。

4.4粒徑

本文提供體積加權平均直徑D[4,3]為約2μm至約12μm之化合物1之微粒化形式。本文亦提供表面加權平均直徑D[3,2]為約1μm至約3 μm之化合物1之微粒化形式。本文進一步提供D₉₀粒徑在約5μm至約26μm範圍內、D₅₀粒徑在約1μm至約6μm範圍內、D₁₀粒徑在約0.1μm至約1.5μm範圍內之化合物1之形式。

4.5套組

本文所提供之醫藥組合物可提供為使用熟習此項技術者熟知之封裝材料之製品。醫藥封裝材料之實例包括(但不限於)泡殼包裝、瓶、封包、藥囊、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、滴管及適用於所選調配物及預期投與及治療模式之任何封裝材料。

本文提供在醫學從業者使用時可簡化向個體投與適量活性成份的套組。在某些實施例中，本文所提供之套組包括容器及本文所提供之醫藥調配物之劑型及其使用說明書。在某些實施例中，套組包括之說明書對投與化合物1之給藥量及/或給藥方案提供指導。

在某些實施例中，套組包括包含本文所提供之醫藥調配物之劑型的容器，容器中包含一或多種本文所述之其他治療劑。

本文所提供之套組可進一步包括用於投與活性成份之裝置。此類裝置之實例包括(但不限於)注射器、無針注射器、滴液袋、貼片、滴管及吸入器。

本文所提供之套組可進一步包括可用於投與活性成份之醫藥學上可接受之媒劑。舉例而言，若活性成份以須復水用於非經腸投與之固體形式提供，則套組可包含適合媒劑之密封容器，其中活性成份可溶解以形成適用於非經腸投與之粒子自由無菌溶液或可復水為用於經口投與之懸浮液。醫藥學上可接受之媒劑之實例包括(但不限於)：水性媒劑，包括(但不限於)注射用水USP、氯化鈉注射液、林格氏注射液、右旋糖注射液、右旋糖及氯化鈉注射液及乳酸林格氏注射液；水可混溶性媒劑，包括(但不限於)乙醇、聚乙二醇及聚丙二醇；及非水性媒劑，包括(但不限於)玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、 十四烷酸異丙酯及苯甲酸苯甲酯。

5.使用方法

本文提供治療、預防、改善或管理無意義突變介導之MPS疾病之方法，其包含向患有nmMPS之患者投與1,2,4-二唑苯甲酸。特定言之，本文提供藉由調節過早轉譯終止或無意義介導之mRNA衰減來治療、預防、改善或管理nmMPS I之方法，其包含向患有能夠藉由調節過早轉譯終止或無意義介導之mRNA衰減來改善之nmMPS類型的患者投與有效量之如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物。在一或多個實施例中，nmMPS為由IDUA基因之一或兩個對偶基因上之某些無意義突變產生的無意義突變介導之MPS I。在某些實施例中，nmMPS I由選自以下的IDUA基因之一或兩個對偶基因上之無意義突變產生：Q60X、Y64X、Q70X、Y167X、Q310X、Q320X、Q400X、W402X、G409X、Y581X、R619X、R621X、R626X、R628X及其類似者。

本文進一步提供藉由調節過早轉譯終止或無意義介導之mRNA衰減來治療、預防、改善或管理nmMPS I症狀之方法，其包含向患有能夠藉由調節過早轉譯終止或無意義介導之mRNA衰減來改善之nmMPS I類型之症狀的患者投與有效量之如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物。

本文進一步提供治療、預防、改善或管理與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I類型之方法，其包含向患有與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I類型的患者投與有效量之如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物。在某些實施例中， nmMPS I由IDUA基因之一或兩個對偶基因上之某些突變產生。在某些實施例中，nmMPS I由IDUA基因之一或兩個對偶基因上之Q60X、Y64X、Q70X、Y167X、Q310X、Q320X、Q400X、W402X、G409X、Y581X、R619X、R621X、R626X、R628X及其類似無意義突變產生。

本文進一步提供治療、預防、改善或管理與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I症狀之方法，其包含向患有與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I類型之症狀的患者投與有效量之如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物。

