CN103446250B

CN103446250B - 一种山女鳟用中草药免疫增强剂

Info

Publication number: CN103446250B
Application number: CN201310420539.8A
Authority: CN
Inventors: 王荻; 刘红柏
Original assignee: Heilongjiang River Fisheries Research Institute of Chinese Academy of Fishery Sciences
Current assignee: Heilongjiang River Fisheries Research Institute of Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority date: 2013-09-16
Filing date: 2013-09-16
Publication date: 2014-11-19
Anticipated expiration: 2033-09-16
Also published as: CN103446250A

Abstract

一种山女鳟用中草药免疫增强剂，本发明涉及一种鱼类用免疫添加剂，它是为了解决现有的鲑科鱼类免疫力低下、病害频繁发生、生长状况不良的技术问题。本发明的山女鳟用中草药免疫增强剂由1份秦皮、1.4～1.6份的连翘、0.9～1.1份的当归、1.4～1.6份的杜仲、1.4～1.6份的茯苓和1.4～1.6份黄芩制成。本发明的山女鳟用中草药免疫增强剂能有效抑制有害菌生长，显著提高肠道有益菌群数量及多样性，改善肠道功能，促进营养物质的吸收，进而提高机体免疫力及其抗病能力。它可作为免疫增强剂用于增强山女鳟的机体免疫力。

Description

一种山女鳟用中草药免疫增强剂

技术领域

本发明涉及一种鱼类用免疫添加剂，特别是涉及一种鲑科鱼类用中草药免疫增强剂。

背景技术

山女鳟(Oncorhyrchus masou masou)系鲑形目Salmoniformes、鲑科Salmonidae、大麻哈鱼属(Oncorhyr chus)，是日本樱鳟(马苏大麻哈鱼)(Oncorhyrchus masou)的遗传型陆封种。多生活在山区河流的中上游，在低于20℃的水温中生长栖息。

山女鳟是一种小型经济鱼类。被日本人民认为是最好吃的两种鲑科鱼类之一。该鱼不仅肉质细嫩，鱼味浓郁，在餐饮业上被看作是珍稀的鱼类食品。且因其体态优美、适于游钓而倍受青睐，自古就有“山女鱼”、“山溪女王”的美誉。

中国于1996年首次从日本引进山女鳟发眼卵，在黑龙江水产研究所渤海冷水鱼实验站孵化出鱼苗，经过近8年的养殖，已成功实施规模化养殖。随着人们生活水平及对高品质水产品需求的不断提升，山女鳟日渐成为鱼类食品中的上品，特别是食用鱼的开发以及作为游钓鱼种和增殖鱼种的开发，山女鳟的推广将会展现出越来越广阔的前景。

近年来，山女鳟的人工养殖发展迅速。但随着养殖业的发展，其病害爆发的类型及频次也逐渐增加，为产业的发展带来了极大的困扰和阻碍。但由于山女鳟开始规模化养殖的时间尚短，相关的基础研究特别是病害研究相对薄弱。因此疾病的诊断和治疗都较为困难，如何有效预防就成了疾病防控的重中之重。提高机体的非特异性免疫能力，可以有效抵抗疾病入侵，减少机体发病和死亡率，而许多中草药就具有这样的功效。同时，为了保障这一名优养殖新品种的健康绿色养殖，选用高效，价廉，天然无残留的中草药对其病害进行防治也是养殖业者的首选。

发明内容

本发明是为了解决现有的鲑科鱼类免疫力低下、病害频繁发生、生长状况不良的技术问题，而提供一种山女鳟用中草药免疫增强剂。

本发明的山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由1份秦皮、1.4～1.6份的连翘、0.9～1.1份的当归、1.4～1.6份的杜仲、1.4～1.6份的茯苓和1.4～1.6份黄芩制成。

上述的山女鳟用中草药免疫增强剂的制备方法按以下步骤进行：

一、按质量份数称取1份秦皮、1.4～1.6份的连翘、0.9～1.1份的当归、1.4～1.6份的杜仲、1.4～1.6份的茯苓和1.4～1.6份黄芩；

二、将步骤一称取的药材放入砂锅中，加水没过药材3～4厘米，浸泡30min，武火烧开，然后文火熬45min，倒出药汁A，再水没过药材2～2.5厘米，武火烧开，然后文火熬15min，过滤得到药汁B；

三、将药汁A和药汁B混合均匀，得到山女鳟用中草药免疫增强剂。

本发明的山女鳟用中草药免疫增强剂中的秦皮具有清热燥湿、清肝明目的功效；连翘具有较好的广谱抗菌作用；当归具有补血活血功效，能有效抗缺氧、调节机体免疫功能、抗癌、抑菌、抗动脉硬化；杜仲可补肝肾、强筋骨，有降血压，减少胆固醇的吸收等功效；茯苓能增强机体免疫功能，茯苓多糖有明显的抗肿瘤及保肝脏作用；黄芩具有清热燥湿及解毒功效，其临床应用抗菌比黄连还好，且不产生抗药性。

