CN104304793A - 一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂及其制备方法和应用，属于水产配合饲料技术领域。其包括五倍子、大黄、连翘、甘草、黄芪、白花蛇舌草、牛蒡子等；将上述各组份切片，后经进行水浴回流浓缩提取，后滤液经真空浓缩喷雾干燥制成复合中草药提取物免疫增强剂干粉。本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉，并且具有天然型、无残留、毒副作用小等优点；从中医的理论出发，复合中草药提取物免疫增强剂可以弥补中草药的直接复配或者单味中草药提取物在水产养殖中的应用，并且添加剂量小，用时能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进团头鲂生长。

Description

一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂及其制备方法和应用，属于水产配合饲料技术领域。

背景技术

团头鲂（Megalobrama amblycephala），隶属于硬骨鱼纲，鲤形目，鲤科，鳊亚科，鲂属，为我国主要的淡水养殖品种之一，2013团头鲂养殖产量已超过70万吨。近年来随着养殖密度的增加，病害频繁发生，团头鲂养殖业带来巨大的经济损失，为防治病原菌，抗生素及抗菌药物得到了大量使用，并造成药物残留、耐药性增强、引起动物免疫力下降等一系列不良后果，有些抗生素或者抗菌药物，还会有药物残留，影响人类食品安全，影响水产养殖业的可持续发展。中草药具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、茶多酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，能促进机体健康，减少抗生素在动物生产中的使用，是今后水产养殖药物研究的重要方向。 

五倍子（Galla Chinensis）又名百虫仓、百药煎、棓子，化学成分主要包括单宁酸、没食子酸、五倍子油、树脂、蛋白质、脂肪、淀粉、蜡质、矿物质等。 其中主要有效成分单宁酸含量很高，最高可达70%以上，具有抗菌、抗病毒、清除自由基和抗氧化等作用。

大黄（Rheum palmatum）是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称。主要含有掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄。大黄中主要成分是蒽醌甙及双蒽酮甙，也含有脂肪酸、草酸钙、葡萄糖、果糖和淀粉。中药大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。中国用大黄于医药有悠久历史，西汉初已成批运销欧洲，为中国主要出口药材之一。

连翘（Forsythia suspensa ）是一种落叶灌木，香港俗称一串金，是木犀科连翘属植物。连翘主要含苯乙醇苷类、木脂体及其苷类、五环三萜娄、挥发油类等化合物。药理研究认为其具有抗菌、抗炎、解热、镇吐、利尿强心、抗肝损、镇痛、抗病毒、降血压、抑制弹性蛋白酶活力、抗内毒素等作用。

甘草（Radix Glycyrrhizae）是一种补益中草药。含有多种化学成分，主要成分有甘草酸、甘草甙等。研究证明甘草能抗病毒、抗细菌、抗氧化、抗应激，且能调节免疫机能，如增强巨噬细胞吞噬能力, 促进辅助性 T 淋巴细胞的增殖与激活等。 

黄芪（Astragalus membranaceus），又名绵芪，多年生草本。主要成分为毛蕊异黄酮、黄芪皂甙、黄芪多糖，以及多种氨基酸、苦味素、甜菜碱、胆碱、叶酸、黄烷化合物及含有硒、硅、锌、钴、铜、钼等多种微量元素。药用迄今已有2000多年的历史，其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。

白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）为一年生披散草本。主要成分含车叶草甙，车叶草甙酸，去乙酸，基车叶草甙酸，都桷子甙酸，鸡屎藤次甙，鸡屎藤次甙甲酯等，以及熊果酸，β-谷甾醇，三十一烷，豆甾醇，齐墩果酸，β-谷甾醇-β-葡萄糖甙，对-香豆酸等。具有增强免疫功能、抑瘤、清热解毒、消痛散结、利尿除湿等作用。

牛蒡子（Arctium lappa ），别名山茶根、土金茶根，为菊科二年生草本植物牛蒡的干燥成熟果实。牛蒡子果实主要成分牛蒡甙，水解生成牛蒡甙元及葡萄糖。又含罗汉松脂酚，络石甙元，倍半木质素等。种子含牛蒡甙，牛蒡酚以及花生酸、硬脂酸、棕榈酸、和亚油酸等。具有抗菌、抗病毒，疏散风热，宣肺透疹，利咽散结，解毒消肿等作用。

