CN103149297A - 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法 - Google Patents
尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103149297A CN103149297A CN2013100659777A CN201310065977A CN103149297A CN 103149297 A CN103149297 A CN 103149297A CN 2013100659777 A CN2013100659777 A CN 2013100659777A CN 201310065977 A CN201310065977 A CN 201310065977A CN 103149297 A CN103149297 A CN 103149297A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nnal
- urine
- phenylacetic acid
- mass spectrometry
- acid ester
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 57
- OGRXKBUCZFFSTL-SNVBAGLBSA-N n-[(4r)-4-hydroxy-4-pyridin-3-ylbutyl]-n-methylnitrous amide Chemical compound O=NN(C)CCC[C@@H](O)C1=CC=CN=C1 OGRXKBUCZFFSTL-SNVBAGLBSA-N 0.000 title claims abstract description 34
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 title 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 141
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 26
- -1 (S)-(+)-α-methoxyl-α-trifluoromethyl phenylacetic acid acid anhydride Chemical class 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 16
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 13
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 6
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims description 5
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 claims description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 8
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 6
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 6
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PVDVPOZEJCXUAM-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;n,n-diethylethanamine Chemical compound CC#N.CCN(CC)CC PVDVPOZEJCXUAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 239000003546 flue gas Substances 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- XKLJHFLUAHKGGU-UHFFFAOYSA-N nitrous amide Chemical compound ON=N XKLJHFLUAHKGGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 3
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 3
- 0 CONC(C1)(C2)C12C=CCC*c1cccnc1 Chemical compound CONC(C1)(C2)C12C=CCC*c1cccnc1 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- KNPUXTWHFSLCDT-BBYIEOQPSA-N 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol glucuronide Chemical compound C=1C=CN=CC=1C(CCCN(C)N=O)O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KNPUXTWHFSLCDT-BBYIEOQPSA-N 0.000 description 1
- OGRXKBUCZFFSTL-UHFFFAOYSA-N 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol Chemical compound O=NN(C)CCCC(O)C1=CC=CN=C1 OGRXKBUCZFFSTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005751 Alcohol Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108010031132 Alcohol Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- ZWZOQVSCFGXHOE-UHFFFAOYSA-N CN(CCCC(CC1=CC=CN(C)C1)=O)NOC Chemical compound CN(CCCC(CC1=CC=CN(C)C1)=O)NOC ZWZOQVSCFGXHOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- VSVYJUYJFLYYSI-UKOUFMKDSA-N NNAL-N-glucuronide Chemical compound O=NN(C)CCCC(O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)=C1 VSVYJUYJFLYYSI-UKOUFMKDSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000656145 Thyrsites atun Species 0.000 description 1
