CN103110930A - 一种排铅组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种排铅组合物及其制备方法。本发明从众多药物中筛选出了具有明显促进排铅作用的狗舌草。采用狗舌草或其提取物单用或与其他具有排铅作用的药物组合,制备的排铅药物,能够减少动物体内的血铅含量,达到促进排铅、缓解铅对机体的损害、改善症状的目的。且经急性毒性实验表明,本发明的排铅组合物对小鼠无毒副作用,安全有效。
Description
技术领域
本发明涉及狗舌草或其提取物单用或与其他促排铅作用物质组合在制备促排铅药物或保健品中的应用。
背景技术
随着工业的发展,环境污染越来越严重,其中铅是常见的工业毒物和环境污染物。铅为人体不需要的微量元素,极低浓度就能对人体的骨髓造血系统、免疫系统、神经系统,肝、肾、脑等造成呈多系统性、多器官性损害。铅在体内的半衰期极长,主要通过庞大复杂的食物链,空气等经消化道或呼吸道进入人体并在体内富集。不同年龄对铅的易感度不一样,其中儿童对铅最为易感,儿童年龄越小对铅的易感性越高。血铅浓度高的儿童在体格发育,智力发育,学习能力等都比正常儿童低。当儿童血铅浓度超过100ug/ L时, 将严重损害儿童的神经系统, 影响儿童的智力和行为发育。戚其平等在中国城市儿童血铅水平调查结果表明,中国城市儿童血铅总体均值为88.3ug/L。我们不得不重视铅对儿童健康的危害。
目前排铅作用机制主要有螯合作用、配位及吸附作用、沉淀作用、拮抗作用和抗氧化作用等。以螯合作用的排铅药物主要有依地酸二钠钙,锌促排灵,钙促排灵等螯合剂;配位及吸附作用的排铅药物主要有MT蛋白,魔芋精粉,大蒜等;沉淀作用的有含硫的食物如菠菜,果胶等;拮抗作用的有锌剂等;氧化作用的有维生素C,维生素B和多酚类物质云绿茶等。
目前临床上使用的排铅制剂主要有依地酸钠钙(CaNa2EDTA),锌促排灵(ZnNa3DTPA),钙促排灵(CaNa3DTPA),二疏基丁二酸钠(Na2DMS),二疏基丁二酸(DMSA)等。这些排铅制剂虽然有较好的排铅效果,但都有不同程度的毒副作用;其主要作用机制是螯合作用,排铅的同时也同样把人体内必须微量元素络合排出体外,使体内的微量元素失调,长期使用严重影响儿童的生长发育。某些螯合剂可能对重要器官有损害作用。
中药在中国有着深远的历史,虽然中药成分复杂,作用机制不明确,提取工艺繁琐,但其具有治疗效果好、无毒副作用或毒副作用小等特点,深受广大人们的认可。现国内掀起了中药热的浪潮,近年来有大量关于中药研究的文献资料不断涌现,促进了中药研究的发展。目前中药排铅作用研究中,排重金属口服液的排铅药效学研究尚无相关研究报道。尤其是狗舌草或其提取物是否具有促进人体排铅的作用还未见文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种排铅组合物及其制备方法。
本发明所采用的技术方案是:
狗舌草或其提取物单用或与其他促排铅作用物质组合在制备促排铅药物或保健品中的应用。
所述药物或保健品为口服剂型。
一种排铅组合物,由以下重量份的原料组成:狗舌草 10~90份、土茯苓 10~90份、甘草 10~90份、谷胱甘肽0.5~3份、蛋氨酸0.1~1份、半胱氨酸0.1~1份。
优选的,所述的排铅组合物由以下重量份的原料组成:狗舌草45~55份、土茯苓25~35份、甘草 10~20份、谷胱甘肽2~3份、蛋氨酸0.5~1份、半胱氨酸0.5~1份。
进一步优选的,所述的排铅组合物由以下重量份的原料组成:狗舌草50份、土茯苓30份、甘草15份、谷胱甘肽3份、蛋氨酸1份、半胱氨酸1份。
