CN103045493A - 一种毕赤酵母菌及其在饲料发酵中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种毕赤酵母菌（Pichia jadinii）Hzd-pj-003，已于2012年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.6930，它可以用在发酵饲料以及微生态制剂，是一种极具应用价值的益生菌。本发明的优势是：毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003有很强的耐酸性，可以在pH值为2的条件下缓慢生长；可以产生高含量的乙酸乙酯，具有独特的苹果香气，用在发酵饲料中可以增加适口性，提高采食量；用于发酵饲料中使发酵饲料的蛋白含量及水解酶类大大增加，促进动物消化吸收，提高饲料利用率，促进动物生长。
Description
技术领域
本发明涉及一种菌株，特别涉及一种用于发酵饲料的毕赤酵母菌。
背景技术
酵母菌是人类利用最早、利用数量最大的一种单细胞微生物，是理想的营养源和食品原料，也是优质蛋白饲料源。酵母菌属于真核微生物，不是人和动物肠道的固有菌，但可以产生多种消化酶类，可以在消化道内代谢。作为益生菌使用的酵母则是以活细胞的形式，通常为酵母培养物。在饲料工业应用中，目前使用的菌种主要是芽孢杆菌和乳酸菌及其混合物。但存在抗生素的使用受到限制的问题，酵母菌既不会干扰抗生素的作用，又可以增加饲料的稳定性，作为消化剂还有助于提高营养物质的利用，因此酵母菌在饲料工业中有很高的应用价值。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一株用于发酵饲料的毕赤酵母菌。该毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003，已于2012年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏号为：CGMCC No.6930，它可以用在发酵饲料以及微生态制剂，是一种极具应用价值的益生菌。本发明通过试验表明：毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003可产生多种代谢产物，发酵液具有浓郁的苹果香气，从而增加发酵饲料的适口性，提高采食量，其中含多种代谢产物可以促进猪的消化，提高饲料利用率，促进猪的快速生长。
本发明的优势是：毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003有很强的耐酸性，可以在pH值为2的条件下缓慢生长；可以产生高含量的乙酸乙酯，具有独特的苹果香气，用在发酵饲料中可以增加适口性，提高采食量；用于发酵饲料中使发酵饲料的蛋白含量及水解酶类大大增加，促进动物消化吸收，提高饲料利用率，促进动物生长。
附图说明
本发明有如下附图：
图1 毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003菌落形态照片；
图2 毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003显微镜下形态图；
图3 毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003生长曲线图；
图4 毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003 26SrDNA D1/D2区域序列通过BLAST对比构建的系统进化树；
图5 毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003 26SrDNA D1/D2区域电泳图。
具体实施方式
下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1
毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003的获得及其培养条件检测
毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003的筛选与鉴定
1）毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003的筛选
从山东平度南村镇农户家堆积的陈年花生壳中，选取表面有些发酵迹象的作为样本，无菌水浸泡，采用梯度稀释涂平板的分离法，将花生壳溶液梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5后，各吸取0.1mL涂于PDA培养基上对菌株进行分离，28℃恒温培养箱中培养2-3 d，挑取PDA培养基上菌落形态为乳白色、光滑、菌落直径为3～5mm左右的单菌落反复进行划线分离直至纯化，如图1所示。
所述的PDA培养基配方如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL。将200g马铃薯去皮切碎，煮烂后过滤得到马铃薯汁，加入20g葡萄糖，加入琼脂15～20g，加水至1000mL，121℃灭菌20min。
2）菌种的鉴定
菌株纯化后PDA培养基平板上菌落形态为乳白色、光滑、单菌落直径为3～5mm左右的初筛菌株进行鉴定。
菌株细胞为真核细胞，单个菌体呈椭球状，从显微镜下清晰可见细胞核和液泡，有的处于分裂期细胞有两个细胞核，有的能看到出芽生殖，如图2所示。
培养特征
固体培养特征：菌株在28℃培养条件下连续培养2 d，在PDA固体培养基表面形成直径3-5mm左右的光滑乳白色菌落。
所述的PDA固体培养基配方如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL。
将200g马铃薯去皮切碎，煮烂后过滤得到马铃薯汁，加入20g葡萄糖，加入琼脂15-20g，加水至1000mL，121℃灭菌20min。
液体培养特征：从PDA培养基上挑取单菌落于澄清的YPD液体培养基中，30℃、220r/min振荡培养。菌株在液体培养基中生长后期出现培养基浑浊现象。