- AATFPUCRBIXXID-ROUUACIJSA-N [(2S)-3,3,3-trifluoro-2-methoxy-2-phenylpropanoyl] (2S)-3,3,3-trifluoro-2-methoxy-2-phenylpropanoate Chemical compound CO[C@](C(=O)OC([C@](OC)(C(F)(F)F)C1=CC=CC=C1)=O)(C1=CC=CC=C1)C(F)(F)F AATFPUCRBIXXID-ROUUACIJSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000451 chemical ionisation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N n-Butanol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 235000019505 tobacco product Nutrition 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006200 vaporizer Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,使用衍生化后HPLC-MS-MS法测定尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL,包括用测定旋光并比对的方法确定(S)-NNAL和(R)-NNAL的构型并作为参照,或用Mosher方法确定(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照;配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液,再进行Mosher衍生化,然后对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;最后进行尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL检测。该方法具有检测限低、稳定性好、前处理简单、快速准确的优点。
Description
技术领域
本发明属于烟草特有亚硝胺在尿液中的生物标志物理化检验技术领域,具体涉及尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法。
背景技术
烟草特有亚硝胺(TSNAs)是烟草内源性生物碱与硝酸盐和亚硝酸盐通过亚硝化作用而产生,只存在于烟草、烟草制品和卷烟烟气中。近年来,随着吸烟与健康问题受到人们的广泛关注,国内外对于烟气中各种有害化学成分的研究也日益深入。由于烟草特有亚硝胺中的4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)对动物可能有致癌性,因此,现在烟草行业以及卫生机构等迫切需要建立一种准确评价不同人群对NNK暴露程度的方法,而生物标志物法是一种公认且有效的监测NNK暴露人群暴露程度的方法。
在NNK分子中没有手性碳原子,因此NNK分子没有对映异构体,但NNK分子中有一个羰基,该羰基随着NNK进入人体后被羰基还原酶还原为羟基,生成一对NNAL对映异构体,分别为(S)-NNAL和(R)-NNAL,部分NNAL可以进一步被糖苷化物为NNAL糖苷化合物(包括NNAL-O-Glucuronide和NNAL-N-Glucuronide),这些代谢产物主要通过尿液和其它体液排出体外,研究还发现在吸烟者的尿液中不含游离形式的NNK。
由于人体本身就是一个动态的不对称化学反应有机系统,所以卷烟烟气中的NNK被加氢还原酶还原生成(S)-NNAL和(R)-NNAL的比例以及进一步代谢产物比例必然反映出人体相关器官的解毒能力以及受到NNK的损害程度,因此尿液中(S)-NNAL、(R)-NNAL、(S)-NNAL-糖苷化合物和(R)-NNAL-糖苷化合物的含量以及比例一直受到关注。2002年,Hecht等的研究发现揭示,人体尿样中游离形式的(R)-NNAL的含量略约是(S)-NNAL含量的1.1倍,但人尿样中(R)-NNAL糖苷化合物的含量是(S)-NNAL糖苷化合物含量的的两倍左右,这说明(S)-NNAL和(R)-NNAL的进一步代谢途径差别很大,同时也说明人体对(S)-NNAL有一种立体选择性的保留能力,特别是老鼠在摄入NNK后相当长一段时间内其肺部(S)-NNAL的比例也远高于(R)-NNAL。其他学者的研究结果也显示吸烟的肺癌患者尿样中(S)-NNAL与(R)-NNAL的比值明显大于普通吸烟者。结合流行病学调查分析结果,人们推测人肺脏内可能有(S)-NNAL的受体,此受体可特异性结合(S)-NNAL,这可能就是吸烟吸收NNK导致肺癌的原因之一。
由于中式卷烟每支卷烟烟气中释放的NNK只有几个纳克,而NNK进入人体后又被代谢为多种物质,加之尿样基质复杂,所以尿样中的(S)-NNAL和(R)-NNAL的检测非常困难,国内外许多相关行业都无法开展尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的检测工作。在这种背景下,许多相关行业迫切需要建立一种能够快速准确测定人体尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的含量和比例的方法,以便为肺癌的早期检测等提供进一步参考信息。
发明内容:
本发明的目的在于针对现有方法很难开展尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的检测工作的不足,提供一种尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,为评估个体对烟气中NNK的暴露程度提供一种科学的判定方法,该方法具有检测限低、稳定性好、快速准确等优点。
本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,包括以下步骤:
①用测定旋光并比对的方法确定(S)-NNAL和(R)-NNAL的构型并作为参照,或用Mosher方法确定(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照;
②配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液,再进行Mosher衍生化,然后对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;用确定构型后的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯通过保留时间确定相应的色谱峰保留时间,采用内标法分别建立(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线;
