CN103060205A - 活性霉菌制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种活性霉菌制剂及其制备方法和用途，具体为豆腐乳制作过程中由白坯制备毛坯的过程中提供一种方便易操作的菌剂。该霉菌活菌制剂由发酵罐液态培养雅致放射毛霉后板框过滤获得菌体，所得菌体与玉米淀粉或可溶性淀粉和大豆粉、甘油按一定比例复配的助干保护剂组成，能够快速在豆腐表面增殖长成大量菌丝覆盖豆腐白坯形成毛坯，质地致密。在腐乳的制作过程中使用该菌剂，其生长周期短，仅需36h-48h便可成为优势菌群达到最大菌丝长度且覆盖致密，防止杂菌的侵入，且该菌剂的制作方法简单，易于随时取出，单位菌剂质量中的菌群含量大，活性高。
Description
技术领域
本发明涉及微生物菌剂的制备，特别涉及一种活性霉菌制剂及其制备方法和应用，属于应用微生物领域。
背景技术
霉菌在食品加工工业中用途十分广泛，许多酿造发酵食品、食品原料的制造都是在霉菌的参与下生产加工出来的，如腐乳、豆豉、酱油、柠檬酸等，近期研究证明毛霉可应用于干酪等新型食品的生产。
由于目前腐乳生产,虽然绝大多数已改传统的自然发酵工艺为纯菌种发酵工艺,但由于生产中仍然采用敞开式自然环境培养,外界的微生物难免侵入,加上配料中也带有微生物,所以豆腐乳酿造过程中控制毛坯杂菌滋生，毛霉快速生长为优势菌种至关重要。
目前直投式活菌制剂已广泛应用于农业、食品、医药、卫生等领域，公开号CN1602764的专利公开了一种用于生产泡菜的直投式复合菌粉产品及生产方法，公开号CN101486987的专利公开了一种双歧杆菌冻干菌粉的制备方法，但这些都是关于细菌活菌制剂的研究，关于活性霉菌制剂的研究尚未有较多的报道。本专利从生产腐乳的优质菌种雅致放射毛霉入手，通过对雅致放射毛霉的生长特性、发酵条件以及发酵产物的探讨，找出了雅致放射毛霉的最佳发酵条件，通过液体培养技术制得了雅致放射毛霉（Actinomucor elegans）活性菌粉制剂。
此活性霉菌制剂可以直接投入培养基中扩大培养再应用于生产实践中，也可以直投运用到腐乳实验室规模的小量实验。
发明内容
本发明的目的是提供一种活性霉菌制剂及其制备方法，具体为腐乳制备工艺中毛坯制备的过程提供活菌制剂，为解决毛霉发酵白坯制作毛坯提供一种高速、高效、方便的活性霉菌制剂。
本发明的另一目的是将活性霉菌制剂应用到工厂腐乳生产和实验室腐乳方面实验研究中。
本发明目的是通过以下技术方案实现的：
本发明所述活性霉菌制剂由菌体和助干保护剂组成，通过下述方法制备：
（1）菌种发酵：将霉菌种子液按照3%-5%的接种量接种于10L发酵罐中，在温度为29℃，通风比为1:0.8-1:1.2，发酵48h后，发酵液通过100-300目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂由可溶性淀粉或玉米淀粉的其中一种与大豆粉、甘油进行复配，复配质量比为1:0.1:0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经过121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥处理：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，按照每百毫升培养基发酵获得的湿菌体与50mL助干保护溶液的比例混合后，鼓风干燥50℃-90℃至总水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存。
所述发酵培养基组成：以重量体积百分比计，14-20g/L麦芽糖，10-16g/L牛肉膏，0.8-1.2g/L七水硫酸镁，0.8g/L-1.2g/L磷酸二氢钾，0.6-1.0g/L二水氯化钙，0.001g/L-0.002g/L VB1，初始pH为5。
所述菌种在发酵培养前还经过一级种子培养，一级种子培养基成分与发酵培养基相同，将培养基每100mL分装于500mL三角瓶中，在121℃条件下灭菌20min，接种孢子浓度为107个/mL的孢子液，接种量为1%-10%，140r/min-220r/min振荡，26℃-34℃培养36-40h。
本发明所用霉菌为雅致放射毛霉（Actinomucor elegans），购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC3.2468。
一种活性霉菌制剂，其是由以上之任意方法制备获得。
本发明所述活性霉菌制剂可应用于腐乳加工生产中。
有益效果
本发明具有以下优点：1）能够使得毛霉在白坯上快速生长成为优势菌种，活力高、周期短，达到条件适宜情况仅需要36-48h；2）直投式操作方便，适合实验室定量培养操作，方便定量；3）高密度培养菌体制作菌粉，可以实现产业化，使得发酵用菌方便贮藏随时取用。
附图说明
图1为豆腐白坯接种活性霉菌制剂0h状态图；
图2为豆腐白坯接种活性霉菌制剂24h状态图；
图3为豆腐白坯接种活性霉菌制剂48h形成毛坯状态图。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明产品及其制备方法。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
