CN106562100A - 一种预防和治疗水产生物疾病的饲料添加剂、水产生物饲料的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种防治水产生物疾病的饲料添加剂，该饲料添加剂原料由金银花的茎和叶组成，其含重量百分比50～100％的金银花茎叶微粉或提取物。本发明还提供了含有该饲料添加剂的饲料。本发明的饲料添加剂和饲料有效的避免了抗生素药物的使用，不仅具有成本低、无药物残留、无毒副作用、无耐药性等优点，而且制备时工艺简单、耗能低、无污染，容易实现产业化，为金银花产区提供了新的用途。

Description

一种预防和治疗水产生物疾病的饲料添加剂、水产生物饲料 的制备方法和应用

技术领域

本发明属于水产养殖业领域，具体涉及到一种防治水产生物疾病的饲料添加剂、鱼饲料的制备及应用。

背景技术

近年来，随着人民生活水平的提高，鱼的消费量也在逐年增加，进而带动了国内水产集约化养殖业的发展。然而，在水产养殖中，由于水质的富营养化、高密度饲养及多种病原菌引起的水产养殖相关疾病日益严重，严重危害其养殖业的发展。一般认为，引起鱼类细菌性疾病的有嗜水气单胞菌、爱德华氏菌、弧菌及肠球菌等，而口白症病毒等是鱼类最常见的感染病毒。

目前对水产养殖相关疾病的防治措施主要依赖抗生素药物的使用，但滥用抗生素的负面效应也是日益显露，其结果不仅影响养殖业的产能，同时也引起细菌耐药性和抗生素残留等问题。人们长期食用具有抗生素残留的鱼虾等水产品，也很容易引起过敏反应、毒性反应等，危害人们的健康。

尽管疫苗在防治水产生物疾病上具有一定的作用，但预防单一，且效果并不稳定，难以对应病毒的快速变异。因此，一种安全、高效、无残留、无耐药、抗菌、抗病毒及抗感染作用的防治水产养殖相关疾病的新对策，无论是对于养殖业自身的可持续发展，而且是对消费者健康，都是至关重要，且具有着巨大的市场空间。

发明内容

本发明涉及一种防治水产生物疾病的饲料添加剂，所述饲料添加剂原料由金银花的茎和叶组成，所述饲料添加剂中含重量百分比50～100％的金银花茎叶微粉或提取物。

在本发明中，所述的水产生物疾病包括寄生虫症、细菌及病毒感染症等,本发明的应用对象为鲑鱼类、鲀鱼类、鲷鱼、鰤鱼类、鲽鱼类及鲤鱼类等，当然本发明也适用于虾及其他水产生物养殖过程中的疾病防治。

本发明所述的饲料添加剂原料中富含绿原酸、异绿原酸及木犀草素等多种具有抗菌和抗氧化作用的活性化合物，且安全性较高。

本发明的防治水产生物疾病的饲料添加剂是以金银花茎叶为原料，经机械粉碎成粉末或制备提取物制备而成。

在本发明中，上述机械粉碎粉末的粒径小于0.85mm，以便于水产生物消化吸收，并减少对水产生物消化系统的损害。此外，为降低成本，所述的金银花茎叶来源是在金银花季节性修剪植物时获得的，将其用于防治水产生物疾病的饲料添加剂，不仅可以有效的降低成本，而且那个有力的提高金银花产区综合利用和增加市场竞争力。

本发明涉及一种防治水产生物疾病的饲料，所述饲料包括重量比1～5％的所述的饲料添加剂。

本发明涉及所述的饲料添加剂在制备预防和治疗所述水产生物疾病的药物中的应用，所述水产生物疾病包括寄生虫症、细菌或病毒感染症。

附图说明

图1为金银花茎、叶及花中绿原酸液相分析对比；

图2为金银花叶中各主峰的分子量；

图3为金银花叶中含有的活性成分。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行说明。

本发明涉及一种防治水产生物疾病的饲料添加剂，所述饲料添加剂原料由金银花的茎和叶组成，所述饲料添加剂中含重量百分比50～100％的金银花茎叶微粉或提取物。

作为本发明的一种实施方式，本发明的防治水产生物疾病的饲料添加剂中，含100％金银花茎叶微粉，所述金银花茎叶微粉粉末的粒径小于0.85mm；或含重量百分比50～100％的金银花茎叶水提取物，所述金银花茎叶水提取物每克含生药>3g。