所述的YPD培养基配方如下: 酵母膏5g/L，蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，丙酸钠2.5g/L，pH 6.8。115℃灭菌30min。
毕赤酵母菌Hzd-pj-003的26SrDNA D1/D2区域序列如SEQ ID No.1所示。将所测26SrDNA D1/D2区域序列通过BLAST对比，通过Mega软件构建系统进化树如图4所示，鉴定其与毕赤酵母菌同源性最接近，因此认定此酵母菌为毕赤酵母菌。
根据图3可看出，毕赤酵母菌Hzd-pj-003在6h后开始进入对数生长期，6-24h为对数生长期，24-48h为稳定期。48h后为衰败期。24h时活菌数为4.6×109个/ml。
代谢产物分析
酵母菌Hzd-pj-003在发酵培养基中培养24h后，测定各种风味物质含量，结果如表1。试验结果表明风味物质中乙酸乙酯、异戊醇的含量较高，毕赤酵母菌Hzd-pj-003在发酵后能产生独特的苹果香气，有利于提高畜禽的采食量。
表1毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵风味物质含量分析
实施例2
酵母菌Hzd-pj-003的耐酸试验
毕赤酵母菌菌液的制备：将保藏菌种接种于装有70～80mL固体斜面PDA培养基的250mL茄子瓶中，30℃恒温培养箱中培养3d；将茄子瓶中的长好的菌用无菌水冲下，并反复吹吸使菌和无菌水混合均匀制得菌悬液，按3%的接种量接入装有300mL YPD培养基的500mL三角瓶种，30℃恒温摇床培养24h，转速220rpm；按3%接种量接入装有300mL发酵培养基的500mL三角瓶中，30℃恒温摇床培养24h，转速220rpm；每隔4h测定发酵培养基的OD660值，结果如表2所示。试验结果表明酵母菌Hzd-pj-003在pH值为2的时候仍能缓慢生长，具有很强的耐酸性，因此能较好的适应发酵产酸后的环境。
所述的PDA培养基配方如下:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL。
将200g马铃薯去皮切碎，煮烂后过滤得到马铃薯汁，加入20g葡萄糖，加入琼脂15～20g，加水至1000mL，121℃灭菌20min。
所述的YPD培养基配方如下: 酵母膏5g/L，蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，丙酸钠2.5g/L，pH 6.8。115℃灭菌30min。
所述的发酵培养基：葡萄糖6％，玉米浆1%，酵母粉0.25%，大豆蛋白胨0.5%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.1%，pH 6.0～6.2，121℃灭菌20min
表2毕赤酵母菌Hzd-pj-003耐酸性实验
实施例3
毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003应用于发酵饲料
从斜面培养基上挑取单菌落于装有300ml种子培养基的500ml三角瓶中，30℃、220r/min振荡培养，当液体种子培养基中的OD660值达到1.4时，无菌条件下按3%～5%的接种量接入装有300ml发酵培养基的500ml三角瓶中，30℃、220r/min振荡培养24h，即制备完成枯草芽孢杆菌Hzd-bs-001发酵液。
所述的种子培养基（YPD培养基）配方如下: 酵母膏5g/L，蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，丙酸钠2.5g/L，pH 6.8。115℃灭菌30min。
所述的发酵培养基配方如下：葡萄糖6％，玉米浆1%，酵母粉0.25%，大豆蛋白胨0.5%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.1%，pH 6.0-6.2，121℃灭菌20min。
发酵饲料原料配比（1kg）：花生壳粉0.351份，次粉0.032份，麸皮0.02份，虫沙0.054份，啤酒糟0.5份，预混料0.02份，菌液0.023份。
所述预混料的组成和配比如下：石粉452份；沸石粉330份；复合多维24份；磷酸氢钙50份；喷浆玉米皮50份；食盐90份；香味剂2份；甜味剂2份。
所述的所述的复合多维的配比如下：
维生素A 20000IU/kg 维生素D3 10000IU/kg
维生素E 110mg/kg 维生素K3 10mg/kg
维生素B1 8mg/kg 维生素B2 12mg/kg
维生素B6 7mg/kg 维生素B12 0.2mg/kg
生物素 25mg/kg 烟酸 120mg/kg
泛酸钙 60mg/kg 叶酸 6mg/kg
铜 3g/kg 铁 3.5g/kg 锰 2g/kg
锌 3g/kg 碘 9mg/kg 余量为啤酒酵母粉；
对照组（CK）加入50ml无菌水，试验组加入50ml酵母菌Hzd-pj-003发酵液，混合均匀后放入自封袋中，扎紧，放入30摄氏度保温箱，5d后检测蛋白含量和水解酶类的含量变化。
测定结果：
表3 蛋白含量变化
表4 水解酶类变化
试验表明，发酵饲料中加入酵母菌Hzd-pj-003，使发酵饲料中的水解蛋白酶和淀粉酶的活性大大提高，水溶性蛋白含量显著提高。
测定方法
蛋白质含量测定
将烘干样品粉碎过筛，称取0.5000g于小三角瓶中，加蒸馏水10mL，在水浴锅中加热至微沸，维持15min，加饱和CaCl2 1mL，100 g/LKH2PO4 2 mL，待出现白色絮凝物后，充分摇匀过滤，再用10mL蒸馏水洗涤滤纸上的样品，直至洗出液无NH4 +(用钠氏试剂检验)，将滤纸连同滤物放入消煮管中，100℃烘干后各加入8mL浓硫酸，以小漏斗盖住消煮管口，120℃碳化12h后，用浓硫酸-过氧化氢法消煮后，定容至100mL，选择适宜的稀释倍数采用靛酚蓝比色法测定样品中NH4-N含量，再乘以系数6.25换算为纯蛋白质含量。
活性肽含量测定
采用考马斯亮蓝比色法测定样品中活性肽含量。
水溶性蛋白质含量测定
称样品0.500g于小三角瓶中，加蒸馏水10mL，加盖小漏斗后在水浴锅上沸浴，维持15 min，充分摇匀后过滤，将滤液稀释适宜倍数后，采用考马斯亮蓝比色法测定其水溶性蛋白的含量。
蛋白酶活力测定
