WO2023168898A1 - 中药组合物在制备防治视网膜色素变性的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

一种中药组合物及其应用。所述中药组合物由石菖蒲、决明子、肉苁蓉、葛根、青葙子、党参、蔓荆子、枸杞子、车前子、白芍、山茱萸、甘草、菟丝子、升麻、蕤仁、菊花、密蒙花、川芎、酒黄精、熟地黄、关黄柏和黄芪制成。所述中药组合物对视功能和视网膜组织形态均具有保护作用，可一定程度上延缓视网膜色素变性的进展速度。

Description

中药组合物在制备防治视网膜色素变性的药物中的应用 技术领域

本发明涉及生物医疗领域，具体涉及中药组合物在制备防治视网膜色素变性的药物中的应用。

背景技术

视网膜色素变性(Retinitis Pigmentosa，RP)是一类常见的遗传性致盲眼病，其特征是以进行性视杆细胞凋亡为主，继而视锥细胞受累，从而导致视力逐渐丧失。感光细胞的丧失伴随着视网膜色素上皮变性。患者初发症状多为暗适应障碍或夜盲，然后逐渐出现视野缩窄。当视野缺损进展至黄斑区，中心视力也随之丧失。RP是最常见的遗传性致盲眼病，世界范围内患病率为1/7000-1/3000，在我国约为1/3784，至今对于其尚无有效的治疗方法。研究RP防治有着重要的临床实践价值和社会学价值。

对部分RP患者而言，基因治疗法效果较佳。但基因治疗技术难度大，预期治疗费用高昂，且对不同患者疗效差异也很大，不具有普适性。

基于此，有必要开发防治视网膜色素变性的不同疗法。

发明内容

本发明的目的包括提供一种防治视网膜色素变性的中医疗法。

上述发明目的可通过如下的技术方案实现。

本发明的一个方面提供一种中药组合物在制备防治视网膜色素变性的药物中的应用，所述中药组合物包含如下成分：20～30份石菖蒲、30～40份决明子、30～40份肉苁蓉、30～40份葛根、30～40份青葙子、40～50份党参、30～40份蔓荆子、40～50份枸杞子、30～40份车前子、40～50份白芍、20～30份山茱萸、20～30份甘草、60～70份菟丝子、1～10份升麻、30～40份蕤仁、30～40份菊花、30～40份密蒙花、30～40份川芎、30～40份酒黄精、60～70份熟地黄、30～40份关黄柏和40～50份黄芪。

在一些实施例中，所述中药组合物包含如下成分：22±m份石菖蒲、30±m份决明子、37±m份肉苁蓉、37±m份葛根、30±m份青葙子、48±m份党参、30±m份蔓荆子、48±m份枸杞子、37±m份车前子、45±m份白芍、24±m份山茱萸、22±m份甘草、61±m份菟丝子、7±m份升麻、37±m份蕤仁、37±m份菊花、37±m份密蒙花、30±m份川芎、37±m份酒黄精、61±m份 熟地黄、30±m份关黄柏和48份±m黄芪，其中，所有的m相同，m为1、0.5、0.2、0.1或0。

在一些实施例中，所述中药组合物为障眼明片。

在一些实施例中，所述视网膜色素变性为常染色体隐性遗传型视网膜色素变性。

在一些实施例中，所述常染色体隐性遗传型视网膜色素变性由PDE6b基因突变引起。

在一些实施例中，所述的药物为固体制剂。

在一些实施例中，所述固体制剂选自普通片、分散片、缓释片、胶囊、颗粒剂或散剂。

在一些实施例中，所述的药物为障眼明片。

在一些实施例中，所述的药物含有有效量的所述中药组合物。

在一些实施例中，所述的药物的受试者为哺乳动物；优选地，所述受试者为小鼠或人。

本发明中，本发明提供的中药组合物能够明显改善视功能和视网膜组织形态，有效延缓视网膜色素变性的进展速度，在防治视网膜色素变性方面具有重要价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明一个实施例中不同组别小鼠灌胃7天后的视网膜彩照图，其中，A为空白对照组，B为实验对照组，C为障眼明片组；

