KR20100100154A - 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체들의 동시분석 방법 - Google Patents

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Abstract

액체 크로마토그래피-질량분석기를 이용한 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법이 개시된다. 상기 동시분석 방법은 개별적 분석이 요구되는 물질들을 한 번의 측정과정을 통해 분석함으로써, 시간과 비용을 절감할 수 있으며 흡연과 관련된 질병들에 대한 위험성을 용이하게 감지할 수 있다.
니코틴, NNK, 액체 크로마토그래피, 질량분석기, 고체상 추출, MRM

Description

뇨 내의 담배성분 및 그 대사체들의 동시분석 방법 {Simultaneous quantitaive analysis method for tobacco elements and metabolites thereof in human urine}
본 발명은 뇨 내에 존재하는 담배성분 및 그 대사체들에 대한 동시분석 방법에 관한 것이다.
니코틴과 NNK (NNK; 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone)는 담배의 주요성분이자 발암물질로 알려져 있으며, 인체 내로 흡수되어 다양한 대사경로를 거친 후, 뇨를 통해 배설된다.
니코틴, NNK 및 그들의 대사체들을 검출하기 위해서, 종래에는 흡연자, 비흡연자 또는 암환자 등의 뇨, 혈장, 침 또는 조직 등에서 기체크로마토그래피-질량분석기, 액체크로마토그래피-자외선 검출기, 액체크로마토그래피-질량분석기 등을 이용하는 방법들이 사용되었다. 그러나, 이러한 분석법들은, 니코틴과 니코틴의 주요 대사체 또는 NNK와 NNK의 주요 대사체들에 대하여 각각 개별적인 분석을 실시하여야 한다는 한계가 있었다. 따라서, 뇨를 통하여 배설되는 전반적인 대사체들을 분석하기 위해서는, 각각의 물질에 대하여 과정을 달리하여 별도의 실험을 수행해 야 하므로, 많은 시간과 비용이 소요되는 문제점이 있었다.
따라서, 니코틴과 그 대사체 및 NNK와 그 대사체들을 포함한 여러 물질들을 동시에 분석하기 위한 경제적인 추출법과 소량의 뇨 시료에서도 우수한 분석 감도를 얻을 수 있는 안정적인 검출법의 개발이 요구되는 실정이다.
본 발명의 일실시예의 목적은 담배성분 및 그 대사체들에 대한 고감도의 동시분석 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 분석방법은, 액체 크로마토그래피-질량분석기를 이용하여 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체들을 동시에 분석하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 뇨 내의 담배성분 및 대사체들의 동시분석 방법은, 극성이 강한 물질을 포함하는 니코틴과 NNK 그리고 그들의 전반적인 대사체들을 동시에 정량분석 함으로써, 시간과 비용을 현저히 줄일 수 있다. 이를 통해, 흡연과 관련된 질병의 치료에 적합한 유효하고 적절한 판단지표를 제공할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따른 동시분석 방법은, 액체 크로마토그래피와 질량분석기를 이용하여 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체들을 동시에 분석하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 동시분석 방법은, 다양한 니코틴, NNK 및 그들의 대사체들을 동시에 분석할 수 있다는 장점이 있다. 또한, 기존의 방법들은, 니코틴과 NNK 그리고 그들의 대사체들을 분석하기 위해서, 다량의 시료(약 1 ml 이상)를 사용하여야 하는 단점을 개선함으로써, 소량의 시료만을 이용하더라도 우수한 분석 감도를 나타낼 수 있다.
일실시예에서, 본 발명에 따른 동시분석 방법을 보다 구체적으로 살펴보면 다음과 같다. 상기 동시분석 방법은,
검체인 뇨로부터 분석물질을 추출하는 추출공정;
상기 추출된 물질을 액체크로마토그래피를 이용하여 분리시키는 분리공정; 및
상기 분리공정에서 액체크로마토그래피를 통과한 분석물질에 대하여 질량분석을 이용하여 담배성분 및 그 대사체들의 농도를 분석하는 분석공정을 포함한다.
