CN101690540B

CN101690540B - 一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法

Info

Publication number: CN101690540B
Application number: CN200910193101A
Authority: CN
Inventors: 叶明强; 邝哲师; 罗国庆; 廖森泰; 肖更生; 徐志宏; 赵祥杰; 潘木水
Original assignee: Agricultural Biotechnology Research Institute Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; GUANGDONG BOSUN HEALTH FOOD RESEARCH DEVELOPMENT CENTER; Sericulture and Agri Food Research Institute GAAS
Current assignee: Agricultural Biotechnology Research Institute Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; GUANGDONG BOSUN HEALTH FOOD RESEARCH DEVELOPMENT CENTER; Sericulture and Agri Food Research Institute GAAS
Priority date: 2009-10-14
Filing date: 2009-10-14
Publication date: 2012-10-24
Anticipated expiration: 2029-10-14
Also published as: CN101690540A

Abstract

本发明公开了一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.取豆粕、花生饼和蚕蛹混合，然后加水得混合发酵原料；b.取菌种接种到步骤a中混合发酵原料中，再加入碳源混合均匀，在32～38℃中发酵培养48～72小时，然后干燥得到复合蛋白饲料。该方法进一步促进豆粕、花生饼和蚕蛹在畜牧水产业上的有效利用，使其成为解决我国目前蛋白质饲料资源短缺的途径之一。

Description

一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法

技术领域

本发明涉及发酵制备复合蛋白饲料的生产方法，尤其涉及一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法。

背景技术

随着人民生活水平由“温饱型”向“营养型”的转变，对肉禽蛋奶需求的持续增长，进而带动了畜禽养殖业的高速发展，也随之产生了饲料原料尤其是蛋白质饲料资源紧缺的世界性问题。饲用蛋白源的缺乏业已成为制约我国饲料工业及畜牧、水产业发展的重要因素。因此只有通过开发新型蛋白源产品，改变饲料行业对几种蛋白饲料过分依赖的现状，进一步拓展蛋白饲料的来源，改善现有蛋白饲料中限制性因素，才能维系养殖业的稳定、健康和可持续发展。因此，复合蛋白饲料的优质化必将成为未来饲料行业发展的一大趋势，而微生物混合发酵恰恰为改变蛋白原料的单一性、粗放性提供了一种科学、可行的方法。

目前，我国在微生物固体发酵单一原料方面研究的越来越多，而针对复合蛋白饲料研究方面却不多，国内外相关报道极少。微生物固态发酵的研究主要集中在上世纪90年代，重点在筛选高效脱毒菌株及工艺优化方面。随着科技的发展，微生物固态发酵饲料的营养价值和经济效益在试验中不断得到证实，避免了化学添加剂和物理法处理复合蛋白饲料所带来的弊端，如对蛋白功能性质以及适口性的影响。微生物发酵产生的各种消化酶、氨基酸、维生素等也大大提高了复合蛋白饲料的营养价值，同时微生物发酵复合蛋白饲料还可得到具有生理活性的抗菌肽、提高保健物质的生物活性。采用适当的加工工艺，能使得发酵产物中存有一定数量的益生菌，用于改善动物肠道微生态环境，对动物自身的健康和营养有很大作用。

豆粕、花生饼都是我国畜牧业中来源最广泛的饲料资源，限制它们应用的原因是其含有的抗营养因子和黄曲霉毒素，蚕蛹蛋白的限制性因素主要是蚕蛹异味，它会影响饲料本身的适口性，从而降低动物的采食量。大量研究表明，通过多菌种混合发酵法除了能够有效的消除抗营养因子、降低甚至消除黄曲霉毒素以及有效去除蚕蛹的腥臭味道外，同时更可以将大分子蛋白分解成多功能的小肽。