图2是本发明一个实施例中不同组别小鼠灌胃14天后的视网膜彩照图，其中，A为空白对照组，B为实验对照组，C为障眼明片组；

图3是本发明一个实施例中不同组别小鼠灌胃7天后的视网膜HE染色图，其中，A为空白对照组，B为实验对照组，C为障眼明片组；

图4是本发明一个实施例中不同组别小鼠灌胃14天后的视网膜HE染色图，其中，A为空白对照组，B为实验对照组，C为障眼明片组。

具体实施方式

下面结合附图、实施方式和实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书的保护范围。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

术语：

本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明书的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。

本文中，“优选”、“较佳”、“更佳”等仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明防护范围的限制。

本发明中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”等中，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。

本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本发明中，“防治”包括预防、治疗、辅助治疗等概念。

本发明中，“组合物”可以为多种物质的组合，进一步地，可以为组合使用，也可以为组合而成的混合物。

本发明中，“有效量”是指该术语所对应的组分在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解特定疾病、病症和/或症状的剂量，本发明中，如无特别限定，指实现治疗、预防、减轻和/或缓解肠缺血再灌注损伤的剂量。

本发明中，“受试者”是动物，优选为哺乳动物，更优选地为人，受试者包括但不限于食品的食用者，保健品的使用者和具有疾病、病症和/或症状的患者。本发明中的受试者优选为哺乳动物。术语“哺乳动物”主要是指温血脊椎类哺乳动物，包括但不限于：如猫、狗、 兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠(如大鼠、小鼠)、猪、牛、羊、马、人等，优选灵长类动物，更优选为人。以甜菊双糖苷的受试者为例，指接受甜菊双糖苷或其组合物以治疗、预防、减轻和/或缓解疾病、病症、症状的动物。

本发明中，“患者”是指一种动物，优选为哺乳动物，更好的为人。术语“哺乳动物”主要是指温血脊椎类哺乳动物，包括但不限于：如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠、猪、牛、羊、马、人等，优选灵长类动物，更优选为人。

本发明中，“药物组合物”指具有药学上预防和/或治疗效果、可用于药物的组合物。

如本文所用，“药物”包括在在体内或体外提供生理和/或药理作用的任何药剂、化合物、组合物或混合物，且往往提供的是有益效果。所述“药物”在体内产生生理和/或药理作用的范围没有特别限制，可以为全身效果，也可以只在局部产生效果。所述“药物”的活性没有特别限制，可以为能与其它物质发生相互作用的活性物质，也可以为不发生相互作用的惰性物质。

如本文所用，“治疗有效量”是指针对疾病、病症和/或症状，将引起个体的生物学或医学响应的药物活性成分的量，例如为个体带来生理和/或药理上积极效果的本发明化合物的量，所述生理和/或药理上积极效果包括但不限于降低或抑制酶或蛋白质活性或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进程或预防疾病等。

本发明中，“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内适于施用患者且与合理益处/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。

本发明中，“药学上可接受的载体”指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。如本文所用，语言“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的缓冲剂、注射用无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂及诸如此类。在与配制物中其他成分兼容且对患者无害的意义上，每种体必须为“药学上可接受的”。合适的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉及经取代或未经取代的β-环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；及(21)药物配制物中所采用的其他无毒兼容物质。本发明中，“药学上可接受的载体”可选自如下范围：包括但不限于甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸 氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁。

视网膜色素变性(RP)为一种遗传性致盲眼底病，根据临床表型可分为典型RP患者和非典型RP患者。其中，典型RP患者占RP患者的80％～90％，典型RP患者病理特征为视杆细胞死亡并继发视锥细胞死亡，感光细胞受损、变性，视网膜外核层逐渐变薄直至消失，伴随视网膜其他相关细胞层出现相应病理改变；患者早期表现为夜盲和进行性视野损害，逐步发展为管状视野，直至失明。

