CN103100070A - 一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草与生姜药对制剂 - Google Patents

一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草与生姜药对制剂 Download PDF

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张崇禧
陆波
张成城
李玲玉
侯欣池
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Abstract

本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂。精确称取干燥且经粉碎的葎草和生姜各10g,分别加入280ml72%的乙醇,于80℃下回流提取1-2h,然后分别用8层纱布过滤,滤渣再分别加入280ml72%的乙醇回流提取1-2h,分别过滤,得滤液;将滤液分别合并,分别回收乙醇,分别浓缩至10mL,再分别按照葎草∶生姜为1∶1的比例配比葎草-生姜药对的浓缩液,置4℃冰箱保存,备用。该制剂具有协同提高抗细菌性腹泻作用。

Description

一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草与生姜药对制剂
技术领域
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草一生姜药对制剂。 
背景技术
葎草为桑科植物葎草Humulus scandens(Lour.)Merr的全草,一年生或多年生草本植物。别名很多,主要有拉拉秧、拉拉藤、锯子草、五爪龙、降龙草等,始载于《唐本草》。葎草生命力顽强,资源丰富,广泛分布于全国(除青海、新疆以外)各地区,日本、朝鲜、北美洲等也有分布。具有清热解毒、利尿消肿等功效,可用于治疗肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、淋证、痔疮、小便不利、皮肤瘙痒等证.据报道葎草全草含青兰苷、天门冬素、挥发油、鞣质及树脂;葎草叶含木犀草素葡萄糖苷、大波斯菊苷、牡荆素等黄酮类成分。在研究草提取物的抗菌作用时发现,其水提取液对革兰阳性菌具有较强的抗菌活性,并证实抗菌作用与葎草中所含的黄酮类成分有关。据报道不同月份的葎草中黄酮的含量不同,本实验采用了黄酮含量最高的9月份的葎草。 
生姜(Zingiber officinale Roscoe)又名姜,属姜科(Zingiberaceae)多年生草本宿根植物,其根茎肥厚,具有芳香和辛辣味,是最常用的香辛料之一。亚洲、非洲、拉丁美洲等地均有种植。我国是世界上最大的生姜出口国之一,生姜在我国南方广东、浙江栽培较为普遍,其次是江西、安徽、四川、云南、湖南、湖北等;在北方则以山东为主要产地,还有河南、陕西等。生姜的化学组分很复杂,主要有挥发油、姜辣素、姜油酮、姜烯酚、姜醇、水茴香烯、龙脑和桉精油和二苯基庚烷及黄酮类化合物等。 
本实验通过实验研究了葎草、生姜以及葎草-生姜药对对一些引起细菌性腹泻的细菌的抑菌的活性研究,并确定了葎草、生姜以及葎草-生姜药对抑菌的最低抑菌浓度,葎草-生姜药对抑菌的最佳浓度配比等。为生活中的细菌性腹泻的治疗提供了科学依据。 
发明内容
1、一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤: 
(1)精确称取干燥且经粉碎的葎草和生姜各10g,分别加入280ml72%的乙醇,于80℃ 下回流提取1-2h,然后分别用8层纱布过滤,滤渣再分别加入280ml72%的乙醇回流提取1-2h,分别过滤,得滤液; 
(2)将(1)中的滤液分别合并,分别回收乙醇,分别浓缩至10mL,再分别按照葎草∶生姜为1∶1的比例配比葎草-生姜药对的浓缩液,置4℃冰箱保存,备用。 
2、一种葎草-生姜药对制剂用于制备具有协同提高抗细菌性腹泻作用的药物制剂。 
具体实施方式
本发明所述的一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂包括以下实施例,下面的实施例可进一步说明本发明,但不以任何方式限制本发明。 
实施例1: 
1、一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤: 
(1)精确称取干燥且经粉碎的葎草和生姜各10g,分别加入280ml72%的乙醇,于80℃下回流提取1h,然后分别用8层纱布过滤,滤渣再分别加入280ml72%的乙醇回流提取1h,分别过滤,得滤液; 
(2)将(1)中的滤液分别合并,分别回收乙醇,分别浓缩至10mL,再分别按照葎草∶生姜为1∶1的比例配比葎草-生姜药对的浓缩液,置4℃冰箱保存,备用。 