实施例1：活性霉菌制剂由下述方法制备：
（1）接种与发酵条件：孢子液接种量为1%，200r/min振荡，26℃培养40h后按照3%-5%的接种量接种于10L发酵罐中，发酵培养基成分与一级种子培养基的成分相同，在温度为29℃，通风比为1:1，培养48h后，发酵液过200目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体。
（2）助干保护剂处理：助干保护剂选用可溶性淀粉、大豆粉、甘油进行复配，复配比例为1:0.1：0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥过程：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，按照每百毫升培养基发酵获得的湿菌体与50mL助干保护溶液的比例混合后，鼓风干燥50℃至水分含量为20%-23%，得产品1；
所述发酵培养基组成：以重量体积百分比计，14-20g/L麦芽糖，10-16g/L牛肉膏，0.8-1.2g/L七水硫酸镁，0.8g/L-1.2g/L磷酸二氢钾，0.6-1.0g/L二水氯化钙，0.001g/L-0.002g/L VB1，初始pH为5。
实施例2：活性霉菌制剂由下述方法制备：
（1）接种与发酵条件：孢子液接种量为5%，220r/min振荡，29℃培养36h后按照3%的接种量接种于10L发酵罐中，发酵培养基成分与一级种子培养基的成分相同，在温度为29℃，通风比为1:0.8，培养48h后，发酵液过300目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂选用可溶性淀粉，大豆粉，甘油进行复配，复配比例为1:0.1：0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥过程：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，按照每百毫升培养基发酵获得的湿菌体与50mL助干保护溶液的比例混合后，鼓风干燥60℃至水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存，得产品2。
发酵培养基组成与实施例1基本相同。
实施例3：活性霉菌制剂由下述方法制备：
（1）接种与发酵条件：孢子液接种量为10%，200r/min振荡，29℃培养36-40h后按照3%-5%的接种量接种于10L发酵罐中，发酵培养基成分与一级种子培养基的成分相同，在温度为29℃，通风比为1:1.2，培养48h后，发酵液过300目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂选用可溶性淀粉，大豆粉，甘油中进行复配，121℃，20min灭菌处理待用，水经121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥过程：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，按照每百毫升培养基发酵获得的湿菌体与50mL助干保护溶液的比例混合后，鼓风干燥70℃至水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存，得产品3。
发酵培养基组成与实施例1基本相同。
实施例4：活性霉菌制剂由下述方法制备：
（1）接种与发酵条件：孢子液接种量为1%-10%，200r/min振荡，29℃培养36-40h后按照5%的接种量接种于10L发酵罐中，发酵培养基成分与一级种子培养基的成分相同，在温度为29℃，通风比为1:1，培养48h后，发酵液过200目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂选用玉米淀粉，大豆粉，甘油进行复配，复配比例为1:0.1：0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥过程：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，再与上述发酵所得湿菌体混合，鼓风干燥80℃至水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存，得产品4。
发酵培养基组成与实施例1基本相同。
实施例5：活性霉菌制剂由下述方法制备：
（1）接种与发酵条件：107孢子液接种量为1%-10%，140r/min-220r/min振荡，26℃-34℃培养36-40h后按照3%-5%的接种量接种于10L发酵罐中，发酵培养基成分与一级种子培养基的成分相同，在温度为29℃，通风比为1:0.8，培养48h后，发酵液过200目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂选用玉米淀粉，大豆粉，甘油进行复配，复配比例为1:0.1：0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥过程：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，再与上述发酵所得湿菌体混合，鼓风干燥90℃至水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存，得产品5。
