CN103115983A - 食品中壬基酚的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种食品中壬基酚的测定方法，包括以下步骤： 1）将待测品制成待测样品；2）提取：将取待测样品制成待净化提取液；3）净化：取活化后的氨基固相萃取柱，转移待净化提取液上柱，先加入正己烷淋洗，吹干氨基固相萃取柱后，加入甲醇丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，吹干，用流动相溶解并定容至1mL，得样品提取液；4）样品提取液与壬基酚标准工作溶液分别进行高效液相色谱测定；利用壬基酚标准工作溶液的峰面积和壬基酚标准工作溶液中壬基酚浓度获知壬基酚浓度/峰面积的线性相关性关系，以及利用样品提取液的峰面积，得知样品提取液中壬基酚的浓度；最终根据比例关系换算获得待测样品中壬基酚的浓度。

Description

食品中壬基酚的测定方法

技术领域

本发明涉及一种食品中壬基酚的测定方法，特别是食品中壬基酚浓度的测定方法。

背景技术

壬基酚是一种对人体有严重危害的一类环境污染物，目前被广泛应用于食品相关产品生产中，如用作清洁剂、油漆和杀虫剂等的原料，还可作为食品工业生产中的抗氧化剂。我国目前壬基酚的年生产能力3万吨，产量为2.6万吨，近几年我国壬基酚进口量维持在年2万吨左右。

据统计，全世界每年约有50万吨的壬基酚进入水体或土壤。由于壬基酚的高度疏水性及化学性质稳定，使得其易在水体下的淤泥中蓄积造成在环境中的广泛分布，并能通过食物链进行富集，从而通过食物对人类造成危害。研究发现壬基酚可以从牛奶加工过程中的PVC管以及包装食品的塑料中渗出，这些壬基酚大部分直接进入牛奶中，还有一部分释放到环境中后，很难被降解掉，累积在污水污泥、流水沉积物、甚至一些饮用水中，水体中的壬基酚污染还可富集在水生动物中，通过食物链对人体产生作用。

大量体内、外试验表明壬基酚作为一种环境雌激素，具有干扰内分泌活性的作用，对哺乳动物与水生生物的生殖与发育造成了不同程度的影响，已经引起了毒理学、生态学、环境流行病学等方面科学家的广泛关注。目前相关研究主要集中在其环境行为及其可能的相关生态环境风险方面，有关食品中壬基酚的检测技术目前还比较缺乏。大量研究表明，这些化合物广泛地存在于各种食品中，对人类有着长期的危险，与其他雌激素类物质的协同效应也是其严重危害后果之一。

针对壬基酚的检测，国内外尚有对环境中壬基酚含量的检测方法，但较少有具体在食品中的检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检出限低、回收率高、重现性好、利用高效液相色谱法测定食品中壬基酚的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种食品中壬基酚的测定方法，包括以下步骤：

1）、试样制备：

将待测品制成待测样品；

2）、提取：

称取待测样品2.0g加入离心管内，加入18~22mL正己烷和丙酮混合溶剂，振荡提取、超声波提取、离心后，得首次上清液和沉淀；

在沉淀中加入8~12mL正己烷和丙酮混合溶剂，重复上述振荡提取、超声波提取和离心；得再次上清液；

合并首次上清液和再次上清液，得合并上清液，取1/3体积的合并上清液45~55℃（最佳为50℃）氮吹干（吹至近干），二氯甲烷溶解，得待净化提取液；

正己烷和丙酮混合溶剂由正己烷和丙酮按照1:1的体积比混合而得；

备注说明：上述二氯甲烷的用量为只需能溶解“被45~55℃氮吹至近干的1/3体积的合并上清液”即可；一般为2~4ml，例如为3ml；

3）、净化：

取活化后的氨基固相萃取柱，转移上述待净化提取液上柱，先加入正己烷淋洗，吹干（近干）氨基固相萃取柱后，加入甲醇丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，将所收集的洗脱液于48~52℃（最佳为50℃）氮气吹干，用流动相溶解并定容至1mL，过0.45μm有机相滤膜，得样品提取液；所述样品提取液用于下述步骤的高效液相色谱仪测定；

