CN102266469A - 一种复方茵陈蒿制剂及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方茵陈蒿制剂及其用途。分别取茵陈蒿、黄芩和连翘叶分别加入乙醇，用摇床震荡浸提，用离心机离心得上清液；重复提取2次，合并三次上清液，过滤，将滤液进行减压浓缩，烘干，得到茵陈蒿、黄芩和连翘叶提取物；取捣碎的大蒜，加入圆底烧瓶中，进行水蒸气蒸馏，得大蒜精油；取茵陈蒿提取物、黄芩提取物、连翘叶提取物和大蒜精油制成复方茵陈蒿制剂。本发明产品对鳗弧菌、哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌和嗜盐弧菌具有抑菌作用，可开发相应制剂用于防治水产养殖过程中发生的弧菌病，本发明产品适合工业化生产。

Description

一种复方茵陈蒿制剂及其用途

技术领域

本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方茵陈蒿制剂及其用途。本发明产品对D31(鳗弧菌V.anuguillarum)、D32(哈维氏弧菌V.harveyi)、D61(溶藻胶弧菌V.alginolyticus)、D230(嗜盐弧菌Vibrio vulnificus)具有抑菌作用，可开发相应制剂用于防治水产养殖过程中发生的弧菌病，本发明产品适合工业化生产。

背景技术

近年来我国大力发展海水养殖业，但因养殖面积过速扩展、养殖密度过高和管理不当，养殖鱼类疾病繁生，造成了巨大的经济损失。这其中由D31(鳗弧菌V.anuguillarum)、D32(哈维氏弧菌V.harveyi)、D61(溶藻胶弧菌V.alginolyticus)、D230(Vibrio vulnificus)引起的弧菌病是被公认的鱼类养殖过程中出现的最为严重的病害之一，也是限制该产业发展的重要性因素，此外弧菌还可以通过食物链引起食物中毒，危害食用者的身体健康。然而，目前我国对于水产养殖动物的疾病防治主要以抗生素等化学药物为主，但由于长期滥用已经造成了严重的环境污染、病菌抗药、人畜安全受到威胁等一系列问题。

相比较化学药物，植物源抑菌药物具有杀菌功效较强，毒性较低，不易产生抗药性，以及成本低廉等优点，因此从植物中寻找抑菌活性物质是保障鱼类养殖业稳步发展的一条有效途径。但是令人遗憾的是近年来从事致鱼病菌抑菌活性植物筛选工作却与其优点相背离，一味的追求强效杀菌活性，使得被筛选植物聚集到高毒高成本的一类植物中，这使得植物源杀菌剂的开发普及停滞不前，因此探讨开发高效、低毒、价廉的植物源杀菌剂刻不容缓。

茵陈蒿为属菊科植物茵陈蒿Artemisia capillaries的茎叶。茵陈蒿煎剂对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。对痢疾杆菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、白喉杆菌、牛型及人型结核杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌、脑膜炎双球菌等有不同程度的抑制作用。茵陈蒿乙醇提取物对流感病毒有抑制作用。

黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的根。有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床应用抗菌比黄连还好，而且不产生抗药性。

连翘叶为木犀科植物连翘Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl.的干燥叶。连翘通常以果实入药，对多种革兰阳性及阴性细菌均有抑制作用.其浓缩煎剂在体外可抑制伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、白喉杆菌及霍乱弧菌、葡萄球菌、链球菌等。对于连翘叶抗菌作用鲜见报道。

大蒜精油为蒜Allium sativum L.(Garlic)的鳞茎经水蒸气蒸馏获得的挥发油。大蒜含挥发油约0.2％，油中主要成分为大蒜辣素，具有杀菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解产生。

发明内容

1、一种复方茵陈蒿制剂，其特征在于是由下述重量配比制成的制剂：

茵陈蒿提取物2g-3g、黄芩提取物1g-2g、连翘叶提取物1g-2g、大蒜精油0.001g-0.002g。

2、权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤(一)：分别取茵陈蒿、黄芩和连翘叶各30g-40g，分别加入600mL-800mL乙醇，用摇床震荡浸提24h，用离心机离心得上清液和残渣；

步骤(二)：将(一)中残渣分别加入400mL-600mL乙醇，用摇床震荡浸提18h，离心机离心得上清液和残渣；

步骤(三)：将(二)中残渣分别加入200mL-400mL乙醇，震荡浸提12h，离心机离心得上清液和残渣，残渣弃去，合并三次上清液，过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，烘干，得到茵陈蒿、黄芩和连翘叶提取物；

步骤(四)：取捣碎的大蒜10g-20g，加入1000mL圆底烧瓶中，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间1.5h-2.0h，静置，得大蒜精油；

步骤(五)：按权利要求1所述的重量配比制成复方茵陈蒿制剂。

3、权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的用途，其特征在于对鳗弧菌、哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、嗜盐弧菌具有抑菌作用。

根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。

具体实施方式

本发明所述的涉及一种复方茵陈蒿制剂及其用途包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：

1、一种复方茵陈蒿制剂，其特征在于是由下述重量配比制成的制剂：

茵陈蒿提取物2g、黄芩提取物1g、连翘叶提取物1g、大蒜精油0.001g。

2、权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤(一)：分别取茵陈蒿、黄芩和连翘叶各30g，分别加入600mL乙醇，用摇床震荡浸提24h，用离心机离心得上清液和残渣；

步骤(二)：将(一)中残渣分别加入400mL乙醇，用摇床震荡浸提18h，离心机离心得上清液和残渣；

步骤(三)：将(二)中残渣分别加入200mL乙醇，震荡浸提12h，离心机离心得上清液和残渣，残渣弃去，合并三次上清液，过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，烘干，得到茵陈蒿、黄芩和连翘叶提取物；

步骤(四)：取捣碎的大蒜10g，加入1000mL圆底烧瓶中，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间1.5h，静置，得大蒜精油；

步骤(五)：按权利要求1所述的重量配比制成复方茵陈蒿制剂。

3、权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的用途，其特征在于对鳗弧菌、哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、嗜盐弧菌具有抑菌作用。

实施例2：

1、一种复方茵陈蒿制剂，其特征在于是由下述重量配比制成的制剂：

茵陈蒿提取物3g、黄芩提取物2g、连翘叶提取物2g、大蒜精油0.002g。

2、权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤(一)：分别取茵陈蒿、黄芩和连翘叶各40g，分别加入800mL乙醇，用摇床震荡浸提24h，用离心机离心得上清液和残渣；

步骤(二)：将(一)中残渣分别加入600mL乙醇，用摇床震荡浸提18h，离心机离心得上清液和残渣；

步骤(三)：将(二)中残渣分别加入400mL乙醇，震荡浸提12h，离心机离心得上清液和残渣，残渣弃去，合并三次上清液，过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，烘干，得到茵陈蒿、黄芩和连翘叶提取物；

步骤(四)：取捣碎的大蒜20g，加入1000mL圆底烧瓶中，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2.0h，静置，得大蒜精油；

步骤(五)：按权利要求1所述的重量配比制成复方茵陈蒿制剂。

3、权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的用途，其特征在于对鳗弧菌、哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、嗜盐弧菌具有抑菌作用。

药理实验

复方茵陈蒿制剂的抑菌作用实验

1材料及方法

1.1供试材料

1.1.1供试菌株

本实验所使用的四致鱼病菌均来自山东大学威海分校微生物实验室，分别是D31(鳗弧菌V.anuguillarum)、D32(哈维氏弧菌V.harveyi)、D61(溶藻胶弧菌V.alginolyticus)、D230(嗜盐弧菌Vibriovulnificus)。试验中病菌用2216E固体和液体培养基培养。

2216E培养基：蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高铁0.01g，陈海水1000mL，煮沸的5％氢氧化纳溶液调PH值7.6-7.8，琼脂15-20g(液体培养基不加)。