发酵培养基组成与实施例1基本相同。
实施例6：活性霉菌制剂由下述方法制备：
（1）接种与发酵条件：孢子液接种量为1%-10%，180r/min振荡，30℃培养36-40h后按照3%的接种量接种于10L发酵罐中，发酵培养基成分与一级种子培养基的成分相同，在温度为29℃，通风比为1:1.2，培养48h后，发酵液过200目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂选用可溶性淀粉，大豆粉，甘油中进行复配，复配比例为1:0.1：0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥过程：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，再与上述发酵所得湿菌体混合，鼓风干燥60℃至水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存，得产品6。
表1：产品菌体酶活与应用于毛坯制作实验生长效果
| 样品编号 | TTC脱氢酶活 | 24h菌丝长度（mm） | 48h菌丝长度（mm） |
| 1 | 535pKat/g | 2.56 | 8.18 |
| 2 | 389pKat/g | 2.88 | 8.43 |
| 3 | 589pKat/g | 2.78 | 12.99 |
| 4 | 576pKat/g | 2.98 | 12.80 |
| 5 | 632pKat/g | 3.07 | 13.79 |
| 6 | 428pKat/g | 2.17 | 9.41 |
Claims (5)
1.一种活性霉菌制剂，由菌体和助干保护剂组成，其特征在于，由下述方法制备：
（1）菌种发酵：将霉菌种子液按照3%-5%的接种量接种于10L发酵罐中，在温度为29℃，通风比为1:0.8-1:1.2，发酵48h后，发酵液通过100-300目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂由可溶性淀粉或玉米淀粉的其中一种与大豆粉、甘油进行复配，复配质量比为1:0.1:0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经过121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥处理：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，按照每百毫升培养基发酵获得的湿菌体与50mL助干保护溶液的比例混合后，鼓风干燥50℃-90℃至总水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存。
2.根据权利要求1所述的一种活性霉菌制剂，其特征在于，所述发酵培养基组成为：以重量体积百分比计，14-20g/L麦芽糖，10-16g/L牛肉膏，0.8-1.2g/L七水硫酸镁，0.8g/L-1.2g/L磷酸二氢钾，0.6-1.0g/L二水氯化钙，0.001g/L-0.002g/L VB1，初始pH为5。
3.根据权利要求1所述的一种活性霉菌制剂，其特征在于，所述菌种在发酵培养前还经过一级种子培养，一级种子培养基组成与发酵培养基相同，将培养基每100mL分装于500mL三角瓶中，在121℃条件下灭菌20min，接种孢子浓度为107个/mL的孢子液，接种量为1%-10%，140r/min-220r/min振荡，26℃-34℃培养36-40h。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种活性霉菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）菌种发酵：将霉菌种子液按照3%-5%的接种量接种于10L发酵罐中，在温度为29℃，通风比为1:0.8-1:1.2，发酵48h后，发酵液通过100-300目的尼龙滤布板框真空抽滤后获得湿菌体；
（2）助干保护剂处理：助干保护剂由可溶性淀粉或玉米淀粉的其中一种与大豆粉、甘油进行复配，复配质量比为1:0.1:0.02，121℃，20min灭菌处理待用，水经过121℃，20min灭菌处理，待用；
（3）干燥处理：上述灭菌的水与助干保护剂按照质量比1:1混合成助干保护溶液，按照每百毫升培养基发酵获得的湿菌体与50mL助干保护溶液的比例混合后，鼓风干燥50℃-90℃至总水分含量为20%-23%；
（4）粉碎处理：干燥后的霉菌制剂经高速粉碎机粉碎后过60目筛，装袋低温保存。
5.根据权利要求1-3任一所述的一种活性霉菌制剂在腐乳加工生产中的应用。
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