CN101720869A - 一种鱼用免疫增强剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鱼用免疫增强剂的制备方法，属于水产配合饲料技术领域。特征是：取大黄提取物、地锦草、仙鹤草、辣蓼、谷氨酰胺、磷酸二氢钾等及载体；将上述各组份充分混合后粉碎，制成干粉。本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉；从鱼体免疫的机理出来，免疫增强剂既补充中草药，又补充西药谷氨酰胺二肽；从中西结合药物对鱼体的应激调理，并适当补充应激造成的Na⁺、K⁺流失来防治鱼体应激。使用时能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长。

Description

一种鱼用免疫增强剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种鱼用免疫增强剂的制备方法，属于水产配合饲料技术领域。

背景技术

近些年来，随着我国水产养殖业的迅速发展，水产养殖的病害问题却日趋严重，常见疾病依旧十分普遍，新的疾病不断发生，诊断和监控技术缺乏，养殖水域生态环境恶化严重，滥用药物问题突出，水产品质量安全隐患凸现，据统计水产养殖品种的病害频繁发生，全国每年水产养殖病害发生率达50％以上，损失率20％左右，每年因水产养殖病害问题而造成的直接经济损失就达百亿元之巨。为了防治病原，环境改良剂、消毒剂、杀虫驱虫药、抗生素等等药物的滥用、错用，可能对养殖动物造成毒性损伤，长期滥用药物还可能会诱发基因突变或转移，使部分病原生物产生抗药性，对人体产生致残、致畸、致突变等，影响我国水产养殖业的健康和可持续发展。

随着抗生素、抗菌药物的逐渐禁用，一些绿色、安全、高效饲料添加剂的开发与应用应运而生。植物提取物具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、茶多酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，能促进机体健康，减少抗生素在动物生产中的使用，是我国传统的防病治病药物。

在水产上研究，天然植物可促进水产动物机体代谢和蛋白质及酶的合成，促进机体的生长发育，并通过影响非特异性免疫系统，激活和诱生多种细胞因子等途径提高水产动物机体免疫力，如：传统中草药大黄、黄芪、甘草、陈皮、鱼腥草、黄芩、当归等能提高中国对虾、南美白对虾、尼罗罗非鱼、异育银鲫等免疫能力，抵抗病原菌感染。

地锦草为大戟科植物地锦(Euphorbia humifusa willd)或班地锦(Euphorbiamacilata L.)干燥的全草，主要成分为黄酮类化合物、没食子酸、内消旋肌醇等，具有抗氧化、抗菌、治疗肠炎、清热解毒等功能。

仙鹤草(Agrimonia pilosa ledeb.)为蔷薇科多年生草本植物龙牙草的全草，主要成分含有仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、甾醇、有机酸、皂苷等，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤等功能。

辣蓼(Polygonum hydropipre L.)属蓼科(Polygonaceae)蓼属(Polygonum L.)的一年生草本植物，含有水蓼二醛、异水蓼二醛、水蓼素、槲皮素、槲皮黄甙、金丝桃甙等，具有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能。

谷氨酰胺是L-谷氨酸的γ-羧基酰胺化物，是体液中最丰富的氨基酸之一，可增强鱼体免疫功能、维持酸碱平衡、增加细胞的吞噬作用和淋巴细胞的增殖、增加细胞体积、增强肌肉细胞内蛋白质的合成等，是一种极有发展前景的新型药物和动物营养性饲料添加剂。目前已有一些关于地锦草、仙鹤草、辣蓼的在水产养殖的使用，但是有关与大黄蒽醌提取物、谷氨酰胺的配伍使用，还未见报道。因此研制一种鱼用免疫增强剂，提高鱼体抗病能力，抗应激能力，对水产养殖的健康发展和可持续发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服上述的一些不足之处，从而提供一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长的免疫增强剂。

按照本发明提供的技术方案，一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组分配比以重量份数计：

取谷氨酰胺二肽为：0.25～0.75份、大黄提取物为：0.3～0.9份、地锦草为：30.0～40.0份、仙鹤草为：25.0～33.0份、辣蓼为：13.0～17.0份、磷酸二氢钾1.0-3.0份、载体为：8.45-27.35份；

将上述各组份充分混合后粉碎，制成160～200目干粉的免疫增强剂。粉碎转速为：400-500转/分。

所述载体选自玉米粉或麸皮或小麦粉或大豆粉或米糠或沸石粉等。所述大黄提取物，主要成分为45％大黄素，由巨邦植物原料有限公司提供。所述谷氨酰胺二肽，由浙江安木化工有限公司提供。上述免疫增强剂在鱼饲料中的添加量为1％-5％。免疫增强剂的添加量与使用的周期有关，当使用周期在30d以上，在饲料中添加量为1％-2％；当使用周期在7d以内，在饲料中添加量为3％-5％。

此免疫增强剂可用于鲤鱼、鲫鱼、青鱼、草鱼、鳊鱼、翘嘴红鲌等常规淡水鱼类养殖中，直接地清除机体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响，加快修复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高鱼体的免疫与抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，改善饲料适口性，促进鱼体生长。