③将在室温下解冻后的尿液样品摇匀,准确移取10mL于50mL试管中,加入rac-NNAL-甲基-d3溶液,再用MIP-NNAL固相萃取小柱净化,淋洗后洗脱,干燥过滤后进行Mosher衍生化,浓缩至干,再用7/3的乙腈/水溶解后上HPLC-MS-MS检测。
所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,其中在分析检测尿样中尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL时进行Mosher衍生化,并使用rac-NNAL-甲基-d3作为内标。
所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,使用微波辅助萃取仪在37℃对尿样进行恒温酶解。
所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,其中向尿液样品加入rac-NNAL-甲基-d3溶液、磷酸二氢氨缓冲溶液(pH6.4,50mM)和β-葡糖苷酸酶混匀后置入恒温振荡器或微波辅助萃取仪中在37℃恒温酶解,再将酶解后的尿样经过MIP-NNAL固相萃取小柱净化,淋洗后用二氯甲烷洗脱,加入无水硫酸钠干燥后过滤,减压浓缩至干,加入三乙基胺无水乙腈溶液、(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液,衍生化后再对样品进行HPLC-MS-MS分析,进而换算出尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的含量。
具体实施方式
以下结合应用实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不限定本发明的保护范围。
实施例1:
除非另有说明,本发明中所采用的百分数均为重量百分数。
尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,该方法包括以下步骤:
1、化学试剂
(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐(CAS号20445-33-4),(S)-(+)-α--甲氧基-(三氟甲基)苯乙酸酐(CAS号85541-57-7),4-(-甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-丁醇(NNAL)(rac NNAL,CAS号76014-81-8),4-(甲基-d3-亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇(rac-NNAL-甲基-d3CAS号1020719-61-2),三乙基胺,β-葡萄糖甘酸酶(类型IX-A,来自大肠杆菌)。
(S)-NNAL和(R)-NNAL的制备和绝对构型的确定:制备型OD-H手性色谱柱,流动相异丙醇:正己烷的比例为10:90,分别收集两个流出色谱峰,分别浓缩直至其残留物重量都大于1mg。分别取两个色谱峰的浓缩物,用2ml乙醇溶解,测定其比旋光度值,比旋光度值为负值的浓缩物为(S)-NNAL,比旋光度值为正值的浓缩物为(R)-NNAL。
2.标准曲线建立
外消旋体NNAL标准溶液:以无水乙腈为溶剂,配制浓度为1μg/mL的rac NNAL标准品单标溶液,保留四位有效数字;以同样方式以无水乙腈为溶剂分别配制浓度为1μg/mL的rac-NNAL-甲基-d3的单标溶液;以无水乙腈为溶剂,按表1配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液;配制浓度为10ng/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液;配制浓度为10ng/mL的三乙基胺的无水乙腈溶液;分别取0.5mL混合标准溶液于HPLC-MS-MS色谱瓶中,再按照表2分别加入(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液和三乙基胺乙腈溶液在室温下反应过夜,在氮气氛围中真空浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解,然后立即对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;将确定构型后的(S)-NNAL或(R)-NNAL用乙腈溶解抽干,(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐进行衍生化,通过保留时间确定衍生化后的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的色谱峰。外消旋体NNAL标准溶液衍生化生成的一对非对映异构体的峰面积为1:1。以HPLC-MS-MS色谱图中(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的浓度与(S)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的浓度之比为横坐标,以色谱图中(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的定量离子对峰面积与(S)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的定量离子对峰面积之比为纵坐标,建立(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线,以同样方法建立(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线。
表1rac-NNAl和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液
表2混合标准溶液的衍生化
3、尿液样品处理
将在室温下解冻后的尿液样品摇匀,准确移取10mL于50mL试管中,加入100μL浓度为1ng/mL的rac-NNAL-甲基-d3溶液,再加入10mL的磷酸二氢氨缓冲溶液(pH6.4,50mM)和500μL的β-葡糖苷酸酶(1000U/mL尿液),充分混匀后置于恒温振荡器中或置入微波辅助萃取仪37℃避光恒温酶解(游离NNAL的测定在加入内标后即可上MIP-NNAL固相萃取小柱净化,不需酶解,可将酶解步骤省略)。将酶解后的尿样上样到已经分别用2mL二氯甲烷、2mL甲醇、2mL水活化好的MIP-NNAL固相萃取小柱上进行净化,先用4*1mL去离子水淋洗后抽干、再用2mL甲苯、2mL甲苯/二氯甲烷(9/1)淋洗后抽干,最后用3*1mL二氯甲烷进行洗脱,合并洗脱液,加入1.0g无水硫酸钠干燥后过滤,在氮气氛围中浓缩至干,加入0.2mL浓度为1μg/mL的三乙基胺无水乙腈溶液,震荡1分钟,再在无水条件下加入0.3mL浓度为1μg/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐,室温下反应过夜,浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解后上HPLC-MS-MS检测。
