CN103071121A - 一种山女鳟用中草药免疫增强剂 - Google Patents

Abstract

一种山女鳟用中草药免疫增强剂，本发明涉及一种免疫增强剂。本发明是要解决现有技术下存在鲑科鱼类病害频繁发生、免疫力低下、生长状况不良的问题。一种山女鳟用中草药免疫增强剂由茵陈、大黄、黄芩、黄柏、生地、熟地、金银花、连翘、板兰根、陈皮、郁金和甘草制备而成。本发明的免疫增强剂对山女鳟的抗氧化和免疫相关指标有促进作用，而对机体生理生化指标的影响并不显著，说明此方剂对山女鳟有免疫促进作用和生长促进作用的同时，对机体其它的功能基本无显著影响，是较为温和的免疫增强剂。本发明制备的免疫增强剂用于人工养殖山女鳟。

Description

一种山女鳟用中草药免疫增强剂

技术领域

本发明涉及一种免疫增强剂。

背景技术

山女鳟（Oncorhyrchus masou masou）系鲑形目Salmoniformes、鲑科Salmonidae、大麻哈鱼属（Oncorhyr chus），是日本樱鳟（马苏大麻哈鱼）（Oncorhyrchus masou）的遗传型陆封种。多生活在山区河流的中上游，在低于20℃的水温中生长栖息。

山女鳟是一种经济鱼类。日本的鱿科鱼类共有20余种，其中山女鳟被认为是最好吃的两种鱼之一，其特点是肉质细嫩，鱼味浓郁，在餐饮业上被看作是珍稀的鱼类食品。又因其形体姿态优美、适于游钓而倍受青睐，自古就称其为“山女鱼”、“山溪女王”，是最受欢迎的淡水游钓鱼类。

山女鳟是1996年中国从日本引进发眼卵，在黑龙江水产研究所渤海冷水鱼实验站孵化出鱼苗，经过近8年的养殖，已成功实施规模化养殖。随着社会生活的进步，山女鳟将成为鱼食品中的上品，特别是食用鱼子的开发以及作为游钓鱼种和增殖鱼种的开发，山女鳟的推广将会体现出更广阔的前景。

近年来，山女鳟的人工养殖发展迅速。但随着养殖业的发展，其病害也逐渐增加，经常会发生某些疾病，包括病毒、细菌和寄生虫感染等疾病。其中有常见病，也有不明原因的暴发性疾病。但由于山女鳟开始规模化养殖的时间短，相关的基础研究包括病害研究相对薄弱，因此疾病的诊断和治疗都较为困难，如何有效预防就成了关键。

综上所述，现有技术下存在鲑科鱼类病害频繁发生、免疫力低下、生长状况不良的问题。

发明内容

本发明是要解决现有技术下存在鲑科鱼类病害频繁发生、免疫力低下、生长状况不良的问题，而提供一种山女鳟用中草药免疫增强剂。

一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.2份~7.2份茵陈、4.7份~5.5份大黄、4.7份~5.5份黄芩、4.7份~5.5份黄柏、4.7份~5.5份生地、4.7份~5.5份熟地、4.7份~5.5份金银花、3.1份~3.7份连翘、3.1份~3.7份板兰根、23份~2.9份陈皮、2.3份~2.9份郁金和3.6份~4.4份甘草制备而成。

本发明的有益效果是：⑴能有效增强鱼体的免疫力、抗氧化能力，从而提高对疾病的抵抗力，降低发病率；⑵能显著提高鱼的增重率，缩短养成时间，提高养殖产量；⑶长期添加投喂后鱼体没有出现毒副作用和不良反应；⑷所用的原料来源稳定、价格低廉，生产工艺简单。因而，山女鳟用中草药免疫增强剂具有提高山女鳟免疫抗病能力和促进其健康生长的双重效果，对减少我国山女鳟养殖过程中爆发性疾病频繁发生和促进其生长有促进作用。

本发明的免疫增强剂对山女鳟的抗氧化和免疫相关指标有促进作用，而对机体生理生化指标的影响并不显著，说明此方剂对山女鳟有免疫促进作用和生长促进作用的同时，对机体其它的功能基本无显著影响，是较为温和的免疫增强剂。其中免疫指标中MDA、CAT、GSH-PX和补体C4数值的升高特别明显，证明了此方剂对山女鳟的免疫功能的改善有特殊的作用。

本发明制备的免疫增强剂用于人工养殖山女鳟。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举的具体实施方式，还包括各具体实施方式之间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.2份~7.2份茵陈、4.7份~5.5份大黄、4.7份~5.5份黄芩、4.7份~5.5份黄柏、4.7份~5.5份生地、4.7份~5.5份熟地、4.7份~5.5份金银花、3.1份~3.7份连翘、3.1份~3.7份板兰根、2.3份~2.9份陈皮、2.3份~2.9份郁金和3.6份~4.4份甘草制备而成。

本实施方式的免疫增强剂对山女鳟的抗氧化和免疫相关指标有促进作用，而对机体生理生化指标的影响并不显著，说明此方剂对山女鳟有免疫促进作用和生长促进作用的同时，对机体其它的功能基本无显著影响，是较为温和的免疫增强剂。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.5份茵陈、5.0份大黄、5.2份黄芩、5.0份黄柏、5.0份生地、5.3份熟地、4.8份金银花、3.5份连翘、3.3份板兰根、2.6份陈皮、2.5份郁金和4.0份甘草制备而成。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：一种山女鳟用中草药免疫增强剂作为免疫增强剂用于增强山女鳟的机体免疫力。其它与具体实施方式一或二相同。

采用以下实施例验证本发明的有益效果：

实施例一：

本实施例一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.4份茵陈、5.1份大黄、5.0份黄芩、5.2份黄柏、5.1份生地、5.4份熟地、5.0份金银花、3.4份连翘、3.1份板兰根、2.5份陈皮、2.4份郁金和4.3份甘草制备而成。

具体制备方法按照以下步骤进行制备：

一、按质量份数称取6.4份茵陈、5.1份大黄、5.0份黄芩、5.2份黄柏、5.1份生地、5.4份熟地、5.0份金银花、3.4份连翘、3.1份板兰根、2.5份陈皮、2.4份郁金和4.3份甘草；

二、将步骤一得到的药材放入砂锅中，加水没过药材3厘米，浸泡30min，武火烧开，然后文火熬45min，倒出药汁A，再加水没过药材2厘米，武火烧开，然后文火熬15min，过滤得到药汁B；

三、将药汁A和药汁B混合均匀，得到山女鳟用中草药免疫增强剂。

按照制备山女鳟用中草药免疫增强剂的生药与基础饲料质量比为52.9：100，将山女鳟用中草药免疫增强剂和基础饲料混合均匀制成药饵。

随机选取健康费免疫状态下1龄山女鳟作为实验鱼于室内水族箱(0.90m×0.50m×0.45m)水温为14℃~15℃条件下预饲两周，实验鱼分为实验组和对照组，每组两个水族箱，每个水族箱50尾鱼，保持各水族箱养殖条件均一，每天按鱼体重的1.0％投喂全价基础饲料。预饲结束后，对照组按照鱼体重1.0%投喂全价基础饲料，实验组每天按照鱼体重1.0%投喂药饵，连续给药30天，停食一天后，自实验鱼尾动（静）脉采血，将采集的血液在温度为4℃下以3500r／min转速离心20min，取血浆。解剖取鱼肝、鱼脾和鱼肠道（前肠、中肠和后肠）组织样品。将血清、血细胞及组织样品立即于-80℃下保存，进行测试。测试结果如下：

1.山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟生长的影响

表1山女鳟的增重情况

注：1)增重率=(末重-初始重)/初始重×100%；2)饲料系数=鱼体增重/耗料量。

注：表中同一列相同字母表示无显著差异（P>0.05），相邻字母表示差异显著（P<0.05），相间字母表示差异极显著（P＞0.01），下同。

由表1可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟增重率及饲料系数均高于对照组，其中平均增重率达到60.0%，有显著性升高。表明，山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟增重有促进作用。

表2山女鳟肠道细菌数量变化                     CFU/g

由表2可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟前肠、中肠、后肠及全肠细菌数量均显著性升高，分别升高了2.8、4.4、1.2和2.2倍。这说明了山女鳟用中草药免疫增强剂可以刺激山女鳟肠道细菌的生长繁殖。

表3山女鳟肠道细菌类群的变化

注：金黄杆菌属Chryseobacterium sp.(Chr)；泛菌属Pantoea sp.(Pan)；肠杆菌属Enterobacter sp.(Ent)；克吕沃尔菌Kluyvera sp.(Klu)；芽孢杆菌属Bacillus sp.(Bac)；假单胞菌属Pseudomonas sp.(Pse)；罗尔斯通菌属Ralstonia sp.(Ral)；微杆菌属Microbacterium sp.(Mic)；巨型球菌属Macrococcus sp.(Mac)；伯克霍尔德氏菌属Burkholderia sp.(Bur)。

由表3可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肠道各部分细菌类群数较对照组均有所增加。增加了对照组所没有检测到的Pseudomonas sp.和Burkholderia sp.细菌。

实施例二：

本实施例一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.5份茵陈、5.0份大黄、5.2份黄芩、5.0份黄柏、5.0份生地、5.3份熟地、4.8份金银花、3.5份连翘、3.3份板兰根、2.6份陈皮、2.5份郁金和4.0份甘草制备而成。

具体制备方法按照以下步骤进行制备：

一、按质量份数称取6.5份茵陈、5.0份大黄、5.2份黄芩、5.0份黄柏、5.0份生地、5.3份熟地、4.8份金银花、3.5份连翘、3.3份板兰根、2.6份陈皮、2.5份郁金和4.0份甘草；

二、将步骤一得到的药材放入砂锅中，加水没过药材3厘米，浸泡30min，武火烧开，然后文火熬45min，倒出药汁A，再加水没过药材2厘米，武火烧开，然后文火熬15min，过滤得到药汁B；

四、将药汁A和药汁B混合均匀，得到山女鳟用中草药免疫增强剂。

按照制备山女鳟用中草药免疫增强剂的生药与基础饲料质量比为35.1：100，将山女鳟用中草药免疫增强剂和基础饲料混合均匀制成药饵。

随机选取健康费免疫状态下1龄山女鳟作为实验鱼于室内水族箱(0.90m×0.50m×0.45m)水温为15℃~16℃条件下预饲两周，实验鱼分为实验组和对照组，每组两个水族箱，每个水族箱50尾鱼，保持各水族箱养殖条件均一，每天按鱼体重的1.5％投喂全价基础饲料。预饲结束后，对照组按照鱼体重1.0%投喂全价基础饲料，实验组每天按照鱼体重1.5%投喂药饵，连续给药30天，停食一天后，自实验鱼尾动（静）脉采血，将采集的血液在温度为4℃下以3500r／min转速离心20min，取血浆。解剖取鱼肝、鱼脾和鱼肠道（前肠、中肠和后肠）组织样品。将血清、血细胞及组织样品立即于-80℃下保存，进行测试。测试结果如下：

2.山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟生理生化指标的影响

表4山女鳟各组织蛋白浓度的变化

由表4可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肝脏、脾脏和血细胞中蛋白浓度均有所降低或升高，但是并不显著。

3.山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟抗氧化功能的影响

表5山女鳟肝脏中MDA、CAT的变化

由表5可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肝脏中MDA含量较对照组下降了66.8%，有显著降低，表明山女鳟用中草药免疫增强剂可以降低氧自由基引起的脂质过氧化损伤。而实验组中CAT较对照组提高了68.2%，明显高于对照组。由于过氧化氢酶(CAT)是体内的一种主要抗氧化酶，能清除活性氧自由基，保护动物免受自由基的伤害，从而维持机体正常的机能。这表明山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟的抗氧化能力具有很好的作用。

表6山女鳟肝脏中GSH、GSH-PX的变化

由表6可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肝脏中GSH-PX含量显著性升高，较对照组升高了1.7倍，GSH含量同样有所升高。谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要过氧化物分解酶，它在细胞内能够清除过氧化物，使其分解成对机体无害的水，阻断脂质过氧化链锁反应，从而起到保护细胞膜结构和功能的作用。GSH也是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。所以，GSH-PX含量的显著升高与GSH含量的升高，再次表明山女鳟用中草药免疫增强剂对提高山女鳟的抗氧化能力有明显的作用。

表7山女鳟肝脏中T-SOD、血细胞中T-SOD的变化

由表7可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，山女鳟肝脏和血细胞中T-SOD的值均有显著性升高，分别提高28.3%和38.5%。而且对照组和实验组均为血细胞中T-SOD值高于肝脏中的数值。机体中，红细胞SOD活性是相对较重要的指标，这样的结果表明，山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟抗氧化活性有较好的促进作用。

4.山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟非特异性免疫功能能够的影响

表8山女鳟血清中NO、脾脏中NO的变化

由表8可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，山女鳟血清中NO和脾脏中NO有所升高或降低，但不明显和显著。说明山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟血清和脾脏中ON含量的影响并不显著。

表9山女鳟血清中溶菌酶、脾脏中溶菌酶的变化

由表9可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，山女鳟血清和脾脏中溶菌酶数值均有显著性升高，均提高20%。溶菌酶是鱼类血清中极为重要的非特异性免疫指标之一，溶菌酶主要针对革兰氏阳性菌发挥作用，对一些革兰氏阴性菌如伤寒杆菌、嗜水气单胞菌等也有作用，在防御病原入侵上起着重要作用。溶菌酶活力的增大，可增加溶菌酶溶解细菌的能力。表明山女鳟用中草药免疫增强剂对提高山女鳟溶菌酶活力，促进其对细菌的溶解具有一定效果。

表10山女鳟血清中补体C3和补体C4的变化

由表10可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，山女鳟血清中补体C3和补体C4均有显著性升高，其中补体C3提高45.8%、补体C4提高114.3%。补体系统广泛参与机体抗微生物防御反应以及免疫调节。补体C3是补体激活过程中起关键性作用的一种成分，C3的高低与总补体的含量相平行，故通过C3测定可反应血清总补体水平。补体C4则在经典途径的活化阶段起着重要作用。总之，补体C3，C4是体内一组具有酶原活性的球蛋白，它们在机体防御过程中可通过免疫复合物、调理吞噬细胞等机制对病原微生物进行清除及活化炎性细胞对靶细胞的杀伤作用。所以，山女鳟用中草药免疫增强剂对促进山女鳟补体系统的能力有一定的作用。

综上所述，此免疫增强剂对试验中山女鳟的抗氧化和免疫相关指标有促进作用，而对机体生理生化指标的影响并不显著，说明此方剂对山女鳟有免疫促进作用和生长促进作用的同时，对机体其它的功能基本无显著影响，是较为温和的免疫增强剂。其中免疫指标中MDA、CAT、GSH-PX和补体C4数值的升高特别明显，证明了此方剂对山女鳟的免疫功能的改善有特殊的作用。

Claims (3)

1.一种山女鳟用中草药免疫增强剂，其特征在于一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.2份~7.2份茵陈、4.7份~5.5份大黄、4.7份~5.5份黄芩、4.7份~5.5份黄柏、4.7份~5.5份生地、4.7份~5.5份熟地、4.7份~5.5份金银花、3.1份~3.7份连翘、3.1份~3.7份板兰根、2.3份~2.9份陈皮、2.3份~2.9份郁金和3.6份~4.4份甘草制备而成。

2.根据权利要求1所述的一种山女鳟用中草药免疫增强剂，其特征在于一种山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由6.5份茵陈、5.0份大黄、5.2份黄芩、5.0份黄柏、5.0份生地、5.3份熟地、4.8份金银花、3.5份连翘、3.3份板兰根、2.6份陈皮、2.5份郁金和4.0份甘草制备而成。

3.如权利要求1所述的一种山女鳟用中草药免疫增强剂的用途，其特征在于它是作为免疫增强剂用于增强山女鳟的机体免疫力。