CN1030428A - 培养微生物的致密培养基的制备方法 - Google Patents

Abstract

培养微生物的培养基的制备方法，包括丙烯酰 胺，N，N′-亚甲基双丙烯酰胺在有平均分子量为7.2 ×10⁴的支化聚丙烯酰胺(相应的重量比为7.0～15.0 ∶0.11～0.21∶0.028～0.11和引发剂存在时在生理 溶液中进行共聚直到形成凝胶，洗涤并用营养基质浸 润。

Description

本发明涉及一种培养微生物的緻密培养基的制备方法，这种培养基以聚丙烯酰胺凝胶为基础的。

按本发明方法制备的緻密培养基可用于医学和生物技术。

培养微生物的緻密培养基的已知制备方法是通过重量比为15.0～20.0∶0.019～0.132的丙烯酰胺与N，N′-亚甲基双丙烯酰胺，在有引发剂存在时，在生理溶液中进行共聚合直到形成凝胶，洗涤，在50～60℃的温度下，于生理溶液中溶胀16～20小时，然后用营养基质浸润。

这种緻密的培养基具有近似于琼脂培养基的緻密性，有弹性并且是透明的。它保证在微生物接种和剥离时细菌环很好地滑动而且不损伤其表面，这种良好的滑动是通过长时间的溶胀步骤（16～20小时）而获得的，这样，从整体来说实际上延长了整个工艺过程。

培养微生物的培养基的已知制备方法，包括重量比为0.5～40.0∶2.5～12的丙烯酰胺和N，N′-亚甲基双丙烯酰胺在有引发剂存在时，在生理溶液中进行共聚合。将所制得的聚丙烯酰胺凝胶进行洗涤并用营养基质浸润（SU.A.977466）。所说的致密培养基在浸润、消毒和在微生物接种时具有高的损伤。用细菌环从这种培养基表面上剥离某些种类微生物是有困难的。

上述方法中共聚合工艺是在没有空气进入的专门的成形设备中进行的，以使在形成聚丙烯酰胺凝胶时避免出现不光滑的表面，而有礙于在培养基制备中使用。这样的工艺难以大量制备培养基，例如，在培养皿或其他实验室器皿中。

本发明的任务是提供培养微生物的緻密培养基的制备方法，该方法在共聚合时使用结构剂，因而保证了培养基在微生物接种时具有类似于琼脂培养基的良好的细菌环的滑动效应特性。

任务是这样解决的，本发明推荐的培养微生物的緻密培养基的制备方法包括丙烯酰胺和N，N′-亚甲基双丙烯酰胺在生理溶液中，在有引发剂存在时进行共聚合，直到形成凝胶，洗涤，并用营养基质浸润凝胶，按照本发明，其中丙烯酰胺和N，N′-亚甲基双丙烯酰胺的共聚合是在平均分子量为7.2×10⁴的支化聚丙烯酰胺存在时进行的，他们之间的相应重量比为7.0～15.0∶0.11～0.21∶0.028～0.11。

本发明的方法在简化工艺时保证培养基有良好的性质。由于有结构剂，共聚合易于在空气中进行而不需用特殊装置。

为了加速共聚反应要求使用所说的支化聚丙烯酰胺的水溶液。在浸润聚丙烯酰胺凝胶时适于使用含有0.02～0.2克/升的聚氧化乙烯的营养基质。在培养基上它促进形成表面单层，这保证了在微生物接种时细菌环的滑动有很明显的效果。

根据本发明的方法，培养微生物的緻密培养基按以下方法制备。

准备反应混合物，该混合物含有原料单体溶液，分子量为7.2×10⁴的支化聚丙烯酰胺和在生理溶液中的引发剂溶液。可以使用所说的支化聚丙烯酰胺的水溶液。在反应混合物中丙烯酰胺和支化聚丙烯酰胺的比例为7.0～15.0∶0.028～0.11。

作为生理溶液可使用0.5%或0.9%的氯化钠水溶液，5%葡萄糖水溶液，林格-罗加溶液，汉萨溶液，爱拉溶液（PacTBOP    PuHZeP-Лока，ХЗНкСа，ЗРла）和其他。共聚作用在空气中于培养皿或由不同材料制成的其他容器内进行。

在上述比例的支化聚丙烯酰胺存在时进行共聚合促使制得的聚丙烯酰胺凝胶具有接近琼脂培养基的緻密度。此外，使用支化聚丙烯酰胺导致聚丙烯酰胺凝胶的补充结构，这就可能在培养皿中于空气中聚合时得到具有平滑表面的凝胶。以前要达到这种效能只能在使用惰性气体的专门设备中于无空气进入情况下进行聚合。按本申请的方法在制备培养基的过程中去掉了溶胀凝胶16～20小时的步骤。

全部上述的优点大大简化了制备培养基的工艺。

聚丙烯酰胺凝胶经洗涤后，用加热、辐照或化学方法进行消毒。所说凝胶用培养微生物的基质浸润，这可以在消毒之前或之后进行。推荐使用含有0.02～0.2的分子量在500000以上的聚氧化乙烯营养基质。

基质成分取决于微生物和细胞的具体的组或种的需要。

用一般的研究方法测定培养基的性质及研究微生物的生物性质。

以下列出实施本发明方法的具体实施例。

例1.

