CN103124563A - 用于前列腺癌治疗的联合治疗 - Google Patents

Abstract

本说明书中公开了萘醌类似物例如白花丹素，含萘醌类似物例如白花丹素的药物组合物，以及用萘醌类似物例如白花丹素治疗疾病和/或症状例如癌症的方法。说明书中还包括联合治疗，其中向患有症状例如癌症的患者提供萘醌类似物例如白花丹素以及激素治疗剂。

Description

用于前列腺癌治疗的联合治疗

对相关申请的交叉引用

本申请要求2010年8月4日递交的美国临时申请第61/370,534号的优先权的权益；这项申请的全部内容以引用的方式被明确结合在本说明书中。

技术领域

本申请的方面涉及化学、生物化学和医学领域。更具体地，本说明书中公开了萘醌类似物（例如白花丹素）、含萘醌类似物（例如白花丹素）的药物组合物，以及用萘醌类似物（例如白花丹素）治疗疾病和/或症状的方法。本申请还包括联合治疗，其中向患有癌症（例如前列腺癌）的患者提供萘醌类似物（例如白花丹素）以及激素治疗剂（例如激素阻断化合物）。

背景技术

前列腺癌在前列腺中出现，并且是典型的缓慢生长；然而，有些前列腺癌是有侵略性的。前列腺癌细胞通常为雄激素/睾酮/DHT依赖的，并且可以从前列腺转移至身体的其他部位，特别是骨和淋巴结。对于仍位于前列腺内的前列腺癌的治疗方案包括观察等待/积极监视，外部激光辐射疗法，近距放射疗法，冷冻手术，HIFU和手术。通常将激素疗法和化学疗法留作治疗已经扩散超出了前列腺的疾病。然而，也有例外，放射疗法可被用于某些晚期肿瘤，激素疗法可被用于某些早期肿瘤。

经过一到三年的激素疗法，尽管雄激素/睾酮/DHT被阻断，但通常前列腺癌细胞会重新开始生长。现在也经常使用以前被称之为“激素抵抗性前列腺癌”或“雄激素-非依赖的前列腺癌”的术语--去势抵抗性前列腺癌（CRPC）。化学治疗剂和免疫疗法已经表现出可以延长CRPC后的生存期，但生存率有限。尽管付出了诸多努力，但对于更多的癌症疗法，尤其是前列腺癌疗法的需要仍然很明显。

发明内容

本说明书中公开的一些实施方案涉及一种抑制或延迟前列腺癌的生长的方法：向患有前列腺癌的患者提供治疗有效量的式（I）化合物，或式（I）的药学上可接受的盐，同时降低患者体内的雄激素的量。在一些实施方案中，可以通过向患者提供抗雄激素化合物、雌激素、黄体生成素释放激素（LHRH）激动剂或LHRH拮抗剂而减少雄激素的量。在一些实施方案中，可以通过向患者提供甾族的抗雄激素或非甾族的抗雄激素而降低雄激素的量。在一些实施方案中，可以通过向患者提供醋酸赛普罗特博、阿比特龙、非那雄胺、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基已烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克和/或地加瑞克而降低雄激素的量。在一些实施方案中，抑制或延迟前列腺癌的生长的方法能够将患者的血清睾酮水平降至大约20-50ng/dL。在一些实施方案中，抑制或延迟前列腺癌的生长的方法可以将患者的血清睾酮水平降至低于大约50ng/dL。在一些实施方案中，抑制或延迟前列腺癌的生长的方法可以将患者的血清睾酮水平降至低于大约20ng/dL。

在本说明书中公开的一些实施方案涉及一种鉴别抑制或延迟前列腺癌细胞生长的化合物的方法：建立伪原位腔室小鼠模型，其中所述小鼠模型患有前列腺癌；在所述小鼠模型中降低雄激素水平；向所述小鼠模型提供式（I）的化合物或其药学上可接受的盐或其前药；以及评价所述化合物在抑制前列腺癌细胞的生长上是否有效。

在本说明书中公开的一些实施方案涉及一种抑制或延迟去势抵抗性前列腺癌（CRPC）发作的方法：将患者分类为属于处在发展出CRPC风险的人群的人员；向所述患者提供治疗有效量的式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐，同时降低所述患者体内的雄激素的量；以及评价前列腺癌细胞增殖的抑制或延迟情况或其标志或CRPC的发作情况。

在本说明书中公开的一些实施方案涉及一种鉴别抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的化合物的方法：将前列腺癌细胞在不含雄激素下接触式（I）的化合物；确定前列腺癌细胞增殖中是否出现抑制或延迟；以及将化合物分类归入在不含雄激素下抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的种类，或者归入不能抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的种类。

在本说明书中公开的一些实施方案涉及一种使前列腺癌得以治疗的方法：将前列腺癌细胞在不含雄激素下接触式（I）的化合物；确定在前列腺癌细胞增殖中是否出现抑制或延迟；选择在不含雄激素下抑制前列腺癌细胞增殖的式（I）化合物；以及制定在不含雄激素下抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的化合物的配方，向罹患前列腺癌的患者施用。

在本说明书中公开的一些实施方案涉及式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐和激素治疗剂的联合，用于抑制或延迟前列腺癌细胞增殖或去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的发作。在一些实施方案中，所述激素治疗剂可以为醋酸赛普罗特博、阿比特龙、非那雄胺、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基已烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克或一种或多种所述化合物的任意组合。

在本说明书中公开的一些实施方案涉及式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐和激素治疗剂的联合，用于降低前列腺肿瘤的大小。在一些实施方案中，激素治疗剂可以是醋酸赛普罗特博、阿比特龙、非那雄胺、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基已烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克或一种或多种所述化合物的任意组合。

附图说明

图1显示了萘醌类似物对于PTEN-P2/GFP细胞增殖的作用。

图2显示了萘醌类似物对于PTEN-P2/GFP细胞增殖的作用。

图3显示白花丹素在PTEN-P2/GFP细胞中的剂量反应。

图4比较了在不治疗、单独的去势治疗、单独的白花丹素治疗，以及去势和白花丹素联合治疗下肿瘤的生长情况。

图5显示了在与去势联合下，0.1mg/kg、0.3mg/kg和1mg/kg的白花丹素的作用。

图6示出了在手术去势后添加白花丹素的作用。

图7示出了在每日腹腔内注射白花丹素（2mg/kg）后细胞凋亡（AP）和有丝分裂（MI）增加。

图8示出了在不含二氢睾酮下白花丹素在人LNCaP细胞中的作用。

具体实施方式

I.定义

除非另行规定，在本说明书中使用的所有技术和科学术语的含义与本领域普通技术人员通常理解的含义相同。除非另外声明，在本说明书中参考的所有专利、申请、公布的申请以及其他出版物均以其全部被结合作为参考。除非另外声明，如果本说明书中对于一个术语有多种定义，则以本部分的为准。

在本说明书中使用的任何“R”基团，例如（并非限制）R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴表示可以连接至所给出的原子上的取代基。R基团可以是被取代的或未被取代的。

在本说明书中使用的“C_a-C_b”中“a”和“b”为表示烷基、链烯基或炔基基团中碳原子数量的整数，或者为表示在环烷基、环链烯基、环炔基、芳基、杂芳基或杂脂环基的环中碳原子数量的整数。即，烷基、链烯基、炔基、环烷基的环、环链烯基的环、环炔基的环、芳基的环、杂芳基的环或杂脂环基的环可以包含从“a”到“b”（包括a和b）个碳原子。因此，例如，“C₁-C₄烷基”基团指的是具有从1-4个碳的所有烷基，即，CH₃-、CH₃CH₂-、CH₃CH₂CH₂-、(CH₃)₂CH-、CH₃CH₂CH₂CH₂-、CH₃CH₂CH(CH₃)-和(CH₃)₃C-。如果针对烷基或链烯基没有指定“a”和“b”，则应该认为是指这些定义所描述的最广范围。

在本说明书中使用的“烷基”指的是包含全部饱和的（没有双键或三键）烃类基团的直链或支链的烃链。所述烷基基团可以具有1-20个碳原子（当其每次出现在说明书中时，数值范围例如“1到20”指的是在给出的范围内的每一个整数；例如，“1到20个碳原子”意味着所述烷基可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等等，直至并包括20个碳原子组成，虽然本定义同样覆盖了没有给出的数值范围下出现的术语“烷基”）。所述烷基也可以是具有1-10个碳原子的中等大小的烷基。所述烷基也可能是具有1-6个碳原子的低级烷基。化合物的烷基基团可以被命名为“C₁-C₄烷基”或类似的名称。仅通过举例的方式来说，“C₁-C₄烷基”表示在烷基链中有1-4个碳原子，即所述烷基链选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基以及叔丁基。典型的烷基包括但绝不局限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。所述烷基基团可以是被取代的或未被取代的。

在本说明书中使用的“链烯基”指的是在直链或支链的烃链中含有一个或多个双键的烷基。链烯基基团可以是未被取代的或被取代的。

在本说明书中使用的术语“卤素”指的是元素周期表中第7族的任何一种放射稳定的原子，例如氟、氯、溴和碘。

当一个基团被描述为“可选择性地被取代”时，则该基团可以是未被取代的或被一个或多个所给出的取代基所取代。同样地，当一个基团被描述为“未被取代的或被取代的”，如果被取代了，则取代基可以选自一个或多个所指出的取代基。如果没有给出取代基，则意味着所指出的“可选择性地被取代”或“被取代”的基团可以被一个或多个单独和独立选自如下基团的基团所取代：烷基、链烯基、炔基、环烷基、环链烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、杂芳烷基、（杂脂环基）烷基、羟基、被保护的羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤素、硫羰基、O-氨甲酰基、N-氨甲酰基、O-硫氨甲酰基、N-硫氨甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、被保护的C-羧基、O-羧基、异氰酰基、硫氰酰基、异硫氰酰基、硝基、甲硅烷基、氧硫基、亚硫酰基、磺酰基、卤烷基、卤烷氧基、三卤甲烷磺酰基、三卤甲烷磺酰胺基、氨基、单取代的氨基和双取代的氨基，及其被保护的衍生物。