近几十年来，尽管微生物固态发酵有了很大进步，针对本发明的目标饲料豆粕、花生饼、蚕蛹的研究仍有着其自身的创新性。随着科技的发展，微生物固体发酵法以高营养、低毒素、低抗营养因子、无异味等优点逐步引起科技工作者的关注。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，进一步促进豆粕、花生饼和蚕蛹在畜牧水产业上的有效利用，使其成为解决我国目前蛋白质饲料资源短缺的途径之一。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，包括以下步骤：

a.取豆粕、花生饼和蚕蛹混合，然后加水得混合发酵原料；

b.取菌种接种到步骤a中混合发酵原料中，再加入碳源混合均匀，在32～38℃中发酵培养48～72小时，然后干燥得到复合蛋白饲料。

本发明所述的步骤a中的豆粕、花生饼和蚕蛹间的重量比在6∶3∶1～1∶2∶2范围内。所述的混合发酵原料中含水量在40％～50％范围内

所述的步骤b中的碳源的添加比例为混合发酵原料总量的1～4％。所述的碳源可采用糖蜜、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、麸皮、米糠、酒糟、木薯渣等的一种或多种。

所述的步骤b中的发酵培养采用需氧发酵方式。

所述的步骤b中的菌种采用枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌和乳酸菌的混合。在本发明中所述的菌种以菌种液形式接种至混合发酵原料中，即分别取含有枯草芽孢杆菌的培养液、含有啤酒酵母菌的培养液和含有乳酸菌的培养液按重量比4∶1∶5～2∶5∶3混合成用于发酵的菌种液后再接种到混合发酵原料中。本发明所述的用于发酵的菌种液的接种量为混合发酵原料总重量的3～10％。

本发明所述的含有枯草芽孢杆菌的培养液通过以下步骤来制备：取枯草芽孢杆菌菌种接种到LB种子培养基中，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养16～24小时后，直到OD600＝0.7～0.9，停止培养，作为种子液；在液体扩大LB培养基中以液体扩大LB培养基总重量的1～5％的接种量接种种子液，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养20～28小时。

所述的LB培养基和液体扩大LB培养基均按重量百分比含有0.3％～0.5％的氯化钠、0.3％～0.5％的蛋白胨和0.5％～1.0％酵母膏。所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌种的接种量为2株。

本发明所述的含有啤酒酵母菌的培养液通过以下步骤来制备：取啤酒酵母菌菌种接种到麦芽汁种子培养基中，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养16～24小时后，直到OD600＝0.7～0.9，停止培养，作为种子液；在麦芽汁培养基中以接种量为麦芽汁培养基总重量的1～5％接种种子液，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养20-28小时。

所述的麦芽汁培养基含有10％的麦芽膏粉和0.01％的氯霉素。所述的啤酒酵母菌(Saccharomyces crevisiae)菌种接种量为1株。

本发明所述的含有乳酸菌的培养液通过以下步骤来制备：从原始出发菌种乳酸菌属细菌中挑取一环菌体，接种到乳酸菌属培养基中，于30℃～35℃温度下静止培养40～48小时，作为种子液；在液体扩大乳酸菌属培养基中以接种量为液体扩大乳酸菌属培养基总重量的1～5％接种种子液，于30℃～35℃温度下静止培养48小时。

所述的乳酸菌属培养基和液体扩大乳酸菌属培养基均含有0.2％～0.4％的胰蛋白胨、0.3％～0.5％的NaCl、0.2％～0.4％的葡萄糖、0.3％的KH₂PO₄、0.3％的K₂HPO₄、0.02％的MgCl₂、0.005％的CaSO₄和0.2％的淀粉。所述的乳酸菌(Lactobacillus)菌种接种量为1株。

本发明具有以下有益效果：

(1)本发明中以豆粕、花生饼和蚕蛹的混合物作为发酵原料，利用微生物发酵即微生物的生长代谢活动及代谢过程中产生的各种酶类对豆粕、花生饼和蚕蛹的营养特性进行改善。经过发酵，利用产蛋白酶的细菌或霉菌，得到具有良好功能性与营养特性的肽。

(2)本发明通过多菌种混合发酵，可以有效的去除蚕蛹异味，而且花生饼本身具有特有的香味，可以部分的掩盖蚕蛹的腥臭味，可以提高饲料的适口性。复合蛋白饲料成品经称量、包装后放于阴凉干燥处，在室温下可存放6～9个月。