所述流动相同步骤4）中的高效液相色谱检测用流动相；

备注说明：过0.45μm有机相滤膜，几乎不会导致体积的改变，即，所得的样品提取液仍为1 mL；

4）、将步骤3）所得的样品提取液与壬基酚标准工作溶液分别进行高效液相色谱测定；

高效液相色谱测定条件如下：

所用色谱柱为EclipseXDB C18，5μm，150mm×4.6mm内径；

高效液相色谱检测用流动相由体积百分比70％的组分A和体积百分比30％的组分B，组分A为乙腈，组分B为水；

分别测得样品提取液和壬基酚标准工作溶液的峰面积；

利用壬基酚标准工作溶液的峰面积和壬基酚标准工作溶液中壬基酚浓度获知壬基酚浓度/峰面积的线性相关性关系，以及利用样品提取液的峰面积，得知样品提取液中壬基酚的浓度；再根据待测样品与样品提取液的比例关系，换算获得待测样品中壬基酚的浓度（即，待测品中壬基酚的浓度）。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的改进：

壬基酚标准工作溶液中壬基酚的浓度为在1ng/mL～0.5mg/mL。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的进一步改进：

壬基酚浓度/峰面积的线性相关性关系：y=0.13x+0.41；

y为峰面积；x为壬基酚浓度，单位ng/ml。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的进一步改进：

当待测品为谷类时，将谷类制成过40目筛的粉末， 作为待测样品；

当待测品为鱼类时，将待测品制成糜状物（即鱼肉糜），作为待测样品；

当待测品为蔬菜、蔬菜制品，将待测品匀浆，得浆液；加入无水硫酸钠将浆液进行浓缩处理，使浓缩后的浆液=待测品的重量；浓缩后的浆液作为待测样品。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的进一步改进：

步骤4）中的高效液相色谱中荧光检测波长为激发波长222nm，发射波长305nm。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的进一步改进：

步骤2）中：

在15~25mm震荡幅度下的震荡提取时间为15~25min；

在30~50KHz的超声频率和80~120W的功率下超声波提取15~25min。

离心的转速为4000~6000r/min，离心时间8~12min。

上述工艺参数较佳为：

在20mm震荡幅度下的震荡提取时间为20min；

在40KHz的超声频率和99W的功率下超声波提取20min。

离心的转速为5000r/min，离心时间10min。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的进一步改进：

步骤3）中甲醇丙酮混合液、正己烷体积均为4~8mL ，较佳均为6mL。

作为本发明的食品中壬基酚的测定方法的进一步改进：

步骤2）中所用的离心管为具塞离心管。

备注说明：

将氨基固相萃取柱进行活化，从而获得活化后的氨基固相萃取柱，是一个公知技术；例如为：将氨基固相萃取柱安装在SPE固相萃取装置上，依次用甲醇丙酮混合液（甲醇和丙酮的体积比为1:1）和正己烷进行淋洗，实现活化。

在本发明的步骤4）中，高效液相色谱测定条件具体如下：

a)色谱柱：EclipseXDB C18柱，5μm(粒度)，150mm×4.6mm（内径）。

b)流动相

70％（体积比）A：乙腈

30％（体积比）B：水

c)流速：1.3mL/min。

d)柱温：30℃。

e)激发波长：222nm。

发射波长：305nm。

f)进样量：10μL。

在本发明中，壬基酚标准工作溶液中壬基酚的溶液在1ng/mL～0.5mg/mL内，其浓度与峰面积有良好的相关性，回归方程为y=0.13x+0.41（x为壬基酚的浓度，单位ng/ml；y为峰面积），相关系数0.9995，能够满足定量分析的需要。

按照常规理论：倘若样品提取液的响应值超出仪器检测的线性范围的上限，则对样品提取液采取适当的稀释处理后再进行检测即可，稀释倍数视响应值而定。

本发明具有如下优点：

（1）回收率高、重现性好：回收率可以达到78.2%～101.2%，相对标准偏差2.3%～7.7%，现有技术的回收率为77.3%～90.1%，相对标准偏差为4.2%～6.5%，本发明平均回收率提高了5%，相对标准偏差大体相当。