4、HPLC-MS-MS检测条件
液相条件:Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm i.d.×100mm,1.7μm),等度洗脱:35%乙腈/65%10mM乙酸铵(PH=7.0),色谱柱温度:30℃,进样量:5μL,流速为:0.2mL/min。
质谱条件:电离方式:大气压化学电离;正离子模式(APCI+);离子源温度:120℃;电晕针电流:10uA;气化室温度:350℃;脱溶剂气流速:800L/hr;气帘气:80L/hr;碰撞气:0.19mL/min;扫描时间:200ms;多反应检测(MRM)模式,分析物特征离子对如表3。
表3分析物特征离子对
上述方法中涉及的NNK、(S)-NNAL和(R)-NNAL的化学结构式为:
实施例2:
1、外消旋体NNAL的衍生化:以无水乙腈为溶剂,配制浓度为1μg/mL的rac NNAL标准品单标溶液,保留四位有效数字;以同样方式以无水乙腈为溶剂分别配制浓度为1μg/mL的rac-NNAL-甲基-d3的单标溶液;以无水乙腈为溶剂,按表1配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液;配制浓度为10ng/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液;配制浓度为10ng/mL的三乙基胺的无水乙腈溶液;分别取0.5mL混合标准溶液于HPLC-MS-MS色谱瓶中,再按照表2分别加入(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液和三乙基胺乙腈溶液室温下反应过夜,在氮气氛围中浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解后立即对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析。
2、实际样品检测
将在室温下解冻后的尿液样品摇匀,准确移取10mL于50mL试管中,加入100μL浓度为1ng/mL的rac-NNAL-甲基-d3溶液,再加入10mL的磷酸二氢氨缓冲溶液(pH6.4,50mM)和500μL的β-葡糖苷酸酶(1000U/mL尿液),充分混匀后置于恒温振荡器中,37℃避光恒温酶解过夜,将酶解后的尿样上样到已经分别用2mL二氯甲烷、2mL甲醇、2mL水活化好的MIP-NNAL固相萃取小柱上进行净化,先用4*1mL去离子水淋洗后抽干、再用2mL甲苯、2mL甲苯/二氯甲烷(9/1)淋洗后抽干,最后用3*1mL二氯甲烷进行洗脱,合并洗脱液,加入1.0g无水硫酸钠干燥后过滤,在氮气氛围中浓缩至干,加入0.2mL浓度为1μg/mL的三乙基胺无水乙腈溶液,震荡1分钟,再在无水条件下加入0.3mL浓度为1μg/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐,室温下反应过夜,浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解后上HPLC-MS-MS检测。使用(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线计算待测样品中的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯,进而换算出该尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的浓度分别为0.97ng/mL和0.89ng/mL。
实施例3:
1、(S)-NNAL和(R)-NNAL的制备和绝对构型的确定:用rac NNAL标准品的无水乙腈溶液、(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液和(R)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液和三乙胺分别进行Mosher反应,再经过纯化和1H NMR谱图测试,用Mosher方法确定(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的绝对构型。
2、外消旋体NNAL的衍生化和标准曲线的建立:以无水乙腈为溶剂,配制浓度为1μg/mL的rac NNAL标准品单标溶液,保留四位有效数字;以同样方式以无水乙腈为溶剂分别配制浓度为1μg/mL的rac-NNAL-甲基-d3的单标溶液;以无水乙腈为溶剂,按表1配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液;配制浓度为10ng/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液;配制浓度为10ng/mL的三乙基胺的无水乙腈溶液;分别取0.5mL混合标准溶液于HPLC-MS-MS色谱瓶中,再按照表2分别加入(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液和三乙基胺乙腈溶液室温下反应过夜,在氮气氛围中浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解后立即对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;将确定构型后的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯通过保留时间比对确定衍生化后尿样中的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的色谱峰。外消旋体NNAL标准溶液衍生化生成的一对非对映异构体的峰面积为1:1。以HPLC-MS-MS色谱图中(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的浓度与(S)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的浓度之比为横坐标,以色谱图中(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的定量离子对峰面积与(S)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的定量离子对峰面积之比为纵坐标,建立(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线,以同样方法建立(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线。
