CN103130867A - 一种链霉亲和素偶联物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成，A．按质量份数计，称取MES、NaCl、H2O、SA和EDC各组分；B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；C．将溶液PH值调至3～8；D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应1～3小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。本发明克服了现有的制备方法产率不高、产品不稳定的缺陷，提供了一种链霉亲和素偶联物的制备方法，产率提高5倍左右，产品的稳定性和保质期也大大增加，而且操作更加简单便捷。

Description

一种链霉亲和素偶联物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种链霉亲和素偶联物的制备方法。
背景技术
链霉亲和素（streptavidin，简称SA），是与亲和素（avidin，简称AV）有相似生物学特性的一种蛋白质，1963年，Chaiet在筛选抗菌素时首先发现，并予以报道。近年来，用以检测抗原-抗体系统时，显示其非特异性结合远比AV为低，尤其在组化和DNA分子杂交检测中几无背景显色，因此，SA近年来逐渐受到青睐，大有替代AV之势。
现有技术中，链霉亲和素偶联物的制备方法比较复杂，流程比较长。首先是SA和rIgG分别偶联小分子。然后各自过分子筛纯化脱盐。后再混合反应，透析后放置一周。再进行浓缩，进行下一步的纯化过柱。基本周期要一个星期。这种制备方法的产率并不高，产品不稳定。
发明内容
本发明针对现有的制备方法产率不高、产品不稳定的缺陷，目的是提供一种链霉亲和素偶联物的制备方法，产率提高5倍左右，产品的稳定性和保质期也大大增加，而且操作更加简单便捷。
为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成，
A．按质量份数计，称取以下各组分，
MES   1.5～2.5份，
NaCl  2.5～3.5份，
H2O   50～150份，
SA    0.1～0.5份，
EDC   0.04～0.1份，
其中MES为2-吗啉乙磺酸，NaCl为氯化钠，SA为链霉亲和素，EDC为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至3～8；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应1～3小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。使用时，将得到的产品静置一晚上，然后加入双蒸水稀释即可。
与现有技术相比，步骤E能使SA自身偶联，不用过柱纯化，没有任何损失，可以大幅提高产率。而且不会引进其他蛋白，从而大幅提高了产品的稳定性和保质期。
作为优选，步骤A中，称取以下各组分，
MES   1.5～2.5克，
NaCl  2.5～3.5克，
H2O   50～150克，
SA    0.1～0.5克，
EDC   0.04～0.1克。
作为优选，步骤A中，称取以下各组分，
MES   2～2.3克，
NaCl  2.8～3克，
H2O   80～120克，
SA    0.2～0.4克，
EDC   0.05～0.08克。
作为优选，步骤A中，称取以下各组分，
MES   2.1～2.2克，
NaCl  2.9～3克，
H2O   90～110克，
SA    0.3克，
EDC   0.06～0.07克。
作为优选，步骤C中，将溶液PH值调至5～6。
作为优选，步骤E中，将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应2小时。作为优选，H2O为双蒸水。双蒸水为经过两次蒸馏得到的水。
本发明克服了现有的制备方法产率不高、产品不稳定的缺陷，提供了一种链霉亲和素偶联物的制备方法，产率提高5倍左右，产品的稳定性和保质期也大大增加，而且操作更加简单便捷。
具体实施方式
下面结合实施例1至6对本发明作进一步详细描述，并且通过实施例1至6制备链霉亲和素偶联物的产率、产品的稳定期、保质期和生产周期的统计结果，与对比例中利用现有技术制备链霉亲和素偶联物的产率、产品的稳定期、保质期和生产周期的统计结果进行对比，进一步说明本发明的制备方法的有益效果。
实施例1
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成：
A．称取以下各组分，
MES   1.5克，
NaCl  2.5克，
H2O   50克，
SA    0.1克，
EDC  0.04克，
其中MES为2-吗啉乙磺酸，NaCl为氯化钠，SA为链霉亲和素，EDC为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至3；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应1小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
实施例2
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成：
A．称取以下各组分，
MES   2克，
NaCl  2.8克，
H2O   80克，
SA    0.2克，
EDC   0.05克，
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至5；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应2小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
实施例3
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成：
A．称取以下各组分，
MES   2.1克，
NaCl  2.9克，
H2O   90克，
SA    0.3克，
EDC   0.06克，
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至6；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应2小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
实施例4
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成：
A．称取以下各组分，
MES   2.2克，
NaCl  3克，
H2O   100克，
SA    0.3克，
EDC   0.06克，
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至7；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应2小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
实施例5
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成：
A．称取以下各组分，
MES   2.3克，
NaCl  3克，
H2O   110克，
SA    0.4克，
EDC   0.07克，
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至7；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应3小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
实施例6
一种链霉亲和素偶联物的制备方法，依次由下述步骤组成：
A．称取以下各组分，
MES   2.5克，
NaCl  3.5克，
H2O   150克，
SA    0.5克，
EDC   0.1克，
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至8；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应3小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
对比例
一种现有技术的链霉亲和素偶联物的制备方法，首先是SA和rIgG分别偶联小分子。然后各自过分子筛纯化脱盐。后再混合反应，透析后放置一周。再进行浓缩，进行下一步的纯化过柱。基本周期要一个星期。
然后，统计产率、产品的稳定期、保质期和生产周期，在表1中列出了统计结果。
表1
项目名称 产率 产品的稳定期 产品的保质期 生产周期
实施例1 120% 3年 3年 1天
实施例2 133% 4年 4年 1天
实施例3 163% 4年 4年 1天
实施例4 130% 4年 4年 1天
实施例5 112% 3年 3年 1天
实施例6 108% 2年 2年 1天
对比例 30% 1年 1年 7天
说明：其中，产品的稳定期越长表明产品的稳定性越好。从上表1中实施例1至6和对比例的产率、产品的稳定期和保质期的统计数据可知，本发明的产率是对比例的3～5倍，稳定期和保质期也明显高于对比例，生产周期从现有技术的7天缩短为1天，因此，本发明的链霉亲和素偶联物的制备方法明显优于现有技术，而且操作更加简单便捷，所以本发明在生物学检查抗原-抗体系统技术领域中是具有良好的应用前景的。
总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。