（2）检出限低：本方法检出限为1μg/kg，现有技术检出限2.4μg/kg。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是浓度为0.25μg/mL 壬基酚（Nonylphenol）标准物质的液相色谱图。

具体实施方式

标准品：壬基酚（Nonylphenol）分子式为C₁₅H₂₄O，纯度大于99%。

标准贮备溶液：准确称取0.0500g壬基酚标准品，用甲醇定容至100mL，配制成浓度为500μg/mL的壬基酚标准贮备液，于－18℃避光保存。

标准工作溶液（0.25μg/mL）：分别准确吸取50μL壬基酚标准贮备液至100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成0.25μg/mL的标准工作溶液。

氨基固相萃取柱：500mg（填料量），3mL（空柱管体积），例如可选用天津博纳艾杰尔科技有限公司生产的PA5003型号的氨基固相萃取柱；使用前依次使用6mL甲醇丙酮混合液（甲醇：丙酮=1：1的体积比），6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的杂质，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然过柱。

高效液相色谱(HPLC)仪：配有荧光检测器。

实施例1、速食面样品中壬基酚含量检测

(一)样品处理

1）试样制备

将速食面制成过40目筛的粉末，作为待测样品。

2）提取

称取待测样品2.00g加入50mL离心管（具塞离心管）内，加入20mL正己烷和丙酮混合溶剂（正己烷：丙酮=1：1的体积比），在20mm震荡幅度下振荡提取20min，在40KHz的超声频率和99W的功率下超声波提取20min，5000r/min离心10min，得首次上清液和沉淀；将所得的首次上清液转移至另一个50mL离心管中。

在沉淀中加入10mL正己烷和丙酮混合溶剂（正己烷：丙酮=1：1的体积比）重复提取一遍，即，在20mm震荡幅度下振荡提取20min，在40KHz的超声频率和99W的功率下超声波提取20min，5000r/min离心10min，得再次上清液。

将首次上清液和再次上清液进行合并，共得到约30mL的上清液。取1/3体积（即约10mL）上清液50℃氮气吹至近干，然后用3mL二氯甲烷溶解，得待净化提取液。

3）净化

将氨基固相萃取柱安装在SPE固相萃取装置上，依次用6mL甲醇丙酮混合液（甲醇：丙酮=1：1的体积比）和6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的杂质，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然过柱。

转移步骤2）所得的待净化提取液上柱，再加入6mL正己烷淋洗（流速为一秒一滴），50℃氮气吹氨基固相萃取柱近干，加入6mL甲醇丙酮混合液洗脱（流速为一秒一滴，甲醇：丙酮=1：1的体积比），收集洗脱液，50℃氮气吹干，流动相（即高效液相色谱检测用流动相：体积百分比70％乙腈和30％水组成的混合溶液）溶解并定容至1mL，过0.45μm有机相滤膜，得1mL样品提取液，供高效液相色谱仪测定。

(二)测定条件

a)色谱柱：EclipseXDB C18柱，5μm(粒度)，150mm×4.6mm（内径）。

b)流动相

70％（体积比）A：乙腈

30％（体积比）B：水

c)流速：1.3mL/min。

d)柱温：30℃。

e)激发波长：222nm。

发射波长：305nm。

f)进样量：10μL。

（三）色谱分析

注入10μL壬基酚标准工作溶液及样品提取液于高效液相色谱仪进样器中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积。根据标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图参见图1。

由于壬基酚标准溶液在1ng/mL～0.5mg/mL内，其浓度与峰面积有良好的线性相关性，回归方程：y=0.13x+0.41，根据峰面积y=1.7295，可得样品提取液中壬基酚浓度为10.15 ng/ml。