(3)本发明采用微生物发酵处理原料：豆粕、花生饼和蚕蛹的混合物，得到复合蛋白饲料，避免了化学添加剂和物理法对复合蛋白功能性质的影响。发酵过程中产生的各种消化酶、中小分子蛋白(功能肽)、氨基酸、维生素、益生菌等也大大提高了发酵复合蛋白的营养价值。通过对复合蛋白饲料发酵前后常规营养成分含量、氨基酸含量、蛋白质分子量、抗营养因子、黄曲霉毒素含量及异味程度的测定，得出复合饲料发酵后粗蛋白含量提高了14.43％，无氮浸出物含量降低了11.99％，其它常规营养指标含量变化不大；发酵复合饲料蛋白质分子量明显降低，水溶性蛋白质含量升高了4.34倍，中小分子蛋白质含量升高了12.9倍；发酵后复合蛋白饲料除精氨酸外，其他氨基酸含量都有所增加；发酵后复合蛋白饲料中豆粕的抗营养因子基本得到消除，胰蛋白酶抑制因子和脲酶完全失活，蚕蛹异味完全消除，同时也抑制了黄曲霉的产生。

(4)本发明提供了一种多菌种混合固体发酵处理豆粕、花生饼和蚕蛹的混合物，得到复合蛋白饲料的方法，这对于解决我国畜牧水产业发展中优质蛋白质源紧缺的问题提供了重要的理论依据和技术支持。

附图说明

图1是未发酵复合饲料蛋白分子量分布图；

图2是发酵复合饲料蛋白分子量分布图。

具体实施方式

以下通过实施例和试验对本发明进行阐述，但是不应理解为本发明的保护范围仅限于此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

实施例一：

本实施例所用的菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2株、乳酸菌(Lactobacillus)1株、啤酒酵母菌(Saccharomyces crevisiae)1株。其具体步骤为：

a.由5克蛋白胨、5克酵母膏、3克氯化钠和1升水(pH7.0)组成的LB液体培养基，倒入无菌三角瓶中，制成枯草芽孢杆菌种子液体培养基和液体扩大培养基；由2克胰蛋白胨、5克NaCl、2克葡萄糖、3克KH₂PO₄、3克K₂HPO₄、0.2克MgCl₂、0.05克CaSO₄、2克淀粉和1升水(pH6.5)组成的乳酸菌属培养基，倒入无菌三角瓶中，制成乳酸菌种子液体培养基和液体扩大培养基；由100克麦芽膏粉、0.1克氯霉素和1升水(pH6.0)组成的麦芽汁培养基，倒入无菌三角瓶中，制成酵母菌种子液体培养基和液体扩大培养基。

b.取原始出发菌种枯草杆菌属枯草芽孢杆菌2株和酵母菌属啤酒酵母菌一株，分别接种到LB种子培养基和麦芽汁种子培养基中，枯草芽孢杆菌于37℃温度下，170rpm，摇床培养16小时，啤酒酵母菌于30℃温度下，170rpm，摇床培养124小时，直到OD₆₀₀＝0.7～0.9，停止培养，作为种子液。从原始出发菌种乳酸菌属乳酸菌一株，接种到乳酸菌属培养基中，于35℃温度下静止培养48小时，作为种子液。

c.在液体扩大LB培养基(枯草芽孢杆菌)和麦芽汁培养基(啤酒酵母菌)中分别以重量为培养基总重量的5％的接种量接种种子液，枯草芽孢杆菌于37℃温度下，170rpm，摇床培养20小时。啤酒酵母菌于30℃温度下，170rpm，摇床培养28小时。在液体扩大乳酸菌属培养基(乳酸菌)中以重量为培养基总重量的5％的接种量接种乳酸菌种子液，于35℃温度下静止发酵培养48小时得枯草芽孢杆菌发酵培养液和啤酒酵母菌发酵培养液。将枯草芽孢杆菌发酵培养液、啤酒酵母菌发酵培养液、乳酸菌的菌株发酵培养液按3∶2∶4比例混合均匀，作为豆粕、花生饼和蚕蛹混合原料发酵用的菌种液。