在某些實施例中，本文所提供之方法包含根據下式在24小時時段中以三劑量投與如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物：1X、1X、2X，其中X為特定劑量(例如2mg/kg、5mg/kg、8mg/kg、10mg/kg、15mg/kg或20mg/kg)之活性劑。在一特定實施例中，以約1mg/kg至約3mg/kg(例如約2mg/kg)、約3mg/kg至約7mg/kg(例如約5mg/kg)、約6mg/kg至約10mg/kg(例如約8mg/kg)、約7mg/kg至約13mg/kg(例如約10mg/kg)、約13mg/kg至約17mg/kg(例如約15mg/kg)或約18mg/kg至約22mg/kg(例如約20mg/kg)之如本文所提供之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的劑量每24小時時段連續三次投與如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物持續複數個24小時時段，複數個24小時時段包括(但不限於)數天、數週、數月或數年。在另一特定實施例中，以約5mg/kg至約9mg/kg(例如約7mg/kg)、約5mg/kg至約9mg/kg(例如約7mg/kg)及12mg/kg至約16mg/kg(例如約14mg/kg)之活性劑劑量每24小時時段連續三次投與如本文所提供之 包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物持續數週、數月或數年。在一特定實施例中，以約8mg/kg至約12mg/kg(例如約10mg/kg)、約8mg/kg至約12mg/kg(例如約10mg/kg)及約18mg/kg至約22mg/kg(例如約20mg/kg)之活性劑劑量每24小時時段連續三次投與如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物持續數天、數週、數月或數年。在一特定實施例中，以約18mg/kg至約22mg/kg(例如約20mg/kg)、約18mg/kg至約22mg/kg(例如約20mg/kg)及約38mg/kg至約42mg/kg(例如約40mg/kg)之活性劑劑量每24小時時段連續三次投與如本文所提供之包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑的醫藥組合物持續數天、數週、數月或數年。在投與活性劑之各24小時時段中，較佳以大致6、6及12小時間隔(例如，在早餐之後的約7：00AM、在午餐之後的約1：00PM及在晚餐之後的約7：00PM)投與三次。

化合物1治療功效遵循鐘形劑量-反應曲線，其中在特定範圍內達成且維持某一穩態血漿濃度產生最大活性。因此，咸信個體患者可能需要特定給藥量(亦即1X、1X、2X，其中X為特定劑量，諸如2mg/kg、5mg/kg、8mg/kg、10mg/kg、15mg/kg或20mg/kg)以獲得化合物1之治療上有效之血漿濃度。

在某一實施例中，本文所提供之方法包含在患者體內維持大於以下之化合物1之血漿濃度持續至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或24小時以上：約0.1μg/mL、約0.5μg/mL、約2μg/mL、約5μg/mL、約10μg/mL、約20μg/mL、約25μg/mL、約40μg/mL、約50μg/mL、約100μg/mL、約150μg/mL、約200μg/mL、約250μg/mL或約500μg/mL。可例如藉由高效液相層析(HPLC)量測血漿中之化合 物1含量。

在另一實施例中，本文所提供之方法包含在患者體內維持約0.1μg/mL至約500μg/mL、約2μg/mL至約40μg/mL、約2μg/mL至約20μg/mL、約2μg/mL至約10μg/mL或約10μg/mL至約20μg/mL之化合物1之血漿濃度持續至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或24小時以上。

在一些實施例中，化合物1與至少一種其他治療劑組合投與。在一些實施例中，其他治療劑在投與化合物1之前、在投與化合物1之後、與投與化合物1同時投與或其組合。在一些實施例中，其他治療劑為拉羅尼酶(laronidase)(更特定言之α-L-艾杜糖醛酸酶)及/或一或多種抗組胺。

在某些實施例中，待藉由本文所提供之方法治療、預防、改善或處理之無意義突變介導之MPS疾病為nmMPS I。在某些實施例中，化合物1與另一療法組合用於治療nmMPS I。在一特定實施例中，與本文所提供之化合物1或醫藥組合物組合用於治療、預防、改善或管理nmMPS I之療法為酶替代療法(ERT)、造血幹細胞移植(HSCT)、骨髓移植(BMT)或臍帶血移植(UCBT)。在一特定實施例中，與本文所提供之化合物1或醫藥組合物組合用於治療、預防、改善或管理nmMPS I之療法為重組α-L-艾杜糖醛酸酶，亦稱為Aldurazyme^TM(拉羅尼酶之商標)。