再根据最初选用的取待测样品2.00g与样品提取液用量比的换算关系：

$X=\frac{C\×V\×N}{m}$

X—— 样品中壬基酚残留量，mg/kg；

C——样品提取液中壬基酚浓度，μg/mL；

V—— 样品提取液最终定容体积，mL；

N—— 稀释倍数；

m—— 样品质量，g。

其中样品提取液的体积V为1mL；样品质量m为2g；稀释倍数N为3（根据2）步骤中取1/3体积的上清液，可知此处N为3）。

根据取样的检测结果，速食面中壬基酚的浓度为15.2 ng/g。由于壬基酚广泛存在于环境中，生产速食面的原材料可能被壬基酚污染。

实施例2：中国大白菜样品中壬基酚含量检测

(一)样品处理

1）试样制备

将中国大白菜切碎，匀浆，得浆液，加入适量无水硫酸钠将浆液进行浓缩处理，使浓缩后的浆液的重量=原始的中国大白菜的重量；该浓缩后的浆液作为待测样品。

2）提取

称取待测样品2.00g加入50mL离心管（具塞离心管）内，加入20mL正己烷和丙酮混合溶剂（正己烷：丙酮=1：1的体积比），在20mm震荡幅度下振荡提取20min，在40KHz的超声频率和99W的功率下声波提取20min，5000r/min离心10min，得首次上清液和沉淀。将所得的首次上清液转移至另一个50mL离心管中。在沉淀中加入10mL正己烷和丙酮混合溶剂（正己烷：丙酮=1：1的体积比）重复提取一遍，即，在20mm震荡幅度下振荡提取20min，在40KHz的超声频率和99W的功率下声波提取20min，5000r/min离心10min，得再次上清液。

将首次上清液和再次上清液进行合并，共得到约30mL的上清液。取1/3体积（即约10mL）上清液50℃氮吹至近干，然后用3mL二氯甲烷溶解，得待净化提取液。

3）净化

将氨基固相萃取柱安装在SPE固相萃取装置上，依次用6mL甲醇丙酮混合液（甲醇：丙酮=1：1的体积比）和6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的杂质，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然过柱。

转移步骤2）所得的待净化提取液上柱，再加入6mL正己烷淋洗（流速为一秒一滴），吹氨基固相萃取柱近干，加入6mL甲醇丙酮混合液洗脱（流速为一秒一滴），收集洗脱液，50℃氮气吹干，流动相（即高效液相色谱检测用流动相：体积百分比70％乙腈和30％水的混合溶液）溶解并定容至1mL，过0.45μm有机相滤膜，得样品提取液1mL，供高效液相色谱仪测定。

 (二)测定条件

a)色谱柱：EclipseXDB C18柱，5μm(粒度)，150mm×4.6mm（内径）。

b)流动相

70％（体积比）A：乙腈

30％（体积比）B：水

c)流速：1.3mL/min。

d)柱温：30℃。

e)激发波长：222nm。

发射波长：305nm。

f)进样量：10μL。

（三）色谱分析

注入10μL壬基酚标准工作溶液及样品提取液于高效液相色谱仪进样器中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积。根据标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图参见图1。

由于壬基酚标准溶液在1ng/mL～0.5mg/mL内，其浓度与峰面积有良好的线性相关性，回归方程：y=0.13x+0.41，根据峰面积y=1.6398，可得样品提取液壬基酚浓度为9.46 ng/ml。再根据最初选用的取待测样品2.00g与样品提取液用量比的换算关系：

$X=\frac{C\×V\×N}{m}$

X—— 样品中壬基酚残留量，mg/kg；

C——样品提取液中壬基酚浓度，μg/mL；

V—— 样品提取液最终定容体积，mL；

N—— 稀释倍数；

m—— 样品质量，g。

其中样品提取液体积V为1mL；样品质量m为2g；稀释倍数N为3。

根据取样的检测结果，中国大白菜中壬基酚的浓度为14.2 ng/g。由于壬基酚广泛存在于各种环境介质中，可能通过各种途径在植物体内富集。

实施例3：鲫鱼样品中壬基酚含量检测

(一)样品处理

1）试样制备

将鲫鱼肉制成糜状物（鱼肉糜），作为待测样品。

2）提取

称取待测样品2.00g加入50mL离心管（具塞离心管）内，加入20mL正己烷和丙酮混合溶剂（正己烷：丙酮=1：1的体积比），在20mm震荡幅度下振荡提取20min，在40KHz的超声频率和99W的功率下声波提取20min，5000r/min离心10min，得首次上清液和沉淀；将所得的首次上清液转移至另一个50mL离心管中。在沉淀中加入10mL正己烷和丙酮混合溶剂（正己烷：丙酮=1：1的体积比）重复提取一遍，即，在20mm震荡幅度下振荡提取20min，在40KHz的超声频率和99W的功率下声波提取20min，5000r/min离心10min，得再次上清液。