术语“萘醌类似物”指的是式（I）的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶同本说明书中的定义。

术语“药学上可接受的盐”指的是不会对其所施用的有机体产生严重刺激并且不会取消该化合物的生物活性和特性的化合物的盐。在一些实施方案中，所述盐为化合物的加酸盐。药学上的盐可通过使化合物与无机酸例如氢卤酸（例如盐酸或氢溴酸）、硫酸、硝酸和磷酸反应获得。药学上的盐也可通过将化合物与有机酸例如脂肪族或芳香的羧酸或磺酸，例如蚁酸、醋酸、琥珀酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、烟酸、甲基磺酸、乙基磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸或萘磺酸反应获得。药学上的盐也可通过将化合物与碱反应形成盐而获得，所形成的盐例如铵盐、碱金属盐（例如钠盐或钾盐）、碱土金属盐（例如钙盐或镁盐）、有机碱的盐（例如二环己基胺、N-甲基-D-葡萄糖胺、三（羟甲基）甲胺、C₁-C₇烷基胺、环己胺、三乙醇胺、乙二胺），以及氨基酸类（例如精氨酸和赖氨酸）的盐。

应当理解，在本说明书中描述的任何具有一个或多个手性中心的化合物中，如果没有明确给出绝对立体化学，则每个手性中心可以独立地为R-构型或S-构型或其混合物。因此，本说明书中提供的化合物可以是非对映异构纯的、非对映异构富含的或可以是立体异构混合物。此外，应当理解的是，在本说明书中描述的任何具有一个或多个双键生成的可被定义为E或Z的几何异构体的化合物中，每个双键可以独立地为E或Z或其混合物。同样地，应当理解，在任何所描述的化合物中，也包括了其所有的互变异构形式。

术语“药物组合物”指的是在本说明书中公开的化合物与其他化学组分，如稀释剂或载体的混合物。所述药物组合物有助于所述化合物向有机体的给药。药物组合物也可通过将化合物与无机酸或有机酸反应获得，所述无机酸或有机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。药物组合物通常会被设计为用于特定的给药途径。

术语“生理学上可接受的”限定的是没有取消化合物的生物活性及特性的载体、稀释剂或赋形剂。

在本说明书中使用的“载体”指的是可以促进化合物结合进入细胞或组织中的化合物。例如（并非是限制），二甲亚砜（DMSO）是一种经常被使用的可以促进许多有机化合物摄取进入患者的细胞或组织中的载体。

在本说明书中使用的“稀释剂”指的是药物组合物中缺乏药理学活性但可以是药学上必要或合乎需要的一种成分。例如，可以使用稀释剂以增加由于质量太小而难于生产和/或给药的强效药的体积。稀释剂也可以是用于将待通过注射、口服或吸入而施用的溶解药物的液体。本领域中一种常用形式的稀释剂为缓冲水溶液，例如但并非限制的可模拟人血中组合物的磷酸盐缓冲盐水。

在本说明书中使用的“赋形剂”指的是加入药物组合物中以向所述组合物提供（并非是限制）容积、相容性、稳定性、结合力、润滑、崩解力等等的惰性物质。“稀释剂”是一种赋形剂。

在本说明书中使用的“患者”或“受试者”指的是治疗、观察或实验对象的动物。“动物”包括冷血和热血脊椎动物和无脊椎动物，例如鱼、贝类、爬行动物以及特别是哺乳类。“哺乳类”包括（并非是限制）小鼠、大鼠、兔、豚鼠、狗、猫、绵羊、山羊、奶牛、马、灵长类，例如猴、黑猩猩和猿，以及特别是人。在一些实施方式中，所述受试者是人。

在本说明书中使用的术语“治疗”、“处理”、“治疗的”或“疗法”并不必须意味着疾病或症状的彻底治愈或消失。任何不希望的疾病或症状的迹象或病征的任何程度的任何缓和均可被认为是处理和/或治疗。此外，处理可以包括有可能使病人的幸福感或外表的总体感觉变差的行为。

术语“治疗有效量”被用于表示活性化合物或药物试剂引起所示的生物学或医学反应的量。例如，化合物的治疗有效量可以是预防、减轻或改善正在被治疗的患者的疾病的病征或延长其生存时间所需要的量。这种反应可以发生在组织、系统、动物或人中，包括正在被治疗的疾病的迹象或病征的缓和。根据本说明书中公开的内容，确定治疗有效量属于本领域技术人员的能力范围以内。作为剂量所需的本说明书中公开的化合物的治疗有效量取决于给药途径、正在被治疗的动物种类（包括人类）以及所考虑的具体动物的生理特征。剂量可以被设计为达到预期效果，但会取决于一些因素，例如体重、饮食、同服的药物以及医学领域的技术人员会知道的其他因素。

在本说明书中使用的术语“激素治疗剂”指的是抗雄激素类（包括甾族抗雄激素类和非甾族抗雄激素类）、雌激素、黄体生成素释放激素（LHRH）激动剂以及LHRH拮抗剂，还有激素阻断治疗。示例性的激素治疗剂包括但不局限于醋酸赛普罗特博、阿比特龙、非那雄胺、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基已烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克和地加瑞克。

在本说明书中所使用的——不管是在过渡短语还是在权利要求主体中——术语“包括”及“包含”应当被解释为具有开放式的含义。即，这些术语应该被解释为与短语“至少含有”或“至少包括”含义相同。当在方法的内容中使用时，术语“包含”或“包括”指的是所述方法至少含有所列举出的步骤，但可以包括其他步骤。当在化合物、组合物或设备的内容中使用时，术语“包含”或“包括”指的是所述化合物、组合物或设备至少包括所列举的特征或组分，但也可以包括其他特征或组分。下面的部分描述了一些可被单独用于治疗癌症、或抑制或延迟癌细胞（尤其是前列腺癌细胞）生长，或可与一种或多种化学去势治疗（例如，去势、激素去势、激素阻断或激素疗法）联合治疗的化合物。

II.式（I）的化合物

在本说明书中公开的一些实施方案涉及式（I）的化合物式，其药学上可接受的盐，以及在含或不含本说明书所述的激素治疗剂下使用这些化合物抑制、延迟、治疗或预防需要的患者中的前列腺癌细胞增殖或前列腺癌的方法。式（I）：

其中：R¹可以选自氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；R²可以选自氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；R³可以选自氢、可选择性取代的C_1-6烷基和–OR¹¹；R⁴可以选自氢、可选择性取代的C_1-6烷基，和–OR¹²；R⁵可以选自氢、可选择性取代的C_1-6烷基和–OR¹³；R⁶可以选自氢、可选择性取代的C_1-6烷基和–OR¹⁴；以及R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴可以独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R¹可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是卤素。在一些实施方案中，R¹可以是氯。在一些实施方案中，R¹可以是可选择性取代的C_1-18烷基。可选择性取代的C_1-18-烷基的例子包括但不局限于下列的可选择性取代的变型：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基和植烷基。可选择性取代的C_1-18-烷基可以是支链或直链。在一些实施方案中，R¹可以是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R¹可以是甲基。在一些实施方案中，R¹可以是叔丁基。在一些实施方案中，R¹可以是可选择性取代的C_2-18链烯基。可选择性取代的C_2-18-链烯基的例子包括但不局限于下列的可选择性取代的变型：乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一烯基、十二烯基、十三烯基、十四烯基、十五烯基、十六烯基、十七烯基、十八烯基和植烯基（phytenyl）。可选择性取代的C_2-18-烯基可以是支链或直链，并且可以含有一个或多个双键。在一些实施方案中，R¹可以是可选择性取代的C_2-6链烯基。在一些实施方案中，R¹可以是–OR⁷,其中R⁷为氢。在一些实施方案中，R¹可以是–OR⁷，其中R⁷是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R¹可以是–OR⁷,其中R⁷为甲基。在一些实施方案中，R¹可以是–SR⁸,其中R⁸为氢。在一些实施方案中，R¹可以是–SR⁸，其中R⁸是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R¹可以是–SR⁸，其中R⁸是可选择性地被羟基所取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R¹可以是–SR⁸,其中R⁸为–CH₂CH₂OH。

在一些实施方案中，R²可以是氢。在一些实施方案中，R²可以是卤素。在一些实施方案中，R²可以是氯。在一些实施方案中，R²可以是可选择性取代的C_1-6烷基。可选择性取代的C_1-6-烷基的例子包括下列的可选择性取代的变型：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基（支链和直链）以及己基（支链和直链）。在一些实施方案中，R²可以是甲基。在一些实施方案中，R²可以是可选择性取代的C_2-6链烯基。可选择性取代的C_2-6-链烯基的例子包括下列的可选择性取代的变型：乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基（支链和直链）以及己烯基（支链和直链）。在一些实施方案中，R²可以是–CH₂-CH=C(CH₃)₂。在一些实施方案中，R²可以是–OR⁹,其中R⁹为氢。在一些实施方案中，R²可以是–OR⁹，其中R⁹是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R²可以是–OR⁹,其中R⁹为甲基。在一些实施方案中，R²可以是–SR¹⁰,其中R¹⁰为氢。在一些实施方案中，R²可以是–SR¹⁰，其中R¹⁰是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R²可以是–SR¹⁰，其中R¹⁰是可选择性地被羟基所取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R²可以是–SR¹⁰,其中R¹⁰为–CH₂CH₂OH。