本发明的第一方面

本发明的第一方面，提供一种中药组合物(也记为中药组合物I)在制备用于防治视网膜色素变性的药物(也记为药物II)中的应用。

在本发明中，如无特别限定，涉及“中药组合物I”，指的是包含如下组分的中药组合物：石菖蒲、决明子、肉苁蓉、葛根、青葙子、党参、蔓荆子、枸杞子、车前子、白芍、山茱萸、甘草、菟丝子、升麻、蕤仁、菊花、密蒙花、川芎、酒黄精、熟地黄、关黄柏和黄芪。

在本发明中，如无特别限定，涉及“药物II”指的是防治视网膜色素变性的药物。

发明人经过大量探索，意外地发现，本发明提供的药物组合物(如障眼明片)可以缩短受试者视网膜电图潜伏期、抑制受试者视网膜萎缩、增加受试者视网膜外核层细胞数量，具有防治视网膜色素变性的作用。发明人推测，本发明的重要组合物通过如下机理起到防治视网膜色素变性的作用：视网膜色素变性(RP)在中医领域属“高风内障”的范畴，先天禀赋不足，后天脾胃虚弱，导致精气血亏损，其病位在肝脾肾；本发明的药物组合物，方中诸药合用，温补肾阳、滋养肝肾、补脾益气。需要说明的是，虽然本领域技术人员知晓障眼明片可补益肝肾、益气明目，但是对于障眼明片是否能够用于防治视网膜色素变性，是无法预期的，这是因为中医理论主要讲“异病同治”，“肝肾阴虚”是一个非常大的概念，许多疾病都会有辩证肝肾阴虚的情况。比如，“刘冰,等.甲状腺相关眼病中西医诊治概况《实用中医内科杂志》,2015,29(07)，165-166”记载了，患有甲状腺相关眼病辩证为“肝肾阴虚”的患者，中医药治疗法需较长疗程，治疗过程中易出现变化，导致效果不明显。

在一些实施方式中，中药组合物Ⅰ包含如下成分：20～30份石菖蒲、30～40份决明子、30～40份肉苁蓉、30～40份葛根、30～40份青葙子、40～50份党参、30～40份蔓荆子、40～0份枸杞子、 30～40份车前子、40～50份白芍、20～30份山茱萸、20～30份甘草、60～70份菟丝子、1～10份升麻、30～40份蕤仁、30～40份菊花、30～40份密蒙花、30～40份川芎、30～40份酒黄精、60～70份熟地黄、30～40份关黄柏和40～50份黄芪。

在一些实施例中，中药组合物Ⅰ包含如下成分：22±m份石菖蒲、30±m份决明子、37±m份肉苁蓉、37±m份葛根、30±m份青葙子、48±m份党参、30±m份蔓荆子、48±m份枸杞子、37±m份车前子、45±m份白芍、24±m份山茱萸、22±m份甘草、61±m份菟丝子、7±m份升麻、37±m份蕤仁、37±m份菊花、37±m份密蒙花、30±m份川芎、37±m份酒黄精、61±m份熟地黄、30±m份关黄柏和48份±m黄芪，其中，m为1、0.5、0.2、0.1或0。

在一些实施例中，m选自下述任一个数值或者任两个数值构成的数值区间(包括端点)：1、0.5、0.2、0.1、0，举例如0～1、0～0.5、0.5～1、0.2～0.5、0.1～0.2、0.1～0.5等。

在一些实施例中，中药组合物为障眼明片。

视网膜色素变性为遗传性疾病，其遗传方式有常染色体隐性、显性与X性连锁隐性三种。

在一些实施例中，视网膜色素变性为常染色体隐性遗传型视网膜色素变性。

在一些实施例中，常染色体隐性遗传型视网膜色素变性由PDE6b基因突变引起。视杆细胞cGMP-磷酸二酯酶6型β亚基(PDE6b)编码的蛋白在cGMP水解中起重要作用，是光转导的关键部分。该基因的突变会导致感光细胞的功能受损。

一些实施方式中，药物Ⅱ为固体制剂。

一些实施方式中，固体制剂选自普通片、分散片、缓释片、胶囊、颗粒剂或散剂。

一些实施方式中，药物Ⅱ中含有有效量的中药组合物I。

一些实施方式中，所述药物Ⅱ包括：(a)中药组合物Ⅰ；和(b)药学上可接受的辅料和/或药学上可接受的载体。一些实施方式中，所述药物Ⅱ包括：中药组合物Ⅰ和药学上可接受的辅料。一些实施方式中，所述药物Ⅱ包括中药组合物Ⅰ和药学上可接受的载体。一些实施方式中，所述药物Ⅱ包括中药组合物Ⅰ、药学上可接受的辅料和药学上可接受的载体。

一些实施方式中，药物Ⅱ为障眼明片。

一些实施方式中，药物Ⅱ中，中药组合物Ⅰ的质量百分含量为85％～90％，举例的质量百分含量如，85％、86％、87％、88％、89％、90％，等。

一些实施方式中，药物Ⅱ的受试者为哺乳动物。

一些实施方式中，药物Ⅱ的受试者为小鼠或人。

视网膜色素变性(RP)的特征之一为患者视网膜萎缩。一些实施方式中，药物Ⅱ抑制受试者视网膜萎缩。

一些实施方式中，药物Ⅱ增加受试者视网膜外核层细胞数量。

本发明的第二方面

本发明的第二方面，提供一种视网膜色素变性的预防或治疗方法，包括给予所需患者治疗有效量的中药组合物Ⅰ。也即，使患者施用治疗有效量的中药组合物Ⅰ。

施用方式

本发明的中药组合物(中药组合物Ⅰ)的剂型和施用方式没有特别限制。

代表性的施用方式包括但并不限于：口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)注射、和局部给药、吸入。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，具体例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。如悬浮液可包含悬浮剂，具体例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。由活性成分在无菌条 件下与药学上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合而成。

可以理解的是，本发明实施例的药物可以添加不同的药物学可以接受的辅料从而制备成合适的临床剂型，这些临床剂型包括但不限于上文所述剂型。这些药物学可以接受的辅料包括但不限于稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂、等渗或等张调节剂等。进一步地：稀释剂，如淀粉、蔗糖、纤维素类、无机盐类等；润湿剂，如水、乙醇等；黏合剂，如淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮、聚乙二醇等；崩解剂，如淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂、跑腾崩解剂等；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶、聚乙二醇等；色香味调节剂，如色素、香料、甜味剂、胶浆剂、矫臭剂等，具体如品红、木糖醇；溶剂，如水、油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油、乙酸乙酯等；增溶剂，如吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、磺酸化物等；助溶剂，如有机酸(如枸橼酸)及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以、甘油等；乳化剂，如司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅、皂土等；助悬剂，如甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇、触变胶等；抗氧剂，如亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类等；金属络合剂，如乙二胺四乙酸二钠、多羧酸化合物等；惰性气体，如氮气、二氧化碳等；防腐剂，如尼泊金类、有机酸及其盐(如苯甲酸钠)、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油等；局部止痛剂，如苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因等；pH调节剂，如盐酸、硫酸、磷酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐、枸橼酸、枸橼酸盐等；等渗或等张调节剂，如葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇等。可以理解的是，本发明实施例所述的稀释剂也可以叫填充剂，在药物制剂中发挥作用相同；本发明实施例所述的水为满足药剂要求的水，例如注射用水、纯化水等，油为注射用油；本发明实施例所述的防腐剂也可以称作抗菌剂，在制剂中发挥抑制微生物生长、延长保质期等作用；本发明实施例的润滑剂含有助流剂、抗黏剂等；本发明实施例所述的糖可以是糖粉或者是糖浆，糖的种类也不限于葡萄糖；本发明实施例所述的香料包括但不限于香精。

在一些实施方式中，给药频次为1～3次/日，举例如1次/日、2次/日、3次/日。

在一些实施方式中，给药剂量为0.42g/次。

在一些实施方式中，中药组合物Ⅰ的施用方式为口服。

在一些实施方式中，中药组合物Ⅰ的施用方式为灌胃。

在本文中，“灌胃”是指通过导管经口腔或鼻腔和食管，将液体、混悬液、半流质等直接落入胃内。在一些实施方式中，施用剂量为：灌胃5mL/kg组合物Ⅰ混悬液(将中药组合物Ⅰ加入蒸馏水，按照0.0378g/mL配制，震荡、常温溶解制得)。

本发明的第二方面的“中药组合物Ⅰ”可选自包括但不限于前文所述的中药组合物Ⅰ，可参考本发明的第一方面。

在一些实施方式中，中药组合物Ⅰ为固体制剂。在其中的一些实施方式中，所述固体制剂选自普通片、分散片、缓释片、胶囊、颗粒剂或散剂。

在一些实施方式中，患者为人或鼠。

在一些实施方式中，患者为人。

在一些实施方式中，患者为小鼠。

本发明的第三方面

本发明的第三方面，提供一种用于预防和/或治疗视网膜色素变性的中药组组合物I。

本发明的第三方面的“中药组合物Ⅰ”可选自包括但不限于前文所述的中药组合物Ⅰ，可参考本发明的第一方面。

以下为一些具体实施例。

以下具体实施例中未写明的实验参数，优先参考本申请文件中给出的指引，还可以参考本领域的实验手册或本领域已知的其它实验方法，或者参考厂商推荐的实验条件。

以下具体实施例中涉及的原料和试剂，可以通过市售得到，或者本领域技术人员能够根据已知手段制备。

以下具体实施例采用的动物模型是PDE6B基因突变小鼠(RP小鼠)，模型小鼠RP表型与人的RP病变较为一致，可利用RP模型小鼠进行人的RP病变治疗方法的研究。本实验选择出生后7天的小鼠进行灌胃，分别于出生后14天(灌胃7天)和出生后21天(灌胃14天)进行相关指标观察。

实施例1灌胃预处理

1.1实验材料

1.1.1实验动物

实验选取7日龄野生型昆明小鼠(正常小鼠)8只，雌雄各半，体重9～11g，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司；

7日龄RP模型小鼠(PDE6b基因突变小鼠)16只，雌雄各半，体重9～11g，来源于中国中医科学院眼科医院实验动物中心；

饲养地点为中国中医科学院眼科医院实验动物中心屏障级动物房，动物饲养过程中涉及的操作均通过伦理委员会批准，符合动物伦理要求。

1.1.2试剂和仪器

障眼明片为广州白云山中一药业有限公司生产(产品批号P00042)，实验前粉碎，过100目筛，双蒸水配制成浓度0.0378g/mL口服混悬液；1mL注射器；灌胃针头。

1.2实验方法

1.2.1动物分组

正常小鼠作为空白对照组，共8只，PDE6b基因突变小鼠随机均分为实验对照组和障眼明片组，每组8只。

1.2.2灌胃预处理

配制障眼明片口服混悬液备用，浓度0.0378g/mL，用前摇匀。

障眼明片组给予障眼明片口服混悬液灌胃干预，灌胃处理步骤如下：根据小乳鼠体重配比率(5mL/kg)每日灌胃1次；

实验对照组同时灌胃等体积蒸馏水，每日1次；

空白对照组同时灌胃等体积蒸馏水，每日1次。

实施例2视网膜电图(electroretinogram，ERG)检测

2.1检测方式

对预处理后的各组小鼠于不同时间点进行视网膜电图(electroretinogram，ERG)检测。测试仪器小动物视觉电生理检测仪(Diagnosis，型号D430)；测试方式：各组小鼠于检测前暗适应12h，复方托吡卡胺滴眼液点双眼常规散瞳；采用盐酸氯胺酮-盐酸塞拉嗪混合麻醉剂(体积比＝1:7)腹腔注射(2mL/kg)麻醉小鼠。检测操作全程均在弱红光灯下进行操作。将双侧角膜电极置于小鼠双侧眼角膜正中，保持各电极间阻抗始终＜5kΩ。根据国际临床视觉电生理协会(ISCEV)制定的最新国际标准，依次选定视杆细胞反应，最大反应，暗适应震荡电位，(自动明适应5min)视锥细胞反应以及10Hz闪烁光反应进行检测。依次记录各组a、b、P波的峰时值(ms)和振幅值(μV)。