将首次上清液和再次上清液进行合并，共得到约30mL的上清液。取1/3体积（即，约10mL）的上清液50℃氮吹至近干，然后用3mL二氯甲烷溶解，得待净化提取液。

3）净化

将氨基固相萃取柱安装在SPE固相萃取装置上，依次用6mL甲醇丙酮混合液（甲醇：丙酮=1：1的体积比）和6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的杂质，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然过柱。

转移步骤2）所得的待净化提取液上柱，再加入6mL正己烷淋洗（流速为一秒一滴），吹氨基固相萃取柱近干，加入6mL甲醇丙酮混合液洗脱（流速为一秒一滴），收集洗脱液，50℃氮气吹干，流动相（即高效液相色谱检测用流动相：体积百分比70％乙腈和30％水的混合溶液）溶解并定容至1mL，过0.45μm有机相滤膜，得样品提取液，供高效液相色谱仪测定。

(二)测定条件

a)色谱柱：EclipseXDB C18柱，5μm(粒度)，150mm×4.6mm（内径）。

b)流动相

70％（体积比）A：乙腈

30％（体积比）B：水

c)流速：1.3mL/min。

d)柱温：30℃。

e)激发波长：222nm。

发射波长：305nm。

f)进样量：10μL。

（三）色谱分析

注入10μL壬基酚标准工作溶液及样品提取液于高效液相色谱仪进样器中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积。根据标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图参见附图1。

由于壬基酚标准溶液在1ng/mL～0.5mg/mL内，其浓度与峰面积有良好的线性相关性，回归方程：y=0.13x+0.41，根据峰面积y=2.5198，可得样品提取液壬基酚浓度为16.23 ng/ml。

再根据最初选用的取待测样品2.00g与样品提取液用量比的换算关系：

$X=\frac{C\×V\×N}{m}$

X—— 样品中壬基酚残留量，mg/kg；

C——样品提取液中壬基酚浓度，μg/mL；

V—— 样品提取液最终定容体积，mL；

N—— 稀释倍数；

m—— 样品质量，g。

其中样品提取液最终定容体积V为1mL；样品质量m为2g；稀释倍数N为3。

根据取样的检测结果，鲫鱼中壬基酚的浓度为24.3 ng/g。造成鲫鱼体内的壬基酚含量浓度较高是由于样品取自可能受环境污染的东海沿海养殖场。

验证例1、

将事先已知不含壬基酚的速食面制成过40目筛的粉末，然后添加适量的壬基酚，从而制成壬基酚浓度为30ng/g的速食面粉末作为待测样品。

将上述待测样品按照实施例1所述的方法进行检测，得峰面积y=2.7785，根据y=0.13x+0.41，得样品提取液壬基酚浓度为18.22 ng/ml；最终的待测样品中壬基酚的浓度为27.33 ng/g。

对比例1、将实施例1中的步骤3）“净化”中的“收集洗脱液，50℃氮气吹干”改成“收集洗脱液，70℃氮气吹干”，其余同实施例1。

将完全同验证例1中的待测样品按照对比例1的方法进行检测，得峰面积y=2.619，根据y=0.13x+0.41，得样品提取液壬基酚浓度为16.99ng/ml；最终的待测样品中壬基酚的浓度为25.49 ng/g。

验证例2、

将事先已知不含壬基酚的速食面制成过40目筛的粉末，然后添加适量的壬基酚，从而制成壬基酚浓度为1.5ng/g的速食面粉末作为待测样品。

将上述待测样品按照实施例1所述的方法进行检测，得峰面积y=0.5284，根据y=0.13x+0.41，得样品提取液壬基酚浓度为0.91 ng/ml；最终的待测样品中壬基酚的浓度为1.36 ng/g。