所述组合物制备成口服剂型,所述口服剂型为口服液、颗粒、胶囊或片剂。
上述的排铅组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)按配方称取各原料,将狗舌兰、土茯苓、甘草用机械粉碎后,加入8~12倍量的水煎煮2~3次,每次2~3小时,过滤,收集滤液浓缩至相当于生药5~15g/ml;
(2)往步骤(1)得到的浓缩液中加入1~2倍量的70%~80%的乙醇溶液,4~10℃过夜,离心去沉淀,旋蒸回收乙醇;
(3)将谷胱甘肽、蛋氨酸、半胱氨酸加至步骤(2)得到的浓缩液中,混匀,灭菌,制成口服液、颗粒、胶囊或片剂。
本发明的有益效果在于:
本发明从众多药物中筛选出了具有明显促进排铅作用的狗舌草。采用狗舌草或其提取物单用或与其他具有排铅作用的药物组合,制备的排铅药物,能够减少体内的血铅含量,达到促进排铅、缓解铅对机体的损害、改善症状的目的。且经急性毒性实验表明,本发明的排铅组合物对小鼠无毒副作用,安全有效。
附图说明
图1 试药组1小鼠肝脏石蜡切片图(1、2都是肝小叶,肝小叶周边清晰放射性肝索);
图2试药组2小鼠肝脏石蜡切片图;
图3药组3小鼠肝脏石蜡切片图;
图4正常组小鼠肝脏石蜡切片图(1为肝小叶肝索呈放射性,肝细胞良好;2 处有脂肪粒);
图5模型组中小鼠肝脏石蜡切片图(1,2处肝索比较紊乱,发射状不明显;3处出现水样性病变,细胞肿胀水肿);
图6 阳性组小鼠肝脏石蜡切片图(1处在脱蜡的时候时间太长出现裂痕,因为肝脏比较脆弱;2处肝索呈放射状,肝细胞良好);
图7试药组1小鼠肾脏石蜡切片图(1处为肾小球,正常组织形态学);
图8试药组2小鼠肾脏石蜡切片图;
图9试药组3小鼠肾脏石蜡切片图;
图10 正常组小鼠肾脏石蜡切片图;
图11 模型组小鼠肾脏石蜡切片(1处肾小管较小,细胞有萎缩现象);
图12 阳性组小鼠肾脏石蜡切片图(1处肾小管细胞略有受损);
图13 试药组1小鼠脑细胞石蜡切片图(1处为锥形细胞,2处为圆形细胞;锥形细胞比圆形细胞多);
图14试药组2小鼠脑细胞石蜡切片图;
图15试药组3小鼠脑细胞石蜡切片图;
图16 正常组小鼠脑石蜡切片图(1处为锥心细胞,2处为圆形细胞;锥形细胞比圆形细胞多);
图17 模型组小鼠脑石蜡切片图(1处为锥形细胞,2处圆形细胞;形态圆形的细胞较多,锥形细胞较少);
图18 阳性组小鼠脑石蜡切片图(1处为锥形细胞,2处为圆形细胞;锥形细胞比圆形细胞多)。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点,下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。应当说明的是,以下实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
实施例1
狗舌草水提液单用作为排铅口服液,其制备方法为:
取狗舌草全草用机械粉碎后,加入8~12倍量的水,煎煮2~3次,每次2~3小时,用8层纱布过滤,收集滤液浓缩至相当于生药10g/ml,即得排铅口服液,置于4℃冷藏备用。
实施例2
一种排铅组合物,按重量份计,由以下原料组成:
狗舌草50份、土茯苓30份、甘草15份、谷胱甘肽3份、蛋氨酸1份、半胱氨酸1份
实施例3
一种排铅组合物,按重量份计,由以下原料组成:
狗舌草55份、土茯苓25份、甘草10份、谷胱甘肽2份、蛋氨酸0.5份、半胱氨酸0.5份。
实施例4
一种排铅组合物,按重量份计,由以下原料组成:
狗舌45份、土茯苓35份、甘草20份、谷胱甘肽2.5份、蛋氨酸1份、半胱氨酸1份。
将实施例2-4的排铅组合制备成口服液,步骤如下:
(1)按配方称取各原料,将狗舌兰、土茯苓、甘草用机械粉碎后,加入8~12倍量的水煎煮2~3次,每次2~3小时,用8层纱布过滤,收集滤液浓缩至相当于生药10g/ml;
(2)往步骤(1)得到的浓缩液中加入1~2倍量的70%~80%的乙醇溶液,4~10℃过夜,连续流离心机离心去沉淀,旋蒸回收乙醇,浓缩至相当于生药10g/ml;
(3)将谷胱甘肽、蛋氨酸、半胱氨酸加至步骤(2)得到的浓缩液中,混匀,灭菌,分装,即得排铅口服液。
当然,也可以按常规方法制成颗粒、胶囊或片剂。
药效及毒性实验
1 材料
1.1 试药与仪器
1.1.1 试剂
醋酸铅(净重500g分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司,批号:20100110);依地酸二钠钙(25g,广州瑞舒生物科技有限公司);氯化钠(净重500g分析纯,天津市广成化学试剂有限公司,批号:20080316);硝酸铅(优级纯)等。
1.1.2 器材
灌胃针、解剖工具(止血钳、手术刀等)、烧杯、玻璃棒、电子天平、Fw177-中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)、Z2000石墨炉原子吸收光谱仪、毛细管、抗凝EP管(江苏省姜堰市瑞康医疗器械有限公司,0.5ml)、美的电饭煲、电热板等。
1.2 动物
昆明种小鼠,清洁级,40只,雄雌各半,体质量18~22 g〔广州中医药大学实验动物中心,动物合格证号:scxk(粤)2008-0020〕。饲养条件:小鼠饲以普通饲料,自由饮水;实验室内温度保持在25℃左右,相对湿度为40% ~70%,每日光照12 h。
2 方法
2.1 急性毒性试验
固定剂量法急性毒性试验:24只体重在18~22g之间的昆明小鼠,6只为一组,雄雌各半,分别灌服实施例1-4的排铅口服液,用相当于生药500 mg/kg作为初始剂量进行预试,如无毒性反应,则用相当于生药2000 mg/kg进行预试,此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应,即降低一个档次的剂量进行预试,如此时动物存活,就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只小鼠。每个剂量试验之间间隔24小时。给受试物后的观察期为7天,如动物的毒性反应到第7天仍然存在,则继续观察7天。记录结果。
2.2 实验分组
从广州中医药大学动物实验中心购进60只体重为18~22g的合格昆明种属小鼠,雄雌各半,饲养一周。根据小鼠体重进行随机分层分组,分为6组(模型组,阳性对照组,正常组,试药组1、试药组2、试药组3),每组10只(5只雌,5只雄);用苦味酸标记每只小鼠。
2.3 铅中毒小鼠模型的制备
采用0.1%醋酸铅溶液自然饮食染毒法构建小鼠铅中毒模型,每天固定200ml 0.1%醋酸铅溶液,连续饮用15天。眼球静脉丛取血,用石墨炉原子吸收光谱仪检测血铅浓度。
2.4 药效学实验