2.2检测结果

测试结果如表1、表2所示。

表1 灌胃7天和14天后各阶段ERG振幅变化

*表示与空白对照组相比P＜0.05。

表1中，对视网膜电图各阶段振幅进行分析，各组均符合正态分布，数据以均数±标准差的形式表示。灌胃7天和14天后，障眼明片组与实验对照组比较振幅变化无统计学差异(P＞0.05)，且两组均明显低于空白对照组(P＜0.05)，但灌胃7天后障眼明片组各阶段振幅均数都高于实验对照组。

表1中，ERG是视网膜受光刺激后，在视网膜节细胞电冲动之前记录到的一簇电反应，它反映了光感受器到无长突细胞的视网膜各层的电活动。其中，杆体ERG(比如视杆细胞反应b波)主要反映视杆细胞系统的电反应；最大混合反应ERG(比如最大混合反应b波)表示的全视网膜，包括视杆和视锥系统的综合电反应；而振荡电位则起源于视网膜的内核层，主要反映视网膜的循环状态；视锥反应ERG(比如视锥细胞反应b波)主要反映视锥系统的反应，有少量视杆的成分；而10Hz闪烁，则因视杆细胞对此频率的闪光无法做出反应，而被认为完全是视锥系统的反应。

表2 灌胃7天后各阶段ERG潜伏期变化

表2中，对各阶段潜伏期进行分析后发现，最大混合反应b波峰时、视锥细胞反应a波峰时、b波峰时各组数据符合正态分布，数据以均数±标准差的形式表示。灌胃7天后给药组与模型组比较潜伏期缩短差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2中，各阶段反应的a、b波潜伏期主要反映相对应的感光细胞对不同刺激阈做出反应的时间，若感光细胞功能受损则相应的波形潜伏期会延长。

根据表1和表2的数据结果，本发明的中药组合物可以延缓视网膜感光细胞功能恶化，对于视网膜功能的具有保护作用。

实施例3视网膜形态检测

3.1眼底彩照检测

采用小动物视网膜成像系统(OPTOPROBE SCIENCE LTD,UK,OPTO-RIS-CN)，对预处理后的各组小鼠进行眼底照相，得到眼底彩照(图1、图2)。其中，图1中A为出生后14天的空白对照组小鼠的眼底彩照，视网膜血管粗细均匀，清晰可见，脉络膜血管不显，图1中B、C分别为出生后14天的实验对照组小鼠、出生后14天的障眼明片组小鼠的眼底彩照，视网膜萎缩变薄，可透见脉络膜血管；图2中A为出生后21天的空白对照组小鼠的眼底彩照，视网膜血管粗细均匀，清晰可见，脉络膜血管不显；图1中B、C分别为出生后21天的实验对照组小鼠、障眼明片组小鼠的眼底彩照，视网膜进一步变薄，可透见脉络血管，还可见白色的巩膜组织。

比较图1和图2可发现，与实验对照组相比，障眼明片组小鼠的视网膜萎缩程度较轻，说明本发明的中药组合物对延缓视网膜萎缩变性有一定作用。

3.2组织病理学检测

3.2.1测试方式和测试数据

过量麻醉法处死小鼠，快速摘取眼球，将眼球用戴维森固定液固定，解剖显微镜下小心去除眼前节和部分玻璃体，余下组织脱水后浸蜡包埋。连续4μm切片，切片常规脱蜡后行HE染色，光学显微镜(Leica，DM2500)观察视网膜各层病理改变。

3.2.2测试结果

如图3的HE染色的组织切片图，预处理7天后，正常组小鼠视网膜外核层和RPE无异常改变(图3中A)。而模型组小鼠视网膜外核层明显变薄，感光细胞凋亡严重(图3中B)。障眼明片组小鼠视网膜外核层明显变薄，但比模型组稍厚，说明感光细胞变性程度较模型组轻(图3中C)。

