CN102987164B - 团头鲂复合中草药抗应激制剂、制备方法及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公布了一种团头鲂复合中草药抗应激制剂，其组成包括（重量份）：五倍子22～28份、刺五加15～19份、黄柏5～20份、蒲公英12～19份、白头翁10～16份和甘草10-15份。制备方法为：按上述配方分别称取各组份，分别烘干后粉碎，混匀即得。所述复合中草药抗应激制剂在鱼饲料中的添加量为1.0%-5.0%。本发明的复合中草药抗应激制剂可直接清除机体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响，加快修复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高团头鲂的免疫与抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，改善饲料适口性，促进团头鲂生长。
Description
技术领域
本发明涉及一种团头鲂复合中草药抗应激制剂、制备方法及其使用方法，属于水产配合饲料技术领域。
背景技术
团头鲂（Megalobrama amblycephala），隶属于硬骨鱼纲，鲤形目，鲤科，鳊亚科，鲂属，现为我国主要的淡水养殖品种之一，近年来年产量已超过60万吨，并有上升趋势。团头鲂生理特点是身体大、内脏小，集中在南方地区养殖，易受高温气候影响，相对于鲤、鲫鱼等鱼类，团头鲂不耐低氧和运输，因此在养殖生产过程当中经常受到外界不利因素的影响产生应激，病害频繁发生，团头鲂养殖业带来巨大的经济损失。为防治病原菌，抗生素及抗菌药物得到了大量使用，并造成药物残留、耐药性增强、引起动物免疫力下降等一系列不良后果，影响人类食品安全，影响水产养殖业的可持续发展。
随着抗生素、抗菌药物的逐渐禁用，一些绿色、安全、高效饲料添加剂的开发与应用应运而生。中草药具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、茶多酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，能促进机体健康，减少抗生素在动物生产中的使用，是我国传统的防病治病药物。
五倍子（Galla Chinensis）又名百虫仓、百药煎、棓子，化学成分主要包括单宁酸、没食子酸、五倍子油、树脂、蛋白质、脂肪、淀粉、蜡质、矿物质等。 其中主要有效成分单宁酸含量很高，最高可达70%以上，具有抗菌、抗病毒、清除自由基和抗氧化等作用。
刺五加（Radix Acanthopanacis Senticosl）是五加科五加属，化学成分主要包括多种醣类、氨基酸、脂肪酸、维生素A、B1、B2及多量的胡萝卜素；另含有芝麻脂素、甾醇、香豆精、黄酮、木栓酮、非芳香性不饱和有机酸、及多种微量矿物质等，具有调节机体紊乱，使之趋于正常的功能，提高耐缺氧能力，抗菌消炎等作用。
黄柏（Cortex Phellodendri Chinensis）为芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树皮。主要成分小檗碱、黄柏碱、木兰花碱等多种生物碱及内酯、甾醇、黏液质等，具有抗真菌、抗细菌、抗氧化、提高免疫机能等功效。
蒲公英（Herba Taraxaci）属菊科多年生草本植物。含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分，同时含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，有丰富的营养价值。 具有有利尿、缓泻、退黄疸、利胆、保肝等功效，同时具有抗真菌、抗细菌、抗氧化、提高免疫机能等作用。
白头翁（Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel）是毛莨科植物，多年生草本，别名有奈何草、粉乳草、白头草、老姑草、菊菊苗、老翁花、老冠花、猫爪子花等等，具有清热解毒，凉血止痢，用于热毒血痢，阿米巴痢疾，对肠粘膜有收敛作用，能止泻，止血，对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、痢疾杆菌有抑制作用。
甘草（Radix Glycyrrhizae）是一种补益中草药。含有多种化学成分，主要成分有甘草酸、甘草甙等。研究证明甘草能抗病毒、抗细菌、抗氧化、抗应激，且能调节免疫机能，如增强巨噬细胞吞噬能力, 促进辅助性 T 淋巴细胞的增殖与激活等。
最近的一些专利：喻运珍等申请了专利“一种鱼用复方中草药制剂及其制备方法”（201010162861.1 ）；张其中等申请了专利“一种鱼用复方中草药免疫增强剂及其制备方法”（201110201424.0 ）；张璐等申请了专利“一种淡水养殖鱼类通用复合中草药免疫增强剂”（201110186183.7 ）；徐维娜等申请了专利“一种团头鲂免疫增强剂饲料及其生产方法”（20210033844.7 ）等，都是提高鱼类的免疫力复方中草药制剂，但是有关提高鱼体抗应激复合中草药的论文与专利还少见，特别是能提高团头鲂专用的复合中草药制剂还少见。目前已有一些关于五倍子、刺五加、黄柏、蒲公英、白头翁、甘草的在水产养殖的使用，但是有关五倍子、刺五加、黄柏、蒲公英、白头翁、甘草配伍使用，还未见报道。因此研制复合中草药抗应激制剂，提高团头鲂抗病能力，抗应激能力，对水产养殖的健康发展和可持续发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于从中医的理论出发，以五倍子为君，刺五加、黄柏为臣，蒲公英、白头翁、甘草等为使，研制中草复合物，从而提供一种团头鲂复合中草药抗应激制剂及制备方法，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长。