本发明还涉及一种制备所述的饲料添加剂的方法，其中，所述方法包括：将所述原料经过机械粉碎成粒径小于0.85mm的粉末，得到所述饲料添加剂。

本发明还涉及一种制备所述的饲料添加剂的方法，其中，所述方法包括：步骤(1)，将所述原料粉碎成粉末；步骤(2)，将所述步骤(1)获得的原料粉末添加溶剂，所述溶剂为水、乙醇或含水乙醇，所述的原料粉末溶解在溶剂中，所述的原料粉末与溶剂的重量比在1:1～20，获得的溶液通过加热提取、微波提取或超声提取获得所述饲料添加剂。

本发明还涉及一种制备所述的饲料添加剂的方法，其中，所述方法包括：步骤(1)，将所述原料粉碎成粉末；步骤(2)，将所述步骤(1)获得的原料粉末添加水，所述的原料粉末与水的重量比在1:1～20，加热提取，提取时间为30分钟至24小时，过滤所述提取液；步骤(3)，将所述步骤(2)中的过滤后的滤渣添加水，所述的滤渣与水的重量比在1:1～20，加热第二次提取，提取时间为30分钟至24小时，过滤所述第二次提取液；步骤(4)，合并所述步骤(2)和步骤(3)得到的滤液，浓缩得到所述的饲料添加剂。

作为本发明的一种实施方式，本发明所述的饲料添加剂的制备方法中，所述步骤(2)和步骤(3)中加热温度为沸腾温度，加热时间为30分钟。

本发明还涉及一种防治水产生物疾病的饲料，所述饲料包括重量比1～5％的所述饲料添加剂。

作为本发明的一种实施方式，所述饲料添加剂通过与所述饲料混合添加，或所述饲料添加剂通过涂覆到所述饲料表面添加。

本发明还涉及所述的饲料添加剂在制备预防和治疗所述水产生物疾病的药物中的应用，所述水产生物疾病包括寄生虫症、细菌或病毒感染症。

作为本发明的一种实施方式，所述水产生物包括鲑鱼类、鲀鱼类、鲷鱼、鰤鱼类、鲽鱼类、鲤鱼类或虾。

作为本发明的一种实施方式，所述水产生物疾病为致病嗜水气单胞菌感染导致的疾病。

本发明提供的防治鱼疾病饲料添加剂的使用方法如下：当防治鱼病的饲料添加剂为机械粉碎粉末状时，将防治鱼疾病的饲料添加剂直接混合入饲料中并通过搅拌均匀，所述防治鱼疾病饲料添加剂与饲料的重量比为1～5％为适宜，本实施例所提示的金银花茎叶机械粉碎粉末为粒径小于0.85mm(20目)，以便于水产生物消化吸收，并减少对水产生物消化系统的损害；当防治鱼病的饲料添加剂为液态提取物时，先将防治鱼病的饲料添加剂稀释到体积倍数的40倍后，再放入饲料中搅拌均匀，所述防治鱼疾病饲料添加剂与饲料的重量比为1～5％为适宜。

本发明利用金银花季节性植物修剪获得的茎叶为质量稳定、易获得的原料来制备防治水产生物疾病的饲料添加剂，利用了金银花富含绿原酸等抗菌抗病毒活性成分，避免了抗生素药物的使用，具有成本低、无药物残留、无耐药性、无毒副作用的优点，制备时工艺简单、耗能低、无污染，容易实现产业化，为金银花产区提供了新的用途，具有很好的经济和社会效益。

下面结合具体实施实例对本发明做进一步的描述。

实施例1金银花茎叶提取物活性成分分析

分析仪器和原料：

恒温干燥箱为德国Memmert型

电子天平Sartorius BP211D，精密度十万分之一

粉碎机杭州熊火科技有限公司

超纯水仪Merck millipore公司

分析型高效液相色谱仪Dionex Ultimate 3000系列

低分辨质谱仪Bruker amazon SL离子阱质谱仪

分析色谱柱为Phenomenex Gemini 5μC18 110A(5μm,250×4.6mm)