在一些实施方案中，R³可以是氢。在一些实施方案中，R³可以是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R³可以是–OR¹¹,其中R¹¹为氢。在一些实施方案中，R³可以是–OR¹¹，其中R¹¹是可选择性取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R⁴可以是氢。在一些实施方案中，R⁴可以是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R⁴可以是叔丁基。在一些实施方案中，R⁴可以是–OR¹²,其中R¹²为氢。在一些实施方案中，R⁴可以是–OR¹²，其中R¹²是可选择性取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R⁵可以是氢。在一些实施方案中，R⁵可以是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R⁵可以是–OR¹³,其中R¹³为氢。在一些实施方案中，R⁵可以是–OR¹³，其中R¹³是可选择性取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R⁶可以是氢。在一些实施方案中，R⁶可以是可选择性取代的C_1-6烷基。在一些实施方案中，R⁶可以是–OR¹⁴,其中R¹⁴为氢。在一些实施方案中，R⁶可以是–OR¹⁴，其中R¹³是可选择性取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴可以独立地选自氢。在一些实施方案中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴可以独立地选自C_1-6烷基。在一些实施方案中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴可以独立地选自C_1-6烷基，其中C_1-6烷基可以选择性地被选自卤素、羟基和C_1-4烷基的基团所取代。

在一些实施方案中，R¹可以选自氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、–OR⁷和–SR⁸；R²可以选自氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、–OR⁹和–SR¹⁰；R³可以选自氢和–OR¹¹；R⁴可以选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基，；R⁵可以是氢；R⁶可以选自氢和–OR¹⁴；以及R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴可以独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是甲基;R³可以是–OH；以及R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R³和R⁶每一个均可以是–OH；以及R¹、R²、R⁴和R⁵每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R³可以是–OH；以及R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹和R²每一个均可以是–SCH₂CH₂OH；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹和R²每一个均可以是–OCH₃；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是–OCH₃；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是甲基；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹和R²每一个均可以是氯；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是–OH；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是植烯基；R²可以是甲基；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹和R⁴每一个均可以是叔丁基；以及R²、R³、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。在一些实施方案中，R¹可以是–OH；R²可以是–CH₂-CH=C(CH₃)₂；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均可以是氢。

在一些实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶中的至少一个不能是氢。在一些实施方案中，当R¹是甲基，以及R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R³不能是–OH。在一些实施方案中，当R¹、R²、R⁴和R⁵每一个均为氢时，则R³和R⁶中的至少一个不能为–OH。在一些实施方案中，当R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R³不能是–OH。在一些实施方案中，当R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹和R²中的至少一个不能为–SCH₂CH₂OH。在一些实施方案中，当R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹和R²中的至少一个不能为–OCH₃。在一些实施方案中，当R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹不能是–OCH₃。在一些实施方案中，当R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹不能是甲基。在一些实施方案中，当R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹和R²中的至少一个不能为氯。在一些实施方案中，当R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹不能是–OH。在一些实施方案中，当R²是甲基，以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹不能是植烯基。在一些实施方案中，当R²、R³、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹和R⁴中的至少一个不能为叔丁基。在一些实施方案中，当R²是–CH₂-CH=C(CH₃)₂，以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢时，则R¹不能是–OH。

式（I）的化合物的例子包括但不局限于下列化合物：

和

在一些实施方案中，式（I）的化合物可以是二聚体，这样R¹、R²、R³、R⁴、R⁵或R⁶中的一个具有式（I）的结构。例如，在一些实施方案中，式（I）的化合物可以是指甲花醌二聚体：

下面的部分描述了一些可以采用的用于抑制或延迟前列腺癌细胞增殖和/或治疗或预防前列腺癌的常规疗法。应当理解，本说明书描述的本发明的疗法可以在含或不含包括在下文中描述的任意一种或多种治疗的任何前列腺癌的常规治疗下进行。

III.前列腺癌

在2009年美国估计诊断出有192,280例新的前列腺癌案例，估计有27,360例死亡。大约90%的晚期病人会出现骨转移，伴有剧痛、运动性丧失以及脊髓压迫。其他受到影响的器官可以包括肝脏、肺和脑。晚期前列腺癌对激素疗法、放射疗法和常规的化学疗法产生耐受。虽然局部病的5年生存率接近100%，但对于晚期癌症来说则降至30%。

最近在治疗前列腺癌方面出现了一些进展，包括新的手术方法以及在放射疗法中做了些改进。例如：

1）在1986年，外科医生开发出了一种技术（采用达芬奇机器人前列腺切除术），可以除去前列腺同时对神经的损害最小化，从而降低不利的副作用。

2）另外，临床研究员改进了已经建立很久的称之为近距放射疗法的放射治疗技术，包括向前列腺中植入少量的放射性物质（种子）。这种放射治疗方法对于早期前列腺癌是一种有效的治疗方法。

3）在对于前列腺癌的激素疗法中也有所进展，包括促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂的发展，这可以抑制垂体刺激睾丸以生成睾酮的能力。

4）在对于前列腺癌的化学疗法中也有所进展。在2004年，两个大型的由NCI发起的临床试验结果显示，使用药物多西他赛可以延长患有晚期前列腺癌、不再对激素疗法出现响应的男性的生存期。

不幸的是，在通过常规治疗或通过使用达芬奇机器人前列腺切除术的先进治疗进行根治性前列腺切除术后，如果前列腺-特异性抗原（PSA）的水平维持在零以上，这表明前列腺癌已经扩展到囊以外，即转移性疾病，对于这种疾病，至今也没有可治愈的治疗方法。

因此，所有目前的对于这种转移性雄激素依赖的前列腺癌的激素治疗方案以及化学治疗方案仅是减轻性的。后来，即使在治疗前列腺癌方面有所进展，但寻找治疗转移性疾病的新的策略仍然是一个严峻的挑战。下面的部分提供了使用式（I）的化合物以抑制或延迟癌细胞，尤其是前列腺癌细胞生长的更多细节。

IV.作为抗癌剂的式（I）的化合物

式（I）的化合物具有显著的抗癌症特性。例如，白花丹素（5-羟基-2-甲基萘-1,4-二酮）是一种天然的萘醌，可以在各种药用草药，包括白花丹（Plumbago zeylanica）、补血草属勿忘我（Statice limonium）以及镰叶韭（Limonium carolinianum）中发现。白花丹素表现出了对于纤维肉瘤（ED50为0.75mg/kg体重）和P388淋巴细胞性白血病（ED50为4mg/kg体重）的抗癌作用、诱导肝细胞癌消退的作用，并且具有抑制激素抵抗性前列腺癌的生长和侵入的作用。Aziz等人，癌症研究，2008，68(21)：9024-322。此外，白花丹素已经表现出是一种对于肠瘤形成比较有希望的化学预防/抗癌的试剂。

并非希望受到理论的约束，可以认为白花丹素和其他醌式化合物的细胞毒作用的主要机理是由于氧化还原-环化和亲电子芳基化。白花丹素可以通过从黄素蛋白上进行电子转移而被还原成半醌原子团，其反过来能够将氧还原为过氧化物。生成的过氧化物可以因此被转化为过氧化氢、羟自由基和/或过氧亚硝酸盐，这些均是高度活性氧物质（ROS），具有强效的细胞毒和杀肿瘤作用。

仍然并非希望受到理论的约束，白花丹素和相关醌类的其它抗癌机制可以涉及细胞内硫醇的直接芳基化，使得可以耗尽谷胱甘肽（GSH）。GSH耗尽有可能最终会导致细胞内大分子的烃基化并使其失活。此外，结果显示低剂量浓度的白花丹素（5umol/L）可以抑制前列腺癌细胞中的多种分子靶点，包括蛋白激酶Cq（PKCq）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、AKT的表达，抑制前列腺癌细胞中转录因子激活蛋白-1（AP-1）、核因子-κB（NF-κB）以及信号转导和转录激活蛋白3（Stat3）的激活。这样的活性可以有助于白花丹素的杀肿瘤作用。

在临床前模型中使用白花丹素的研究显示，采用白花丹素进行处理可以导致雄激素非依赖的前列腺癌的生长变慢，并且生长变慢背后的机制可能是因为前列腺肿瘤细胞的细胞凋亡。

可以认为式（I）的几种化合物具有抗癌活性，并且这种抗癌活性，尤其是前列腺癌相关的抗癌活性在将所述化合物与睾酮/雄激素/DHT的阻断（例如，去势，激素治疗，如激素阻断）联合应用时可以得到显著改善。例如，向有需要的患者施用甲萘醌（维生素K₃）会有效抑制前列腺癌细胞的生长，进而减少致命的前列腺癌的发生率。将甲萘醌与抗氧化剂，例如抗坏血酸、阿尔法硫辛酸、n-乙酰半胱氨酸（NAC）、番茄红素、生育酚、生育三烯酚或其它的抗氧化剂联合应用也是有效的。甲萘醌和丝裂霉素C联合应用在治疗患有晚期实体瘤、晚期肺癌和晚期肠胃癌的患者中也是有效的。通过向患有前列腺癌的患者联合施用甲萘醌和抗氧化剂或多种抗氧化剂（例如维生素C），可以预期肿瘤细胞数量和PSA（前列腺癌特异性抗原）会减少。

在一期/二期临床试验中，向以前无法达到监护治疗方案标准（即，根治性前列腺切除术、放射治疗和/或激素阻断）的前列腺癌患者联合施用甲萘醌和维生素C。试验中有十个病人在该试验前接受过激素阻断治疗，但这些病人在接受维生素C和甲萘醌联合治疗时并没有进行激素阻断治疗。参见Tareen等人，国际医学科学杂志，2008，5:62。在本研究中，对患有晚期疾病（侵略性、周期性）的病人的治疗进行了测试。以前接受过激素疗法的病人在进行临床试验时很有可能变为激素耐受（这也许就是在这些病人中疾病发展的原因）。

本发明认为，当在病人接受抗氧化剂（例如，抗坏血酸）和式（I）的化合物（例如，甲萘醌）的联合治疗期间进行去势、激素去势、激素阻断或激素疗法时，对前列腺癌细胞增殖的抑制能够得到显著改善。本发明提供了一种治疗罹患前列腺癌的患者的改进的方法，对在根治性前列腺切除术后PSA值高于零的患者，即当他们患有雄激素依赖的转移性疾病时采用式（I）的化合物和雄激素阻断治疗。而目前对于上述疾病尚无治疗方法，病人普遍仅接受姑息疗法，包括仅接受激素治疗。本说明书中提供的数据显示，在激素治疗时结合白花丹素比仅激素治疗更好。

