CN105901328A - 异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂及其制备方法和应用，属于水产配合饲料添加剂技术领域。其包括虎杖、大黄、野菊花、金银花、黄芩、大青叶、连翘等；将上述各组份切片，后经进行水浴回流浓缩提取，后滤液经真空浓缩喷雾干燥制成复合中草药提取物促生长剂干粉。本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉，并且具有天然型、无残留、毒副作用小等优点；从中医的理论出发，复合中草药提取物促生长剂可以弥补中草药的直接复配或者单味中草药提取物在水产养殖中的应用，并且添加剂量小，用时能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水气单胞菌感染能力，促进异育银鲫生长。

Description

异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂及其制备方法和应用，属于水产配合饲料添加剂技术领域。

背景技术

异育银鲫(Carassius auratus gibelio)是利用天然雌核发育的方正银鲫为母本，以兴国红鲤为父本，经人工授精繁育的子代。具有良好的杂种优势，增产效果明显，且肉质细嫩，营养丰富，并且离水存活时间长，食性广、容易饲养，适应性强，成活率等特点，是中国的大宗淡水鱼类之一，深受养殖者和消费者欢迎。近年来还成了出口韩国、日本和东南亚地区的新秀，受到当地养殖者的喜爱和欢迎，取得了较好的社会效益和经济效益。

为了追求高的效益，集约化、高密度应激的养殖下，特别高温应激条件下，病害频繁发生，特别是近年来江苏盐城等地大规模爆发的疱疹病毒病，体表、下颚、腮部等充血，鳃组织粒细胞、肾脏和脾脏等造血细胞坏死，鱼体免疫能力低下，池塘鲫鱼死亡率高达90%以上，一些池塘几近绝收，严重影响异育银鲫的经济效益，给养殖业带来巨大的经济损失。为防治病原菌，抗生素及抗菌药物得到了大量使用，并造成药物残留、耐药性增强、引起动物免疫力下降、微生态失调以及致畸、致癌、环境污染等一系列不良后果，有些抗生素或者抗菌药物，还会有药物残留，影响人类食品安全，影响水产养殖业的可持续发展。因此，一些绿色、安全、高效饲料添加剂的开发与应用应运而生。植物提取物具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、茶多酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，可促进机体的生长发育，并通过影响非特异性免疫系统，激活和诱生多种细胞因子等途径提高水产动物机体免疫力，防治病害的发生。

近几年关于鲫鱼免疫与抗病相关的专利有：魏万权等（2012）申请专利（201510201964.8）一种异育银鲫专用中草药饲料添加剂；肖玲等（2013）申请专利（201310293137.6）一种异育银鲫复方中草药饲料添加剂；黄剑飞等（2015）申请专利（201510355536.X）一种防治异育银鲫腮出血疾病的药物组合物及其制备方法；黄锦炉等（2015）申请专利（201510126559.3）一种用于预防异育银鲫感染鲤疱疹病毒的饲料添加剂；

目前已有一些关于虎杖、大黄、野菊花、金银花、黄芩、大青叶、连翘等单独或者部分配伍的研究报道在水产养殖的少量使用，但是有关与虎杖、大黄、野菊花、金银花、黄芩、连翘、板蓝根等配伍后提取物的使用及其提取方法，还未见报道。因此研制一种鲫鱼抗病促生长剂，既能促进鱼体生长，又能提高鱼体抗病能力，对水产健康养殖和可持续发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂及其制备方法和应用，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高异育银鲫免疫与抗氧化能力，提高异育银鲫体抵抗嗜水气单胞菌感染能力，且可促进异育银鲫生长。

按照本发明提供的技术方案，一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂，配方比例按重量份计为：虎杖20-26份、大黄15-19份、野菊花9-15份、金银花12-18份、大青叶10-15份、黄芩叶12-16份、连翘叶为5-9份；将上述各组份切片、水浴回流提取、浓缩、喷雾干燥，即制得异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂。

所述异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的制备方法，步骤为：

（1）前处理：取虎杖20-26份、大黄15-19份、野菊花9-15份、金银花12-18份、大青叶10-15份、黄芩叶12-16份、连翘叶为5-9份，烘干至水分小于12%，切片后备用，切片速度600-700转/分；

（2）水浴回流提取：在步骤（1）所得切片后的混合物料中添加水，水的质量为物料总量的10-15倍，水浴回流提取2-3h；提取时，提取罐加热蒸汽压力0.15-0.2MPa，提取罐温度为90-100℃收集提取液；

（3）浓缩：将步骤（2）所得的提取液经真空浓缩至原提取液体积的10%-20%，浓缩罐加热蒸汽压力0.05-0.1MPa；浓缩罐温度为80-85℃，真空度为-0.05~-0.04 MPa，得到浓缩液；

（4）喷雾干燥：将步骤（3）所得浓缩液充分进行喷雾干燥，进料滤液速度为32-36转/分，进风温度为150-200℃，出风温度为45-50℃，产品粉状的异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂。

所述异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的应用，添加在异育银鲫饲料中，以抑制水产养殖中的嗜水气单胞菌，添加量为0.2%-0.6%。

所述异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的使用周期在30d以上，饲料中的添加量为0.2%-0.3%；使用周期在7d以内，饲料中的添加量为0.5%-0.6%。

本发明的有益效果：

1、本发明从中医的理论出发，以虎杖为君，大黄、野菊花、金银花为臣，大青叶、黄芩叶、连翘等为使，研制复合中草药提取物，能克服某一种产品的不足之处，相互补充，促进异育银鲫鱼体生长。

2、本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉，并且具有天然型、无残留、毒副作用小等优点。

3、本发明虎杖、大黄、野菊花、金银花、大青叶、黄芩叶、连翘等等复合中草药提取物，经过浓缩干燥的粉剂，可以弥补中草药的直接复配或者单味中草药提取物在水产养殖中的应用，并且添加剂量小，作用效果好。

4、本发明通过动物试验，表明该复合中草药提取物提高异育银鲫免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

具体实施方式

以下实施例中切片机采用中药切片机，DXQ-130B，购自广州市大祥电子机械设备有限公司；水浴回流浓缩提取采用中草药浓缩机组，RTN-100双效并联型，购自浙江金安制药机械有限公司；喷雾干燥采用喷雾干燥机，Z YG-5喷雾干燥机，购自浙江金安制药机械有限公司。

下面本发明将结合实施例作进一步描述：

实施例1

一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂制备和应用采用以下工艺步骤，其组份配比如下：

（1）前处理：本发明配制1kg复合中草药抗病促长剂其各原料组成：取虎杖260g、大黄150g、野菊花150g、金银花120g、大青叶150g、黄芩叶120g、连翘叶为50g；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分用中药切片机进行切片，切片速度：600转/分；

（2）水浴回流提取：所得的粗片混合后经中草药浓缩机组进行水浴回流浓缩提取，其中添加自来水10升；提取罐加热蒸汽压力：0.15MPa；提取罐温度为90℃。水浴回流提取时间2小时；

（3）浓缩：滤液经真空浓缩提取原滤液体积的10%溶液。浓缩罐加热蒸汽压力0.05MPa；浓缩罐温度为80℃；真空度为-0.05 MPa；

（4）喷雾干燥：将上述滤液充分经喷雾干燥机喷雾干燥，其中进料滤液速度：32转/分；进风温度：150℃，出风温度：45℃，制成粉状异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂。

生长实验：异育银鲫由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。

试验选择健康、规格、重量基本一致的异育银鲫，个体初均重约30g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），采用室内循环流水系统。每组试验所用养殖桶在空间位置上随机分散排布，避免人为因素造成的误差。异育银鲫驯化15d后投喂0、0.2%两个剂量异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂56d，测定其生长、免疫的影响。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/mL。按每50 g鱼重腹腔注射菌液0.3mL，后放养于同样规格容积的圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，0.2%异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂增重率显著(P<0.05)分别提高了12.58%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为92.11%，0.2%复合中草药提取物制剂鱼死亡率为58.42%；与对照组相比，0.2%复合中草药提取物抗病促长剂显著降低血液丙二醛浓度6.43%，增加了血液呼吸爆发活性9.25%、白细胞介素8.55%、抗肿瘤坏死因子10.11%。因此，0.2%复合中草药提取物抗病促长剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

实施例2

本发明一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂制备和应用采用以下工艺步骤，其组分配比如下：

（1）前处理：本发明配制1kg复合中草药抗病促长剂其各原料组成：取虎杖230g、大黄170g、野菊花120g、金银花150g、大青叶100g、黄芩叶160g、连翘叶为70g；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分用中药切片机进行切片，切片速度：600转/分；

（2）水浴回流提取：所得的粗片混合后经中草药浓缩机组进行水浴回流浓缩提取，其中添加自来水10升；提取罐加热蒸汽压力：0.18 MPa；提取罐温度为100℃，水浴回流提取时间2.5小时；

（3）浓缩：滤液经真空浓缩提取原滤液体积的15%溶液。浓缩罐加热蒸汽压力0.08MPa；浓缩罐温度为85℃；真空度为-0.04 MPa；

（4）喷雾干燥：将上述滤液充分经喷雾干燥机喷雾干燥，制成粉状异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂。其中进料滤液速度：36转/分；进风温度：180℃，出风温度：50℃。

生长实验：异育银鲫由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。

试验选择健康、规格、重量基本一致的异育银鲫，个体初均重约30g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），采用室内循环流水系统。每组试验所用养殖桶在空间位置上随机分散排布，避免人为因素造成的误差。异育银鲫驯化15d后投喂0、0.5%两个剂量复合中草药提取物抗病促长剂56d，测定其生长、免疫的影响。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/mL。按每50 g鱼重腹腔注射菌液0.3mL，后放养于同样规格容积的圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，0.5%复合中草药提取物抗病促长剂增重率显著分别提高了8.92%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为90.75%，0.5%复合中草药提取物制剂鱼死亡率为68.44%；与对照组相比，0.5%复合中草药提取物抗病促长剂显著降低血液丙二醛浓度7.87%，增加了血液呼吸爆发活性11.26%、白细胞介素浓度5.43%、抗肿瘤坏死因子6.43%、超氧化物歧化酶活性6.67%。因此，0.5%复合中草药提取物抗病促长剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

实施例3

本发明一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂制备和应用采用以下工艺步骤，其组分配比如下：

（1）前处理：取虎杖200g、大黄190g、野菊花90g、金银花180g、大青叶120g、黄芩叶130g、连翘叶为90g；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分用中药切片机进行切片，切片速度：700转/分；

（2）水浴回流提取：所得的粗片混合后经中草药浓缩机组进行水浴回流浓缩提取，其中添加自来水12升；提取罐加热蒸汽压力：0.20 MPa； 提取罐温度为95℃。水浴回流提取时间3小时；

（3）浓缩：后滤液经真空浓缩提取原滤液体积的20%溶液。浓缩罐加热蒸汽压力0.08MPa；浓缩罐温度为83℃；真空度为-0.045 MPa；

（4）喷雾干燥：将上述滤液充分经喷雾干燥机喷雾干燥，制成粉状复合中草药提取物抗病促长剂。其中进料滤液速度：34转/分；进风温度：200℃，出风温度：48℃。

生长实验：异育银鲫由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。

试验选择健康、规格、重量基本一致的异育银鲫，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），采用室内循环流水系统。每组试验所用养殖桶在空间位置上随机分散排布，避免人为因素造成的误差。异育银鲫驯化15d后投喂0、0.6%两个剂量复合中草药提取物抗病促长剂56d，测定其生长、免疫的影响。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/mL。按每50 g鱼重腹腔注射菌液0.3 mL，后放养于同样规格容积的圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，0.6%复合中草药提取物抗病促长剂增重率显著分别提高了10.23%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为91.65%，0.6%复合中草药提取物制剂鱼死亡率为57.45%；与对照组相比，0.6%复合中草药提取物抗病促长剂显著降低血液丙二醛浓度5.56%，增加了血液呼吸爆发活性6.57%、白细胞介素浓度9.85%、抗肿瘤坏死因子11.54%、超氧化物歧化酶活性6.77%。因此，0.6%复合中草药提取物抗病促长剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

Claims (4)

1.一种异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂，其特征是配方比例按重量份计为：虎杖20-26份、大黄15-19份、野菊花9-15份、金银花12-18份、大青叶10-15份、黄芩叶12-16份、连翘叶为5-9份；将上述各组份切片、水浴回流提取、浓缩、喷雾干燥，即制得异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂。

2.权利要求1所述异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的制备方法，其特征是步骤为：

（1）前处理：取虎杖20-26份、大黄15-19份、野菊花9-15份、金银花12-18份、大青叶10-15份、黄芩叶12-16份、连翘叶为5-9份，烘干至水分小于12%，切片后备用，切片速度600-700转/分；

（2）水浴回流提取：在步骤（1）所得切片后的混合物料中添加水，水的质量为物料总量的10-15倍，水浴回流提取2-3h；提取时，提取罐加热蒸汽压力0.15-0.2MPa，提取罐温度为90-100℃收集提取液；

（3）浓缩：将步骤（2）所得的提取液经真空浓缩至原提取液体积的10%-20%，浓缩罐加热蒸汽压力0.05-0.1MPa；浓缩罐温度为80-85℃，真空度为-0.05~-0.04 MPa，得到浓缩液；

（4）喷雾干燥：将步骤（3）所得浓缩液充分进行喷雾干燥，进料滤液速度为32-36转/分，进风温度为150-200℃，出风温度为45-50℃，产品粉状的异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂。

3.权利要求1所述异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的应用，其特征是：添加在异育银鲫饲料中，以抑制水产养殖中的嗜水气单胞菌，添加量为0.2%-0.6%。

4.如权利要求3所述异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的应用，其特征是：异育银鲫复合中草药抗嗜水气单胞菌制剂的使用周期在30d以上，饲料中的添加量为0.2%-0.3%；使用周期在7d以内，饲料中的添加量为0.5%-0.6%。