상기 담배성분 및 그 대사체들은, 담배의 구성성분 및 그 성분들의 다양한 생리 대사체들을 포함하는 의미이다. 일실시예에서, 상기 담배성분의 대사체들로는, 니코틴 및 그 대사체, NNK (4-(Methylnitro samino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone) 및 그 대사체를 포함한다.
일실시예에서, 상기 추출공정은 고체상 추출과정을 통해 분석물질을 추출할 수 있다. 일반적으로 니코틴, NNK 및 그들의 대사체들은 대체로 강한 극성을 나타낸다는 특징이 있다. 따라서, 검체인 뇨로부터 극성이 강한 니코틴과 엔엔케이의 대사체들에 대한 동시분석을 위하여, 이온결합(Mixed mode Cation Exchange) 모드를 이용한 고체상 추출법으로 분석시료를 추출한 후 증발 건고시켜 농축한 후 고성능 액체크로마토그래피 및 질량분석기(High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry)에 적용하여 농도를 분석하게 된다.
또 다른 일실시예에서, 상기 분리공정에서는, 추출공정에서 추출된 물질을 물과 메탄올의 비율이, 부피비를 기준으로, 3:7 내지 9:1인 용액 또는 메탄올에 용해시켜 액체크로마토그래피의 분석 컬럼을 통과시킬 수 있다. 보다 구체적으로는, 상기 추출공정에서 추출된 물질을 물과 메탄올의 비율이 1:1인 용액에 용해시켜 액체크로마토그래피의 분석 컬럼을 통과시킬 수 있다. 이는, 추출된 물질을 용해시키는 용액의 제조시, 물과 메탄올의 혼합비율에 따라 특정 물질에 대한 분해능이 달라질 수 있기 때문이다. 따라서, 상기 범위는 다양한 대사체들을 동시에 분리하기 위한 최적 범위를 선정한 것이다.
일실시예에서, 상기 분석공정은 MS-MS 모드인 MRM (Multiple Reaction Monitoring)으로 정량하는 과정을 포함할 수 있다. SIM(Selected Ion Monitoring)은 질량분석기의 소스(source) 부분에서 한 번 충돌하여 생긴 이온들을 이용하는 방법이다. 이에 반해, MRM은 상기 한 번 깨진 이온 중에서 특정 이온을 한 번 더 선택하여 연속하여 연결된 또 다른 MS의 source를 한 번 더 통과시켜 충돌시킨 후 이 중에서 얻은 이온들을 이용하는 방법이다. 보다 구체적으로는, SIM에서는 선택 한 정량이온이 혈장에서도 검출되는 이온인 경우에 정량에 방해가 될 수 있다는 문제점이 있다. 반면, MRM을 이용하는 경우에는, 같은 질량을 가진 이온이라도 한 번 더 깨지면 분자구조가 달라지면서 차별화된 경향을 나타내므로, 이를 정량이온으로 사용하게 되면 백그라운드에서 방해되는 피크가 제거되어 한 층 더 깨끗한 베이스 라인을 얻을 수 있다. 따라서, 질량분석시에 MRM 모드를 사용함으로써, 보다 우수한 분석 감도에서 원하는 물질들을 동시에 분석할 수 있다.
일실시예에서, 상기 니코틴 및 그 대사체들은 니코틴과 함께 생리 대사과정에서 발생되는 다양한 대사체들을 포함할 수 있다. 니코틴 및 그 대사체로는, 예를 들어, 니코틴(Nicotine), 니코틴 엔-옥사이드(Nicotine-N-oxide), 노르니코틴(Nornicotine), 니코틴 엔-글루코로나이드(Nicotinine-N-glucuronide), 코티닌(Cotinnie), 코티닌 엔-옥사이드(Cotinine-N-oxide), 노르코티닌(Norcotinine) 및 하이드록시코티닌(Hydrooxycotinine) 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 동시분석방법은, 니코틴의 생리 대사과정에서 발생될 수 있는 다양한 대사체들에 대한 동시분석이 가능하다는 장점이 있다.