金银花茎叶样品由巨鹿京鼎穆拉德金银花产业园提供。

金银花叶的活性成分分析采用HPLC-MS法，供试品溶液的制备为分别取金银花粉末、金银花叶粉末、金银花梗粉末0.5g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加水50ml，称定质量，浸泡30min后，通过加热回流提取法煎煮使之沸腾15min，放冷，再称定质量，加水补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，水浴蒸干，用1ml蒸馏水溶解，离心之后经0.45μm水膜过滤用于HPLC-MS仪器分析。绿原酸对照品为0.46mg，加甲醇配制成46.0μg/ml对照品溶液用于本实验。实验检测波长为365nm，柱温为40℃，进样量为20μl，流动相：乙腈—0.05％冰醋酸，采用线性梯度洗脱程序：0-60min乙腈1％—30％，0.05％冰醋酸99％—70％，流速为0.9ml/min。

实验结果如图1所示。

从图1可见，在金银花茎、叶和花的提取物的成分比较中可以看出，金银花叶中的化学成分含量显著高于花和茎的提取物，金银花叶提取物中含有多种活性成分(参见图2)，其中主要为咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinic acid)、绿原酸(chlorogenic acid)、当药甙(sweroside)及木犀草苷(galuteolin)等均为抗菌、抗病毒及抗氧化活性成分(参见图3)，适用于饲料防病原用途，且不会对牲畜的健康形成负面作用。

此外，根据HPLC液相色谱图面积比，金银花花、茎、叶中的绿原酸和木犀草苷含量如表1所示。

表1金银花茎叶中绿原酸及木犀草苷的含量

实验组别	金银花	金银花叶	金银花茎
				绿原酸(％)	6.17±0.12	5.89±0.15	4.60±0.32
木犀草苷(％)	0.11±0.02	0.35±0.01	0.16±0.01

因此，金银花茎叶具有相当的药用价值。

实例2本发明的饲料添加剂的制备

本发明的饲料添加剂可以为微粉和提取物两种形式。

2.1金银花茎叶微粉的制备

以季节修剪金银花植物时获得的茎叶作为原料，清洗，干燥，经过机械粉碎成粉末而制成，粉末的粒径小于0.85mm(20目)，得到本发明金银花茎叶微粉。

2.2金银花茎叶水提取物的制备

以季节修剪金银花植物时获得的茎叶作为原料，按以下步骤制备而成：

步骤(1)，将原料粉碎成粉末；步骤(2)，将步骤(1)获得的原料粉末添加10倍量的水，加热至沸腾，提取30分钟，过滤所述提取液；步骤(3)，将步骤(2)中的过滤后的滤渣添加10倍量的水，加热至沸腾，第二次提取，提取30分钟，过滤所述第二次提取液；以及步骤(4)，合并步骤(2)和步骤(3)得到的滤液，每克浓缩物中含有生药3.2g，得到本发明金银花茎叶水提取物。

本发明的金银花茎叶也可以使用乙醇、含水乙醇作为溶剂进行提取，提取时金银花茎叶与溶剂的比例在1:1～20范围为宜；提取温度从室温到溶剂沸点范围都可适用。提取方法可以采用加热提取、超声提取、微波提取等，也可多种方法结合起来应用。提取时间从30分钟到24小时范围均可以。

本发明所述的饲料添加剂一般以微粉、浸膏及微粒等形式用于防治疾病，其产品在制备过程中还可以添加常规的赋形剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂等添加剂。其中，赋形剂可选用淀粉、纤维素等；优选的抗氧化剂有亚硫酸盐、抗坏血酸等；二羟基乙酸、氯丁醇等可作为防腐剂使用。所述饲料添加剂中金银花茎叶微粉或提取物的含量在50～100％为适宜。

实施例3本发明的饲料添加剂金银花茎叶提取物的抗病原菌作用

实验使用JG101、CCH201、TPS-30、4lns301和IB101等五种最常见的鱼类致病嗜水气单胞菌，LB培养基是由酵母膏5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，固体培养基加2％的琼脂制备而成。