最近的一些专利：喻运珍等（2010）申请专利（201010162861.1 ）一种鱼用复方中草药制剂及其制备方法；张其中等（2011）申请专利（201110201424.0 ）一种鱼用复方中草药免疫增强剂及其制备方法；张璐等（2011）申请专利（201110186183.7 ）一种淡水养殖鱼类通用复合中草药免疫增强剂；刘波等（2012）申请专利（20210573614.X ）团头鲂复合中草药抗应激制剂、制备方法及其使用方法等以往专利所述的都是提高鱼类的免疫力复方中草药制剂，但是有关提高团头鲂免疫能力复合中草药提取物的论文与专利还少见。目前已有一些关于五倍子、大黄、连翘、甘草、黄芪等的在水产养殖的使用，大多都是直接复配或者单味中草药提取物在水产养殖中的应用，但是有关五倍子、大黄、连翘、甘草、黄芪、白花蛇舌草、牛蒡子配伍提取的主要成分及其使用，还未见报道。因此研制复合中草药提取物免疫增强剂，增强团头鲂免疫能力，提高生长，对水产养殖的健康发展和可持续发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，从中医的理论出发，以五倍子为君，大黄、连翘为臣，甘草、黄芪、白花蛇舌草、牛蒡子等为使，研制复合中草物提取物，从而提供一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂制备和应用，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长。

按照本发明提供的技术方案，一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂，配方比例按重量份计：包括五倍子26.0-30.0份、大黄16.0-18.0份、连翘8.0-12.0份、甘草英13.0-16.0份、黄芪12.0-15.0份、白花蛇舌草9.0-12.0份、牛蒡子5.0-9.0份；

将上述各组份切片、水浴回流提取、浓缩、喷雾干燥，即制得复合中草药提取物免疫增强剂干粉。

所述团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂的制备方法，按重量份计步骤如下：

（1）前处理：取五倍子26.0-30.0份、大黄16.0-18.0份、连翘8.0-12.0份、甘草英13.0-16.0份、黄芪12.0-15.0份、白花蛇舌草9.0-12.0份、牛蒡子5.0-9.0份，切片后烘干至水分<12%，备用； 

（2）水浴回流提取：在上述切片后的物料中添加水，水的质量为物料总量的10-20倍，水浴回流提取1.5-3h；其中提取时，提取罐加热蒸汽压力0.15-0.2MPa；提取罐温度为90-100℃； 

（3）浓缩：将步骤（2）所得的滤液经真空浓缩提取至原滤液体积的10%-20%浓缩液；其中浓缩时，浓缩罐加热蒸汽压力0.05-0.1MP；浓缩罐温度为80-85℃；真空度为-0.05～-0.04 Mpa；

（4）喷雾干燥：将步骤（3）所得浓缩液充分经喷雾干燥得到产品粉状的团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂；喷雾干燥时，进料滤液速度为32-36转/分；进风温度为150-200℃，出风温度为45-50℃。

团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂在团头鲂饲料中的添加量为0.3%-0.6%。添加量与使用的周期有关，当使用周期在30d以上，添加量为0.3%-0.4%；当使用周期在7d以内，在饲料中添加量为0.5%-0.6%。

本发明的有益效果：

1、本发明从中医的理论出发，以五以五倍子为君，大黄、连翘为臣，甘草、黄芪、白花蛇舌草、牛蒡子等为使，研制复合中草药提取物免疫增强剂，能克服某一种产品的不足之处，相互补充，促进团头鲂鱼体生长。

2、本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉，并且具有天然型、无残留、毒副作用小等优点。

3、本发明五倍子，刺五加、大黄、连翘、甘草等复合中草药提取物，经过浓缩干燥的粉剂，可以弥补中草药的直接复配或者单味中草药提取物在水产养殖中的应用，并且添加剂量小，作用效果好。

4、本发明通过动物试验，表明该复合中草药提取物免疫增强剂能提高团头鲂免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

具体实施方式

以下实施例中切片机采用中药切片机，DXQ-130B，购自广州市大祥电子机械设备有限公司；水浴回流浓缩提取采用中草药浓缩机组，RTN-100双效并联型，购自浙江金安制药机械有限公司；喷雾干燥采用喷雾干燥机，Z YG-5喷雾干燥机，购自浙江金安制药机械有限公司。

下面本发明将结合实施例作进一步描述：

实施例1

一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂制备和应用采用以下工艺步骤，其组份配比如下：

（1）前处理：本发明配制1kg复合中草药免疫增强剂其各原料组成：五倍子300g、大黄170g、连翘80g、甘草英160g、黄芪120g、白花蛇舍草120g、牛蒡子50g；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分用中药切片机进行切片，切片速度：600转/分；

（2）水浴回流提取：所得的粗片混合后经中草药浓缩机组进行水浴回流浓缩提取，其中添加自来水20升；提取罐加热蒸汽压力：0.15MPa；提取罐温度为90℃。水浴回流提取时间1.5小时；

（3）浓缩：滤液经真空浓缩提取原滤液体积的10%溶液。浓缩罐加热蒸汽压力0.05MPa；浓缩罐温度为80℃；真空度为-0.05 MPa；

（4）喷雾干燥：将上述滤液充分经喷雾干燥机喷雾干燥，其中进料滤液速度：32转/分；进风温度：150℃，出风温度：45℃，制成粉状复合中草药提取物免疫增强剂。

生长实验：团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约5g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），采用室内循环流水系统。每组试验所用养殖桶在空间位置上随机分散排布，避免人为因素造成的误差。团头鲂驯化15d后投喂0、0.3%两个剂量复合中草药提取物免疫增强剂56d，测定其生长、免疫的影响。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/mL。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 mL，后放养于同样规格容积的圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，0.3%复合中草药提取物免疫增强剂增重率显著(P<0.05)分别提高了16.58%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为86.77%，0.3%复合中草药提取物制剂鱼死亡率为76.56%；与对照组相比，0.3%复合中草药提取物免疫增强剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度8.98%，丙二醛浓度7.84%，增加了血液呼吸爆发活性10.23%、白细胞介素8.98%、抗肿瘤坏死因子13.33%、过氧化氢酶13.22%、超氧化物歧化酶活性9.28%。因此，0.3%复合中草药提取物免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

实施例2

本发明一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂制备和应用采用以下工艺步骤，其组分配比如下：

（1）前处理：本发明配制1kg复合中草药免疫增强剂其各原料组成：五倍子280g、大黄160g、连翘100g、甘草英140g、黄芪150g、白花蛇舍草100g、牛蒡子70g；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分用中药切片机进行切片，切片速度：660转/分；

（2）水浴回流提取：所得的粗片混合后经中草药浓缩机组进行水浴回流浓缩提取，其中添加自来水15升；提取罐加热蒸汽压力：0.18 MPa；提取罐温度为100℃。水浴回流提取时间2小时；

（3）浓缩：滤液经真空浓缩提取原滤液体积的15%溶液。浓缩罐加热蒸汽压力0.08MPa；浓缩罐温度为85℃；真空度为-0.04 MPa；

（4）喷雾干燥：将上述滤液充分经喷雾干燥机喷雾干燥，制成粉状复合中草药提取物免疫增强剂。其中进料滤液速度：36转/分；进风温度：180℃，出风温度：50℃。

生长实验：团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约5g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），采用室内循环流水系统。每组试验所用养殖桶在空间位置上随机分散排布，避免人为因素造成的误差。团头鲂驯化15d后投喂0、0.5%两个剂量复合中草药提取物免疫增强剂56d，测定其生长、免疫的影响。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/mL。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 mL，后放养于同样规格容积的圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，0.5%复合中草药提取物免疫增强剂增重率显著(P<0.05)分别提高了11.12%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为92.71%，0.5%复合中草药提取物制剂鱼死亡率为66.77%；与对照组相比，0.5%复合中草药提取物免疫增强剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度10.12%，丙二醛浓度6.89%，增加了血液呼吸爆发活性12.24%、白细胞介素浓度9.89%、抗肿瘤坏死因子10.24%、过氧化氢酶活性9.34%、超氧化物歧化酶活性9.67%。因此，0.5%复合中草药提取物免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