또 다른 일실시예에서, 상기 NNK(4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone) 및 그 대사체들은 엔엔케이와 함께 생리 대사과정에서 발생되는 다양한 대사체들을 포함한다. NNK 및 NNK 대사체로는, 예를 들어, 엔엔케이(NNK), 엔엔케이 엔-옥사이드 (NNK-N-oxide; 4-(Methyl nitrosamino)-1-(3-pyridyl-N-oxide)-1-butanone), 엔엔에이엘 (NNAL; 4-(Methyl nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1- butanol) 및 엔엔에이엘엔-옥사이드(NNAL-N-oxide;4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl-N-oxide)-1- butanol)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다.
이하 본 발명을 하기 실시예 등에 의거하여 더욱 상세히 설명하지만, 이는 본 발명의 예시를 들기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이에 제한되는 것은 아니다.
<실시예>
1. 고체상 추출(Solid-Phase Extraction) 공정
니코틴 엔-글루코르나이드(Nicotine-N-glucuronide, NIC-N-GLU), 코티닌 엔-글루코르나이드(Cotinine-N-glucuronide, COT-N-GLU), 하이드록시 엔-글루코로나이드(Hydroxycotinin-N-glucuronide, THOC-N-GLU), 엔엔에이엘 엔-글루코르나이드(NNAL-N-glucuronide, NNAL-N-GLU) 등의 분석물질은 친수성과 친유성의 중합체 형태 HLB(Hydrophlic-liophilic balance)인 충진제를 사용하여 추출하여 분석하였을 때, 추출 효율성이 매우 낮기 때문에 분석을 하는데 많은 어려움이 있는 것으로 나타났다.
따라서, 이러한 극성이 강한 분석물질을 동시에 분석하기 위하여 이온결합(Mixed mode Cation exchange)모드를 사용하여 추출함으로써 염기성 물질에 높은 추출 효율성을 나타내고 충진제와 분석물질 간의 선택적인 머무름을 갖게 하는 충 진제를 사용하여 추출하였다.
인간의 뇨 2 mL를 취하여 15 mL의 폴리프로필렌 튜브에 담은 후, 내부 표준물질(internal standard)인 니코틴 메틸-디3(Nicotine-methyl-d3), 코티닌 메틸-디3(Cotinine-methyl-d3), 하이드록시코티닌메틸-디3 (Hydroxycotinine-methyl-d3) 10 ㎍/ml와 엔엔케이 메틸-디3(NNK-methyl-d3), 엔엔에이엘 메틸-3(NNAL-methyl-d3) 1㎍/ml의 혼합용액 20 ㎕ 가하였다. 그런 다음, 제조된 용액을 1 분간 볼텍싱(vortexing)한 후 고체상 추출(Solid-Phase extraction)을 행하였다.
2. 물과 메탄올의 혼합용액에 대한 용해 및 분리공정
추출된 고체상 추출물은 충진제와의 선택적 머무름을 이용하여 분석방해물질로부터 분리하게 되고, 이를 질소가스를 이용하여 증발시킨 후 남는 잔사를 수득하는 과정을 거치게 된다. 그러나, 수득된 잔사 중에는 극성이 상반되는 물질들이 혼합되어 있다. 따라서, 이러한 극성이 상반되는 물질들이 포함된 잔사를 용해시키기 위하여, 물과 메탄올을 적절한 비율로 혼합한 용액이 요구된다. 극성 및 비극성 물질들을 동시에 분석하기 위해서는 물과 메탄올에 대한 적절한 혼합비를 결정하여야 한다. 따라서, 보다 높은 회수율을 얻기 위하여, 물과 메탄올의 적절한 혼합비를 선정하기 위한 실험을 실시하였다.
실험과정은 다음과 같다. 먼저, 물과 메탄올(물 : 메탄올)의 혼합비율을, 부피비를 기준으로, 3:7, 5:5, 7:3, 9:1, 0:1(순수 메탄올)로 조절한 용액에서 수 득된 잔사를 용해시켰다. 그런 다음, 용해된 잔사를 고성능 액체크로마토그래피-질량분석기로 분석하였을 때, 나타내는 회수율을 비교하였다.
실험결과, 30% 메탄올을 사용하였을 경우 엔엔케이(NNK), 70% 메탄올을 사용하였을 경우 코티닌(Cotinine), 90%의 메탄올을 사용하였을 경우 코티닌(Cotinine)과 코티닌 엔-옥사이드(Cotinine-N-oxide), 100% 메탄올을 사용하였을 경우 니코틴 엔-옥사이드(Nicotine-N-oxide), 노르니코틴(Nornicotine), 코티닌(Cotinine) 및 코티닌 엔-옥사이드(Cotinine-N-oxide)가 검출되어지지 않는 것으로 나타났다. 따라서, 상대적으로 높은 회수율을 나타내는 50% 메탄올 용액을 사용하여 실험을 진행하였다.
먼저, 고체상 추출법을 통해 추출된 추출물을 진공건조기 (vacuum evaporator)로 건조시켰다. 건조 후 남은 잔사에 물과 메탄올이 5:5로 혼합된 용액 100 ㎕를 가하고 1 분간 볼텍싱하여 녹인 후, 고성능 액체크로마토그래피-질량분석기에 10 ㎕ 주입하여 분석을 실시하였다.
3. 액체크로마토그래피-질량분석기를 이용한 니코틴과 NNK의 농도 분석공정
니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들의 농도를 결정하기 위해 사용한 기기는, 에이질런트사의 binary pump를 장착한 고성능 액체크로마토그래피(Agilent Co., Palo Alto, 미국)와 6410 사중극자 질량 분석기(triple quardruple mass spectrometer, Agilent Co.,Palo Alto, 미국)이다. 사용된 컬럼은, 길이 50 mm, 내경 2.1 ㎜ 그리고 입자크기 3 ㎛인, 서머 슈펠코사의 Discovery 컬럼 (Discovery HS F5 C18, 50 mm×2.1 mm, Supleco, Bellefornte, PA, USA 미국)이다. 전개용매로, 10 mM 암모늄 아세테이트와 0.1% 아세트산을 함유한 수용액(용매 A)과, 100% 메탄올(용매 B)을 사용하였다. 유속은 200 ㎕/분으로 흘려주었으며, 분석시의 전개용매 조건은 다음과 같았다.
즉, 시작은 용매 A로 3 분까지 흘려주다가 3.5분 까지 용매 B를 10% 비율까지 증가시켜 흘려주고, 이 후 6 분까지 용매 B의 비율을 10%으로 유지시켰다. 이후 9 분까지 용매 B를 70%로 증가시켰으며, 다시 용매 B를 10 분까지 100%로 증가시켜 흘려주었다. 여기서 이후 4 분 동안 머물렀다.
분석컬럼을 통과한 니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들의 질량분석기(MS, Mass Spectrophotometer)에 적용시켜 분석하였다. 분석시 사용한 질량분석기는 전기스프레이(electrospary) 이온화기를 장착하였으며, 이온 스프레이 전압은 4 KV, 네블라이저(nebulizer)가스 압력은 40 arb(arbitrary unit), 그리고 모세관 온도는 350℃이었다. 질량분석은 양성 이온화(positive ionization)방법을 사용하였다. 또한 signal to noise 비율을 개선하기 위하여 모약물의 분자량에 해당하는 이온을 선택적으로 잡은 후 이온을 다시 충돌시켜 생성되는 생성이온 (product ion)을 검출하는 MRM (Multiple Reaction Monitoring) 모드에서 분석을 시행하였다.