d.按重量比豆粕∶花生饼∶蚕蛹＝6∶3∶1称取豆粕、花生饼和蚕蛹，混合均匀后粉碎，过40目筛。然后加水混合得含水量为50％的混合发酵原料，将步骤c中发酵用的菌种液以重量为混合发酵原料总重量5％的接种量接种混合发酵原料中，加入1％的糖蜜，并混合均匀(初始pH值为6.0)，于35℃温度下需氧发酵72小时，然后于60℃下干燥制样。

e.对发酵前后复合蛋白进行营养成分分析。

e-1常规营养成分分析

由下表1可以看出：复合原料经过发酵后，粗蛋白提高了14.43％，无氮浸出物降低了11.99％，水溶性蛋白质提高了4.34倍，中小分子蛋白提高了12.90倍。

表1复合蛋白饲料发酵前后常规营养成分含量

e-2抗营养因子、毒素及异味分析

由表2可以看出，胰蛋白酶抑制因子和脲酶完全被降解，植酸磷含量也降低了55.32％。由于进行大批量动物实验，购买了新鲜的花生饼原料，故在饲料发酵前后均没有测出黄曲霉毒素B₁，蚕蛹的腥臭味道完全消失。

表2复合蛋白饲料发酵前后各因素含量

e-3氨基酸分析

由表3可得出：经过发酵以后的复合饲料，总氨基酸提高了9.38％，除精氨酸有微小降低外，其他氨基酸都有不同程度的提高。

表3复合蛋白饲料发酵前后氨基酸含量变化

e-3蛋白质分子量分析

复合原料蛋白质分子量分布的GPC-SEC分析结果如表4和图1，发酵复合原料蛋白质分子量分布的GPC-SEC分析结果如表5和图2。蛋白质分子量图谱的多分散性(Polydispersity)可以用多分散性系数d来定量地表征，当分子量完全均一时d＝1，分子量分布越宽，d值越大。因此其分子量实质上都是指平均分子量。由于统计平均数的方法不同，可以有四种不同的平均分子量，即数均分子量Mn，重均分子量Mw，Z均分子量Mz和粘均分子量Mv。MP为峰值分子量。从两图比较分析，复合原料发酵后，蛋白质分子量明显降低，峰值104759Da变为84755Da的峰，峰值明显降低，且d值由1.32上升到1.45，说明发酵复合蛋白原料有更多的蛋白质集中在小分子区域。由图2所示看出通过微生物发酵后，曲线明显往后扩展的区域，同时说明了发酵后饲料中的中小蛋白质分子量增大。

表4：未发酵复合饲料蛋白分子量

表5：发酵复合饲料蛋白分子量

f.复合蛋白饲料成品经称量、包装后放于阴凉干燥处，在室温下可存放6～9个月。

g.步骤f中发酵后的复合蛋白饲料即可作为猪、鸡、罗非鱼等的饲料。

实施例二：

与实施例一不同的是：

c.在液体扩大LB培养基(枯草芽孢杆菌)和麦芽汁培养基(啤酒酵母菌)中分别以重量为培养基总重量的5％的接种量接种种子液，枯草芽孢杆菌于37℃温度下，170rpm，摇床培养20小时。啤酒酵母菌于30℃温度下，170rpm，摇床培养28小时。在液体扩大乳酸菌属培养基(乳酸菌)中以重量为培养基总重量的5％的接种量接种乳酸菌种子液，于35℃温度下静止培养48小时。将枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌、乳酸菌的菌株发酵培养液按1∶2∶2比例混合均匀，作为豆粕、花生饼和蚕蛹混合原料发酵用的菌种液。

d.按重量比豆粕∶花生饼∶蚕蛹＝1∶1∶1称取豆粕、花生饼和蚕蛹，混合均匀后粉碎，过40目筛。然后加水混合得含水量为45％的混合发酵原料，将步骤c中发酵用的菌种液以重量为混合发酵原料总重量为6％的接种量接种混合发酵原料中，加入2％的糖蜜，并混合均匀(初始pH值为6.0)，于35℃温度下需氧发酵72小时，然后于60℃下干燥制样。