2、一种葎草-生姜药对制剂用于制备具有协同提高抗细菌性腹泻作用的药物制剂。 
实施例2: 
1、一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤: 
(1)精确称取干燥且经粉碎的葎草和生姜各10g,分别加入280ml72%的乙醇,于80℃下回流提取2h,然后分别用8层纱布过滤,滤渣再分别加入280ml72%的乙醇回流提取2h,分别过滤,得滤液; 
(2)将(1)中的滤液分别合并,分别回收乙醇,分别浓缩至10mL,再分别按照葎草∶生姜为1∶1的比例配比葎草-生姜药对的浓缩液,置4℃冰箱保存,备用。 
2、一种葎草-生姜药对制剂用于制备具有协同提高抗细菌性腹泻作用的药物制剂。 
药理试验一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂的试验 
1实验材料及仪器 
1.1实验材料 
葎草采自山东大学(威海)校园,经山东大学韩晓弟副教授鉴定为桑科葎草属葎草;生姜买自威海市利群购物广场;大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus Rosenbach)均由山东大学(威海)海洋学院提供;小白鼠(18-22g,购自绿叶制药厂);乙醇、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠等均为分析纯。 
1.2实验仪器 
电热鼓风干燥箱(杭州汇尔仪器设备有限公司);分析天平((上海楚柏实验室设备有限公司);SWB5200型超声清洗机(上海必能信超声有限公司);RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),DK-8AD电热恒温水槽(上海精密仪器仪表有限公司),高压蒸汽灭菌锅(上海博迅实业有限公司),超净工作台(上海精密仪器仪表有限公司),电热恒温培养箱(上海精密仪器仪表有限公司)。 
2实验方法 
2.1供试样品液的制备及阳性对照止泻药 
精确称取干燥且经粉碎的葎草和生姜各10g,分别加入280ml72%的乙醇,于80℃下回流提取1h,然后分别用8层纱布过滤,滤渣再分别加入280ml72%的乙醇回流提取1h,分别过滤,得滤液;将滤液分别合并,分别回收乙醇,分别浓缩至10mL,再分别按照葎草∶生姜为3∶7、4∶6、1∶1、6∶4、7∶3的比例配比葎草-生姜药对的浓缩液,置4℃冰箱保存,备用。阳性对照止泻药为市售止泻药止痢宁。 
2.2培养基的制备 
牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3g,蛋内胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1000mL,琼脂20g,水1000mL。PH:7.0~7.2。 
2.3供菌悬液的制备 
将供试菌种接种于相应的试管斜面培养基上。37℃恒温箱中培养18~24h进行活化2-3代。用接种环分别挑取少量活化后的菌体于装有无菌生理盐水的试管内。震荡均匀,制成菌悬液。调整菌悬液的浓度,用平板菌落计数法测定其菌液浓度,并用生理盐水将菌液稀释至105~106cfu/ml。 
2.4抑菌圈的测定 
中草药提取物液抑菌圈的测定采用滤纸片法。在超净工作台上按无菌操作的方式往无菌培养皿中倒入适量培养基,待培养基凝固后,用无菌移液管吸取0.1ml菌悬液于相应的营养平板上,用无菌涂布棒将菌悬液涂布均匀。然后按照无菌操作方式取出各溶液浸泡后的滤纸片(直径6mm),尽量使乙醇挥发完全。按培养皿的标号,将滤纸片放入培养基表面相应位置,每个培养皿等距放3个滤纸片,每个浓度做3组平行。并用无菌生理盐水做空白对照。放入恒温培养箱37℃下倒置培养24h。24h后取出测出滤纸片抑菌圈直径大小,比较抑菌效果。 
2.5小鼠腹泻实验 
选用健康小鼠60只,随机分组,每组10只;设空白组,模型组,葎草提取液组、生姜提取液组、葎草生姜药对提取液组,阳性对照组;模型组、葎草提取液组、生姜提取液组、葎草生姜药对提取液组、阳性对照组均腹腔注射大肠杆菌菌悬液(0.3ml/10g)造成严重腹泻模型,空白组腹腔注射等量生理盐水。3h后,空白组和模型组小鼠灌胃生理盐水(0.1ml/10g);葎草提取液组、生姜提取液组、葎草-生姜药对提取液组,小鼠分别灌胃葎草提取液、生姜提取液、葎草-生姜药对提取液,阳性对照组灌胃市售止泻药止痢宁水悬液。观察腹腔注射大肠杆菌注射液3h内小鼠腹泻情况及给药后3h内模型组和治疗组小鼠腹泻情况(包括稀便次数、总便次数、稀便级),并计算出腹泻指数。 
3结果及分析 
3.1抑菌效力的测定 
采用滤纸片扩散法研究葎草、生姜、葎草-生姜药对提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果,以抑菌圈直径的大小为指标。 