분석한 니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들의 HPLC 크로마토그램을 도 1에 도시하였으며, 정량이온은 하기 표 1에 나타내었다.
분석물질 전구이온
[Parent ion]		 생성이온
[Daughter ion]
니코틴(Nicotine) 163.1 84.1
니코틴 엔-옥사이드(Nicotine-N-oxide) 179.0 132.0
노르니코틴(Nornicotine) 149.0 80.0
니코틴 엔-글루코로나이드(Nicotine-N-glucuronide) 339.0 163.1
코티닌(Cotinine) 177.0 80.0
코티닌 엔-옥사이드(Cotinine-N-oxide) 193.0 95.9
노르코티닌(Norcotinine) 163.1 80.0
하이드록시코티닌(Hydroxycotinine) 193.0 79.9
엔엔케이(NNK) 208.1 122.0
엔엔케이 엔-옥사이드(NNK-N-oxide) 224.1 122.0
엔엔에이엘(NNAL) 210.1 92.9
엔엔에이엘 엔-옥사이드(NNAL-N-oxide) 226.1 93.0
4. 정량공정
니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들의 농도를 정량하기 위한 검량곡선을 도시하였고, 이를 통해 뇨 내의 니코틴 및 그 대사체와 NNK 및 그 대사체들의 농도를 정량하였다. 도시된 곡선은 도 2에 나타내었다. 검량선에서 나타낸 바와 같이, 모든 약물에서 0.02 내지 1000 ng/ml의 농도 범위에서 R=0.993 이상의 좋은 직선성을 나타내었다. 변동 계수(Coefficient Variation; CV) 값과 정확도(accuracy)는 모두 20% 이내로 좋은 재현성과 정확도를 나타내었다.
상기 곡선을 이용하여 사람의 뇨에서 실제 검출한 니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들의 양을 정량한 결과는 하기 표 2와 같다.
분석물질 측정 농도
(ng/mL)
니코틴 (Nicotine) 427.96 ± 404.07
니코틴 엔-옥사이드 (Nicotine-N-oxide) 361.98 ± 221.68
노르니코틴 (Nornicotine) 52.47 ± 32.27
니코틴 엔-글루코로나이드 (Nicotine-N-glucuronide) 434.44 ± 275.86
코티닌 (Cotinine) 1056.35 ± 524.76
코티닌 엔-옥사이드 (Cotninie-N-oxide) 47.77 ± 19.01
노르코티닌 (Norcotinine) 30122 ± 202.45
하이드록시코티닌 (Hydroxycotinine) 1151.49 ± 458.63
엔엔케이 (NNK) 0.25 ± 0.15
엔엔키이 엔-옥사이드 (NNK-N-oxide) N.D.
엔엔에이엘 (NNAL) N.D.
엔엔에이엘 엔-옥사이드 (NNAL-N-oxide) N.D.
N.D. : Not Detected
도 1은 본 발명에 일실시예에 따른 검출 방법으로 추출된 니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들을 고성능 액체크로마토그래피/질량분석기로 분석한 크로마토그램이다;
도 2는 니코틴 및 그 대사체, NNK 및 그 대사체들의 농도를 정량하기 위한 검량곡선을 나타낸 것이다.