應理解，向有需要之患者投與之醫藥組合物或活性劑的量基於或可基於所討論患者之實際體重或所討論患者群之平均體重(例如男性或女性，包括成人及兒童)計算。

實例 1.診斷nmMPS I

使用三個生物化學測試獲得初始診斷。第一個測試分析尿中之GAG含量。第二個測試以層析方式測定存在何種GAG。基於存在何種 GAG，第三個測試為測定酶活性程度之酶分析。使用自患者分離之血漿、白血球或纖維母細胞進行酶分析。酶分析亦可確定黏多糖疾病之類型，因為患有嚴重形式之患者將不具有酶活性，而患有衰減形式之患者將具有0.1%或0.1%以下之降低酶活性。藉助於DNA定序測定基因型可確定nmMPS I之特異性表型。DNA定序亦可在生物化學結果不明確之患者中確認診斷。最後，使用基因篩選確定未來生殖風險且預防nmMPS I在具有患病兒童之家庭中復發。

2.化合物1對來自含無意義突變之賀勒症候群(nm賀勒)小鼠模型的經培養纖維母細胞中之GAG含量之作用

nmMPS I由缺乏溶酶體酶IDUA產生且導致GAG在組織中積累。因此，可監測GAG含量以評定治療對此疾病之功效。在nmMPS I之nm賀勒小鼠模型中，Idua-W402X賀勒小鼠IDUA基因(TGG→TAG)帶有外顯子9中之W392X突變，其對應於在大致30%至50% nmMPS I患者中發現之W402X突變。在0.2% DMSO中用0、1、2.5、5、10、20及40μg/mL濃度之化合物1治療自Idua-W402X小鼠分離之小鼠胚胎纖維母細胞(MEF)持續24小時。24小時之後，裂解細胞且定量GAG含量。

圖1A展示來自野生型小鼠之MEF、用媒劑治療之來自Idua-W402X小鼠之MEF及用遞增濃度化合物1治療之來自Idua-W402X小鼠之MEF中的GAG含量。圖1B展示相同資料，其表示為過量組織GAG之減少(藉由減去在來自野生型小鼠之MEF中所量測之背景GAG含量來計算)。

此等資料展示化合物1實現存在於艾杜糖醛酸酶mRNA中之過早終止密碼子之通讀，導致艾杜糖醛酸酶活性以濃度相關方式提高，如由組織GAG之劑量依賴性變化所測定。GAG含量之最大降低發生於10μg/mL下，GAG含量降低之減少發生於高於20μg/mL之濃度下。達至所測試最高濃度(40μg/mL)未觀測到細胞毒性或應激之跡象(亦即，細胞集攏或浮動或細胞密度變化)。藉由定量各裂解液中之總蛋白質濃度 測定細胞活力。未隨所測試化合物1濃度觀測到總蛋白質濃度之顯著變化，其與缺乏可視細胞毒性(資料未顯示)相符。

nmMPS I之小鼠模型

藉由將化合物1混合至固體小鼠食物中以0.1%、0.3%或1.0%(w/w)之濃度向Idua-W402X小鼠投與化合物1持續2週，此時間後定量腦、脾、心臟、肝、肺及腎組織中之GAG含量。

腦、脾、心臟及肺中GAG含量之最大降低在用0.1%化合物1濃度治療之動物中獲得(p<0.05，史都登氏t檢驗，化合物1治療對比媒劑)，其中腦及脾中達成接近正常之GAG含量(表1)。肝GAG含量之最大降低在用0.3%化合物1濃度治療之動物中獲得(p<0.05，史都登氏t檢驗，化合物1治療對比媒劑)。增加化合物1濃度高於此等含量導致組織GAG含量降低減少。未於任何劑量下在腎中觀測到統計學上顯著之作用。

3.化合物1之藥物代謝動力學

當藉助於固體食物傳遞時測定衛星野生型C57BL/6J小鼠中三個劑量(0.1%、0.3%或1%(w/w))下化合物1之藥物代謝動力學。提供化合物1之第一天定義為第0天。在第3天及第13天於規定時間點自小鼠獲得血液且使用液相層析-串聯質譜分析量測化合物1之血漿濃度。如圖2中所示化合物1之血漿濃度隨遞增劑量而提高且概括於表2中。