1.1.2试验仪器

超净工作台、光照培养箱、电子游标卡尺、离心机、旋转蒸发仪、烘箱、中药粉碎机、高压灭菌锅等。

1.1.3供试植物样品

本实验选取植物为茵陈蒿、黄芩、连翘叶、大蒜。

1.2实验方法

1.2.1植物提取物的制备及复方茵陈蒿制剂的配制

分别取茵陈蒿、黄芩、连翘叶各40g，分别加入800mL mL乙醇，用摇床震荡浸提24h，用离心机离心得上清液(1)和残渣(1)；将残渣(1)分别加入600mL乙醇，用摇床震荡浸提18h，离心机离心得上清液(2)和残渣(2)；将残渣(2)分别加入400mL乙醇，震荡浸提12h，离心机离心得上清液(3)和残渣(3)，残渣弃去，合并三次上清液，过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，烘干，得到茵陈蒿、黄芩、连翘叶提取物；取捣碎的大蒜20g，加入1000mL圆底烧瓶中，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2.0h，静置，得大蒜精油；

取茵陈蒿提取物3g、黄芩提取物2g、连翘叶提取物2g、大蒜精油0.002g配制复方茵陈蒿制剂。以旋蒸回收乙醇做为溶剂溶解复方茵陈蒿制剂，使生药含量为1g/mL，密封后0～4℃冰箱保存待用。

1.2.2复方茵陈蒿制剂对致鱼病弧菌抑茵活性的测定

1.2.2.1菌悬液的制备

菌株经活化后转接于固体平板于28℃培养24h后，挑起适量菌苔接种于液体培养基，而后再于振荡培养箱内28℃培养24h，各锥形瓶均浑浊后涂布平板计数并稀释至4×10⁸CFU/mL备用。

1.2.2.2复方茵陈蒿制剂对致鱼病弧菌抑菌活性试验

采用平板扩散法，制备直径为10cm的2216E固体培养基平板，要求每个平板厚度4mm，加100μl各菌悬液涂布均匀后放置30min，平板底部画线分三区，于每个区中央打孔器各打一孔，打孔器直径为5mm；试验以多菌灵为阳性对照，多菌灵浓度为1mg/mL，以旋蒸回收乙醇做为溶剂对照，每种菌做三个平行，于各个孔滴加复方茵陈蒿制剂30μL，结束后放置30min。放置完毕后将平板置于28℃培养箱内培养24h，游标卡尺测量抑菌圈直径。

抑菌效果的判定参照参考文献，抑菌圈直径＞20mm为极敏，以“***”表示；15-19mm为高敏，以“**”表示；10-14为中敏，以“*”表示；10以下为低敏，以“-”表示。

2结果

2.1复方茵陈蒿制剂对致鱼病弧菌的抑制作用

见表1。

表1复方茵陈蒿制剂对致鱼病弧菌的抑制活性

注：“A”表示抑菌圈直径/mm；“B”表示相对敏感性。

Claims (3)

1.一种复方茵陈蒿制剂，其特征在于是由下述重量配比制成的制剂：

茵陈蒿提取物2g-3g、黄芩提取物1g-2g、连翘叶提取物1g-2g、大蒜精油0.001g-0.002g。

2.权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤(一)：分别取茵陈蒿、黄芩和连翘叶各30g-40g，分别加入600mL-800mL乙醇，用摇床震荡浸提24h，用离心机离心得上清液和残渣；

步骤(二)：将(一)中残渣分别加入400mL-600mL乙醇，用摇床震荡浸提18h，离心机离心得上清液和残渣；

步骤(三)：将(二)中残渣分别加入200mL-400mL乙醇，震荡浸提12h，离心机离心得上清液和残渣，残渣弃去，合并三次上清液，过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，烘干，得到茵陈蒿、黄芩和连翘叶提取物；

步骤(四)：取捣碎的大蒜10g-20g，加入1000mL圆底烧瓶中，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间1.5h-2.0h，静置，得大蒜精油；

步骤(五)：按权利要求1所述的重量配比制成复方茵陈蒿制剂。

3.权利要求1所述的一种复方茵陈蒿制剂的用途，其特征在于对鳗弧菌、哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌和嗜盐弧菌具有抑菌作用。