Claims (7)

  1. 검체인 뇨로부터 분석물질을 고체상으로 추출하는 추출공정;
    상기 추출된 물질을 액체크로마토그래피를 이용하여 분리시키는 분리공정; 및
    상기 분리공정에서 액체크로마토그래피를 통과한 분석물질에 대하여 질량분석을 이용하여 담배성분 및 그 대사체들의 농도를 분석하는 분석공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 담배성분 및 그 대사체들은, 니코틴 또는 그 대사체, 엔엔케이(NNK; 4-(Methylnitro samino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone) 또는 그 대사체들로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상인 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 분리공정에서는, 추출된 물질을 물과 메탄올의 비율이, 부피비를 기준으로, 3:7 내지 9:1인 용액 또는 메탄올에 용해시켜 액체크로마토그래피의 분석 컬럼을 통과하는 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 분리공정에서는, 추출된 물질을 물과 메탄올의 비율이, 부피비를 기준으로, 1:1인 용액에 용해시켜 액체크로마토그래피의 분석 컬럼을 통과하는 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
  5. 제 2 항에 있어서,
    상기 분석공정에서, 상기 질량분석은 MRM(Multiple Reaction Monitoring)에서 정량분석을 수행하는 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
  6. 제 2 항에 있어서,
    니코틴 및 그 대사체는, 니코틴(Nicotine), 니코틴 엔-옥사이드(Nicotine-N-oxide), 노르니코틴(Nornicotine), 니코틴 엔-글루코로나이드(Nicotinine-N-glucuronide), 코티닌(Cotinnie), 코티닌 엔-옥사이드(Cotinine-N-oxide), 노르코티닌(Norcotinine) 및 하이드록시코티닌(Hydrooxycotinine)으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상인 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
  7. 제 2 항에 있어서,
    엔엔케이 및 그 대사체는, 엔엔케이(NNK), 엔엔케이 엔-옥사이드(NNK-N-oxide; 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl-N-oxide)-1-butanone), 엔엔에이엘(NNAL; 4-(Methyl nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol) 및 엔엔에이엘엔-옥사이드(NNAL-N-oxide; 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl-N-oxide)-1-butanol)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상인 것을 특징으로 하는 뇨 내의 담배성분 및 그 대사체의 동시분석 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102353739A (zh) * 2011-09-01 2012-02-15 湖北中烟工业有限责任公司 一种烟草中烟碱的快速检测方法
CN102445510A (zh) * 2011-10-20 2012-05-09 中国烟草总公司郑州烟草研究院 测定肝微粒体中nnk代谢物的液质联用方法
CN102590386A (zh) * 2012-02-16 2012-07-18 广西中烟工业有限责任公司 一种吸烟者尿液样品中烟碱及其代谢物的检测方法
CN102823943A (zh) * 2012-05-24 2012-12-19 广东中烟工业有限责任公司 深吸情况下基于nnk释放量的卷烟设计调整方法
CN103149297A (zh) * 2013-03-01 2013-06-12 红云红河烟草(集团)有限责任公司 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法
CN103323419A (zh) * 2013-06-15 2013-09-25 广东医学院 一种烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法
CN105954456A (zh) * 2016-07-18 2016-09-21 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种电子烟烟液中2-丁酮的测定方法
CN106645442A (zh) * 2016-09-23 2017-05-10 瀚盟测试科技（天津）有限公司 烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的uplc‑ms/ms检测方法
CN107367555A (zh) * 2017-06-29 2017-11-21 国家烟草质量监督检验中心 一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法
CN107515268A (zh) * 2017-09-14 2017-12-26 中国计量大学 细胞裂解液中尼古丁的定量检测方法
WO2020171650A1 (ko) * 2019-02-22 2020-08-27 고려대학교 산학협력단 소변 시료 내 서로 다른 그룹 간의 대사체 차별성을 분석하는 방법
CN111727783A (zh) * 2020-07-27 2020-10-02 贵州省烟草科学研究院 一种烟草赤星病始发期的预报方法
CN111983109A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 国家烟草质量监督检验中心 一种烟草或烟草制品中生物碱的手性分析方法
CN111983108A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 国家烟草质量监督检验中心 一种电子烟气溶胶中主要生物碱的手性分析方法