3、实际样品检测
将在室温下解冻后的尿液样品摇匀,准确移取10mL于50mL试管中,加入100μL浓度为1ng/mL的rac-NNAL-甲基-d3溶液,再加入10mL的磷酸二氢氨缓冲溶液(pH6.4,50mM),充分混匀后上样到已经分别用2mL二氯甲烷、2mL甲醇、2mL水活化好的MIP-NNAL固相萃取小柱上进行净化,先用4*1mL去离子水淋洗后抽干、再用2mL甲苯、2mL甲苯/二氯甲烷(9/1)淋洗后抽干,最后用3*1mL二氯甲烷进行洗脱,合并洗脱液,加入1.0g无水硫酸钠干燥后过滤,在氮气氛围中浓缩至干,加入0.2mL浓度为1μg/mL的三乙基胺无水乙腈溶液,震荡1分钟,再在无水条件下加入0.3mL浓度为1μg/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐,室温下反应过夜,浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解后上HPLC-MS-MS检测。使用(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线计算待测样品中的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯,进而换算出该尿液中游离的(S)-NNAL和(R)-NNAL的浓度分别为0.30ng/mL和0.26ng/mL。
实施例4:
1、外消旋体NNAL的衍生化:外消旋体NNAL标准溶液:以无水乙腈为溶剂,配制浓度为1μg/mL的racNNAL标准品单标溶液,保留四位有效数字;以同样方式以无水乙腈为溶剂分别配制浓度为1μg/mL的rac-NNAL-甲基-d3的单标溶液;以无水乙腈为溶剂,按表1配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液;配制浓度为10ng/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯的无水乙腈溶液;配制浓度为10ng/mL的三乙基胺的无水乙腈溶液;分别取0.5mL混合标准溶液于HPLC-MS-MS色谱瓶中,再加入(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯的无水乙腈溶液和三乙基胺乙腈溶液70℃下反应过夜,在氮气氛围中浓缩至干,再用100uL乙腈/水(7/3)溶解后立即对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析。
2、实际样品检测
将在室温下解冻后的尿液样品摇匀,准确移取10mL于50mL试管中,加入100μL浓度为1ng/mL的rac-NNAL-甲基-d3溶液,再加入10mL的磷酸二氢氨缓冲溶液(pH6.4,50mM)和500μL的β-葡糖苷酸酶(1000U/mL尿液),充分混匀后置入微波辅助萃取仪,37℃恒温酶解100s,静置10分钟,再37℃恒温酶解100s,将酶解后的尿样上样到已经分别用2mL二氯甲烷、2mL甲醇、2mL水活化好的MIP-NNAL固相萃取小柱上进行净化,先用4*1mL去离子水淋洗后抽干、再用2mL甲苯、2mL甲苯/二氯甲烷(9/1)淋洗后抽干,最后用3*1mL二氯甲烷进行洗脱,合并洗脱液,加入1.0g无水硫酸钠干燥后过滤,在氮气氛围中浓缩至干,加入0.2mL浓度为1μg/mL的三乙基胺无水乙腈溶液,震荡1分钟,再在无水条件下加入0.3mL浓度为1μg/mL的(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯,室温下反应过夜,浓缩至干,再用100μL乙腈/水(7/3)溶解后上HPLC-MS-MS检测。使用(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线计算待测样品中的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯,进而换算出该尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的浓度分别为1.08ng/mL和1.03ng/mL。
需要指出,以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
与现有技术相比,本发明具有以下突出优点:
1、本发明使用衍生化HPLC-MS-MS法测定尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL,具有检测限低、稳定性好、快速准确等优点;
2、本发明方法的检测结果受主观判断因素影响小,易于推广应用。
3、本发明适用于尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测,是一种科学评估个体对烟气中NNK的暴露程度的方法,填补了这一技术领域的空白。
4、本发明的方法具有检测限低、速度快、准确度和灵敏度高的特点,适用于各种人体尿液常见样本中的(S)-NNAL和(R)-NNAL的检测,对于检测尿液中的(S)-NNAL和(R)-NNAL的含量以及评估人体对烟气中NNK的暴露程度具有重要意义。
Claims (4)
1.尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,其特征在于该方法包括以下的步骤:
①用测定旋光并比对的方法确定(S)-NNAL和(R)-NNAL的构型并作为参照,或用Mosher方法确定(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照;
②配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液,再进行Mosher衍生化,然后对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;用确定构型后的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯通过保留时间确定相应的色谱峰保留时间,采用内标法分别建立(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线;
③将在室温下解冻后的尿液样品摇匀,准确移取10mL于50mL试管中,加入rac-NNAL-甲基-d3溶液,再用MIP-NNAL固相萃取小柱净化,淋洗后洗脱,干燥过滤后进行Mosher衍生化,浓缩至干,再用7/3的乙腈/水溶解后上HPLC-MS-MS检测。
2.根据权利要求1所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,其特征在于在分析检测尿样中尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL时进行Mosher衍生化,并使用rac-NNAL-甲基-d3作为内标。
3.根据权利要求1所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,其特征在于使用微波辅助萃取仪在37℃对尿样进行恒温酶解。