本发明提供一种团头鲂复合中草药抗应激制剂，其组成包括（重量份）：五倍子22～28份、刺五加15～19份、黄柏5～20份、蒲公英12～19份、白头翁10～16份和甘草10-15份。
制备方法为：按上述配方分别称取各组份，分别烘干后粉碎，混匀即得。所述烘干至水分<12%，烘干温度范围为50-60℃。
上述团头鲂复合中草药抗应激制剂在鱼饲料中的添加量为1%-5.0%。优选地，添加量与使用的周期有关，当使用周期在30d以上，在饲料中添加量为1.0%-2.0%；当使用周期在7-30d以内，在饲料中添加量为2.0%-3.0%。当使用周期在7d以内，在饲料中添加量为3.0%-5.0%。此复合中草药抗应激制剂可直接清除机体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响，加快修复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高团头鲂的免疫与抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，改善饲料适口性，促进团头鲂生长。
本发明的团头鲂复合中草药抗应激制剂，从中医的理论出发，以五倍子为君，刺五加、黄柏为臣，蒲公英、白头翁、甘草等为使，研制复合中草药抗应激制剂，能克服某一种产品的不足之处，相互补充，既有抗应激的功效，又具有一定的抗病原菌的功效，促进鱼体生长；本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉。
具体实施方式
下面结合实施例进一步描述本发明。
实施例1
配制1 kg复合中草药抗应激制剂，其各原料组成：五倍子280g、刺五加150g、黄柏200g、蒲公英120g、白头翁为：100g、甘草150g份；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分进行粗粉碎，粉碎机（WKX-160 型中草药粉碎机，青州市富尔康制药机械有限公司）内粉碎后为粗物料，并通过40目筛网，粉碎机粉碎速度：200转/分；后经超微粉碎机（ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司）进行第二次粉碎，并通过200目筛网，粉碎机粉碎速度：500转/分；再将上述各组分在混合机（V型混合机，上海华夏渔业机械有限公司）内充分混匀，制成200目干粉的复合中草药抗应激制剂，混合机投料转速：18转/分。所用五倍子、刺五加、黄柏、蒲公英、白头翁、甘草等中草药均购自江苏中草药贸易有限公司，下同。
生长实验：团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约30g。随机分组，设有试验组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱（规格为250cm×150cm×100cm）。团头鲂驯化30d后投喂0、1.0%两个剂量复合中草药抗应激制剂56d，测定其生长的影响。
应激试验：饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40 L塑料桶中。采用流水系统，水温25±1℃，流速为2 L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每12观察鱼体死亡情况，观察4d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。
攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5×106cells/ml。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中（规格为100cm×100cm×100cm），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。
结果表明：与对照组相比，1.0%复合中草药抗应激制剂增重率显著(P<0.05)分别提高了12.58%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为90.0%，1.0%复合中草药抗应激制剂鱼死亡率为28.0%；高密度应激1d试验后，与对照组相比，1.0%免疫增强剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度9.21%，血糖水平5.54%及丙二醛浓度8.11%，增加了血液过氧化氢酶15.34%、超氧化物歧化酶活性11.238%以及应激蛋白HSP70浓度6.33%，因此，该复合中草药抗应激制剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
实施例2
配制1 kg复合中草药抗应激制剂，其各原料组成：五倍子250g、刺五加170g、黄柏170g、蒲公英150g、白头翁为：160g、甘草100g份；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分进行粗粉碎，粉碎机（WKX-160 型中草药粉碎机，青州市富尔康制药机械有限公司）内粉碎后为粗物料，并通过50目筛网，粉碎机粉碎速度：250转/分；后经超微粉碎机（ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司）进行第二次粉碎，并通过250目筛网，粉碎机粉碎速度：550转/分；再将上述各组分在混合机（V型混合机，上海华夏渔业机械有限公司）内充分混匀，制成250目干粉的复合中草药抗应激制剂，混合机投料转速：19转/分。