将菌株活化后接种于固体培养基上，在37℃条件下培养24小时后，接种到液体培养基中震荡培养15小时。采用麦氏比浊法将菌液用液体培养基稀释到10⁶CFU/ml浓度用于本实验。活性评价采用琼脂扩散法，即将6mm滤纸片经灭菌后，将实施例2中制备的饲料添加剂分别浸入50％乙醇配成0.5g/ml浓度的金银花茎叶提取物，在无菌条件下贴在涂有菌液的LB固体培养基上，并用50％乙醇为对照，同时使用含量>10％的绿原酸、木犀草苷(以50％乙醇为溶剂)作为对照，37℃条件下培养24小时后检测抑菌圈直径，每种提取物5次重复。抑菌圈≥20mm为显效；10-19mm为有效；10mm以下为无抑菌活性。

表1金银花茎叶提取物及微粉对嗜水气单胞菌的抑菌作用(n＝5/抑菌圈直径mm)

实验组别	JG101	TPS-30	CCH201	IB101	4lns301
						50％乙醇对照	4.8±0.6	5.1±0.7	4.6±0.4	5.0±0.8	4.7±0.6
绿原酸对照	11.2±1.5	10.8±1.4	12.0±1.2	10.9±1.1	12.1±0.8
						木犀草苷对照	10.3±0.8	10.5±1.2	11.1±1.1	10.9±0.8	12.1±1.3
金银花茎叶提取物	18.4±0.6	18.9±0.5	19.2±0.9	17.6±0.8	19.8±1.1
						金银花茎叶微粉	16.5±0.7	15.9±0.6	17.5±0.8	15.8±0.6	16.4±1.1

实验结果如表1所示，本发明提供的饲料添加剂——金银花茎叶提取物及机械粉碎微粉对五种常见鱼类致病嗜水气单胞菌均显示出较强的抑菌活性，与50％乙醇对照、>10％的绿原酸及木犀草苷对照组相比，金银花茎叶提取物和机械粉碎微粉的抑菌活性更为显著，因此可用由于上述病原菌引起的鱼疾病防治。

实例4本发明的饲料添加剂金银花茎叶微粉和金银花茎叶提取物对鲫鱼生产性能的影响

本发明使用的基础饲料组成为，豆粕20％、酵母粉2％、矿物质添加剂1.5％、米糠35％、鱼粉10％、麸皮30％、维生素添加剂1％及无机盐0.5％。

悬浮鱼饲料制备是以基础饲料为载体，分别添加5％的金银花茎叶提取物或微粉，在搅拌机内充分混匀后制粒，以喷油用量控制在0.05％的蜂蜡饱和脂肪酸经喷流床对饲料喷涂色膜后热风干燥，用于本发明的实验中。

饲料添加剂对鱼生产性能效果评价实验选用平均体重30克左右规格一致的鲫鱼180尾，经统计分析体重无显著差异，用3％食盐水溶液消毒后，随机分为3组，每组60尾，放入1.0m×1.0m×1.0m水槽中放养。每天9：00和16:00投食，投食量为平均体重的5％，每两天排污换水一次，溶解氧保存在5mg/L以上。整个实验期间的水温保持25-26℃，实验持续8周。实验结束后，鱼体称重和计算增重率。

实验结果如表2所示，金银花茎叶饲料添加剂能够提高养殖鱼增重，降低饲料比分和促进养殖效益。

表2金银花茎叶提取物及机械粉碎微粉对鲫鱼生产性能的影响

实验组别	始体重(克)	末体重(克)	净增重(克)	增重率(％)
					对照组	30.04±0.11	58.29±3.78	28.33	94.04
金银花茎叶提取物	30.12±0.16	63.42±5.21	33.30	110.55
					金银花茎叶微粉	30.08±0.14	62.23±4.24	32.15	106.88