4.根据权利要求1所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法,其特征在于向尿液样品加入rac-NNAL-甲基-d3溶液、磷酸二氢氨缓冲溶液(pH6.4,50mM)和β-葡糖苷酸酶混匀后置入恒温振荡器或微波辅助萃取仪中在37℃恒温酶解,再将酶解后的尿样经过MIP-NNAL固相萃取小柱净化,淋洗后用二氯甲烷洗脱,加入无水硫酸钠干燥后过滤,减压浓缩至干,加入三乙基胺无水乙腈溶液、(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液,衍生化后再对样品进行HPLC-MS-MS分析,进而换算出尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的含量。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310065977.7A CN103149297B (zh) | 2013-03-01 | 2013-03-01 | 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310065977.7A CN103149297B (zh) | 2013-03-01 | 2013-03-01 | 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103149297A true CN103149297A (zh) | 2013-06-12 |
CN103149297B CN103149297B (zh) | 2014-04-16 |
Family
ID=48547501
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310065977.7A Active CN103149297B (zh) | 2013-03-01 | 2013-03-01 | 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103149297B (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105044252A (zh) * | 2015-08-18 | 2015-11-11 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用 |
CN106018624A (zh) * | 2016-07-19 | 2016-10-12 | 曲阜师范大学 | 食品中亚硝胺的hplc检测方法 |
CN113533594A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-10-22 | 长沙都正生物科技股份有限公司 | 用于测定氨甲环酸含量的方法及试剂盒 |
CN114813991A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-07-29 | 上海交通大学医学院 | 一种人体尿液中新烟碱类杀虫剂的检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20100100154A (ko) * | 2009-03-05 | 2010-09-15 | 한국과학기술연구원 | 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체들의 동시분석 방법 |
CN102012409A (zh) * | 2010-11-04 | 2011-04-13 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 动物血液样品中痕量烟草特有N-亚硝胺(TSNAs)的分析方法 |
CN102445510A (zh) * | 2011-10-20 | 2012-05-09 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 测定肝微粒体中nnk代谢物的液质联用方法 |
-
2013
- 2013-03-01 CN CN201310065977.7A patent/CN103149297B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20100100154A (ko) * | 2009-03-05 | 2010-09-15 | 한국과학기술연구원 | 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체들의 동시분석 방법 |
CN102012409A (zh) * | 2010-11-04 | 2011-04-13 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 动物血液样品中痕量烟草特有N-亚硝胺(TSNAs)的分析方法 |
CN102445510A (zh) * | 2011-10-20 | 2012-05-09 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 测定肝微粒体中nnk代谢物的液质联用方法 |
Non-Patent Citations (5)
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105044252A (zh) * | 2015-08-18 | 2015-11-11 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用 |
CN106018624A (zh) * | 2016-07-19 | 2016-10-12 | 曲阜师范大学 | 食品中亚硝胺的hplc检测方法 |
CN106018624B (zh) * | 2016-07-19 | 2018-10-12 | 曲阜师范大学 | 食品中亚硝胺的hplc检测方法 |
CN113533594A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-10-22 | 长沙都正生物科技股份有限公司 | 用于测定氨甲环酸含量的方法及试剂盒 |
CN114813991A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-07-29 | 上海交通大学医学院 | 一种人体尿液中新烟碱类杀虫剂的检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103149297B (zh) | 2014-04-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101963604B (zh) | 烟草中甾醇的测定方法 | |