本发明与已有技术相比具有以下优点：

1、使用本添加剂后，大黄提取物、地锦草、仙鹤草、辣蓼等含有丰富黄酮类化合物、没食子酸、仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、水蓼二醛、水蓼素、槲皮素、大黄素、大黄酸等，具有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能，提高鱼体饲料利用率，促进鱼体生长。

2、本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉。

3、本发明从鱼体免疫的机理出来，免疫增强剂既补充中草药，又补充西药谷氨酰胺二肽；从中西结合药物对鱼体的应激调理，并适当补充应激造成的Na⁺、K⁺流失来防治鱼体应激。

4、本发明免疫增强剂通过动物试验，表明免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。

具体实施方式

下面本发明将结合实施例作进一步描述：

实施例一：本发明一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组份配比以重量份数计：

取谷氨酰胺二肽为：0.75份、大黄提取物为：0.9份、地锦草为：30.0份、仙鹤草为：25.0份、辣蓼为：13.0份、磷酸二氢钾3.0份、载体选玉米为：27.35份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混匀；后超微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过160目的筛网制成免疫增强剂；超微粉碎机粉碎速度：400转/分；混合机投料转速：18转/分；

生长实验：鲫鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cm×150cm×100cm)。鲫鱼驯化30d后投喂0、1.0％等不同剂量免疫增强剂56d，测定其生长的影响。

应激试验：饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统，水温25±1℃，流速为2L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cm×100cm×100cm)，并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，1.0％免疫增强剂增重率显著(P＜0.05)分别提高了7.36％；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为95.0％，1.0％免疫增强剂鱼死亡率为32.0％；高密度应激1d试验后，与对照组相比，1.0％免疫增强剂显著(P＜0.05)降低血液皮质醇浓度8.11％，血糖水平4.56％及丙二醛浓度9.22％，增加了血液过氧化氢酶11.34％、超氧化物歧化酶活性8.78％以及应激蛋白HSP70浓度4.77％，因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。

实施例二：本发明一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组分配比以重量份数计：

取谷氨酰胺二肽为：0.5份、大黄提取物为：0.6份、地锦草为：35.0份、仙鹤草为：28.0份、辣蓼为：15.0份、磷酸二氢钾2.0份、载体选麸皮为：20.9份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混匀；后超微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过180目的筛网制成免疫增强剂；超微粉碎机粉碎速度：450转/分；混合机投料转速：19转/分；

生长实验：鲫鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cm×150cm×100cm)。鲫鱼驯化30d后投喂0、2.0％等不同剂量免疫增强剂56d，测定其生长的影响。

应激试验：饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统，水温25±1℃，流速为2L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每2h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cm×100cm×100cm)，并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，2.0％免疫增强剂增重率显著(P＜0.05)分别提高了9.76％；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为96.0％，2.0％免疫增强剂鱼死亡率为28.0％；高密度应激1d试验后，与对照组相比，2.0％免疫增强剂显著(P＜0.05)降低血液皮质醇浓度9.34％，血糖水平5.67％及丙二醛浓度9.87％，增加了血液过氧化氢酶9.78％、超氧化物歧化酶活性7.65％以及应激蛋白HSP70浓度5.76％，因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。

实施例三：本发明一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组分配比以重量份数计：

取谷氨酰胺二肽为：0.25、大黄提取物为：0.3份、地锦草为：40.0份、仙鹤草为：33.0份、辣蓼为：17.0份、磷酸二氢钾1.0份、载体选米糠为：8.45份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混匀；后超微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过200目的筛网制成免疫增强剂；超微粉碎机粉碎速度：500转/分；混合机投料转速：20转/分；

生长实验：鲫鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cm×150cm×100cm)。鲫鱼驯化30d后投喂0、3.0％等不同剂量免疫增强剂56d，测定其生长的影响。

应激试验：饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统，水温25±1℃，流速为2L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每2h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。

攻毒实验：饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为1×10⁷cells/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cm×100cm×100cm)，并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。

结果表明：与对照组相比，3.0％免疫增强剂增重率显著(P＜0.05)分别提高了10.43％；病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为96.0％，3.0％免疫增强剂鱼死亡率为25.0％；高密度应激1d试验后，与对照组相比，3.0％免疫增强剂显著(P＜0.05)降低血液皮质醇浓度10.31％，血糖水平6.43％及丙二醛浓度9.24％，增加了血液过氧化氢酶9.56％、超氧化物歧化酶活性8.45％以及应激蛋白HSP70浓度6.23％，因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。

Claims (4)

1.一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征是采用以下工艺步骤，其组份配比以重量份数计：

取谷氨酰胺二肽为：0.25～0.75份、大黄提取物为：0.3～0.9份、地锦草为：30.0～40.0份、仙鹤草为：25.0％～33.0份、辣蓼为：13.0％～17.0份、磷酸二氢钾1.0-3.0份、载体为：8.45％-27.35份；将上述各组份充分混合后粉碎，制成160～200目干粉，粉碎转速为：400-500转/分。

2.根据权利要求1所述的一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述载体选用玉米粉或麸皮或小麦粉或大豆粉或米糠或沸石粉。

3.根据权利要求1述一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述免疫增强剂在鱼饲料中的添加量为1％-5％。

4.根据权利要求1述一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述免疫增强剂用于鲤鱼、鲫鱼、青鱼、草鱼或鳊鱼鱼饲料中。