建模成功后,模型组,阳性对照组,试药组小鼠继续自然饮用0.1%醋酸铅溶液,正常组自然饮用去离子水;模型组以灌胃的方式给予小鼠生理盐水4ml(4ml/只·d-2),每天早晚各一次;阳性对照组以灌胃的方式给予小鼠依地二酸钠钙溶液300mg/kg(300mg/kg·d-2),每天早晚各一次;试药组1-3以灌胃的方式给予小鼠实施例1-3的排铅口服液,每天早晚各一次,采用100 mg/ml的药液,灌胃量相当于生药1000 mg/kg体重。每周给小鼠称重一次,根据体重调整给药剂量;连续给药三周,小鼠眼球静脉丛取血,检测小鼠血铅浓度。经药效实验完成后,解剖小鼠,取各组小鼠的肝、肾、脑、骨,用福尔马林溶液固定,固定24小时包埋后,进行组织切片。
2.5统计方法
通过Sigma Plot 10.0软件进行统计,对试药组和模型组的血铅浓度进行t检验。若P<0.05,则有统计学意义,排铅效果明显。血铅的平均浓度进行对比。
记录情况:给药剂量、小鼠的不同时间段的血铅浓度。
3 结果
3.1 排重金属口服液的急性毒性试验结果
用500mg/kg作为初始剂量进行预试,无毒性反应,再用2000 mg/kg的最大浓度、最大体积进行预试,此剂量仍无小鼠死亡发生,表明该剂量为最大耐受剂量。
3.2 小鼠铅中毒模型的制备结果
模型组,试药组,阳性对照组自然饮食0.1%醋酸铅溶液7d后,开始出现烦躁不安,继续饮用0.1%醋酸铅溶液7d后,测得小鼠血铅浓度明显高于正常组的血铅浓度。各组小鼠的血铅浓度进行t检验,其P<0.01,说明具有统计学意义,结果为造模成功,见表1和图1。
注:40只体重为18~22g的合格昆明种属小鼠,6组(模型组,阳性对照组,正常组,3个试药组),每组10只(5只雌,5只雄);试药组,阳性对照组VS模型组,P<0.01。
3.3 排重金属口服液对小鼠体重的影响
60只体重为18~22g的合格昆明种属小鼠,6组(模型组,阳性对照组,正常组,试药组1,试药组2,试药组3,剂量均为相当于生药1000 mg/kg体重),每组10只(5只雌,5只雄),给药7d后各组小鼠体质重量变化,见表2。从实验数据可得各组小鼠体重比实验前有所增重,增重量并无很明显差异;但试药组增重的量(6.51±3.22)g与正常组增重的量(6.37±4.66)g更为接近。小鼠饮食等状态没有什么异常,但模型组中的小鼠比试药组中的小鼠表现得更为烦躁不安并出现多尿等症状。
注:60只体重为18~22g的合格昆明种属小鼠,6组(模型组,阳性对照组,正常组,3个试药组),每组10只(5只雌,5只雄);* 与模型组比较,P<0.05。
4.4 排重金属口服液对染铅小鼠的血铅浓度的影响
试药组给药30d后,用石墨炉原子吸收光谱仪测定小鼠的血铅浓度,实验结果表明试药组小鼠的血铅浓度比模型组的血铅浓度低,见表3和图3;说明狗舌草单用或其组合物具有排铅作用。
注:60只体重为18~22g的合格昆明种属小鼠,6组(模型组,阳性对照组,正常组,3个试药组),每组10只(5只雌,5只雄);* 试药组,阳性对照组VS模型组,P<0.05。
4.5 排重金属口服液对染铅小鼠的肝肾脑组织的影响
试药组,阳性对照组与正常组的小鼠脏器系数相当;说明排重金属口服液和阳性药对小鼠的肝肾器官的影响不大。而模型组的小鼠脏器系数比正常组的小,推断模型组中小鼠的肝肾器官可能出现较严重的损害,见表4。
注:平均脏器系数比=各组(小鼠脏器重量/小鼠体重)之和/10,每组10只小鼠(5只雌,5只雄)。
从肝肾脑组织切片看,模型组的肝肾脑都有所损伤,试药组的肝肾脑都没有什么影响。