Elian | Determination of endogenous gamma-hydroxybutyric acid (GHB) levels in antemortem urine and blood | |
Hanff et al. | Simultaneous GC-ECNICI-MS measurement of nitrite, nitrate and creatinine in human urine and plasma in clinical settings | |
Pang et al. | Determination of airborne carbonyls via pentafluorophenylhydrazine derivatisation by GC–MS and its comparison with HPLC method | |
Oh et al. | Simple determination of hydrazine in waste water by headspace solid-phase micro extraction and gas chromatography-tandem mass spectrometry after derivatization with trifluoro pentanedione | |
Elian | GC–MS determination of gamma-hydroxybutyric acid (GHB) in blood | |
CN104297409A (zh) | 一种电子烟烟液中烟碱的手性分析方法 | |
CN104142374B (zh) | 一种采用直接衍生/高效液相色谱测定电子烟烟液中羰基化合物含量的方法 | |
Hong et al. | Determination of synthetic cathinones in urine using gas chromatography–mass spectrometry techniques | |
CN103149297B (zh) | 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法 | |
CN103776928B (zh) | 一种检测尿液中3-羟基可替宁的方法 | |
CN102590386B (zh) | 一种吸烟者尿液样品中烟碱及其代谢物的检测方法 | |
CN102788852A (zh) | 一种液相色谱-串联质谱法检测人体尿液中七种芳香胺化合物的方法 | |
Meng et al. | Simultaneous derivatization and extraction of free cyanide in biological samples with home-made hollow fiber-protected headspace liquid-phase microextraction followed by capillary electrophoresis with UV detection | |
Kwon et al. | Simple determination of fluoride in biological samples by headspace solid-phase microextraction and gas chromatography–tandem mass spectrometry | |
Li et al. | A simple analytical method of determining 1-hydroxypyrene glucuronide in human urine by isotope dilution with ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry | |
Rodríguez-Gonzalo et al. | Development, validation and application of a fast analytical methodology for the simultaneous determination of DNA-and RNA-derived urinary nucleosides by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry | |
Yao et al. | Development, validation, and application of a liquid chromatography–tandem mass spectrometry method for the determination of 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol in human hair | |
Wang et al. | Application of solid-phase microextraction and gas chromatography–mass spectrometry for measuring chemicals in saliva of synthetic leather workers | |
Yan et al. | Measurement of serum uric acid by isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry: Modification of a candidate reference measurement method and its clinical application | |
Lafay et al. | Contribution of microextraction in packed sorbent for the analysis of cotinine in human urine by GC–MS | |
Kartsova et al. | Determination of catecholamines by capillary electrophoresis and reversed-phase high-performance liquid chromatography | |
CN110333308B (zh) | 一种灵敏度、准确性高的同时测定尿液中nnal和可替宁的方法 | |
Zhao et al. | Analysis of the heterocyclic aromatic amines in cigarette smoke by liquid chromatography–tandem mass spectrometry | |
CN103175919B (zh) | 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的气相色谱-质谱-质谱联用检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |