CN103079556B - 一种用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱的药物组合物，更具体地说，是涉及用于预防或治疗神经退行性脑功能疾病，如帕金森氏症，阿尔茨海默症（老年痴呆症），中风，葛雷克氏症，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑变性，小脑萎缩，多发性硬化症，创伤后应激障碍和健忘的药物组合物，其中，该组合物包含对羟基苯甲酸酯类化合物作为活性成分，其具有抗氧化作用清除活性氧、抑制细胞凋亡、改善受损的运动功能和增强退化的记忆力的效果。

Description

一种用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱的药物组合物
技术领域
本发明涉及一种用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱疾病，包括帕金森氏症，阿尔茨海默症（老年痴呆症），中风，葛雷克氏症，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑变性，小脑萎缩，多发性硬化症，创伤后应激障碍和健忘的药物组合物。
背景技术
众所周知，损伤导致的细胞死亡和神经细胞的损失（“神经元”）是导致帕金森氏症，阿尔茨海默症，痴呆，中风等为代表的神经退行性功能障碍疾病的最终原因。例如，在帕金森氏症中，中脑黑质多巴胺能神经元选择性丢失引起基底核参与运动功能组织的机能障碍，导致不断颤抖，僵硬，慢振荡，姿势不稳等(Nimi et al.,Clinical and physiological characteristics of autonomic failure with Parkinson's disease.Clin Autonom Res9(1999),139-144;Dawson et al.,Molecular pathways ofneurodegeneration in Parkinson's disease.Science(2003),819-822)。
活性氧被认为是使神经退行性脑功能紊乱疾病相关的神经元凋亡的主要原因。这种活性氧是具有很强氧化活性的氧，在生命体呼吸过程中获得并用于氧化的过程，形成于不同的代谢过程中，在体内攻击生物组织和破坏细胞。这些活性氧可能导致DNA，细胞形成蛋白和活细胞中的脂质发生不可逆的损害(Valko et al.,Freeradicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease.Int JBiochem Cell Biol.39(2007),44-84)。尤其是，当活性氧在脑细胞中大量产生，发生氧化应激反应，导致细胞中线粒体结构和功能发生变化，从而导致大脑神经功能紊乱如帕金森氏症，阿尔茨海默氏症等(Knott et al.,Mitochondrial fragmentation inneurodegeneration.Nat Rev Neurosci.,9(2008),505-18)。
另外，对于包括帕金森氏症在内的神经退行性脑功能紊乱疾病，很多研究结果表明，谷氨酸具有作为兴奋性神经递质和异常聚集蛋白的作用。已经发现，谷氨酸在生理活动中起到重要作用，但是，当它过度分泌时，可能导致神经元的损伤，因此可能是特定疾病，即神经退行性脑功能紊乱包括帕金森综合症的原因之一(Samuelet al.,Localization of N-methyl-D-aspartate receptors in the rat striatum:effects ofspecific lesions on the[3H]3-(2-carboxypiperazin-4-yl)propyl-1-phosphonic acidbinding.J Neurochem1990;54:1926-1933;Weihmuller et al.,Elevated NMDA receptorsin Parkinsonian striatum.Neuroreport1992;3:997-980)。此外，可以观察到异常的蛋白聚集是神经退行性脑功能紊乱疾病的特征。例如，在帕金森氏症患者中，可以发现，α-突触核蛋白是形成帕金森氏症的致病因素的重要组成部分，即，路易体(Spillantiniet al.,Alpha-synuclein in Lewy bodies.Nature388(1997),839-840)。上述蛋白可能本身具有毒性或者在形成活性氧的过程中间接表达毒性，从而导致细胞死亡（“细胞凋亡”）。
目前，用于治疗帕金森氏症的方法还有待开发，多巴胺前体，L-多巴和多巴胺受体启动子被简单的认为具有改善症状的功能。然而，这些治疗药物不能阻止多巴胺能神经元的不断流失，因此，治疗效果可能在5至6年内急剧恶化。此外，由于包括运动功能障碍在内的副作用的增加和被称为“开关现象”的左旋多巴问题在疾病晚期的急剧增加，因此，将导致患者在症状发作后的10至15年内死亡(Vautier S,Milane A,Fernandez C,Buyse M,Chacun H,Farinotti R,Interactions betweenantiparkinsonian drugs and ABCB1/P-glycoprotein at the blood-brain barrier in a ratbrain endothelial cell model.Neurosci Lett.442(2008),19-23;Molecular mechanisms of6-hydroxydopamine-induced cytotoxicity in PC12cells:Involvement of hydrogenperoxide-dependent and-independent action.Free Radical Biology&Medicine42(2007),675-685)。
与此同时，众所周知帕金森氏症通常包括以运动功能障碍为代表的症状。此外，也观察到不同程度的认知功能损伤，包括自主神经系统功能障碍，感官神经系统紊乱和老年痴呆症状(Morris et al.,Planning and spatial working memory in Parkinson'sdisease.J Neurol Neurosurg Psychiatry,(1988)757-66;Robbins et al.,Cognitive deficitsin progressive supranuclear palsy,Parkinson's disease,and multiple system atrophy intests sensitive to frontal lobe dysfunction.J Neurol Neurosurg Psychiatry,(1994)79-88)。自从帕金森氏症被认定为是一种包含运动功能障碍的疾病以来，这些认知功能损伤通常被忽略或者低估。然而，现在患有渐进性帕金森氏症患者所表达出来的认知功能障碍或者老年痴呆症状却被认为是在帕金森氏症中出现的明显异常(Emre,Dementia associated with Parkinson's disease.Lancet Neurol.,(2003)229-37;Emre,Dementia in Parkinson's disease:cause and treatment.Curr Opin Neurol.,(2004)399-404)。事实上，已知的大约20%至40%的帕金森氏症患者同时患有老年痴呆，其老年痴呆症的发生率高达健康人群中发病率的6倍(Mortimer et al.,Relationship ofmotor symptoms to intellectual deficits in Parkinson's disease.Neurology,(1982)133-7;Emre,Dementia associated with Parkinson's disease.Lancet Neurol.,(2003)229-37)。
然而，根据传统的研究所报道的，通过采用左旋多巴（L-多巴）以改善伴随帕金森氏症的老年痴呆患者的认知功能的方法尚未大规模的使用。已经部分证明情绪的改善和积极活动、以及多巴胺能神经传递和处理记忆的信息过程中的有益影响是很有用的。然而，众所周知，其主要目的，即延迟认知功能退化并没有实现(Pillonet al.,Cognitive deficits and dementia in Parkinson's disease.2ed.Amsterdam;ElsevierScience;2001)。
因此，现在迫切需要的是在正确的帕金森氏症的分子病理学机制的基础上，开发一种针对神经保护治疗的药物，它能够预防或者延缓疾病的发展并且能够改善各种程度的神经退行性脑功能紊乱以及帕金森氏症的老年痴呆症状。
发明内容
【技术问题】
通过对预防或治疗例如帕金森氏症的神经退行性脑功能紊乱疾病的反复和深入的研究，发明人发现以结构式1为代表的化合物具有很强的去除活性氧的作用，神经元保护作用，运动功能障碍的改善作用以及增强退化的记忆力的作用，因此，本发明在上述发现的基础上完成。
本发明的目的在于提供一种药学组合物，用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱疾病，包括帕金森氏症，阿尔兹海默症，或与帕金森氏症具有相同病理机制的葛雷克氏症，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑退化症，小脑萎缩，多发性硬化，由于神经元缺失出现的老年性痴呆，中风，创伤后应激障碍和健忘。
【技术方案】
为了实现上述目标，本发明提供了一种用于预防和治疗神经退行性脑功能紊乱的药物组合物，包含由下面结构式1所示的化合物：
[结构式1]
(其中R是指含有1至6个碳原子的烷基)。
由结构式1所示的化合物可以是选自对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸异丙酯和对羟基苯甲酸异丁酯所组成的组中的至少一种。
由结构式1所示的化合物优选对羟基苯甲酸甲酯。
【有益效果】
本发明的包含由结构式1所示化合物的药学组合物具有抗氧化性能去除活性氧、抑制由α-突触核蛋白引起的细胞凋亡、抑制活性氧和兴奋性脑神经递质，并有助于改善运动功能障碍和增强退化的记忆力的作用。
此外，本发明的药物组合物有效用于预防和治疗神经退行性脑功能紊乱相关的疾病，包括帕金森氏症，阿尔兹海默症，或与帕金森氏症具有相同病理机制的葛雷克氏症，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑退化症，小脑萎缩，多发性硬化，以及由于神经元缺失引起的老年性痴呆，中风，创伤后应激障碍和健忘。
附图说明
图1是对羟基苯甲酸甲酯的高效液相色谱分析图。
图2是显示用ESR光谱仪测量的与对羟基苯甲酸甲酯浓度相关的活性氧量测定结果图。
图3是显示与对羟基苯甲酸甲酯浓度相关的活性氧的抑制能力图。
图4是与活性氧相关的对羟基苯甲酸甲酯对细胞的保护作用图。
图5是与兴奋性脑神经递质相关的对羟基苯甲酸甲酯对细胞的保护作用图。
图6是与α-突触核蛋白相关的对羟基苯甲酸甲酯对细胞的保护作用图。
图7是使用对羟基苯甲酸甲酯(100和200μg/kg)后对运动功能障碍的改善作用（术后1周和2周）的示例图。
图8是使用对羟基苯甲酸甲酯(100和200μg/kg)后对回转运动功能障碍的改善作用的示例图。
图9是使用对羟基苯甲酸甲酯(100和200μg/kg)后对记忆力的增强作用（Y型迷宫测试）的示例图。
图10是使用对羟基苯甲酸甲酯(100和200μg/kg)后对记忆力的增强作用（被动回避测试）的示例图。
具体实施方式
本发明涉及一种用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱疾病的药物组合物，所述疾病包括帕金森氏症，阿尔兹海默症，中风，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑退化症，小脑萎缩，多发性硬化，创伤后应激障碍和健忘。该组合物包括由通式1表示的对羟基苯甲酸酯类化合物，其具有清除活性氧，保护神经元，改善运动功能障碍和增强退化的记忆力的多种作用。
以下，将详细描述本发明。
根据本发明所述的用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱的药物组合物，包括由下面结构式1所示的化合物：
[结构式1]
(其中R是指含有1至6个碳原子的烷基)。
由结构式1所示的化合物是一类对羟基苯甲酸酯类化合物，该对羟苯甲酸酯是指对位-羟基苯甲酸酯（p-hydroxybenzoate），其在浓度不会对人体有害并对微生物的生长起到抑制作用的基础上，已经在食品（酱，酱油，醋，饮料，酱汁，水果，蔬菜，等），药品和医疗用品，化妆品中用作保护剂或防腐剂。
然而，根据本发明，基于上述结构式1所示的化合物，即对羟基苯甲酸酯类化合物新的活性和效果的发现（即清除活性氧的抗氧化作用，抑制由α-突触核蛋白、活性氧和兴奋性神经递质引起的细胞凋亡，神经元的保护作用，改善运动功能障碍和增强退化的记忆力），由通式1所示的化合物可用作预防或治疗神经退行性脑功能紊乱的药用组合物的一种有效成分。
结构式1所示的化合物优选包括，例如，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸异丙酯和对羟基苯甲酸异丁酯，它们分别用结构式2至7表示。更优选的是以下结构式2所示的对羟基苯甲酸甲酯。这些化合物可以单独使用，也可以两个或多个组合使用。
[结构式2]
[结构式3]
[结构式4]
[结构式5]
[结构式6]
[结构式7]
由结构式1所示的化合物不需要特殊的制备方法。例如，在高温高压条件下，苯酚和二氧化碳作用后，反应产物用醇酯化，从而通过合成方法获得上述化合物。另外，上述化合物也可以从角质山羊杂草（Epimedium Koreanum Nakai，朝鲜淫羊藿）提取物和蓝莓（Vaccinium corymbosum，越橘蓝莓）提取物中分离获得。
从天然物质的提取物中分离结构式1所示的化合物的方法并没有特别的限制。例如，细研磨干燥的天然物料后，磨料用溶剂提取法进行萃取，提取方法可以是热水萃取，冷浸渍萃取，超声萃取，冷却回流萃取等任何一种，并使用2至20倍于磨料重量的酒精溶液在煎药器或类似容器中进行提取。然后，将该溶剂提取物进行溶剂分馏后，用硅胶柱进行色谱分离得到。
根据本发明，所使用的结构式1所示的化合物可包括从Sigma公司采购的产品和从其他不同试剂生产商所采购的市售产品。
本发明中所描述的神经退行性脑功能紊乱可以是帕金森氏症，阿尔兹海默症，或与帕金森氏症具有相同病理机制的葛雷克氏症，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑退化症，小脑萎缩，多发性硬化，以及由于神经元缺失引起的老年性痴呆，中风，创伤后应激障碍和健忘等任意单一病症或者其组合。
本发明的药用组合物可以根据任何传统方法进行配制。例如，制剂的类型可以包括用于口服的颗粒剂，粉末剂，糖浆，溶液，悬浮液，片剂，胶囊，锭剂（troches）或丸剂，或经由非肠道给药的透皮吸收剂，乳液，药膏，胶布，巴布剂（cataplasma），糊剂，悬浮液，溶液，注射剂，或注射栓剂。
此外，本文所述的药物组合物还可以包括通常在本领域中使用的任何合适的载体或赋形剂。这里所述的载体包括药物上可接受的载体，例如，水，盐水，缓冲溶液如磷酸，乙酸，柠檬酸，酒石酸和其他缓冲溶液形成的溶液或悬浮液，或含有天然或合成的可生物降解的聚合物或共聚物的液体，固体或半固体载体。这里所用的赋形剂可包括，例如：稀释剂如微晶纤维素，乳糖，淀粉，碳酸钙，葡萄糖，右旋糖，无水磷酸氢钙，磷酸钙，高岭土，麦芽糖糊精或甘露醇；粘合剂如阿拉伯胶，海藻酸，卡波姆，羧甲基纤维素钠，乙基纤维素，明胶，瓜尔胶，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，麦芽糖糊精，甲基纤维素，聚甲基丙烯酸酯，聚维酮（povidone）或海藻酸钠；崩解剂如凝胶化淀粉，海藻酸，羧甲基纤维素钙，交联羧甲基纤维素钠，交联聚维酮（crospovidone）或羟乙酸淀粉钠；螯合剂和抗氧化剂如醇，苯甲酸钠，丁基羟基甲苯，丁基羟基苯甲醚或乙二胺四乙酸盐；抗菌剂如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；缓冲液如葡萄糖酸，乳酸，柠檬酸或乙酸，葡萄糖酸钠，乳酸钠，柠檬酸钠或乙酸钠；着色剂如二氧化钛，氧化亚铁或氧化铁；甜味剂或香料如蔗糖或阿斯巴甜，等等。
本发明的药物组合中有效成分的量可以由医师或本领域中的技术人员确定，并依据其症状，体重，患者疾病的严重程度，剂型，肝和肾功能，给药途径和时间的不同而不同。比如，以对羟基苯甲酸酯为有效成分的化合物的给药剂量为100到200μg/kg，每日一次或几次。世界卫生组织（WHO）已经确立了对羟基苯甲酸酯类化合物的每日适当摄入量，即，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯为10mg/kg。
在下文中，提出优选的实施方案来更加具体的描述本发明。然而，下列实例仅用于举例说明本发明，而且本领域中的技术人员显然会明白，在本发明的范围和精神内，各种变化和修改是可能的。这些变化和修改都适当的包含在所附的权利要求书中。
[实施例]
实施例1:对羟基苯甲酸甲酯的合成
苯酚和二氧化碳在100个大气压和125℃条件下反应后，并向其中加入硫酸以生成对羟基苯甲酸。再用醇将该化合物酯化，如用甲醇合成对羟基苯甲酸甲酯（MP）。
用高效液相色谱（HPLC）分析合成的对羟基苯甲酸甲酯（MP），其结果于图1中显示。
另外，所合成的对羟基苯甲酸甲酯（MP）用磷酸盐缓冲液（PBS）进行稀释并用于测试和分析。
实施例2:羟基自由基清除能力测试
为了识别对羟基苯甲酸甲酯（MP）的活性氧去除能力，通过芬顿反应[H2O2+FeSO4]产生羟基自由基。产生的羟基自由基通过硝酮类自旋捕集剂（DMPO）捕获，捕获后形成的DMPO-OH加成产物通过电子自旋共振（ESR）光谱仪进行测定。ESR谱通过反应试剂[磷酸缓冲溶液(pH7.4);4.5M DMPO10μl,0.6mM FeSO475μl,2.8M H2O275μl]，与对羟基苯甲酸甲酯和维生素C反应，然后运用ESR光谱仪(JES-FA,JEOL,日本)进行测定，测量结果示于图2。为此，ESR光谱仪通过一些参数进行分析[磁场340mT，功率1.0mW，频率9.19GHz，振幅调节0,2mT，增益200，扫描时间2分钟，扫描宽度10mT，时间常数0.03秒，温度为20℃]。
如图2所示，从分析的结果可以发现，加入对羟基苯甲酸甲酯（MP）使活性氧的量减少，活性氧的减少量随着活性氧浓度的增高进一步增加。
另外，以平均值±平均误差(n=4)的形式，图3显示了对羟基苯甲酸甲酯（MP）的浓度相对于活性氧的抑制能力水平。符号(*)表示相对于对照组存在显著差异，并且这个值是通过一个单向的ANOVA测试（p<0.05）获得的。结果显示，当对羟基苯甲酸甲酯（MP）加入时，活性氧的抑制能力增强。更进一步的，当对羟基苯甲酸甲酯（MP）的浓度为100μg/ml时，其显示出一种与维生素C基本类似的活性氧的抑制能力。
实施例3:针对阿尔法(α)-突触核蛋白，活性氧和兴奋性脑神经递质的细胞保护活性的测试
为了验证在培养的细胞中对羟基苯甲酸甲酯（MP）是否具有抗活性氧、兴奋性神经递质和α-突触核蛋白的细胞保护作用，进行了一项细胞保护能力测试。这些物质，即，活性氧，兴奋性神经递质和α-突触核蛋白已经被认为是引起与帕金森氏症和其他退行性脑疾病有关的神经细胞广泛损伤的原因。
96孔板的每个孔中均含有从人神经癌患者身上获得的SH-SY5Y细胞（5×103个细胞;10%FBS添加DMEM培养基），在37℃条件下培养24小时。然后，向其中加入浓度为1、10and100ng/ml的对羟基苯甲酸甲酯(MP),50μM维生素E(VitE)或者10μM MK-801继续培养4小时。此外，制备未加入任何药物的培养溶液作为对照组。培养4小时后，进一步向其中加入300mM过氧化氢溶液（H2O2）产生活性氧，加入2mM谷氨酸作为兴奋性脑神经递质，并加入2μMα-突触核蛋白继续培养24小时。培养结束后，用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤培养液。将100μl培养液与10%的细胞增殖剂（WST-1）倒入37℃的恒温箱中，在癌症条件下反应1小时，然后，测定450nm处的吸光度。测定结果在图4至6中显示。此处，每一个测定值都由平均值±平均误差（n=6）的形式表示。
图4，5和6中的符号(#)表示相对于对照组存在显著的差异，而(*)表示相对于α-突触核蛋白实验组存在显著差异。这些结果是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的值。此外，符号(**)表示相对于过氧化氢实验组，谷氨酸实验组，或者α-突触核蛋白实验组存在显著差异，且这些结果是从一个单向ANOVA测试(p<0.01)中得到的值。更多地，符号(***)表示相对于过氧化氢实验组，谷氨酸实验组，或者α-突触核蛋白实验组存在显著差异，且这些结果是从一个单向ANOVA测试(p<0.001)中得到的值。因此，人们发现，与对照组相比，加入10和100ng/ml对羟基苯甲酸甲酯（MP）时，由活性氧，兴奋性脑神经递质或α-突触核蛋白引起的细胞凋亡得到显著抑制。人们还发现，上述效果与用作阳性对照组的50μM维生素E或者10μM MK-801产生的效果基本相似。换句话说，上述结果表明对羟基苯甲酸甲酯（MP）具有抗活性氧、兴奋性神经递质或α-突触核蛋白的细胞保护作用，而且，在上述发现的基础上，可以预期在帕金森氏症模型中的运动功能障碍和老年痴呆症状具有改善作用。
实施例4:帕金森氏症模型的制备
为了验证对羟基苯甲酸甲酯作为帕金森氏症的治疗药物的效果，用氢氧化多巴胺（6-OHDA）制备了一个具有帕金森氏症的动物模型。以体重为20至25克的C57BL/6鼠作为试验动物。在儿茶酚胺神经系统中，多巴胺能神经元会被选择性破坏，且作为保护去甲肾上腺素神经元的预处理，25mg/kg地昔帕明在手术前1小时经腹腔（i.p.）给药。将老鼠麻醉后固定在一个立体的固定设备（David-Kopf框架）上作为试验动物。将头部皮肤切开约直径2厘米并用电钻使右侧的颅骨形成一个小孔。用注射器（汉密尔顿）将含有0.2%抗坏血酸的浓度为10μg/2.5μl的氢氧化多巴胺的溶液注入颅骨中。参考Paxinos和Watsons图谱，将右侧的黑质-纹状体（substantia nigra-corpus striatum）坐标定义为AP+0.8mm,ML-2.0mm,DV-3.3mm。为了防止氢氧化多巴胺回流，该物质是在至少5分钟内缓慢注入并缓慢移除注射器，然后，将头部皮肤缝合。对于药物治疗组，100或者200μg/kg对羟基苯甲酸甲酯（MP）和10mg/kg苄甲炔胺在手术前30分钟经腹腔给药（i.p.），并且对羟基苯甲酸甲酯（MP）和苄甲炔胺连续每日给药持续两周。对于正常对照组，除了注入相同手术部位的是包含0.2%(w/v)抗坏血酸的正常生理盐水，此处作为氢氧化多巴胺溶解的溶剂外，整个麻醉和手术过程均与造成帕金森氏症的测试组进行同样的操作。
实施例5:旋转试验
为了验证对羟基苯甲酸甲酯（MP）是否能够改善帕金森氏症模型的运动功能障碍，在帕金森氏症手术治疗后的第14天进行了旋转试验并对试验结果加以评价。旋转试验是指一种测量小鼠骑在旋转器上而不掉落的持续时间的试验。旋转仪的旋转速度设定为10rpm，适应5分钟后，在10分钟内进行该旋转试验。在旋转仪上的骑行时间重复测量三次，并计算出平均值，然后，最终值以平均值±平均误差（n=6）的形式来表示。
图7表示通过使用对羟基苯甲酸甲酯（MP）(100和200μg/kg)对改善运动功能障碍的效果。符号(#)表示相对于对照组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。符号(*)表示相对于氢氧化多巴给药组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。
实施例6：旋转运动观察
作为验证对羟基苯甲酸甲酯（MP）对帕金森氏症治效果的另一种方法，小鼠按照上述步骤进行手术后显示出所需的黑质-纹状体路径的病变形成和半-帕金森综合症，为了进行筛选，两周后，小鼠经皮下（S.C.）注入0.5mg/kg的阿扑吗啡。旋转运动评价在一个带有转子发动机的半球形复杂设备中进行，适应10分钟后，分别测量小鼠在阿扑吗啡给药1小时后在同侧和对侧方向上的转数。每一个测量值均表示为平均值±平均误差（n=6）的形式。
图8表示通过使用对羟基苯甲酸甲酯（MP）(100和200μg/kg)对改善运动功能障碍的影响。符号(#)表示相对于对照组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。符号(*)表示相对于氢氧化多巴胺给药组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。
实施例7:Y-型迷宫测试
一个Y形迷宫测定装置有三个延伸的臂以形成一个字母“Y”的形状，其中每个臂的长度为35厘米，高度为9厘米，宽度为5厘米，所有的臂均形成相同的角度。将试验动物放在面对Y-型迷宫的任意一个臂的末端后，让其在臂的周围自由活动8分钟。记录动物的运动状态，动物的后腿进入臂时，该动物被视为通过臂（“臂入口”）。动物的运动状态用穿越（“变换”）次数来表示，当动物连续穿过三个臂定义为一次变换。自发穿越运动量是实际变换量和最大可能变换量（即总变换量-2）的百分比。
图9表示通过使用对羟基苯甲酸甲酯（MP）(100和200μg/kg)对增强Y-型迷宫测试中记忆力的影响。符号(#)表示相对于对照组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。符号(*)表示相对于氢氧化多巴给药组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。
实施例8:被动回避试验
将设置有导电的网格的梭箱作为试验装置，其尺寸的宽×长×高为50×15×40厘米。将该箱子分为两间，每一间大小为25×15厘米，通过一闸门（10×10厘米）连接。每间都用一个20w的灯泡照明。试验在噪音为60dB(分贝)或更低且照明非常弱的室内进行。
将小鼠放在用门隔开的两间中的一间（A），当门打开的同时打开一盏1500lux的灯。通过这样做，使小鼠环顾四周并进入另一间没有照明的房间（B）。此时，门就将自动关闭。通过测定从打开门并点亮灯到门自动关闭所用时间来确定一个延迟时间。如果重复上述过程，老鼠将从房间A进入房间B。若通过重复上述过程使老鼠在20秒内从房间A进入房间B，则视为完成训练过程。次日，将完成训练的老鼠放入房间A，当老鼠要进入房间B时，使安装在房间底部的不锈钢电网中通入0.25mA的电流持续2秒，使老鼠的双脚的脚底受到电击，并同时关灯。
老鼠就可能在相关黑暗房间和脚底电击之间形成一种记忆。因此，当将老鼠放在房间A24小时后，即使将房间B的灯点亮，它仍会困惑是否该进入房间B。此时，可以比较延迟的时间。一天后，将上述老鼠放在房间A，测定当灯点亮时老鼠进入房间B所用的时间。最大测量时间为5分钟。
图10表示通过使用对羟基苯甲酸甲酯（MP）(100和200μg/kg)对增强被动回避测试中记忆力的影响。符号(#)表示相对于对照组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。符号(*)表示相对于氢氧化多巴胺给药组存在显著差异且该值是从一个单向ANOVA测试(p<0.05)中得到的。
如图7-10所示，经鉴定，对羟基苯甲酸甲酯（MP）治疗组(100和200μg/kg)相对于对照组来说，对于制备的帕金森氏症模型中退化的运动能力和记忆力均有显著的改善作用。基于这些结果，可以看出，对羟基苯甲酸甲酯（MP）具有抗氧化剂的活性，同时对神经退行性脑功能障碍产生的毒性物质具有神经元保护活性，从而表现出改善由运动功能障碍引起的记忆力恶化和老年痴呆的症状的效果。

Claims (5)

1.对羟基苯甲酸甲酯作为唯一活性成分在制备用于预防或治疗神经退行性脑功能紊乱的药物组合物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中对羟基苯甲酸甲酯是通过苯酚和二氧化碳在高温高压条件下反应的产物再与醇酯化制备得到的。
3.根据权利要求1中所述的应用，其中对羟基苯甲酸甲酯是从角质山羊杂草(Epimedium Koreanum Nakai)提取物和蓝莓(Vaccinium corymbosum)提取物中分离获得。
4.根据权利要求1中所述的应用，其中的神经退行性脑功能紊乱疾病选自由帕金森氏症，阿尔茨海默症(老年痴呆症)，中风，葛雷克氏症，皮克氏症，克雅氏症，亨廷顿氏症，进行性核上性麻痹，脊髓小脑变性，小脑萎缩，多发性硬化症，创伤后应激障碍和健忘组成的群组。
5.根据权利要求1所述的应用，其中组合物被配制成颗粒剂，粉末剂，糖浆剂，悬浮剂，片剂，胶囊剂，锭剂，丸剂，注射剂或栓剂。
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