2,3-双[（2-羟乙基）硫]-1,4-萘醌（NSC95397）可以是双特异性磷酸酶Cdc25（与细胞周期调控有关）的一种强效抑制剂。NSC95397能够抑制分裂素激活的蛋白激酶磷酸酶MKP-1和MKP-3的活性。已经对这种化合物与化学治疗药物例如阿霉素、依托泊苷、奥沙利铂和多西他赛联合应用进行了研究。已经在神经内分泌肿瘤细胞、人胰腺癌细胞和支气管癌细胞中对NSC95397进行了研究。此外，这种化合物已经被用于前列腺癌细胞中，以检测Cdc25磷酸酶在调控分裂素激活的蛋白激酶（MAP-激酶）通路中的作用。参见Nemoto等人，前列腺，2004，58:95。然而，NSC95397在前列腺癌细胞的生长或生存上的影响并未被Nemoto所报道。可以认为，NSC95397能够被用于抑制前列腺癌细胞增殖，并且当在病人接受NSC95397之前、期间和/或之后进行去势、激素去势、激素阻断或激素治疗时对前列腺癌细胞增殖的抑制能够得到显著改善。

胡桃醌被认为是一种肽基-脯氨酰顺式/反式异构酶（PIN-1）抑制剂。已经在人癌细胞中对胡桃醌与依托泊苷联合应用进行了研究，并且β-拉帕醌能够改善辐射在喉鳞状细胞癌细胞中的作用。可以认为，式（I）的化合物高度氧化，诱导细胞中的氧化应激。因此，可以认为，胡桃醌能够被用于抑制前列腺癌细胞增殖，并且当在病人接受胡桃醌之前、期间和/或之后进行去势、激素去势、激素阻断或激素治疗时对前列腺癌细胞增殖的抑制能够得到显著改善。

萘茜可能是一种微管解聚剂，2,3-二甲氧基-1,4-萘醌（DMNQ）可能会抑制DNA拓扑异构酶-I。可以认为，萘茜和/或2,3-二甲氧基-1,4-萘醌（DMNQ）能够被用于抑制前列腺癌细胞增殖，当在病人接受萘茜和/或2,3-二甲氧基-1,4-萘醌（DMNQ）之前、期间和/或之后进行去势、激素去势、激素阻断或激素治疗时对前列腺癌细胞增殖的抑制能够得到显著改善。

如上所述，虽然单独使用一种或多种式（I）的化合物或联合使用式（I）的化合物来治疗患有癌症（例如，前列腺癌）的患者能够抑制癌细胞的生长，但通过将一种或多种式（I）的化合物分别、或以混合物或组合物的形式与降低病人的雄激素水平的治疗（例如，去势、激素去势、激素阻断或激素治疗）联合使用，对癌细胞增殖（例如，前列腺癌细胞增殖）的抑制能够得到显著改善。即，一些实施方案包括了抑制癌细胞增殖（例如，前列腺癌细胞增殖）或治疗或预防癌症（例如，前列腺癌）的方法，其中向患有癌症（例如，前列腺癌）的患者提供一种或多种式（I）的化合物（例如，白花丹素）同时降低患者雄激素的量（例如，提供去势、激素去势、激素阻断或激素治疗）。可选地，在治疗后（例如，在提供了白花丹素和激素治疗的联合治疗后）对癌症（例如，前列腺癌）或其标记物（例如，PSA）的抑制情况进行评价。换一种说法，本发明的一些实施方案包括了一种或多种式（I）的化合物（制成单独或共同施用的制剂）与化学去势治疗（例如，去势、激素去势、激素阻断或激素治疗）的联合治疗，用于抑制或延迟前列腺癌细胞的生长或治疗或预防前列腺癌。下文中描述了一些能够被用于耗尽患者中雄激素水平以进行如上所述的治疗和治疗方案的方法。

V.激素治疗

用于治疗前列腺癌、或抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的激素治疗，也可被称之为雄激素去势治疗（ADT）、化学睾丸切除、或雄激素阻断治疗。雄激素能够加速前列腺细胞（包括健康的前列腺细胞和癌性的前列腺细胞）的生长。在一些实施方案中，对罹患前列腺癌的患者提供可降低患者雄激素水平的激素治疗剂。在一些实施方案中，在患者中降低的雄激素为睾酮、二氢睾酮（DHT）、雄甾酮、雄烯二醇、雄甾烯二酮、脱氢表雄甾酮（DHEA）和硫酸脱氢表雄甾酮（DHEA-S）。在一些实施方案中，患者的血清睾酮水平随一种或多种抗雄激素试剂或雄激素阻断试剂而降低。优选地，在给予一种或多种式（I）的化合物的期间进行雄激素去势治疗。

在一些实施方案中，将罹患前列腺癌的患者归类为需要接受前列腺癌治疗的患者，对所述患者提供可降低患者雄激素水平的激素治疗剂，同时所述患者接受一种或多种式（I）的化合物（例如白花丹素）或在表1中的化合物。可选地，对前列腺癌细胞增殖的抑制情况或前列腺癌发展的抑制情况进行评价。可选地，对前列腺癌细胞增殖的延迟情况或前列腺癌发展的延迟情况进行评价。通过采用常规的临床病理学，包括活组织检查、CT扫描、MRI、指诊、格里森分数或PSA水平，能够识别出需要接受前列腺癌治疗的患者。目前病人也可进行PET扫描，这很重要，因为PET扫描可以评价肿瘤细胞的活性（葡萄糖代谢）。类似地，可以通过采用常规的临床病理学，包括活组织检查、CT扫描、MRI、指诊、格里森得分（Gleason score）或PSA水平对接受治疗后所述患者中的癌细胞增殖的抑制或延迟情况进行评价。

在一些实施方案中，能够被用于本说明书中所描述的任意一种或多种方法或治疗的激素治疗剂选自由如下组成的组：抗雄激素（包括甾族抗雄激素和非类固醇的抗雄激素）、雌激素、黄体生成素释放激素（LHRH）激动剂和LHRH拮抗剂。甾族抗雄激素试剂包括但不局限于醋酸赛普罗特博和非那雄胺。非类固醇的抗雄激素包括但不局限于氟他米特、尼鲁米特和比卡鲁胺。雌激素试剂包括但不局限于乙基已烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚和磷酸雌莫司汀。LHRH激动剂包括但不局限于亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林和布舍瑞林。LHRH拮抗剂包括但不局限于阿巴瑞克和地加瑞克。比较希望地，在本说明书中描述的方法和治疗（组合物）中使用了一种或多种选自由如下组成的组：醋酸赛普罗特博、非那雄胺、氟他米特、阿比特龙、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基己烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克和地加瑞克，其中在提供所述醋酸赛普罗特博、非那雄胺、氟他米特、阿比特龙、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基己烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克之前、期间和/或之后提供一种或多种式（I）的化合物（例如，表1的化合物）。

如上所述，前列腺癌能够通过激素治疗剂进行治疗，然而，单独采用激素治疗剂能够导致去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的发展。例如，激素治疗在最初能够在罹患前列腺癌的患者中产生反应，然而，激素抵抗性肿瘤的复发总会阻止长期的病人生存情况。对于患有晚期前列腺癌的病人来说，需要采用更有效的策略延长期望寿命，改善生活质量。因此，本发明的一些方面涉及用于改善或抑制或降低或延迟去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的发作的方法或治疗（例如，用于改善或抑制或降低或延迟CRPC的发作的组合物的使用），通过这些方法或治疗，在提供醋酸赛普罗特博、非那雄胺、阿比特龙、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基己烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克之前、期间和/或之后给予一种或多种式（I）的化合物（例如，表1的化合物）。可选地，对前列腺癌细胞增殖的抑制情况（一种前列腺癌发展的抑制）或CRPC发作的延迟情况进行评价。可选地，将患有前列腺癌的病人归为需要可改善、降低、延迟或抑制CRPC发作的试剂的患者，然后接受本说明书中描述的一种或多种联合治疗。通过采用常规的临床病理学，包括活组织检查、CT扫描、MRI、指诊、格里森分数或PSA水平，能够识别出需要接受前列腺癌治疗的患者。

目前病人也可进行PET扫描，这很重要，因为PET扫描可以评价肿瘤细胞的活性（葡萄糖代谢）。

类似地，可以通过采用常规的临床病理学，包括活组织检查、CT扫描、MRI、指诊、格里森得分或PSA水平对接受治疗后所述患者中的癌细胞增殖的抑制或延迟情况进行评价。在下文中更详细地描述了所述联合治疗。

VI.联合治疗

在一些实施方案中，本说明书中公开的化合物，例如式（I）的化合物（例如，表1的化合物），或其药学上可接受的盐，或包括本说明书中描述的化合物的药物组合物，能够与一种或多种附加试剂联合应用。在本说明书中公开的一些实施方案涉及改善或治疗肿瘤性疾病的方法，可以包括向罹患肿瘤性疾病的患者施用治疗有效量的一种或多种本说明书中所描述的化合物（例如，式（I）的化合物，或其药学上可接受的盐）联合一种或多种激素治疗剂（称为“联合治疗”）。能够与式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，或包括式（I）的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物联合应用的附加试剂的例子包括但不局限于能够降低患者血清雄激素水平的试剂（例如，醋酸赛普罗特博、阿比特龙、非那雄胺、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基己烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克）。

在一个实施方案中，所述肿瘤性疾病可以为癌症。在一些实施方案中，所述肿瘤性疾病可以为肿瘤例如实体瘤。在一个实施方案中，所述肿瘤性疾病可以为前列腺癌，以及在一些实施方案中所述前列腺癌可以为CRPC。因此，在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，或包括式（I）的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，与一种或多种激素治疗剂联合应用以治疗患有前列腺癌的患者，抑制前列腺癌细胞的生长，延迟前列腺癌，降低前列腺肿瘤的大小，或抑制CRPC的发作或发展。

在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，或包括式（I）的化合物（例如，一种或多种表1的化合物）或其药学上可接受的盐的药物组合物，与外科睾丸切除术和/或与一种或多种激素治疗剂联合应用，所述激素治疗剂包括醋酸赛普罗特博、非那雄胺、阿比特龙、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基己烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克，因此提供了一种“联合治疗”。

正常的血清睾酮范围在1000-300ng/dL之间。在一些实施方案中，对患者进行如本说明书所描述的联合治疗，通过这种方法，接受治疗的患者血清的睾酮水平降低到至少大约≤80、≤70、≤60、≤50、≤40、≤30、≤20或≤10ng/dL。在一些实施方案中，对患者进行了联合治疗，患者的血清睾酮水平降低到至少大约≤50ng/dL。在一些实施方案中，对患者进行了联合治疗，患者的血清睾酮水平降低到至少大约≤20ng/dL。在一些实施方案中，对患者进行了如在本说明书中所描述的联合治疗，患者的血清睾酮水平降低到至少大约120-70、100-60、80-40、70-30、50-20、40-10、30-10或20-10ng/dL或在这些范围中的任一数值。在一些实施方案中，对患者进行联合治疗，使得患者的血清睾酮水平降低到健康男性水平的大约≤95%、≤90%、≤80%、≤70%、≤60%或≤50%。在一些实施方案中，对患者进行联合治疗，使得患者的血清睾酮水平降低到至少大约健康男性水平的5-20%、10-30%、20-40%、30-50%、40-60%或50-70%的范围或位于这些范围之间的任意数值。

间歇激素疗法（IHT）是连续激素疗法的一种替代方法，可以延迟激素去势失败的疾病（即，CRPC）的进展。例如，可以在6个月的时期内使用间歇治疗，然后在接下来的6个月内停止治疗。在一些实施方案中，可以在一个月中进行治疗，然后一个月停止治疗。在一些实施方案中，可以在三个月中进行治疗，然后三个月停止治疗。因此，可以在如上所述的IHT之前、期间和之后提供一种或多种式（I）的化合物，例如，表1的化合物，以便减少或抑制或延迟CRPC的发作。

式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，或包括本说明书中描述的化合物的药物组合物与一种或多种附加治疗试剂联合应用的非限制性的示例名单在表1和2中提供。表1提供了每一种式（I）的化合物的简写名称以及每种治疗的简写名称。在表2每个编号X的化合物在表1中均有相对应的化合物结构。同样地，在表2中每一个编号Y的治疗在表1中均有相对应的治疗。因此，在表2中的每一个“X:Y”词条提供了式（I）的化合物与能够被用于治疗罹患前列腺癌的患者的治疗的联合的示例。例如，在表2中命名为“F02:AT04”的组合提供了一种

（白花丹素）和能够被用于治疗罹患前列腺癌的患者的氟他米特的联合。在表2中给出的每一种联合均可与本说明书中描述的一种、两种、三种或多种附加试剂一起使用。

表1

表2

式（I）的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种附加激素治疗剂的施用的顺序可以不同。在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够在所有的附加激素治疗剂之前施用。在其他的实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够在至少一种附加激素治疗剂之前施用。在另外的其他实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够与一种或多种附加激素治疗剂同时施用。在又另外其他的实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够在施用至少一种附加激素治疗剂之后施用。在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够在所有的附加激素治疗剂施用之后施用。

在一些实施方案中，将罹患前列腺癌的患者通过睾丸切除术（即，切除睾丸）进行治疗。在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够在外科睾丸切除术之后施用。在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够在外科睾丸切除术之前和之后施用。

测定和评价抗癌活性

动物模型

动物模型是促进我们对于癌症（恶性）生长机制理解的关键。目前所使用的啮齿类肿瘤模型，包括转基因肿瘤模型（使用易发展出癌症的经遗传修饰的小鼠）以及将人肿瘤植入免疫缺陷小鼠的皮肤下，并不能充分代表临床癌症，尤其是在转移和药物敏感性方面。所采用的用于评价潜在的新型治疗策略的临床前肿瘤模型系统应该能够尽可能接近地反映其临床对应疾病的转移的过程和模式。

开发出了一种同源的伪原位体内模型，以研究前列腺癌的早期阶段。向雄性小鼠的背部皮肤褶中通过手术植入腔室。简单来说，将雄性小鼠（25–30g体重）麻醉并放置在加热板上。将两个对称的钛框架植入背部的皮肤褶中。从表层一侧切除环层。用与一个所述框架结合在一起的玻璃盖片将下面的肌肉和皮下组织覆盖。在2-3天的恢复期后，将基质组织和肿瘤细胞小心地置于所述腔室中。

肿瘤衍生的细胞系能够直接在相当于传统的皮下模型的所述腔室中生长。然而，研究发现，在所述腔室中植入的各种组织糜可以存活并增加血液供应，并且在共植入后肿瘤衍生的细胞系可适应这些各种基质，这表明该种方法可以作为原位模型以及用于转移的最初阶段的模型。

例如，能够将小鼠的前列腺组织移植到该腔室中。该移植物发展出了其自有的脉管系统并作为肿瘤的原位基质。能够将少量的前列腺癌细胞（例如，源自TRAMP小鼠的TRAMP-C2细胞）植入到前列腺基质顶部上。肿瘤的微环境对于不同类型癌症的进展来说很重要，原位植入癌细胞能够比在皮下植入更加接近地概括人类疾病。当将癌细胞植入相关的器官中时，肿瘤能够生长地更快，发展出更完善的脉管系统。小鼠前列腺癌细胞与前列腺基质共植入能够为肿瘤细胞提供比完全皮下模型更好地反映临床疾病的环境。采用这种方法，再血管化的基质组织和植入的肿瘤能够维持较长时间的存活，例如，多达90天。

同源性磷酸酶及张力蛋白（PTEN）缺陷模型

可以采用源自PTEN（在染色体10中同源性磷酸酶及张力蛋白缺失）缺陷的前列腺癌模型的小鼠细胞来研究前列腺癌。肿瘤抑制基因PTEN是人类前列腺癌中最经常突变的基因中的一种。PTEN缺失能够导致组成性的高PI3-激酶和Akt活性，这会导致迁移、侵袭、细胞增殖和存活增加。PTEN缺失能够在人类前列腺癌的发病机理中发挥主要作用。在大约60%的原发性瘤中观察到了至少一种PTEN等位基因的改变。PTEN缺失能够与更高的格里森得分和不良预后、癌症向激素非依赖的进展、对化学治疗或对放射治疗的耐受以及骨转移有关。PTEN缺陷的小鼠癌症的发生率增加，这与由在PTEN基因中的胚系突变所造成的、称之为多发性错构瘤综合征（Cowden syndrome）的癌症的人类遗传倾向性相似。在这些方面，所述PTEN缺陷的模型看起来非常接近地模拟了人类的发展。因此，PTEN基因的杂合分裂（heterozygous disruption）能够导致在多个组织中肿瘤自发性地发生以及在前列腺中前列腺上皮内瘤样病变（PIN）损害。PTEN的前列腺特异性的纯合缺失能够足以诱导出前列腺肿瘤，前列腺肿瘤能够发展成转移性疾病。在另一方面，PTEN的杂合缺失能够引起长潜伏期的PIN。

PTEN的胚系纯合缺失可以导致由于PTEN切除的胚胎致死现象。这能够通过采用Cre-LoxP系统对基因进行有条件的失活而克服。可以通过采用前列腺特异性的碱性蛋白（probasin）启动子生成表现出Cre重组酶在前列腺上皮细胞中特异性表达的转基因小鼠（PB-Cre4小鼠）。通过将这些动物与含floxed PTEN等位基因的小鼠杂交，有可能生成在前列腺上皮中PTEN特异性删除的杂合和纯合小鼠。在这种模型中前列腺癌的进展与在人类中观察到的前列腺癌的进展非常类似。例如，在这种模型中观察到上皮细胞增生，然后是发育异常、PIN、浸润型腺癌，以及最终向淋巴结及向肺转移。与人类癌症相似，无PTEN的小鼠首先随雄激素的切除而退化，然后变为雄激素非依赖。

上皮细胞系可以源自从纯合的PTEN^L/L/PBCre+小鼠解剖出的前列腺肿瘤。至少两种克隆细胞系（PTEN-P2和PTEN-P8）为杂合PTEN^L/+。其余的等位基因能够通过体外（PTEN-CaP2和PTEN-CaP8细胞）Cre重组酶的强迫表达而被沉默。第二等位基因的缺失能够增加锚定非依赖性的生长并使在体内肿瘤生成。即使PTEN-CaP2和PTEN-CaP8细胞表达雄激素受体，但仍能够在体内出现自发性的雄激素非依赖。

在本说明书中公开的向动物模型中植入PTEN前列腺细胞能够与人类前列腺癌高度相关，并且能够使得可以对前列腺肿瘤针对不同的治疗方案的生长和/或退化进行详细观察。在同源小鼠中的植入遵守了正常肿瘤生长的很多方面。例如，两对小鼠前列腺癌细胞（PTEN-P2/8和PTEN-CaP2/8）能够便于在与人类癌症相关的前列腺癌的小鼠模型中对转移进行检查。

活体镜检法（IVM）

可以采用活体镜检法（IVM）对动物中的肿瘤进行显像，分析癌症生理学的各种方面，例如肿瘤血管形成、细胞迁移和转移。IVM的一个优势包括用单细胞的分辨率对动态过程进行实时分析。活体镜检法使得有可能以非侵入性、非破坏性的方式跟踪肿瘤生长。IVM的应用能够被局限于承受着可见的肿瘤的动物模型。因此，如上所述的背部皮肤褶腔室模型能够与IVM相容。采用IVM能够对活体动物测量多种参数并作为时间的函数，包括肿瘤生长、血管生成、由免疫细胞的浸润、肿瘤细胞迁移、有丝分裂（细胞分裂）和细胞凋亡（细胞程序性死亡），所有这些都在宿主体内进行并且均是实时监测的。

VIII.药物组合物

在本说明书中描述的一些实施方案涉及药物组合物，所述药物组合物可以包括治疗有效量的一种或多种本说明书中描述的化合物（例如，式（I）的化合物（例如，在表1中的化合物）或其药学上可接受的盐，和/或激素治疗剂）以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包括式（I）的化合物的单一的非对映体或其药学上可接受的盐（例如，在所述药物组合物中，单一的非对映体的浓度与其他非对映体的总浓度相比要大于99%）。在其他的实施方案中，所述药物组合物可以包括式（I）的化合物或其药学上可接受的盐的非对映体的混合物。例如，所述药物组合物可以包括一种非对映体其浓度与其他非对映体的总浓度相比，>大约50%，≥60%，≥70%，≥80%，≥90%，≥95%或≥98%。在一些实施方案中，所述药物组合物包括式（I）的化合物或其药学上可接受的盐的非对映体的外消旋的混合物。

在本说明书中描述的一些实施方案涉及一种药物组合物，所述药物组合物可以包括治疗有效量的式（I）的化合物、附加激素治疗剂，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。在本说明书中描述的一些实施方案涉及一种药物组合物，所述药物组合物可以包括治疗有效量的式（I）的化合物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。一些实施方案涉及一种药物组合物，所述药物组合物可以包括治疗有效量的激素治疗剂以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。

能够将本说明书中描述的药物组合物本身，或它们与联合治疗中的其他有效成分，或与载体、稀释剂、赋形剂或其组合进行混合形成的药物组合物的形式被施用到病人身上。根据所选择的给药途径选择合适的剂型。用于配制和施用本说明书中所描述的化合物的技术是本领域技术人员所知的。

在本说明书中公开的药物组合物可以通过本身已知的方式，例如，通过常规的混合、溶解、制粒、制成糖丸、研碎、乳化、封装、包埋或制片法进行制造。另外，含有有效量的有效成分为以达到其预期目的。许多用于本说明书中公开的药物组合的化合物可以以含药学上适合的平衡离子的盐进行提供。

本领域中施用化合物和/或试剂的多种技术包括但不限于口服、直肠、局部、气雾、注射和胃肠外给药，胃肠外给药包括肌肉、皮下、静脉内、髓内注射，鞘内、直接心室内、腹膜内、鼻内和眼内注射。

也可以通过局部而非系统给药的方式施用所述化合物和/或试剂，例如，通过将化合物（通常是以长效（depot）或缓释的剂型）直接注射到感染区域。此外，可以通过靶向给药系统，例如通过包覆有组织特异性抗体的脂质体将化合物和/或试剂进行施用。所述脂质体会靶向于该器官并被所述器官选择性地摄取。

如果需要的话，所述组合物可以存在于可能包含含所述有效成分的一种或多种单位剂型的包装或分配器装置中。所述包装可以例如包含金属或塑料箔，例如罩板包装。所述包装或分配器可以随附有施用说明。所述包装或分配器也可带有与以政府机构管理药物的生产、使用或销售所规定的方式的容器有关的通知，所述通知是政府机构同意所述药物用于人或兽类施用的形式的反映。这类通知，例如，可以是由美国食品与药品管理局对于处方药的批准的标记，或是对于产品说明书批准的标记。也可以将配制于合适的药物载体中的能够包括本说明书中描述的化合物和/或试剂的组合物制备、安装在合适的容器中，并标记用于指定状况的治疗。

IX.配量

对于本领域技术人员显而易见的是，用于给药的有用的体内剂量以及特定的给药方式会根据年龄、体重、痛苦的严重程度、以及所治疗的哺乳动物种类、所使用的具体化合物，以及这些化合物被用于的具体用途而有所变化。本领域技术人员能够采用常规方法，例如人类临床试验和体外研究，完成对于有效剂量水平，即达到预期结果所必需的剂量水平的测定。

剂量可以分布很宽，这取决于预期的效果及治疗迹象。正如本领域技术人员所了解的，可以基于并根据病人的表面积计算可选的剂量。虽然精确的剂量要在多次给药的基础上进行确定，但在大多数情况下，可以得到一些剂量方面的概括。对于成年人类患者的每日给药方案可以是，例如，每种有效成分的口服剂量为0.01mg-3000mg，优选为1mg-700mg，例如5-200mg。所述剂量可以是单剂量或是在一天或多天的给药过程（根据患者的需要）中的两个或更多个剂量的系列。在一些实施方案中，将会以一段时间的连续治疗施用有效成分，例如一周或更长，或数月或数年。在一些实施方案中，有效成分能够每天施用一次。

能够向一个患者施用多剂量的有效成分。例如，施用有效成分可以为每月一次、每月两次、每月三次、每隔一周（qow）、每周一次（qw）、每周两次（biw）、每周三次（tiw）、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一日（qod）、每日一次（qd）、每日两次（qid）、或每日三次（每日三次），给药时间为从大约一天到大约1周，从大约两周到大约四周，从大约一个月到大约两个月，从大约两个月到大约四个月，从大约四个月到大约六个月，从大约六个月到大约八个月，从大约八个月到大约1年，从大约1年到大约2年，或从大约2年到大约4年，或更长。

在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，以及激素治疗剂能够循环地向病人施用。循环疗法包括在一段时间内施用第一有效成分，随后在一段时间内施用第二有效成分，然后重复这种连续施用方式。循环疗法能够降低对一种或多种疗法出现耐受，避免或降低一种或多种疗法的副作用，和/或提高治疗的效力。在一些实施方案中，在少于大约3周的周期中，大约每两周一次、大约每10天一次或大约每周一次施用式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，以及激素治疗剂。循环周期数量可以是大约1到大约12个循环周期，或大约2到大约10个循环周期，或大约2到大约8个循环周期。

在一些实施方案中，所述有效成分可以为式（I）的化合物，或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述有效成分可以是激素治疗剂。在一些实施方案中，向患者施用式（I）的化合物或其药学上可接受的盐的有效成分，以及激素治疗剂的有效成分。

对于成年人类患者的每日剂量方案，对于组合物中提供的两种有效成分可以相同或不同。例如，式（I）的化合物施用的剂量可以为0.01mg-3000mg，而激素治疗剂施用的剂量可以为1mg-700mg。每种有效成分的剂量可以独立地为单剂量或是在一天或多天的给药过程（根据患者的需要）中的两个或更多个剂量的系列。在一些实施方案中，将会以一段时间的连续治疗施用有效成分，例如一周或更长，或数月或数年。在一些实施方案中，式（I）的化合物或其药学上可接受的盐能够每天施用一次。在一些实施方案中，所述激素治疗剂能够每周施用一次。

在对于至少一些状况已经确立了有效成分的人类剂量的情况中，可以使用这些相同的剂量，或者使用所确立的人类剂量的大约0.1%-500%、更优选大约25%-250%的剂量。对于没有确立人类剂量，例如对于新发现的药物组合物的情况，能够通过在动物中的毒性研究和活性研究所明确的、源自体外或体内研究的ED₅₀或ID₅₀值或其他合适的值推断出合适的人类剂量。

对于施用药学上可接受的盐的情况，可以根据游离碱计算剂量。本领域技术人员能够理解的是，为了有效地和积极地治疗特别有侵略性的疾病或感染，在有些情况下，需要以超过、或者甚至远远超过上述优选的剂量范围的量施用本说明书中公开的所述有效成分。

可以单独调整给药的量和给药间隔，使得活性部分的血浆水平能够足以维持调节的作用，或者维持最低有效浓度（MEC）。对于每种有效成分，MEC会有所变化，但能够从体外数据估计出。达到MEC所需要的剂量取决于个体特性和给药途径。然而，可以使用HPLC分析或生物鉴定以确定血浆浓度。给药间隔也能够通过使用MEC值进行确定。组合物应该采用在其10-90%的时间内、优选在30-90%和最优选在50-90%的时间内使血浆水平维持在MEC以上的方案进行给药。在局部给药或选择性摄取的情形中，所述药物的有效的局部浓度可以不涉及血浆浓度。

应当指出，主治医师应该会知道由于毒性或器官机能障碍而如何以及何时终止、中断或调节给药。相反地，主治医师也会知道如果临床反应不够（不包括毒性）而将治疗调节至更高水平。对于所关注的病情的管理中给药剂量的大小会随待治疗的状况的严重程度及给药途径而有所变化。例如，可以部分通过标准预测评定方法对所述状况的严重程度进行评价。此外，剂量以及也许还有给药频率，也会根据个体患者的年龄、体重及反应而有所变化。与上述讨论相当的程序也可用于兽医学中。

能够采用已知的方法对本说明书中公开的有效成分的效力和毒性进行评价。例如，可以通过对细胞系，例如哺乳动物的、以及优选人类的细胞系进行体外毒性进行测定，建立具体的有效成分、或者共有某些化学基团的有效成分的子集的毒理学。这些研究的结果通常对于动物，例如哺乳动物或更具体为人的毒性有预测性。可选地，可以采用已知的方法确定具体化合物在动物模型，例如小鼠、大鼠、兔或猴中的毒性。可以采用多种认可的方法，例如体外方法、动物模型或人类临床试验确定具体的有效成分的效力。当选择了一种模型测定效力时，本领域技术人员能够在现有技术水平的指导下选择合适的模型、剂量、给药途径和/或方案。

实施例

在下列实施例中更为详细地公开了其他的实施方案，这无论如何都不会对权利要求的范围进行限制。

实施例1

能够采用本领域已知的方法制备式（I）的化合物。此外，许多式（I）的化合物是天然的有机化合物，能够从植物中分离得到。此外，许多式（I）的化合物可以商业购买到。

白花丹素可溶于醇、丙酮、氯仿、苯和乙酸中。已经使用乙醇（体外）配制以及使用DMSO（体外）或含PEG30%的DMSO（体内）配置白花丹素。

实施例2

细胞培养：稳定表达组蛋白H2B-GFP融合蛋白的PTEN-P2/GFP细胞。Kanda等人(Kanda T，Sullivan KF，Wahl GM.Histone-GFP fusion proteinenables sensitive analysis of chromosome dynamics in living mammaliancells.Curr Biol1998Mar26;8(7):377-85）开发出了一种用于观察活细胞中染色体动力学的非常灵敏的方法。他们将人类组蛋白H2B基因与编码GFP的基因融合，转染进入人类HeLa细胞中，生成了持续表达H2B-GFP的稳定细胞系。H2B-GFP融合蛋白被结合进入染色质中，没有影响细胞周期进展。我们生成了在LXRN逆转录病毒盒中的5’长末端重复序列下编码组蛋白H2B-GFP融合蛋白的cDNA，并且已经通过逆转录病毒转导将其引入到了多种人类及鼠科癌症细胞系中。