生长实验：团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约30g。随机分组，设有试验组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱（规格为250cm×150cm×100cm）。团头鲂驯化30d后投喂0、2.5%两个剂量复合中草药抗应激制剂25d，测定其生长的影响。
应激试验：饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40 L塑料桶中。采用流水系统，水温25±1℃，流速为2 L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每12h观察鱼体死亡情况，观察4d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。
攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5×106cells/ml。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中（规格为100cm×100cm×100cm），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。
结果表明：与对照组相比，2.5%复合中草药抗应激制剂增重率显著(P<0.05)分别提高了11.21%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为94.0%，2.5%复合中草药抗应激制剂鱼死亡率为24.0%；高密度应激1d试验后，与对照组相比，2.5%复合中草药抗应激制剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度9.54%，血糖水平6.99%及丙二醛浓度12.857%，增加了血液过氧化氢酶8.99%、超氧化物歧化酶活性8.44%以及应激蛋白HSP70浓度12.45%，因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
实施例3
配制1 kg复合中草药抗应激制剂其各原料组成：五倍子220g、刺五加190g、黄柏150g、蒲公英190g、白头翁130g、甘草120g份；将上述各组份进行烘干，烘干至水分<12%；烘干后的各组分进行粗粉碎，粉碎机（WKX-160 型中草药粉碎机，青州市富尔康制药机械有限公司）内粉碎后为粗物料，并通过60目筛网；粉碎机粉碎速度：300转/分；后经超微粉碎机（ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司）进行第二次粉碎，并通过300目筛网；粉碎机粉碎速度：600转/分；再将上述各组分在混合机（V型混合机，上海华夏渔业机械有限公司）内充分混匀，制成300目干粉的复合中草药抗应激制剂，混合机投料转速：20转/分。
生长实验：团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约30g。随机分组，设有试验组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱（规格为250cm×150cm×100cm）。团头鲂驯化15d后投喂0、4.0%复合中草药抗应激制剂7d，测定其生长的影响。
应激试验：饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40 L塑料桶中。采用流水系统，水温25±1℃，流速为2 L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每12h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。
攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5×106cells/ml。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中（规格为100cm×100cm×100cm），并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。
结果表明：与对照组相比，4.0%复合中草药抗应激制剂增重率显著(P<0.05)分别提高了10.78%；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为89.0%，4.0%复合中草药抗应激制剂鱼死亡率为36.0%；高密度应激1d试验后，与对照组相比，4.0%复合中草药抗应激制剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度8.39%，血糖水平4.46%及丙二醛浓度9.64%，增加了血液过氧化氢酶9.66%、超氧化物歧化酶活性6.76%以及应激蛋白HSP70浓度5.76%，因此，该复合中草药抗应激制剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
Claims (3)
1.一种团头鲂复合中草药抗应激制剂，其特征在于其由以下组分重量份组成：五倍子22 ～28 份、刺五加15 ～19 份、黄柏5 ～20 份、蒲公英12 ～19 份、白头翁10 ～16 份甘草10-15份。
2.如权利要求1所述的团头鲂复合中草药抗应激制剂的制备方法，其特征在于所述制备方法为：按权利要求1所述配方分别称取各组份，分别烘干后粉碎，混匀即得；粉碎，过40-60 目筛网；二次粉碎，过200-300 目筛网。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述烘干的温度为50-60℃，烘干至水分<12%。
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