CN111983110A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 国家烟草质量监督检验中心 一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103175919B (zh) * 2013-03-01 2014-07-02 红云红河烟草(集团)有限责任公司 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的气相色谱-质谱-质谱联用检测方法
CN104698102B (zh) * 2015-03-17 2016-04-06 川渝中烟工业有限责任公司 测定卷烟主流烟气总粒相物中烟碱含量的方法
CN106338569A (zh) * 2016-07-29 2017-01-18 云南省烟草农业科学研究院 一种基于气相色谱质谱的烟草茎部代谢组学分析方法
CN110333308B (zh) * 2019-07-18 2021-03-02 四川大学 一种灵敏度、准确性高的同时测定尿液中nnal和可替宁的方法

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102353739B (zh) * 2011-09-01 2013-05-15 湖北中烟工业有限责任公司 一种烟草中烟碱的快速检测方法
CN102353739A (zh) * 2011-09-01 2012-02-15 湖北中烟工业有限责任公司 一种烟草中烟碱的快速检测方法
CN102445510A (zh) * 2011-10-20 2012-05-09 中国烟草总公司郑州烟草研究院 测定肝微粒体中nnk代谢物的液质联用方法
CN102590386A (zh) * 2012-02-16 2012-07-18 广西中烟工业有限责任公司 一种吸烟者尿液样品中烟碱及其代谢物的检测方法
CN102823943B (zh) * 2012-05-24 2014-12-10 广东中烟工业有限责任公司 深吸情况下基于nnk释放量的卷烟设计调整方法
CN102823943A (zh) * 2012-05-24 2012-12-19 广东中烟工业有限责任公司 深吸情况下基于nnk释放量的卷烟设计调整方法
CN103149297A (zh) * 2013-03-01 2013-06-12 红云红河烟草(集团)有限责任公司 尿液中(s)-nnal和(r)-nnal的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法
CN103323419A (zh) * 2013-06-15 2013-09-25 广东医学院 一种烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法
CN105954456A (zh) * 2016-07-18 2016-09-21 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种电子烟烟液中2-丁酮的测定方法
CN105954456B (zh) * 2016-07-18 2017-11-17 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种电子烟烟液中2‑丁酮的测定方法
CN106645442A (zh) * 2016-09-23 2017-05-10 瀚盟测试科技（天津）有限公司 烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的uplc‑ms/ms检测方法
CN106645442B (zh) * 2016-09-23 2019-05-24 瀚盟测试科技（天津）有限公司 烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的uplc-ms/ms检测方法
CN107367555A (zh) * 2017-06-29 2017-11-21 国家烟草质量监督检验中心 一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法
CN107367555B (zh) * 2017-06-29 2019-09-06 国家烟草质量监督检验中心 一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法
CN107515268A (zh) * 2017-09-14 2017-12-26 中国计量大学 细胞裂解液中尼古丁的定量检测方法
CN107515268B (zh) * 2017-09-14 2020-06-16 中国计量大学 细胞裂解液中尼古丁的定量检测方法
WO2020171650A1 (ko) * 2019-02-22 2020-08-27 고려대학교 산학협력단 소변 시료 내 서로 다른 그룹 간의 대사체 차별성을 분석하는 방법
KR20200103246A (ko) * 2019-02-22 2020-09-02 고려대학교 산학협력단 소변의 대사체 분석을 위한 소변 샘플 처리 방법
CN113728229A (zh) * 2019-02-22 2021-11-30 高丽大学校产学协力团 分析不同组间尿液样本中代谢物差异的方法
CN111727783A (zh) * 2020-07-27 2020-10-02 贵州省烟草科学研究院 一种烟草赤星病始发期的预报方法
CN111983109A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 国家烟草质量监督检验中心 一种烟草或烟草制品中生物碱的手性分析方法
CN111983108A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 国家烟草质量监督检验中心 一种电子烟气溶胶中主要生物碱的手性分析方法
CN111983110A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 国家烟草质量监督检验中心 一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法
CN111983108B (zh) * 2020-09-03 2022-07-12 国家烟草质量监督检验中心 一种电子烟气溶胶中主要生物碱的手性分析方法
CN111983110B (zh) * 2020-09-03 2022-07-12 国家烟草质量监督检验中心 一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法
CN111983109B (zh) * 2020-09-03 2022-07-12 国家烟草质量监督检验中心 一种烟草或烟草制品中生物碱的手性分析方法

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