将细胞培养在含10%FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素/100μg/ml链霉素、胰岛素-硒-转铁蛋白（5μg/ml胰岛素）以及终浓度为10^-8M的DHT的DMEM培养基中。通过将细胞维持在不含酚红的DMEM培养基（含10%炭处理过的FBS以及除DHT外的与普通培养基相同的添加物）中实现雄激素撤除。将细胞维持在37℃和5%的CO₂的湿润培养箱中。加入G418（100μg/ml）以维持H2B-GFP的稳定表达。

细胞计数：在12孔板的细胞用PBS洗涤一次，使用胰蛋白酶分开，并转入终体积为10ml PBS的悬浮瓶中。采用开启合适孔眼大小并修正了悬浮颗粒的COULTER^TM Multisizer II仪（贝克曼库尔特股份有限公司，海厄利亚，佛罗里达）进行细胞计数。

动物模型和外科手术技术：动物实验已经酌情得到了批准。所有外科手术均在无菌层流洁净工作台上进行。在使用前对背部皮肤褶腔室和手术器械进行高压消毒。用于在手术准备阶段维持组织湿润的生理盐水混入了庆大霉素（50μl/ml）。

对雄性裸鼠（25-35g体重）进行麻醉（7.3mg盐酸氯胺酮和2.3mg甲苯噻嗪/100g体重，腹腔注射）并放置在加热板上。将两个对称的钛框架植入背部皮肤褶中，以夹在被扩展开的皮肤双层之间。切除15mm全厚度的环状层。用与一个所述框架结合在一起的玻璃盖片将下面的肌肉（M.cutaneous max.）和皮下组织覆盖。在2-3天的恢复期后，将前列腺组织和癌细胞球体小心地置于所述腔室中。在手术后将较小的圆形邦迪创可贴贴在所述腔室的后侧以防止抓挠。在手术前，腹腔注射丁丙诺啡（0.1mg/kg）。在手术后，在饮用水中加入美洛昔康4天，将美洛昔康（5.0mg/ml）向每100ml待加药的水中加入35μl。

制备基质：将一只雄性供体小鼠安乐死，切除前面的前列腺组织，放入含抗生素（庆大霉素50μl/ml）的陪替氏培养皿中，并用小剪刀剪碎成小块（<1mm²）用于植入。

制备肿瘤球体：采用熔于DMEM中的1%琼脂糖生成液体覆盖板，加入到圆底的96孔板中（50ul/孔）。生长至预融合的单层的癌细胞进行胰酶消化，稀释至终体积为250,000肿瘤细胞/ml。采用台盼蓝测定存活情况。将细胞以100ul/孔加入到琼脂糖-涂覆的培养板中。48小时后，细胞形成球体，将其挖出并在植入小鼠腔室前在无血清培养基中洗涤。采用台盼蓝测定存活情况。所植入的球体的大小能够被精确测量，以使各动物间的差异最小化。

外科去势：腹腔注射7.3mg盐酸氯胺酮和2.3mg甲苯噻嗪/100g体重以麻醉小鼠。横跨阴囊进行侧部切口，将睾丸分别绑扎并切除。将伤口烧灼。然后采用

丙烯酸酯对切口缝合并密封。

活体镜检法：采用装有源自氙弧（MV-7600,EG&G）的反射照明器和影像-触发的频闪观测照明器的Mikron仪显微镜进行荧光显微镜检查。所述显微镜上安装有硅强化的靶向相机（SIT68，Dage-MTI）。采用固件版本2.50（滨松光子系统）的滨松图像处理器（Argus20）进行图像增强以及捕捉传向计算机的图像。采用蔡司Plan Neoflour1.25X/0.035物镜以获得腔室的总视图并确定肿瘤大小。采用蔡司A-Plan10X/0.25物镜以捕捉用于计算血管参数的图像。采用蔡司Achroplan20X/0.5W物镜以捕捉用于计算有丝分裂和细胞凋亡指数的图像。我们的系统能够对下列参数进行评价。

肿瘤面积（A_T）被定义为光子密度高于75（256个灰度级）的象素的数量，及A_T=∑A_k,其中75<k<255。

肿瘤细胞数量：当肿瘤为异质的时，A_T中的变化并不直接反映肿瘤的生长情况。可以通过对强度指标进行二次函数拟合，例如N_TC=-3.296×10^-12＋190.6×I_T＋7.7310^-2×（I_T）²，得到估计数量的肿瘤细胞（N_TC），其中强度指标通过I_T=∑A_k*k，75<k<255而得到。

有丝分裂和凋亡指数：在每一个时间点，采用FITC滤光片和集成的帧接收器捕捉了肿瘤的两个外周和两个中央的x20区。仅将处于中期-末期（MI）的有丝分裂像纳入有丝分裂指数中，以排除可能的核膜变形的假象。凋亡/固缩核被定义为横截面积<30μm²的H₂B-GFP标记的核。能够很容易地通过H2BGFP的多泡状核固缩和亮度分辨出的核破裂（NK）被纳入这种凋亡指数中。

血管参数的图象分析：对于每个球体，采用视频记录来计算由植入的肿瘤球体诱导的新生血管的长度、面积和血管密度。采用专业图像分析软件（Image-Pro Plus）根据视频记录分析血管参数。将由x10物镜得到的显微照片“变平（flattened）”以降低背景象素中的强度差别。选择感兴趣的区域（AOI）以消除扭曲的区域，并采用阈值转换法将照片分割为目标和背景。该画面被用于计算血管面积（A_V）。该照片被用于粗略计算血管长度（L_V）。平均肿瘤血管直径D_V以A_V/L_V进行计算，血管密度（Δ_V）以L_V/肿瘤面积进行计算。最后，我们计算了肿瘤脉管系统的总面积的增长率。

实施例3

萘醌类似物对于PTEN-P2/GFP细胞增殖的影响

将PTEN-P2/GFP前列腺癌细胞以8000细胞/孔的密度接种至含10%胎牛血清和DHT的生长培养基的96孔板中（一式三份）。第二天，将增加浓度的萘醌类似物（从10mM的DMSO储备溶液稀释而来）孵育24小时。通过基于甲瓒的细胞毒性分析“CellTiter96Aquaeous非放射性增殖分析法”（Promega公司）测定细胞的生存情况。结果在表3和4，以及在图1和2中示出。

表3

表4

化合物	IC50（μM）
		萘茜	1.65
白花丹素	4.55
		胡桃醌	5.3
NSC95397	6.2
		DMNQ	7.35
2-甲氧基-1,4-萘醌	8.95
		甲萘醌	14.5
1,4-萘醌	24.1
		二氯萘醌	37.75
叶绿醌（K1）	>50
		2,6-二-叔丁基-1,4-萘醌	>50
黄钟花醌	>50
		指甲花醌	>50
指甲花醌二聚体	>50

实施例4

白花丹素在PTEN-P2/GFP细胞中的剂量反应

将PTEN-P2/GFP小鼠癌细胞置于含或不含终浓度为10^-8M的DHT（二氢睾酮）的雄激素撤除的培养基中。以指定的浓度加入白花丹素，维持24小时。不含DHT模拟了外科或化学去势。将细胞用胰酶消化，采用细胞库尔特计数器Multisizer II（排除了颗粒）进行计数。结果以占对照的百分比表示细胞数（其中在不含药的情况下的细胞数量为100%）。图3是显示了两个分开的实验（每次一式两份）的平均值的图。结果在表5和图3中示出。结果表明，在体外，白花丹素与模拟的外科或化学去势联合处理比单独用白花丹素处理更加有效。

雄激素撤除培养基：DMEM高糖不含酚红，含下列添加物：10%炭处理过的胎牛血清、25μg/ml牛垂体提取物、5μg/ml胰岛素、6ng/ml重组EGF。

表5

实施例5

白花丹素联合去势在前列腺癌的伪原位腔室模型中的体内影响

通过手术在裸鼠的背部皮肤褶中放置铂腔室。两天后，将来自BalbC小鼠（同源）的剪碎的前列腺组织移植进所述腔室中，进行血管化7-10天。向每个腔室中植入小型的肿瘤细胞球体。在这些实验中使用被H2B-GFP融合蛋白（PTEN-P2/GFP）稳定转染的肿瘤细胞PTEN-P2。当肿瘤血管化确立后（大约5-7天），对动物进行手术去势以抑制雄激素的生成。外科去势诱导了化学去势，并且是本领域已知的有效模拟了临床的激素治疗。在去势后不久用白花丹素处理小鼠。白花丹素给药进程为通过腹腔内注射1mg/kg（DMSO和PEG30%），每日一次。结果出人意料地表明，白花丹素与去势在体内的联合治疗比单独任一种治疗都更为有效。因此，该实验提供了一个重要的征兆，即去势（无论外科或化学）联合白花丹素能够带来比本领域以前所知的疗法显著的改善。

此外，结果显示，仅用去势处理，或仅用白花丹素处理，并不会使得肿瘤尺寸明显降低。然而，去势与白花丹素联合处理出人意料地导致了肿瘤尺寸的显著减小。因此，在治疗前列腺癌方面，本说明书中描述的联合治疗带来了比本领域以前所知的疗法显著的改善。