e.对发酵前后复合蛋白进行营养成分分析。

参照实例一的分析方法得知：复合原料经过发酵后，粗蛋白提高了12.5％，无氮浸出物降低了10％，水溶性蛋白质提高了4.5倍，中小分子蛋白提高了11.2倍。胰蛋白酶抑制因子和脲酶完全被降解，植酸磷含量也降低了50.34％。同时在饲料发酵前后均没有测出黄曲霉毒素B₁，蚕蛹的腥臭味道也完全消失。经过发酵以后的复合饲料，总氨基酸提高了8.9％，所有检测出的氨基酸都有不同程度的提高。复合原料发酵后，蛋白质得到了有效的降解。

实施例三：

与实施例一不同的是：

c.在液体扩大LB培养基(枯草芽孢杆菌)和麦芽汁培养基(啤酒酵母菌)中分别以重量为培养基总重量的5％的接种量接种种子液，枯草芽孢杆菌于37℃温度下，170rpm，摇床培养20小时。啤酒酵母菌于30℃温度下，170rpm，摇床培养28小时。在液体扩大乳酸菌属培养基(乳酸菌)中以重量为培养基总重量的5％的接种量接种乳酸菌种子液，于35℃温度下静止培养48小时。将枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌、乳酸菌的菌株发酵培养液按1∶1∶1比例混合均匀，作为豆粕、花生饼和蚕蛹混合原料发酵用的菌种液。

d.按重量比豆粕∶花生饼∶蚕蛹＝2∶2∶1称取豆粕、花生饼和蚕蛹，混合均匀后粉碎，过40目筛。然后加水混合得含水量为40％的混合发酵原料，将步骤c中发酵用的菌种液以重量为混合发酵原料总重量为10％的接种量接种混合发酵原料中，加入4％的糖蜜，并混合均匀(初始pH值为6.0)，于35℃温度下需氧发酵72小时，然后于60℃下干燥制样。

e.对发酵前后复合蛋白进行营养成分分析。

同样参照实例一的分析方法得知：复合原料经过发酵后，粗蛋白提高了13.12％，无氮浸出物降低了12.1％，水溶性蛋白质提高了4.1倍，中小分子蛋白提高了12.7倍。胰蛋白酶抑制因子和脲酶完全被降解，植酸磷含量也降低了48.89％。同时在饲料发酵前后均没有测出黄曲霉毒素B₁，蚕蛹的腥臭味道也完全消失。经过发酵以后的复合饲料，总氨基酸提高了8.76％，所有检测出的氨基酸都有不同程度的提高。复合原料发酵后，蛋白质也得到了有效的降解。

经上述实例中微生物发酵法制备的复合蛋白饲料成品的营养特性得到明显改善，粗蛋白含量提高了14.43％，无氮浸出物含量降低了11.99％，其它常规营养指标含量变化不大；发酵复合饲料蛋白质分子量明显降低，水溶性蛋白质含量升高了4.34倍，中小分子蛋白质含量升高了12.9倍；发酵复合饲料除精氨酸外，其他氨基酸含量都有所增加；发酵饲料中豆粕的抗营养因子基本得到消除，胰蛋白酶抑制因子和脲酶完全失活，蚕蛹异味完全消除，同时也抑制了黄曲霉的产生。发酵复合蛋白饲料还含有丰富的维生素、益生菌及未知生长因子，营养价值大大得到了提高。

以下通过实验及实验结果来说明本发明制备的复合蛋白饲料(豆粕、花生饼和蚕蛹)在畜禽水产生产上的应用的效果：

选用18日龄商品代岭南黄肉鸡320只，随机分为4组，每组4个重复，每个重复20只。第一组为对照组，饲喂基础日粮，试验处理1、2、3分别添加5％、10％、15％发酵复合饲料，设计等氮等能日粮。试验期共26天(23日龄～49日龄)，研究在饲粮中添加本发明制备的复合蛋白饲料对肉鸡生产性能、屠宰性能、血清生化、免疫器官重以及消化道重等指标的影响。结果为：