验证例3、

将事先已知不含壬基酚的鲫鱼肉制成糜状物（鱼肉糜），然后添加适量的壬基酚，从而制成壬基酚浓度为15ng/g的糜状物（鱼肉糜）作为待测样品。

将上述待测样品按照实施例3所述的方法进行检测，得峰面积y=1.588，根据y=0.13x+0.41，得样品提取液壬基酚浓度为9.07 ng/ml；最终的待测样品中壬基酚的浓度为13.6ng/g。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (8)

1.食品中壬基酚的测定方法，其特征是包括以下步骤：

1）、试样制备：

将待测品制成待测样品；

2）、提取：

称取待测样品2.0g加入离心管内，加入18~22mL正己烷和丙酮混合溶剂，振荡提取、超声波提取、离心后，得首次上清液和沉淀；

在沉淀中加入8~12mL正己烷和丙酮混合溶剂，重复上述振荡提取、超声波提取和离心；得再次上清液；

合并首次上清液和再次上清液，得合并上清液，取1/3体积的合并上清液45~55℃氮吹干，二氯甲烷溶解，得待净化提取液；

所述正己烷和丙酮混合溶剂由正己烷和丙酮按照1:1的体积比混合而得；

3）、净化：

取活化后的氨基固相萃取柱，转移上述待净化提取液上柱，先加入正己烷淋洗，吹干氨基固相萃取柱后，加入甲醇丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，将所收集的洗脱液于48~52℃氮气吹干，用流动相溶解并定容至1mL，过0.45μm有机相滤膜，得样品提取液；所述样品提取液用于下述步骤的高效液相色谱仪测定；

所述流动相同步骤4）中的高效液相色谱检测用流动相；

4）、将步骤3）所得的样品提取液与壬基酚标准工作溶液分别进行高效液相色谱测定；

高效液相色谱测定条件如下：

所用色谱柱为EclipseXDB C18，5μm，150mm×4.6mm内径；

高效液相色谱检测用流动相由体积百分比70％的组分A和体积百分比30％的组分B，所述组分A为乙腈，所述组分B为水；

分别测得样品提取液和壬基酚标准工作溶液的峰面积；

利用壬基酚标准工作溶液的峰面积和壬基酚标准工作溶液中壬基酚浓度获知壬基酚浓度/峰面积的线性相关性关系，以及利用样品提取液的峰面积，得知样品提取液中壬基酚的浓度；再根据待测样品与样品提取液的比例关系，换算获得待测样品中壬基酚的浓度。

2.根据权利要求1所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：

壬基酚标准工作溶液中壬基酚的浓度为在1ng/mL～0.5mg/mL。

3.根据权利要求2所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：

壬基酚浓度/峰面积的线性相关性关系：y=0.13x+0.41；

所述y为峰面积，x为壬基酚浓度，单位ng/ml。

4.根据权利要求1、2或3所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：

当待测品为谷类时，将谷类制成过40目筛的粉末， 作为待测样品；

当待测品为鱼类时，将待测品制成糜状物，作为待测样品；

当待测品为蔬菜、蔬菜制品，将待测品匀浆，得浆液；加入无水硫酸钠将浆液进行浓缩处理，使浓缩后的浆液=待测品的重量；所述浓缩后的浆液作为待测样品。

5.根据权利要求4所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：

所述步骤4）中的高效液相色谱中荧光检测波长为激发波长222nm，发射波长305nm。

6.根据权利要求5所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：

所述步骤2）中：

在15~25mm震荡幅度下的震荡提取时间为15~25min；

在30~50KHz的超声频率和80~120W的功率下超声波提取15~25min。

离心的转速为4000~6000r/min，离心时间8~12min。

7.根据权利要求6所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：步骤3）中甲醇丙酮混合液、正己烷体积均为4~8mL。

8.根据权利要求7所述的食品中壬基酚的测定方法，其特征是：所述步骤2）中所用的离心管为具塞离心管。

Images