称烘干样品1.000g于三角瓶中，加pH 7.2磷酸缓冲液20mL，40℃水浴保温60 min，过滤后选择适宜的稀释倍数采用福林法测定蛋白酶的活性。将1g酶粉在40℃下每1 min水解干酪素产生1 μg酪氨酸的酶活定义为1U。
纤维素酶活力测定
称烘干样品0.500g于三角瓶中，加蒸馏水20 mL，40℃水浴保温45min，过滤后选择合适的稀释倍数用羧甲基纤维素纳（CMC）做底物，用DNS（3,5-二硝基水杨酸）法测定还原糖含量，计算纤维素酶活力。将在pH 5.0，40℃下，每1g纤维素酶曲在1 min内水解CMC，生成1μg葡萄糖的酶活性定义为1U。
淀粉酶活力测定
用0.1M醋酸缓冲溶液（pH 5.0）配制1.0%（w/v）可溶性淀粉溶液作为淀粉酶活力测定的反应底物。0.5ml粗酶液与4.5ml底物混合均匀，50℃水浴保温30min后放入沸水浴中终止反应，反应时间5min。将粗酶液置于沸水浴中灭活5min作为对照组。释放出的还原糖用Nelson-Somogyi法测定。在该测试条件下，每分钟水解可溶性淀粉释放出相当于1.0M葡萄糖含量时所需的酶量为1个酶活力单位（U/mg）。
实施例4
从斜面培养基上挑取单菌落于装有300ml的实施例1中的种子培养基的三角瓶中，30℃、220r/min振荡培养。当液体种子培养基中的OD660值达到1.4时，在无菌条件下，按3%的量接种于实施例1中的液体发酵培养基中。30℃、220r/min振荡培养24h后进行应用试验。
毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵液在育肥猪中的应用试验
试验时间：2011年8月1日至2011年11月1日，共计90天。
试验猪的来源和分组：青岛双河生猪专业合作社
地址：即墨市龙泉镇东河北村
对照组采用市场上购买的全价饲料，试验组为相同的全价配合饲料加入一定量的毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵液。
试验结果：
表5：毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵液在育肥猪中的应用试验
采用自动饮食机供食物。试验组共计用全价配合饲料1540kg，料肉比为：2.6:1，毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵液共计8100ml。对照组共计用1500kg全价饲料，料肉比为：2.8:1。由此可见，通过配合毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵液的使用，刺激了猪的味蕾，增大采食量，加速生长，同时降低了料肉比，减小了养殖成本。
序列表
Claims (2)
1.一种毕赤酵母（Pichia jadinii），其特征在于所述毕赤酵母（Pichia jadinii）为毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003，保藏号为：CGMCC No.6930。
2.根据权利要求1所述的毕赤酵母（Pichia jadinii）Hzd-pj-003在发酵饲料中的应用。
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| CN 201210594653 CN103045493A (zh) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | 一种毕赤酵母菌及其在饲料发酵中的应用 |
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104560743A (zh) * | 2013-10-25 | 2015-04-29 | 武汉乐阳生物科技有限公司 | 一种粉状毕赤酵母高密度发酵工艺方法 |
| CN105941828A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-09-21 | 内蒙古工业大学 | 混合菌种联合发酵生产复合饲料的方法 |
| CN107022498A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-08-08 | 北京科技大学 | 提高奶牛产奶量和牛乳品质的酵母益生菌制剂及制备方法 |
| CN109652323A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-04-19 | 广东省九江酒厂有限公司 | 产酯酵母jjjc-2的扩大培养方法 |
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2012
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104560743A (zh) * | 2013-10-25 | 2015-04-29 | 武汉乐阳生物科技有限公司 | 一种粉状毕赤酵母高密度发酵工艺方法 |
| CN104560743B (zh) * | 2013-10-25 | 2018-09-11 | 武汉光华时代生物科技有限公司 | 一种粉状毕赤酵母高密度发酵工艺方法 |
| CN105941828A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-09-21 | 内蒙古工业大学 | 混合菌种联合发酵生产复合饲料的方法 |
| CN107022498A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-08-08 | 北京科技大学 | 提高奶牛产奶量和牛乳品质的酵母益生菌制剂及制备方法 |
| CN107022498B (zh) * | 2017-04-27 | 2020-09-11 | 北京科技大学 | 提高奶牛产奶量和牛乳品质的酵母益生菌制剂及制备方法 |
| CN109652323A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-04-19 | 广东省九江酒厂有限公司 | 产酯酵母jjjc-2的扩大培养方法 |
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