(1)日粮中添加发酵复合蛋白饲料

提高了肉鸡的生产性能，添加10％效果最佳，显著提高了肉鸡平均日增重(p＜0.05)、降低了料重比(p＜0.05)(详见表6)；

(2)添加本发明制备的复合蛋白饲料有提高肉鸡免疫器官重、改善肉鸡的免疫功能的趋势，但差异不显著(p＞0.05)(详见表7)；

(3)添加本发明制备的复合蛋白饲料增加了肉鸡血清总蛋白质含量(p＜0.05)，降低了血清尿素氮(p＜0.05)，加速蛋白质合成代谢(详见表8)；

(4)添加本发明制备的复合蛋白饲料对肉鸡消化道重量指数影响差异显著(p＜0.05)(详见表9)；

(5)添加本发明制备的复合蛋白饲料对肉鸡的屠宰性能无影响(p＞0.05)(详见表10)；

(6)添加发酵复合蛋白饲料对肉质没有影响，无异味残留(详见表11)。

表6不同的本发明制备的复合蛋白饲料添加量对肉鸡生产性能的影响

注：肩注小写字母不同表示差异显著(p＜0.05)，未标注者表示差异不显著，下同。

表7不同的本发明制备的复合蛋白饲料添加量对肉鸡免疫器官重的影响

表8不同的本发明制备的复合蛋白饲料添加量对肉鸡血清生化指标的影响

表9不同的本发明制备的发酵复合蛋白饲料添加量对肉鸡消化道重量的影响

表10不同的本发明制备的发酵复合蛋白饲料添加量对肉鸡屠宰性能的影响

表11不同的本发明制备的发酵复合蛋白饲料添加量对肉鸡肉质的影响

Claims

1.一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.按重量比在6∶3∶1～1∶2∶2取豆粕、花生饼和蚕蛹混合均匀，然后加水得混合发酵原料；

b.取枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌和乳酸菌的混合菌种接种到步骤a中混合发酵原料中，再加入碳源混合均匀，在32～38℃中发酵培养48～72小时，然后干燥得到复合蛋白饲料；

所述的混合菌种以菌种液形式接种至混合发酵原料中，即分别取含有枯草芽孢杆菌的培养液、含有啤酒酵母菌的培养液和含有乳酸菌的培养液按重量比4∶1∶5～2∶5∶3混合成用于发酵的菌种液后再接种到混合发酵原料中。

2.根据权利要求1所述的采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，所述的混合发酵原料中含水量在40％～50％范围内。

3.根据权利要求1所述的采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，所述的步骤b中的碳源的添加比例为混合发酵原料总量的1～4％；所述的碳源采用糖蜜、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、麸皮、米糠、酒糟和木薯渣的一种或多种。

4.根据权利要求1或2或3所述的采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，所述的步骤b中的发酵培养采用需氧发酵方式。

5.根据权利要求4所述的采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，所述的用于发酵的菌种液的接种量为混合发酵原料总重量的3～10％。

6.根据权利要求4所述的采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，所述的含有枯草芽孢杆菌的培养液通过以下步骤来制备：取枯草芽孢杆菌菌种接种到LB种子培养基中，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养16～24小时后，直到OD600＝0.7～0.9，停止培养，作为种子液；在液体扩大LB培养基中以液体扩大LB培养基总重量的1～5％的接种量接种种子液，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养20～28小时；所述的LB种子培养基和液体扩大LB培养基均按重量百分比含有0.3％-0.5％的氯化钠、0.3％-0.5％的蛋白胨和0.5％-1.0％酵母膏；所述的枯草芽孢杆菌菌种的接种量为2株。

7.根据权利要求4所述的采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法，其特征在于，所述的含有啤酒酵母菌的培养液通过以下步骤来制备：取啤酒酵母菌菌种接种到麦芽汁种子培养基中，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养16～24小时后，直到OD600＝0.7～0.9，停止培养，作为种子液；在麦芽汁培养基中以接种量为麦芽汁培养基总重量的1～5％接种种子液，于30℃～37℃温度下，150～170rpm，摇床培养20-28小时；所述的麦芽汁培养基含有10％的麦芽膏粉和0.01％的氯霉素；所述的啤酒酵母菌菌种接种量为1株。