肝是人体最大的腺体,具有极复杂多样的生物化学功能,被称为机体的化工厂。在小鼠身上也是起着重要的作用。肝产生的胆汁作为消化液参与脂类食物的消化;肝合成多种蛋白质,直接分泌入血;肝还参与糖、脂类、激素和药物代谢。试药组的肝脏与正常组的肝脏相似,肝门呈放射状,肝板肝索,肝门管区都清晰,具有明显规律性,肝细胞良好,见图1-3。但在正常组小鼠肝脏切片图中可以看到有脂粒,见图4。这可能由于正常饲养过程中小鼠比较肥胖引起的。而模型组中,肝门中央静脉有充血,肝门周边肝细胞排列混乱和肝细胞出现水样性病变等病理状态,见图5a和图5b,提示肝细胞有水肿和肝脏有水肿现象。阳性组中的肝细胞无明显病理状态,见图6。
试药组中的肾脏与正常组的相比,无明显差异。肾小管,肾小球远端小管近端小管明显见图7-10。但模型组中,肾小管边缘较模糊,肾小球有些萎缩状态,见图11;阳性组中肾小管肾小球略有肿胀,见图12。有研究表明依地酸二钠钙的主要毒副作用是肾损害,长时间大剂量使用该药事多发生肾损害。但本次实验中从这些切片图中,没有发现肾小管出现坏死现象。
脑组织中,试药组、阳性对照组和正常组小鼠的脑组织相似,锥形细胞增多,与人脑细胞有很大区别,见图13-15,图16,,图17。模型组小鼠的脑细胞核比正常组的大,模型组中圆形的细胞比锥形细胞比例增加,见图18。
以上结果表明,狗舌草水提物或本发明的排铅组合物对染铅小鼠有一定的促进排铅作用。本实验中排铅口服液灌胃给药后,同其他组小鼠相比,体重无显著性差异,说明该药对小鼠体质重量变化无明显影响,给药后血铅含量同模型组相比,有明显下降趋势。
从病理切片得,排铅组合物对重要脏器没有损害作用,而铅对肝肾脑的影响很大。其中对脑的影响最大,使脑细胞的形态学改变最为明显,这与小鼠在染铅初期就出现烦躁不安的临床表现相对应,也证实了相关报道铅对神经系统的影响最大的假说。狗舌草水提物、排铅组合物和阳性药依地二酸钠钙能缓解铅对大脑的损害。本发明为中药治疗铅中毒提供了一种有效的方法。
Claims (7)
1.狗舌草或其提取物单用或与其他促排铅作用物质组合在制备促排铅药物或保健品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物或保健品为口服剂型。
3.一种排铅组合物,由以下重量份的原料组成:狗舌草 10~90份、土茯苓 10~90份、甘草 10~90份、谷胱甘肽0.5~3份、蛋氨酸0.1~1份、半胱氨酸0.1~1份。
4.根据权利要求3所述的排铅组合物,其特征在于,由以下重量份的原料组成:狗舌草45~55份、土茯苓25~35份、甘草 10~20份、谷胱甘肽2~3份、蛋氨酸0.5~1份、半胱氨酸0.5~1份。
5.根据权利要求3所述的排铅组合物,其特征在于,由以下重量份的原料组成:狗舌草50份、土茯苓30份、甘草15份、谷胱甘肽3份、蛋氨酸1份、半胱氨酸1份。
6.根据权利要求3所述的排铅组合物,其特征在于,所述组合物制备成口服剂型,所述口服剂型为口服液、颗粒、胶囊或片剂。
7.权利要求3-6任一项所述的排铅组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)按配方称取各原料,将狗舌兰、土茯苓、甘草用机械粉碎后,加入8~12倍量的水煎煮2~3次,每次2~3小时,过滤,收集滤液浓缩至相当于生药5~15g/ml;
(2)往步骤(1)得到的浓缩液中加入1~2倍量的70%~80%的乙醇溶液,4~10℃过夜,离心去沉淀,旋蒸回收乙醇;
(3)将谷胱甘肽、蛋氨酸、半胱氨酸加至步骤(2)得到的浓缩液中,混匀,灭菌,制成口服液、颗粒、胶囊或片剂。
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Granted publication date: 20150325 Termination date: 20170220 |