Claims (7)

1.一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：依次由下述步骤组成，
A．按质量份数计，称取以下各组分，
MES   1.5～2.5份，
NaCl  2.5～3.5份，
H2O   50～150份，
SA    0.1～0.5份，
EDC   0.04～0.1份，
其中MES为2-吗啉乙磺酸，NaCl为氯化钠，SA为链霉亲和素，EDC为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；
B．将MES和NaCl放于烧杯中，加入H2O配成溶液；
C．将溶液PH值调至3～8；
D．将SA加入溶液中，放在旋转混合器上反应，直至SA充分溶解；
E．将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应1～3小时后，得到链霉亲和素偶联物产品。
2.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：步骤A中，称取以下各组分，
MES   1.5～2.5克，
NaCl  2.5～3.5克，
H2O   50～150克，
SA    0.1～0.5克，
EDC   0.04～0.1克。
3.根据权利要求2所述的一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：步骤A中，称取以下各组分，
MES   2～2.3克，
NaCl  2.8～3克，
H2O   80～120克，
SA    0.2～0.4克，
EDC   0.05～0.08克。
4.根据权利要求3所述的一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：步骤A中，称取以下各组分，
MES   2.1～2.2克，
NaCl  2.9～3克，
H2O   90～110克，
SA    0.3克，
EDC   0.06～0.07克。
5.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：步骤C中，将溶液PH值调至5～6。
6.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：步骤E中，将EDC加入溶液中，放在旋转混合器上反应2小时。
7.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素偶联物的制备方法，其特征在于：H2O为双蒸水。
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