CN103044496B - 一种从野生蝙蝠葛里提取生物碱的新型工艺方法 - Google Patents

一种从野生蝙蝠葛里提取生物碱的新型工艺方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生蝙蝠葛里提取总生物碱的方法，特别是涉及一种利用生物酶解，超高压提取结合柱层析分离纯化总生物碱的新方法。本发明优点：1、采用生物酶解技术，充分溶出细胞内生物碱有效成分。2、采用超高压提取技术，可缩短提取时间，降低能耗，减少杂质成分溶出，不仅提高有效成分收率，而且纯度高。3、通过柱层析技术的吸附分离，使提取的总生物碱进一步纯化。本发明利用生物酶解法，促使有效成分充分溶出，再采用超高压提取、柱层析分离纯化，所得总生物碱纯度提高到93.6％。

Description

一种从野生蝙蝠葛里提取生物碱的新型工艺方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生蝙蝠葛里提取总生物碱的方法，特别是涉及一种利用生物酶解，超高压提取结合柱层析技术纯化总生物碱的新方法。
背景技术：
蝙蝠葛，又名山豆根，缠绕性落叶木质藤木，长达10余米。根状茎细长，外皮常呈层状或片状脱落，断面黄白色，味极苦。小枝绿色，叶互生，肾形或卵圆形，长5-12cm，全缘或3-7浅裂，叶柄盾状着生。花单性异株，短圆锥花序腋生，花小，夏日开黄绿色小花，花期5-6月。核果近球形，熟时紫黑色，果期7-9月。根茎含蝙蝠葛碱、粉汉防己碱、蝙蝠葛双碱、青藤碱、山豆根碱、山豆根诺林等。
国内一般采用有机溶剂提取法和酸性水溶液提取法提取生物碱，存在着操作时间长、温度高，得率不稳定等缺点，本发明的不同之处在于主要采用生物酶解，超高压提取结合柱层析纯化生物碱的方法，产品纯度高、得率高。
发明内容：
本发明优点：
本发明主要采用生物酶解技术，超高压提取技术，超高压能缩短提取时间，减少杂质溶出，提高收率。本发明方法提取快捷、产品纯度高，得率高，选用食品允许使用的乙醇做超高压提取溶剂，无化学残留。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：
(1)生物酶解：蝙蝠葛干燥根粉碎至20-40目，酶浓度0.81.2g/l，酶解温度45-50℃，酶解时间3-4h，得混合液；
(2)预处理：
按不同浓度的乙醇溶剂和原料以一定比例将粗提液混合后包装好，并密封；
(3)超高压提取：
将包装袋放入超高压容器内，在超高压力200-400MPA，室温条件下处理3-5min；
(4)得粗品：
将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；
(5)氧化铝柱层析：取适量粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上100200目碱性氧化铝层析柱；
(6)洗脱：以2-4BV/h流速，用不同浓度乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量90％以上的生物碱成品。
具体实施方式：
实施例1：一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：
(1)生物酶解：100g蝙蝠葛干燥根粉碎至20目，酶浓度0.8g/l，酶解温度45℃，酶解时间3h，得混合液；
(2)预处理：
溶剂和原料比按50∶1的比例混合，加入的乙醇浓度为50％，装好包装袋，密封；
(3)超高压提取：
将包装袋放入超高压容器内，在超高压力200MPA、室温条件下处理3min；
(4)得粗品：
将所得液在60℃真空干燥，得总生物碱粗品；
(5)氧化铝柱层析：取10g粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上100目碱性氧化铝层析柱；
(6)洗脱：以2BV/h流速，用50％、60％、70％乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量为921％的总生物碱成品2.34g。
实施案例2：一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：
(1)生物酶解：500g蝙蝠葛干燥根粉碎至40目，酶浓度1.0g/l，酶解温度50℃，酶解时间3.5h，得混合液；
(2)预处理：
溶剂和原料比按60∶1混合，加入乙醇浓度为60％，装好包装袋，密封；
(3)超高压提取：
将包装袋放入超高压容器内，在超高压力300MPA下，室温条件处理4min；
(4)得粗品：
将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；
(5)氧化铝柱层析：取30g粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上200目碱性氧化铝层析柱；
(6)洗脱：以3BV/h流速，用60％、70％乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量为92.7％的总生物碱成品2.29g。
实施案例3：一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：
(1)生物酶解：200g蝙蝠葛干燥根粉碎至40目，酶浓度1.2g/l，酶解温度50℃，酶解时间4h，得混合液；
(2)预处理：
溶剂和原料比按70∶1的比例混合，加入乙醇浓度为70％，装好包装袋，密封；
(3)超高压提取：
将包装袋放入超高压容器内，在超高压力400MPA，室温条件下处理5min；
(4)得粗品：
将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；
(5)氧化铝柱层析：取20g粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上200目碱性氧化铝层析柱；
(6)洗脱：以4BV/h流速，用70％、80％乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量为93.6％的总生物碱成品2.36g。

Claims (3)

1.一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度蝙蝠葛总生物碱的方法，其步骤如下：
（1）生物酶解：蝙蝠葛干燥根粉碎至20-40目，酶浓度0.8-1.2g/l，酶解温度45-50℃，酶解时间3-4h，得混合液；
（2）预处理：
按不同浓度的乙醇溶剂和原料以一定比例将粗提液混合后包装好，并密封；
（3）超高压提取：
将包装袋放入超高压容器内，在超高压力200-400MPA，室温条件下处理3-5min；
（4）得粗品：
将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；
（5）氧化铝柱层析：取适量粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上100-200目碱性氧化铝层析柱；
（6）洗脱：以2-4BV/h流速，用不同浓度乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
（7）干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量90%以上的生物碱成品；
所述的步骤（1）中，采用的酶为纤维素酶。
2.根据权利要求1所述的利用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度蝙蝠葛总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤（2）中，乙醇体积浓度为50-70%，料液比为1：50-70。
3.根据权利要求2所述的利用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度蝙蝠葛总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤（6）中，乙醇洗脱浓度为50-80%。
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