为制备凝胶按以下方法准备5种溶液A、B、C、D、E（所指的组成量是以100毫升溶液计算的）。

1.制备溶液A

0.5毫升N，N，N′，N′-四甲基乙二胺（TEMEд）溶解在99.5毫升生理溶液中。

2.制备溶液B

0.735克N，N′-亚甲基双丙烯酰胺（MБA）溶解在50毫升生理溶液中，加热到60℃，加入24.5克丙烯酰胺（AA），搅拌直到完全溶解，将所得溶液过滤并用生理溶液加到100毫升。

3.制备溶液C

0.2克过硫酸铵（ПA）溶解在50毫升生理溶液中，并加到100毫升体积。

4.制备溶液D

将10.0克分子量为7.2×10⁴的支化聚丙烯酰胺（PПA）在50～60℃温度下溶解在50毫升生理溶液中。将溶液体积加到100毫升。

5.制备溶液E

将0.5毫升溶液D与99.5毫升溶液C混合，并仔细搅拌。

由比例A∶B∶E＝1∶2∶4的三种溶液制备反应混合物，该比例相当于丙烯酰胺，N，N′-亚甲基丙烯酰胺和支化聚丙烯酰胺重量比为：7.0∶0.21∶0.028。混合物倒入培养皿中，并置于空气中。进行共聚合10～15分钟直到形成凝胶，然后用生理溶液洗涤凝胶1小时。

緻密的培养基是通过使用XOTTuHгeH胰蛋白重煮浸润所制得的凝胶而制备的。

用金黄色葡萄球菌接种培养基，并在37℃温度下培养24小时。緻密培养基具有好的粘附性质，緻密性和透明性，弹性，具有平滑的表面，它保证在接种微生物时细菌环有效滑动而不损伤表面。生长的微生物呈现出它们特有的培养的及形态学上的特征。

例2.

为制备聚丙烯酰胺凝胶使用与例1相同的A、B、C、D溶液。

制备溶液E

将1.0毫升溶液D加到99.0毫升溶液C中，并仔细搅拌。

反应混合物是由按比例A∶B∶E＝1∶2∶4的溶液配制，该比例相当于丙烯酰胺、N，N′-亚甲基丙烯酰胺和支化聚丙烯酰胺的重量比为7.0∶0.21∶0.057。将混合物倒入培养皿中，并放置在空气中聚合。共聚合进行5～10分钟直到形成凝胶，然后将凝胶用生理溶液洗涤1小时。

所得凝胶用肉-胨汤在56℃温度下浸润3小时，然后消毒30分钟。

用大肠杆菌接种培养基在37℃下培养24小时，生长的微生物呈现出它们特有的培养和形态学上的特征。緻密的培养基具有良好的粘附性、緻密性、透明性、弹性、具有平滑的表面，保证在微生物接种时细菌环的滑动效应而不损伤表面。

例3.

为了制备聚丙烯酰胺凝胶按下面的方法准备A、B、C三种溶液。

1.制备溶液A

将0.23毫升N，N，N′，N′-四甲基乙二胺溶解在50毫升生理溶液中并加到100毫升。

2.制备溶液B

将0.4克N，N′-亚甲基双丙烯酰胺溶解在50毫升生理溶液中，加热到60℃，加入53克丙烯酰胺，搅拌直到完全溶解。将所得溶液过滤并加到100毫升。

3.溶液C和D的制备同例1。

4.制备溶液E

将2毫升溶液D倒入98毫升溶液C中，仔细搅拌。

由制备好的溶液准备反应混合物，为此将溶液按A∶B∶E＝1∶2∶4的比例混合，这相当于丙烯酰胺，N，N′-亚甲基丙烯酰胺和支化聚丙烯酰胺的重量比为15.0∶0.11∶0.11，倒入培养皿。在空气中进行共聚合10～15分钟直到形成凝胶。所得凝胶用生理溶液洗涤1小时。用肉-胨汤在50～60℃温度下将凝胶浸润3小时，消毒后接种孢子培养物。

制得的培养基是緻密的，具有良好的粘附性、弹性、緻密性、透明性、平滑表面，用细菌环接种微生物时具有明显的良好滑动效应。培养物生长是标准的。

例4.

聚丙烯酰胺凝胶的制备与例1相同，而浸润是在含有0.2克/升聚氧化乙烯的XuTTuHгeP胰蛋白重煮中于56℃下进行3小时。浸润过的凝胶消毒30分钟并接种金黄色葡萄球菌。

所得的緻密培养基具有良好的粘附性，弹性、緻密性、透明性，用细菌环接种微生物时有明显的滑动效应而不损伤表面。培养物生长是标准的。

例5.

聚丙烯酰胺凝胶如例3制备，而浸润是用肉-胨汤（该肉胨汤含有0.02克/升的聚氧化乙烯）在56℃下进行3小时，然后消毒30分钟。

制得的緻密培养基具有良好的粘附性，弹性、緻密性、透明性，用细菌环接种微生物时有明显的滑动效应而不损伤培养基表面。

用大肠杆菌作为试验微生物。

培养物是以标准菌落型生长。

Claims (3)

1、培养微生物的致密培养基的制备方法，包括丙烯酰胺和N，N′-亚甲基双丙烯酰胺在生理溶液中有引发剂存在时进行共聚合直到形成凝胶，洗涤并用营养基质浸润，其特征在于，丙烯酰胺和N，N′-亚甲基双丙烯酰胺的共聚合是在有平均分子量为7.2×10⁴的支化聚丙烯酰胺存在时进行的，它们相应的重量比为7.0～15.0∶0.11～0.21∶0.028～0.11。

2、按照权利要求1的方法，其特征在于，使用所说聚丙烯酰胺的水溶液。

3、按照权利要求1-2的方法，其特征在于，浸润所说的凝胶是用含有0.02～0.2克/升的聚氧化乙烯的营养基质进行的。