实施例3

本发明一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂制备和应用采用以下工艺步骤，其组分配比如下：

（1）前处理：本发明配制1 kg复合中草药免疫增强剂其各原料组成：五倍子260g、大黄180g、连翘120g、甘草英130g、黄芪130g、白花蛇舍草90g、牛蒡子90g；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分用中药切片机进行切片，切片速度：720转/分；

（2）水浴回流提取：所得的粗片混合后经中草药浓缩机组进行水浴回流浓缩提取，其中添加自来水10升；提取罐加热蒸汽压力：0.20 MPa； 提取罐温度为95℃。水浴回流提取时间3小时；

（3）浓缩：后滤液经真空浓缩提取原滤液体积的20%溶液。浓缩罐加热蒸汽压力0.08MPa；浓缩罐温度为83℃；真空度为-0.045 MPa；

（4）喷雾干燥：将上述滤液充分经喷雾干燥机喷雾干燥，制成粉状复合中草药提取物免疫增强剂。其中进料滤液速度：34转/分；进风温度：200℃，出风温度：48℃。

生长实验：团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约5g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），采用室内循环流水系统。每组试验所用养殖桶在空间位置上随机分散排布，避免人为因素造成的误差。团头鲂驯化15d后投喂0、0.6%两个剂量复合中草药提取物免疫增强剂56d，测定其生长、免疫的影响。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/mL。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 mL，后放养于同样规格容积的圆形蓄养槽（规格为φ1.2×1m），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，0.6%复合中草药提取物免疫增强剂增重率显著(P<0.05)分别提高了9.98%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为88.65%，0.6%复合中草药提取物制剂鱼死亡率为55.23%；与对照组相比，0.6%复合中草药提取物免疫增强剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度9.98%，丙二醛浓度8.54%，增加了血液呼吸爆发活性10.55%、白细胞介素浓度12.87%、抗肿瘤坏死因子11.22%、过氧化氢酶活性10.38、超氧化物歧化酶活性10.76%。因此，0.6%复合中草药提取物免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

Claims (4)

1.一种团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂，其特征是配方比例按重量份计：包括五倍子26.0-30.0份、大黄16.0-18.0份、连翘8.0-12.0份、甘草英13.0-16.0份、黄芪12.0-15.0份、白花蛇舌草9.0-12.0份、牛蒡子5.0-9.0份；

将上述各组份切片、水浴回流提取、浓缩、喷雾干燥，即制得复合中草药提取物免疫增强剂干粉。

2.权利要求1所述团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂的制备方法，其特征是按重量份计步骤如下：

（1）前处理：取五倍子26.0-30.0份、大黄16.0-18.0份、连翘8.0-12.0份、甘草英13.0-16.0份、黄芪12.0-15.0份、白花蛇舌草9.0-12.0份、牛蒡子5.0-9.0份，切片后烘干至水分<12%，备用；

（2）水浴回流提取：在上述切片后的物料中添加水，水的质量为物料总量的10-20倍，水浴回流提取1.5-3h；其中提取时，提取罐加热蒸汽压力0.15-0.2MPa；提取罐温度为90-100℃；

（3）浓缩：将步骤（2）所得的滤液经真空浓缩提取至原滤液体积的10%-20%浓缩液；其中浓缩时，浓缩罐加热蒸汽压力0.05-0.1MPa；浓缩罐温度为80-85℃；真空度为-0.05～-0.04 MPa；

（4）喷雾干燥：将步骤（3）所得浓缩液充分经喷雾干燥得到产品粉状的团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂；喷雾干燥时，进料滤液速度为32-36转/分；进风温度为150-200℃，出风温度为45-50℃。

3.权利要求1所述团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂的应用，其特征是：团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂在团头鲂饲料中的添加量为0.3%-0.6%。

4.如权利要求3所述团头鲂复合中草药提取物免疫增强剂的应用，其特征是：添加量与使用的周期有关，当使用周期在30d以上，添加量为0.3%-0.4%；当使用周期在7d以内，在饲料中添加量为0.5%-0.6%。