本发明的山女鳟用中草药免疫增强剂通过秦皮、连翘、当归、杜仲、茯苓和黄芩的配合，具有如下特点：1、能显著提高鱼体增重率，缩短养成时间，降低饲养成本，提高养殖价值；2、能有效抑制有害菌生长，显著提高肠道有益菌群数量及多样性，改善肠道功能，促进营养物质的吸收，进而提高机体免疫力及其抗病能力；3、不易促使药物作用菌群产生抗药性；4、原料来源稳定，价廉高效，制作简单。因而该中草药免疫增强剂具有抑菌促生长，提高机体免疫力的双重效果，且天然无毒无残留，可用于山女鳟养殖过程中常见病害的防治。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式的山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由1份秦皮、1.4～1.6份的连翘、0.9～1.1份的当归、1.4～1.6份的杜仲、1.4～1.6份的茯苓和1.4～1.6份黄芩制成。

本实用新型的山女鳟用中草药免疫增强剂具有如下特点：1、能显著提高鱼体增重率，缩短养成时间，降低饲养成本，提高养殖价值；2、能有效抑制有害菌生长，显著提高肠道有益菌群数量及多样性，改善肠道功能，促进营养物质的吸收，进而提高机体免疫力及其抗病能力；3、不易促使药物作用菌群产生抗药性；4、原料来源稳定，价廉高效，制作简单。该山女鳟用中草药免疫增强剂可使而山女鳟的肠道内增加Pseudomonas sp、Psychrobacter sp.、Macrococcus sp.和Microbacterium sp.等有益细菌，而抑制有害菌，能有效改善机体的消化功能，促进营养物质的吸收，进而提高机体免疫力及其抗病能力，且天然无毒无残留，可用于山女鳟养殖过程中常见病害的防治。

具体实施方式二：本实施方式的山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由1份秦皮、1.5份的连翘、0.9份的当归、1.6份的杜仲、1.5份的茯苓和1.5份的黄芩制成。

具体实施方式三：本实施方式的山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由1份秦皮、1.6份的连翘、0.9份的当归、1.6份的杜仲、1.6份的茯苓和1.6份的黄芩制成。

具体实施方式四：本实施方式的山女鳟用中草药免疫增强剂的用途是它作为免疫增强剂用于增强山女鳟的机体免疫力。

本实施方式的山女鳟用中草药免疫增强剂成分简单，其作用是抑菌促生长，提高机体免疫力。由于该增强剂对有害菌的有效抑制作用，导致肠道内有益菌群在竞争中处于优势地位，可以更好的发挥作用，改善肠道功能，促进营养物质的吸收，进而提高机体免疫力及其抗病能力。

用以下试验验证本发明的有益效果：

试验1：本试验的山女鳟用中草药免疫增强剂由20g秦皮，30g连翘，20g当归，30g杜仲，30g茯苓和30g黄芩制成。

一、称取20g秦皮，30g连翘，20g当归，30g杜仲，30g茯苓和30g黄芩；

二、将步骤一称取的药材放入砂锅中，加水没过药材3厘米，浸泡30min，武火烧开，然后文火熬45min，倒出药汁A，再水没过药材2厘米，武火烧开，然后文火熬15min，过滤得到药汁B；

三、将药汁A和药汁B混合均匀，得到山女鳟用中草药免疫增强剂。将得到的山女鳟用中草药免疫增强剂添加于50kg鱼种饲料中混合均匀，得到药饵。

随机选取健康非免疫状态下1龄山女鳟于室内水族箱(0.90m×0.50m×0.45m)水温14～16℃下预饲两周，每组两个重复，每个重复50尾鱼，保持各水族箱养殖条件均一，每天按鱼体重的1.0％投喂全价基础饲料。预饲结束后，每天按照鱼体重1.5％投喂药饵，连续给药饵30天，同时设立投喂等比例全价基础饲料的对照组，停食一天后，自实验鱼尾动(静)脉采血，4℃下以3500r/min离心20min，取血浆。并解剖取鱼肝、脾等组

织样品。将血清、血细胞及组织样品立即冻存于-80℃冰箱保存，进行生长、生理生化和

免疫相关指标的测试，结果如下：

1.秦黄复方对山女鳟生长的影响

表1混饲中草药后山女鳟的增重情况

注:1)增重率＝(末重-初始重)/初始重×100％；

注：表中同一列相同字母表示无显著差异(P>0.05)，相邻字母表示差异显著(P<0.05)，下同。

由表1可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组增重率显著高于对照组。表明，山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟增长有较好的促进作用。

表2混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后山女鳟肠道细菌数量变化

由表2可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，混饲组实验鱼前肠、中肠、后肠及全肠细菌数量均显著增加，而肠道菌群多样性的增加能有效改善机体的消化功能，促进鱼体生长。

表3混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后山女鳟肠道细菌数量变化(CFU/g)