在兩個衛星PK研究以及使用Idua-W402X小鼠之藥理學研究中，投與1.0%(w/w)化合物1之C57BL/6J小鼠未增加與投與0.1%、0.3%劑量之化合物1或媒劑之小鼠同樣多之體重。接受含1.0%(w/w)化合物1之食品的小鼠比接受對照食物之小鼠進食少45%。然而，體重增加之減少 在藥理學研究中將不預期引起組織GAG含量之降低。

與1.0%(w/w)之劑量相比，0.1%及0.3%(w/w)之化合物1劑量與nm賀勒小鼠模型中之較佳功效相關。根據各時間點之小鼠(n=4)，血漿濃度於0.1%(w/w)劑量下在0.8μg/mL至5.2μg/mL範圍內且於0.3%(w/w)劑量下在3.7μg/mL至19μg/mL範圍內。血漿濃度於1.0%(w/w)劑量下在19-58μg/mL範圍內。

AUC_9-10係指隨時間繪製血漿濃度之曲線下面積(9am至10pm)(hr.μg/mL)；C_最大係指最大血漿濃度(μg/mL)；C_最小係指最小血漿濃度(μg/mL)；T_最大係指量測最大血漿濃度之時間；且T_最小係指量測最小血漿濃度之時間。

4.化合物1對來自nm賀勒小鼠模型之經培養纖維母細胞中之艾杜糖醛酸酶活性的作用

目標：確定化合物1在自Idua-W392X小鼠胚胎分離之初代纖維母細胞中之活性。

方法及結果：在活體外GAG積累分析中測定化合物1由於通讀存在於Idua基因中之過早終止密碼子而對艾杜糖醛酸酶活性產生之作用。此分析利用自13天大之+/+及-/- Idua-W392X小鼠胚胎分離之初代纖維母細胞。自13天大之野生型及同型接合Idua-W392X小鼠胚胎同窩幼畜分離小鼠胚胎纖維母細胞(MEF)。於37℃及5% CO₂下在含10%小牛血清(BCS)+1%非必要胺基酸+1%青黴素/鏈黴素之達爾伯克經改質伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Media，DMEM)中生長細胞。分離MEF且在膠原蛋白塗佈之盤上生長直至約50%匯合。用溶解 於DMSO中之遞增濃度化合物1(最終濃度0.2%)治療來自Idua-W392X小鼠之MEF。將細胞與化合物1一起培育24小時。對照物包括未經治療野生型及未經治療Idua-W392X MEF。24小時之後，以肉眼檢測細胞之細胞毒性及細胞應激之跡象，接著根據製造商之說明書使用含蛋白酶抑制劑(Complete-mini；Roche)之M-Per蛋白質試劑(Pierce)裂解細胞。如下所述，使用上清液測定葡糖胺聚糖(GAG)含量。

達至所測試最高濃度(40μg/mL)未觀測到細胞毒性或應激之跡象(亦即，細胞集攏或浮動，細胞密度變化)。使用Bio-Rad蛋白質分析測定各裂解液中之總蛋白質濃度，其中使用牛血清白蛋白產生標準曲線。未在所測試濃度範圍內觀測到總蛋白質之顯著變化(圖3)，此與缺乏可視細胞毒性相符。

使用Blyscan硫酸化GAG分析(Biocolor Ltd,UK)測定GAG含量。簡言之，向500μl Blyscan染料試劑中添加50μl之各裂解液且藉由渦旋混合。在室溫下培育混合物30分鐘，每隔5分鐘渦旋。藉由在室溫下以10,000g離心10分鐘自溶液分離結合染料之GAG。向來自各樣品之上清液中添加500μl Blyscan染料分解試劑。在室溫下將樣品渦旋及培育10分鐘。接著將全部體積之各樣品放入光析槽中且在656nm之波長下量測吸光度。使用4-硫酸軟骨素自標準曲線測定自各樣品沈澱之硫酸化GAG之總量。使用Bio-Rad蛋白質分析測定各裂解液中之總蛋白質濃度，其中使用牛血清白蛋白產生標準曲線。