对各组图片中外核层细胞层数进行数据统计分析发现，各组数据不符合正态分布，采用非参数检验，差异具有统计学意义(H＝73.267，P＜0.001)。正常组平均秩次为74(n＝29)，模型组平均秩次为16.15(n＝26)，障眼明片组平均秩次为40.91(n＝33)。两两比较发现，模型组及障眼明组外核层细胞层数明显少于正常组，差异有统计学意义(调整后P＜0.001)，而障眼明组外核层细胞层数明显多于模型组，差异有统计学意义(调整后P＝0.001)。

如图4的HE染色的组织切片图，预处理14天后，正常组小鼠视网膜外核层和RPE无异常改变(图4中A)。而模型组小鼠视网膜外核层仅剩1层，说明感光细胞进一步凋亡(图4中B)。障眼明片组小鼠视网膜外核层仅剩1层，但细胞排列比较紧密，比模型组凋亡速度减慢(图4中C)。

KW检验各组外核层细胞层数分布不全相同，差异具有统计学意义(H＝72.831，P＜0.001)。正常组平均秩次为68.5(n＝28)，模型组平均秩次为26(n＝24)，障眼明片组平均秩次为28.7(n＝30)，障眼明片组较模型组有增高趋势，但差异无统计学差异(调整后P＞0.05)。

给药组和模型组间外核层细胞数量变化如表3所示。外核层细胞计数结果显示：各组数据符合正态分布，数据以均数±标准差的形式表示，灌胃7天后，障眼明片组外核层细胞数量明显多于模型组，且差异具有统计学意义(P＜0.001)。灌胃14天后，两组外核层细胞数结果趋势与7天时相同，障眼明片组较模型组细胞数量明显增多，差异有统计学意义(P＝0.001)。说明给予组合物1处理之后小鼠视网膜感光细胞变性缓慢，组合物1治疗RP在形态学上有一定作用。

表3 给药组和模型组间外核层细胞数量变化

上述实验结果表明，本发明的中药组合物对视网膜色素变性动物模型的视功能和视网膜组织形态均具有保护作用，可一定程度上延缓视网膜色素变性的进展速度。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本申请的发明目的和/或技术方案相冲突，否则，本发明涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本发明中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本发明中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本申请中，但以能够实施本发明为限。应当理解，当引 用内容与本申请中的描述相冲突时，以本申请为准或者适应性地根据本申请的描述进行修正。

以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，但并不能因此理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本发明的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准，说明书和附图可用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1. 一种中药组合物在制备防治视网膜色素变性的药物中的应用，其特征在于，所述中药组合物包含如下成分：20～30份石菖蒲、30～40份决明子、30～40份肉苁蓉、30～40份葛根、30～40份青葙子、40～50份党参、30～40份蔓荆子、40～50份枸杞子、30～40份车前子、40～50份白芍、20～30份山茱萸、20～30份甘草、60～70份菟丝子、1～10份升麻、30～40份蕤仁、30～40份菊花、30～40份密蒙花、30～40份川芎、30～40份酒黄精、60～70份熟地黄、30～40份关黄柏和40～50份黄芪。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物包含如下成分：22±m份石菖蒲、30±m份决明子、37±m份肉苁蓉、37±m份葛根、30±m份青葙子、48±m份党参、30±m份蔓荆子、48±m份枸杞子、37±m份车前子、45±m份白芍、24±m份山茱萸、22±m份甘草、61±m份菟丝子、7±m份升麻、37±m份蕤仁、37±m份菊花、37±m份密蒙花、30±m份川芎、37±m份酒黄精、61±m份熟地黄、30±m份关黄柏和48份±m黄芪，其中，所有的m相同，m为1、0.5、0.2、0.1或0。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物为障眼明片。
4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述视网膜色素变性为常染色体隐性遗传型视网膜色素变性。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述常染色体隐性遗传型视网膜色素变性由PDE6b基因突变引起。
6. 根据权利要求1～5中任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物为固体制剂。
7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述固体制剂选自普通片、分散片、缓释片、胶囊、颗粒剂或散剂。
8. 根据权利要求1～5中任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物为障眼明片。
9. 根据权利要求1～5中任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物含有有效量的所述中药组合物。
10. 根据权利要求1～5中任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物的受试者为哺乳动物；优选地，所述受试者为小鼠或人。

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