图4比较了在不治疗、仅去势治疗、仅白花丹素治疗，去势和白花丹素联合治疗下肿瘤的生长情况。

图5显示了在与去势联合下，0.1mg/kg、0.3mg/kg和1mg/kg的白花丹素的作用。在图4和5中，第0天是用白花丹素处理的第一天。

实施例6

白花丹素联合去势在前列腺癌的伪原位腔室模型中的体内影响

通过手术在裸鼠的背部皮肤褶中放置铂腔室。两天后，将来自BalbC小鼠（同源）的剪碎的前列腺组织移植进所述腔室中，进行血管化7-10天。向每个腔室中植入小型的肿瘤细胞球体。在这些实验中使用被H2B-GFP融合蛋白（PTEN-P2/GFP）稳定转染的肿瘤细胞PTEN-P2。在植入大约三周后将动物进行外科去势以抑制雄激素的生成。外科去势诱导了化学去势，并且是本领域已知的有效模拟了临床的激素治疗。在去势两周后，将小鼠每日腹腔内注射白花丹素2mg/kg。

图6示出了在手术去势后添加白花丹素的作用。

图7示出了在每日腹腔注射白花丹素（2mg/kg）后细胞凋亡（AP）和有丝分裂（MI）增加。该图显示，在肿瘤快速退化的基础上，细胞凋亡增加，但同时有丝分裂增加，这被解释为细胞周期停滞。

结果出人意料地表明，白花丹素与去势在体内的联合治疗比单独去势更为有效。因此，该实验提供了一个重要的征兆，即去势（无论外科或化学）联合白花丹素能够带来比本领域以前所知的疗法显著的改善。

此外，结果显示，仅用去势处理，并不会使得肿瘤尺寸明显降低。然而，去势与白花丹素联合处理出人意料地导致了肿瘤尺寸的显著减小。因此，在治疗前列腺癌方面，本说明书中描述的联合治疗带来了比本领域以前所知的疗法显著的改善。

并非希望受到理论的束缚，观察表明，肿瘤退化有可能是由于雄激素撤除的血管生成的减少，以及主要由于白花丹素处理的肿瘤细胞生长停滞或肿瘤细胞凋亡的联合造成的。因此，在体内，联合的效力比在体外观察到的效力好得多，因为每种处理对于不同的生物学部分（脉管系统基质也许是炎性细胞）的分开的作用无法在细胞系的培养中表示出来。

实施例7

白花丹素在人LNCaP细胞中的剂量反应

将LNCaP激素敏感性人类前列腺癌细胞放置于不含DHT（二氢睾酮）的雄激素撤除的培养基中。不含DHT模拟了外科或化学去势。所述雄激素撤除的培养基为不含酚红、含10%炭处理的胎牛血清的高糖DMEM。

以表6中指定的浓度加入白花丹素，维持24小时。将细胞用胰酶消化，采用细胞库尔特计数器Multisizer II（排除了颗粒）进行计数。表6中的结果以占对照的百分比表示细胞数（其中在不含药的情况下的细胞数量为100%）。图8示出了白花丹素在人LNCaP细胞中的作用。结果表明，在体外，白花丹素与模拟的外科或化学去势联合处理比单独去势处理更加有效。

表6

实施例8

白花丹素与化学去势联合的体内作用

通过手术在裸鼠的背部皮肤褶中放置铂腔室。两天后，将来自BalbC小鼠（同源）的剪碎的前列腺组织继而移植进所述腔室中，进行血管化7-10天。随后向每个腔室中植入小型的肿瘤细胞球体。在这些实验中然后使用被H2B-GFP融合蛋白（PTEN-P2/GFP）稳定转染的肿瘤细胞PTEN-P2。当肿瘤血管化形成后（大约5-7天），对动物用抗雄激素化合物（例如，醋酸赛普罗特博）处理，以诱导化学去势。然后对小鼠用白花丹素或其类似物（例如，表1中的化合物）进行处理。白花丹素或其类似物按照如下进程给药：通过腹腔内注射1mg/kg（DMSO和PEG30%），每日一次。同时对未用醋酸赛普罗特博处理的对照小鼠进行分析。同样地，同时对用醋酸赛普罗特博处理、但未用白花丹素处理的小鼠进行分析。结果会显示，白花丹素（或其类似物）与抗雄激素化合物（例如，醋酸赛普罗特博）的联合会比用单独用白花丹素（或其类似物）或抗雄激素化合物（例如，醋酸赛普罗特博）处理更为有效地抑制前列腺癌细胞增殖。

本领域技术人员应该理解的是，在不脱离本发明精神的情况下，还可以做出很多及各种改变。因此，应当清楚地明白，本说明书中公开的形式仅用于说明，而并非是对本发明范围的限制。

Claims (45)

1.一种抑制或延迟前列腺癌生长的方法，包括向患有前列腺癌的患者提供治疗有效量的式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐：

其中：

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基；

同时降低所述患者体内的雄激素的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过提供抗雄激素化合物、雌激素、黄体生成素释放激素（LHRH）激动剂或LHRH拮抗剂而降低所述患者体内的雄激素的量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述抗雄激素为甾族抗雄激素。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述甾族抗雄激素为醋酸赛普罗特博、阿比特龙或非那雄胺。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述抗雄激素为非甾族抗雄激素。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述非甾族抗雄激素选自由如下组成的组：氟他米特、尼鲁米特和比卡鲁胺。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述雌激素选自由如下组成的组：乙基己烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚和磷酸雌莫司汀。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述LHRH激动剂选自由如下组成的组：亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林和布舍瑞林。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述LHRH拮抗剂为阿巴瑞克或地加瑞克。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为甲基；R³为–OH；以及R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

12.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R³和R⁶每一个均为–OH；以及R¹、R²、R⁴和R⁵每一个均为氢。

13.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R³为–OH；以及R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

14.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R²每一个均为–SCH₂CH₂OH；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

15.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R²每一个均为–OCH₃；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

16.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为–OCH₃；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

17.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为甲基；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

18.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R²每一个均为氯；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

19.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为–OH；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

20.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为植烯基；R²为甲基；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

21.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R⁴每一个均为叔丁基；以及R²、R³、R⁵和R⁶每一个均为氢。

22.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为–OH；R²为–CH₂-CH=C(CH₃)₂；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其特征在于，所述患者的血清睾酮水平被降低至大约20-50ng/dL之间。

24.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其特征在于，所述患者的血清睾酮水平被降低至低于大约50ng/dL。

25.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其特征在于，所述患者的血清睾酮水平被降低至低于大约20ng/dL。

26.一种用于鉴别抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的化合物的方法，包括：

（a）建立伪原位腔室小鼠模型，其中所述小鼠模型患有前列腺癌；

（b）降低所述小鼠模型中的雄激素水平；

（c）向所述小鼠模型提供式（I）的化合物或其药学上可接受的盐或其前药；

以及

（d）评价所述化合物是否对抑制前列腺癌细胞的生长有效；

其中：

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

27.一种抑制或延迟去势抵抗性前列腺癌（CRPC）发作的方法，包括：

将患者分类为属于处在发展出CRPC风险的人群中的人员；

向所述患者提供治疗有效量的式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐：

其中：

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基；

同时降低所述患者体内的雄激素的量；以及

评价前列腺癌细胞增殖的抑制或延迟情况或其标志或CRPC的发作情况。

28.一种用于鉴别抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的化合物的方法，包括：

将前列腺癌细胞在不含雄激素下接触式（I）的化合物，或式（I）的药学上可接受的盐；

确定前列腺癌细胞增殖中是否出现抑制或延迟；以及

将化合物分类归入在不含雄激素下抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的种类，或者归入不能抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的种类；

其中式（I）为：

以及

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

29.一种使前列腺癌得以治疗的方法，包括：

将前列腺癌细胞在不含雄激素下接触式（I）的化合物，或式（I）的药学上可接受的盐；

确定在前列腺癌细胞增殖中是否出现抑制或延迟；

选择在不含雄激素下抑制前列腺癌细胞增殖的式（I）化合物；以及

制定在不含雄激素下抑制或延迟前列腺癌细胞增殖的化合物的配方，向罹患前列腺癌的患者施用；

其中式（I）为：

以及

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

30.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

31.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为甲基；R³为–OH；以及R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

32.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R³和R⁶每一个均为–OH；以及R¹、R²、R⁴和R⁵每一个均为氢。

33.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R³为–OH；以及R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

34.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R²每一个均为–SCH₂CH₂OH；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

35.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R²每一个均为–OCH₃；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

36.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为–OCH₃；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

37.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为甲基；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

38.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R²每一个均为氯；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

39.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为–OH；以及R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

40.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为植烯基；R²为甲基；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

41.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹和R⁴每一个均为叔丁基；以及R²、R³、R⁵和R⁶每一个均为氢。

42.根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其特征在于，R¹为–OH；R²为–CH₂-CH=C(CH₃)₂；以及R³、R⁴、R⁵和R⁶每一个均为氢。

43.一种式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐和激素治疗剂的联合，用于抑制或延迟前列腺癌细胞增殖或去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的发作，其中式（I）为：

以及

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

44.一种式（I）的化合物或式（I）的药学上可接受的盐和激素治疗剂的联合，用于降低前列腺肿瘤的大小，其中式（I）为：

以及

R¹选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-18烷基、可选择性取代的C_2-18链烯基、–OR⁷和–SR⁸；

R²选自由如下组成的组：氢、卤素、可选择性取代的C_1-6烷基、可选择性取代的C_2-6链烯基、–OR⁹和–SR¹⁰；

R³选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹¹；

R⁴选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹²；

R⁵选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹³；

R⁶选自由如下组成的组：氢、可选择性取代的C_1-6烷基、和–OR¹⁴；以及

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢和可选择性取代的C_1-6烷基。

45.根据权利要求43或44所述的组合物，其特征在于，所述激素治疗剂为醋酸赛普罗特博、阿比特龙、非那雄胺、氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙基已烯雌酚（DES）、醋酸甲地孕酮、磷雌酚、磷酸雌莫司汀、亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、组胺瑞林、布舍瑞林、阿巴瑞克或地加瑞克或一种或多种所述化合物的任意组合。

Images