实例5本发明的饲料添加剂金银花茎叶提取物及机械粉碎微粉对鲫鱼病原菌感染的保护作用

本实施例旨在评价金银花茎叶提取物及机械粉碎微粉对鲫鱼病原菌感染的保护作用是将喂养8周鲫鱼用于病原菌感染实验。

实验将致病性嗜水气单胞菌TPS-30株活化后以无菌生理盐水稀释致浓度为2×10⁸CUP/ml。按每100g鱼重量腹腔注射菌液1.0ml后，放入1.0m×1.0m×1.0m水槽中放养。每天9：00和16:00投食，投食量为平均体重的5％，每两天排污换水一次，溶解氧保存在5mg/L以上。整个实验期间水温保持25-26℃条件下，每天观察鱼体死亡情况，观察一周并统计死亡率。同时使用含量>10％的绿原酸及木犀草苷粗提物作为对照。

实验结果如表3所示，金银花茎叶提取物及机械粉碎微粉提高了鲫鱼对嗜水气单胞菌的抗感染能力。显著降低了死亡率，对嗜水气单胞菌感染有较强保护作用。其抗感染效果高于绿原酸、木犀草苷粗提物。

表3金银花茎叶提取物及机械粉碎微粉对鲫鱼病原菌感染的保护作用

实验组别	感染鱼尾数	死亡数	死亡率(％)	保护率(％)
					空白对照组	60	60	100.0	-
绿原酸对照组	60	52	86.7	13.3
					木犀草苷对照组	60	54	90.0	10.0
金银花茎叶提取物	60	34	56.6	43.4
					金银花茎叶微分	60	38	63.3	36.7

以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (11)

1.一种防治水产生物疾病的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂原料由金银花的茎和叶组成，所述饲料添加剂中含重量百分比50～100％的金银花茎叶微粉或提取物。

2.根据权利要求1所述的饲料添加剂，其中，所述饲料添加剂含100％金银花茎叶微粉，所述金银花茎叶微粉粉末的粒径小于0.85mm；或含重量百分比50～100％的金银花茎叶水提取物，所述金银花茎叶水提取物每克含生药>3g。

3.一种制备权利要求1所述的饲料添加剂的方法，其中，所述方法包括：将所述原料经过机械粉碎成粒径小于0.85mm的粉末，得到所述饲料添加剂。

4.一种制备权利要求1所述的饲料添加剂的方法，其中，所述方法包括：

步骤(1)，将所述原料粉碎成粉末；

步骤(2)，将所述步骤(1)获得的原料粉末添加溶剂，所述溶剂为水、乙醇或含水乙醇，所述的原料粉末溶解在溶剂中，所述的原料粉末与溶剂的重量比在1:1～20，获得的溶液通过加热提取、微波提取或超声提取获得所述饲料添加剂。

5.一种制备权利要求1所述的饲料添加剂的方法，其中，所述方法包括：

步骤(1)，将所述原料粉碎成粉末；

步骤(2)，将所述步骤(1)获得的原料粉末添加水，所述的原料粉末与水的重量比在1:1～20，加热提取，提取时间为30分钟至24小时，过滤所述提取液；

步骤(3)，将所述步骤(2)中的过滤后的滤渣添加水，所述的滤渣与水的重量比在1:1～20，加热第二次提取，提取时间为30分钟至24小时，过滤所述第二次提取液；

步骤(4)，合并所述步骤(2)和步骤(3)得到的滤液，浓缩得到所述的饲料添加剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述步骤(2)和步骤(3)中加热温度为沸腾温度，加热时间为30分钟。

7.一种防治水产生物疾病的饲料，其特征在于，所述饲料包括重量比1～5％的权利要求1所述的饲料添加剂。

8.根据权利要求7所述的饲料，其特征在于，所述饲料添加剂通过与所述饲料混合添加，或所述饲料添加剂通过涂覆到所述饲料表面添加。

9.根据权利要求1所述的饲料添加剂在制备预防和治疗所述水产生物疾病的药物中的应用，其特征在于，所述水产生物疾病包括寄生虫症、细菌或病毒感染症。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述水产生物包括鲑鱼类、鲀鱼类、鲷鱼、鰤鱼类、鲽鱼类、鲤鱼类及虾。

11.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述水产生物疾病为致病嗜水气单胞菌感染导致的疾病。