表1葎草提取液抑菌圈平均直径(mm) 
Figure BSA00000843873100041
注:--表示无抑菌圈 
由表1可以看出葎草对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌都有一定的抑制作用,并且葎草提取液的浓度越大,对细菌的抑制作用越强。葎草提取液对金黄色葡萄球菌的抑制作用要比对大肠杆菌的抑制作用要强一些。 
表2生姜提取液抑菌圈平均直径(mm) 
Figure BSA00000843873100042
注:--表示无抑菌圈 
由表2可以看出生姜对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌都有一定的抑制作用,并且生姜提取液的浓度越大,对细菌的抑制作用越强。生姜提取液对金黄色葡萄球菌的抑制作用要比对大肠杆菌的抑制作用要弱一些。 
表3不同浓度配比的葎草-生姜药对提取液抑菌圈平均直径(mm) 
Figure BSA00000843873100043
注:--表示无抑菌圈 
由表3可以看出葎草:生姜提取液浓度配比为4∶6时对大肠杆菌的抑制效果最好,当葎草-生姜药对提取液浓度配比为6∶4时对金黄色葡萄球菌的抑制效果最好。 
由表1、2、3可以得出结论,葎草-生姜药对提取液的抑菌效果要比葎草和生姜单种药材的抑菌效果要好。并且葎草提取液对金黄色葡萄球菌的抑制作用要比对大肠杆菌的抑制作用要强,生姜提取液对大肠杆菌的抑制作用要比对金黄色葡萄球菌的抑制作用要强。 
3.2小鼠腹泻实验结果 
腹泻率:一组动物中排稀便的动物数与该组动物总数之百分比。 
稀便率:每只动物所排的稀便次数与总便次数之比。 
稀便级:表示稀便的程度;以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小定级。统计时先逐个统计每一堆稀便的级数,然后将该鼠所有稀便级数相加除以稀便次数得稀便的平均级数。 
腹泻指数=稀便率×稀便级 
表4污染直径与稀便级数对照表 
Figure BSA00000843873100051
表5药材提取液对大肠杆菌所致小鼠腹泻指数的比较(x±s) 
Figure BSA00000843873100052
注:模型组与空白组组间比较:ΔP<0.05;治疗组与模型组组间比较:*P<0.05。 
应用SPSS11.0统计软件做数据处理,所有数据采用x±s表示,采用t检验,P<0.05为有统计学意义。 
实验中小鼠一般状态与行为的改变:腹腔注射大肠杆菌菌悬液1h后出现不同程度的腹泻,表现为便次增多、便质稀软、到第3个小时腹泻情况明显加剧,有些小鼠呈明显的倦怠乏力,精神萎靡,稀水样便。药物治疗后,给药各组的小鼠腹泻症状明显改善,表现为大便数减少,便质由稀转干,精神状态渐好,饮食恢复,情绪稍见兴奋。 
由统计的数据可见葎草及生姜提取液对治疗小鼠的腹泻均有一定的作用,且与市场上常用的止痢药效果相当,葎草-生姜药对提取液对治疗小鼠的腹泻有较好的作用,并且要比市场上常用的止痢药效果好。 

Claims (2)

1.一种协同提高抗细菌性腹泻作用的葎草-生姜药对制剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)精确称取干燥且经粉碎的葎草和生姜各10g,分别加入280ml72%的乙醇,于80℃下回流提取1-2h,然后分别用8层纱布过滤,滤渣再分别加入280ml72%的乙醇回流提取1-2h,分别过滤,得滤液;
(2)将(1)中的滤液分别合并,分别回收乙醇,分别浓缩至10mL,再分别按照葎草∶生姜为1∶1的比例配比葎草-生姜药对的浓缩液,置4℃冰箱保存,备用。
2.如权利要求1所述方法制备的一种葎草-生姜药对制剂的用途,其特征在于用于制备具有协同提高抗细菌性腹泻作用的药物制剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104491011A (zh) * 2014-12-18 2015-04-08 南方医科大学中西医结合医院 一种治疗轮状病毒致小儿腹泻的中药组合物及其制备方法

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CN102579940A (zh) * 2012-03-28 2012-07-18 山东中医药大学 一种治疗小儿腹泻的敷脐中药组合物

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C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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