如圖4中所示，化合物1對GAG之減少展現U形劑量-反應關係。在10μg/mL下觀測到最大程度之GAG減少。

結果：本文呈現之資料說明如由GAG含量所測定，化合物1展現濃度相關之無意義抑制活性，且在較高濃度下活性降低。

5.化合物1對含無意義之賀勒小鼠模型中之艾杜糖醛酸酶活性的作用

目標：確定化合物1在含無意義突變之Idua-W392X賀勒小鼠模型 中之活性。

方法及結果：在含無意義突變之賀勒症候群小鼠模型(稱為Idua-W392X賀勒小鼠)中測定化合物1由於通讀存在於Idua基因中之過早終止密碼子(Idua-W392X)而對艾杜糖醛酸酶活性產生之作用。當小鼠3-4週大時啟動研究。

向同型接合Idua-W392X小鼠提供與或不與化合物1一起製備之食物持續14天。野生型動物接受無化合物1之食物14天。治療14天之後由自野生型(+/+)及同型接合Idua-W392X(-/-)小鼠分離之組織獲得分析結果。製備於食物調配物中之化合物1濃度展示於表1中。簡言之，化合物1溶解於水中，混合至經粉碎食物中，成形為丸粒且經乾燥。

14天治療時段後，在收集組織之前使用異氟醚麻醉小鼠且經賁門灌注20mL鹽水。在處死時，收集腦、肝、心臟、肺、脾及腎且在-80℃下冷凍直至用於測定GAG含量。

使用Blyscan硫酸化GAG分析(Biocolor Ltd,UK)測定GAG含量。簡言之，向500μl Blyscan染料試劑中添加50μl之各裂解液且藉由渦旋混合。在室溫下培育混合物30分鐘，每隔5分鐘渦旋。藉由在室溫下以10,000g離心10分鐘自溶液分離結合染料之GAG。向來自各樣品之上清液中添加總共500μl Blyscan染料分解試劑。在室溫下將樣品渦旋及培育10分鐘。接著將全部體積之各樣品放入光析槽中且在656nm之波長下量測吸光度。使用4-硫酸軟骨素自標準曲線測定自各樣品沈澱之硫酸化GAG之總量。使用Bio-Rad蛋白質分析測定各裂解液中之總蛋白質濃度，其中使用牛血清白蛋白產生標準曲線。

如圖5中所示，較低濃度之化合物1對觀測到GAG減少之若干組織展現較大反應(U形曲線)。於0.1%食物下在腦(圖5A)、脾(圖5B)、心臟(圖5C)及肺(圖5D)中且於0.3%下在肝(圖5E)中觀測到最大程度之GAG減少。未在腎(圖5F)中觀測到統計學上顯著之作用。

結果：資料說明由多個組織中之GAG含量減少所測定，化合物1展現濃度相關之無意義抑制活性，導致功能性艾杜糖醛酸酶產生。在所評估最低濃度(0.1%化合物1)下，在腦、脾、心臟及肺中觀測到最大程度之GAG減少。在肝中，在0.3%化合物1劑量組中觀測到最大作用。未於所投與任何劑量下在腎中觀測到統計學上顯著之作用。在觀測到反應之彼等組織中，較高濃度之化合物1導致活性降低。

應瞭解，儘管已出於說明之目的在本文中描述本發明之特定實施例，但本文所述之本發明不限於由本文所揭示之特定實施例限定之範疇。此等實施例預期作為本發明若干態樣之說明。任何等效實施例意欲處於本發明之範疇內。實際上，熟習此項技術者將自前述描述而對除本文所示及所述之彼等修改以外的本發明之各種修改顯而易知，其修改亦意欲處於本發明之範疇內。

Claims (3)

1. 一種3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用於治療、預防、改善或管理與無意義突變或過早(premature)終止密碼子相關之無意義突變介導之黏多糖病(nmMPS)疾病的藥物。
2. 一種3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]苯甲酸或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用於治療、預防、改善或管理與無意義突變或過早終止密碼子相關之nmMPS I的藥物。
3. 如請求項1或2中任一項之用途，其中該鹽係選自由以下組成之群：鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽、胺基丁三醇鹽(tromethamine salt)、L-離胺酸鹽、L-精胺酸鹽、N-甲基葡糖胺鹽及L-組胺酸鹽。