注：金黄杆菌属Chryseobacterium sp.(Chr)；泛菌属Pantoea sp.(Pan)；肠杆菌属Enterobactersp.(Ent)；克吕沃尔菌Kluyvera sp.(Klu)；芽孢杆菌属Bacillus sp.(Bac)；假单胞菌属Pseudomonas sp.(Pse)；罗尔斯通菌属Ralstonia sp.(Ral)。

由表3可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验鱼肠道各部分细菌类群数较对照组均有所增加，增加了对照组所没有检测到的Pseudomonas sp、Psychrobacter sp.、Macrococcus sp.和Microbacterium sp.细菌。且鱼类吸收营养物质的主要部位——前肠中的细菌群落多样性显著增加，应有助于营养物质(特别是脂肪，因为有胃鱼类前肠具有吸收脂肪的超微结构)的消化吸收。

2.山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟抗氧化功能的影响

表4混饲山女鳟用中草药免疫增强剂的山女鳟肝脏中MDA、CAT的变化

由表4可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肝脏中MDA含量显著的低于对照组，表明山女鳟用中草药免疫增强剂可以降低氧自由基引起的脂质过氧化损伤。而实验组中过氧化氢酶(CAT)活性显著高于对照组。由于CAT是体内的一种主要抗氧化酶，能清除活性氧自由基，保护动物免受自由基的伤害，从而维持机体正常的机能。这表明山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟的抗氧化能力具有较好的促进作用。

表5混饲山女鳟用中草药免疫增强剂的山女鳟肝脏中GSH、GSH-PX的变化

由表5可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肝脏中GSH-PX活性显著性升高，GSH含量同样有所升高。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)是机体内广泛存在的一种重要过氧化物分解酶，它在细胞内能够清除过氧化物，使其分解成对机体无害的水，阻断脂质过氧化链锁反应，从而起到保护细胞膜结构和功能的作用。GSH也是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。所以，GSH-PX活性的显著升高与GSH含量的升高，再次表明山女鳟用中草药免疫增强剂对提高山女鳟的抗氧化能力有明显的作用。

表6混饲山女鳟用中草药免疫增强剂的山女鳟肝脏及血细胞中T-SOD的变化

由表6可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟肝脏和血细胞中T-SOD活性均有显著性升高。机体中，红细胞SOD活性是相对较重要的指标，这样的结果表明，山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟抗氧化活性有较好的促进作用。3.山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟非特异性免疫功能的影响

表7混饲山女鳟用中草药免疫增强剂的山女鳟血清及脾脏中溶菌酶活性的变化

由表7可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，血清和脾脏中溶菌酶活性均有显著性提高。溶菌酶是鱼类血清中极为重要的非特异性免疫指标之一，主要针对革兰氏阳性菌发挥作用，对一些革兰氏阴性菌如伤寒杆菌、嗜水气单胞菌等也有作用，在防御病原入侵上起着重要作用。溶菌酶活力的增大，可增加溶菌酶溶解细菌的能力。表明山女鳟用中草药免疫增强剂对提高山女鳟溶菌酶活力，促进其对细菌的溶解具有一定效果。

表8混饲山女鳟用中草药免疫增强剂的山女鳟血清中补体C3和补体C4的变化

由表8可见，混饲山女鳟用中草药免疫增强剂后，实验组山女鳟血清中补体C3和补体C4含量均有显著升高。补体系统广泛参与机体抗微生物防御反应以及免疫调节。补体C3是补体激活过程中起关键性作用的一种成分，C3的高低与总补体的含量相平行，故通过C3测定可反应血清总补体水平。补体C4则在经典途径的活化阶段起着重要作用。总之，补体C3，C4是体内一组具有酶原活性的球蛋白，它们在机体防御过程中可通过免疫复合物、调理吞噬细胞等机制对病原微生物进行清除及活化炎性细胞对靶细胞的杀伤作用。所以，山女鳟用中草药免疫增强剂对促进山女鳟补体系统的能力有一定的促进作用。

综上所述，山女鳟用中草药免疫增强剂对山女鳟的生长有较好的促进作用，且对其抗氧化能力和免疫相关活性物质含量及酶活性有一定的促进作用，而对机体生理生化指标的影响并不显著，说明此方剂对提高山女鳟免疫能力及促进生长的同时，对机体其它的功能基本无显著影响，是较为温和的高效免疫增强剂。

Claims

1.山女鳟用中草药免疫增强剂，其特征在于它是按质量份数由1份秦皮、1.4～1.6份的连翘、0.9～1.1份的当归、1.4～1.6份的杜仲、1.4～1.6份的茯苓和1.4～1.6份黄芩制成。

2.根据权利要求1所述的山女鳟用中草药免疫增强剂，其特征在于它是按质量份数由1份秦皮、1.5份的连翘、0.9份的当归、1.6份的杜仲、1.5份的茯苓和1.5份的黄芩制成。

3.根据权利要求1所述的山女鳟用中草药免疫增强剂，其特征在于山女鳟用中草药免疫增强剂按质量份数由1份秦皮、1.6份的连翘、0.9份的当归、1.6份的杜仲、1.6份的茯苓和1.6份的黄芩制成。