RU1837059C

RU1837059C - Способ получени плотной питательной среды дл культивировани микроорганизмов

Info

Publication number: RU1837059C
Application number: SU874278310A
Authority: RU
Inventors: Владимир Владиславович Гашинский; Владимир Павлович Широбоков; Николай Николаевич Марченко; Валерий Григорьевич Войцеховский; Татьяна Ивановна Крайнюкова; Владимир Викторович Онищенко
Original assignee: Киевский Медицинский Институт Им.Акад.А.А.Богомольца
Priority date: 1987-06-25
Filing date: 1987-06-25
Publication date: 1993-08-30
Also published as: ES2007242A6; CA1295569C; CN1030428A; YU121588A

Abstract

Изобретение относитс к способу получени плотной питательной среды дл культивировани микроорганизмов. Изобретение позвол ет упростить технологию изготовлени плотной питательной среды за счет сополимеризации акриламида и N.N -метиленбисакриламида в присутствии разветвленного полиакриламидз со средней молекул рной массой 7,2 104 при массовом соотношении разветвленного полиакриламида, акриламида, N.N -мети- ленбисакриламида, равном 0,028-0,11:7,0- 15,0:0,11-0,21 соответственно. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

Description

СП

с

Изобретение относитс к получению плотных питательных сред на основе полимерных гелей и найдет применение и медицине и биологии.

Целью изобретени вл етс упрощение технологии изготовлени питательной среды за счет того, что отпадает необходимость использовани реактора (разлив в чашки Петри) и сокращение времени реакции до 10-15 мин.

j П р и м е р 1. Дл получени гел готов т четыре раствора А, В. С, О по следующей методике (указанные количества компонентов из расчета на 100 мл раствора).

1,Приготовление раствора А.

I 0,5 N.N.N.N -тетраметилэтилендиамина (т|ЕМЕД) раствор ют в 99.5 мл физиологиче- скрго раствора.

2,Приготовление раствора В.

I 0,735 г N.N -метилен-бис-акриламида (МБА) раствор ют в 50 мл физиологического

раствора, подогревают до температуры 60°С, добавл ют 28 г акриламида (АА), размешивают до полного растворени . Полученный раствор фильтруют и довод т до объема 100мл физиологическим раствором.

3.Приготовление раствора С.

0.189 г персульфата аммони (ПА) раствор ют в 50 мл физиологического раствора или дистиллированной воды и довод т до объема 100 мл.

4.Приготовление раствора D.

10,0 г разветвленного полиакриламида (РПА) со средней молекул рной массой 7,2 х хЮ4 раствор ют в 80 мл дистиллированной воды или физиологического раствора при температуре 50-60°С. Объем раствора довод т до 100 мл.

5.Приготовление раствора Е.

К 99.5 мл раствора С добавл ют 0,5 мл раствора D, тщательно перемешивают.

00

со VI

8

чэ

Реакционную смесь готов т из растворов , вз тых в следующих соотношени х: А:В:Е - 1:2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, М.М метиленби- сакрилзмида и разветвленного полиактила- мида 7,0:0,21:0,028. Смесь разливают в чашки Петри и оставл ют на воздухе. Сопо- лимеризаци протекает в течение 10-15 мин до Образовани гел , который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч.

Плотную питательную среду готов т путем пропитки полученного гел триптиче- ским переваром по Хоттингеру (аминный азот 300мг/%) в течение 3 ч при температуре 5б°С, с последующей стерилизацией в течение 30 минут.

Питательную среду засевают золотистым стафилококком и инкубируют при температуре 37°С в течение 24 часов. Плотна питательна среда обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью , эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжени бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждени , ее поверхности. Выросшие микроорганизмы про вл ют характерные дл них культу- ральные и морфологические признаки. Культура хорошо снимаетс со среды без повреждени ее поверхности.

Пример 2. Дл получени полиакри- ламидного гел используют растворы А, В. С, D такие, как и в примере 1. Приготовление раствора Е. К 99,0 мл раствора С добавл ют 1,0 мл раствора D, тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готов т из растворов при следующих соотношени х: А:В:Е 1:2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, N,N -метиленбисакри- л амид а и разветвленного полиакриламида 7,0:0,21:0,057.

Смесь разливают в чашки Петри и оставл ют их дл полимеризации на воздухе. Сополимеризаци протекает в течение 5-10 минут до образовани гел , который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 часа. Полученный гель пропитывают м со- пептонным бульоном в течение Зч при температуре 56°С, с последующей стерилизацией в течение 30 мин.

Питательную среду засевают кишечной палочкой и инкубируют при температуре 37°С в течение 24 ч. Выросшие микроорганизмы про вл ют характерные дл них культуральные и морфологические признаки , хорошо снимаютс со среды без повреждени ее поверхности. Плотна среда

обладает хорошими адгезионными свойствами , плотностью и прозрачностью, эластичностью , имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжени бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждени поверхности.

Пример 3. Дл получени полиакри- ламидного гел готов т три раствора А, В, С по следующей методике.

0 1. Приготовление раствора А.

0,23 мл М,Ы,М ,М -тетраметилэтиленди- амина раствор ют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора и довод т до объема 100 мл.

5 2. Приготовление раствора В.

0,4 г №,М -метилен-бис-акриламида раствор ют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора, подогрева до температуры 60°С, добавл ют 60 г акрила0 мида, размешивают до полного растворени , Полученный раствор фильтруют, довод т до объема 100 мл.

3. Раствор С и D готов т аналогично примеру 1.

5 4. Приготовление раствора Е.

2 мл раствора D внос т в 98 мл раствора С. Из приготовленных растворов готов т реакционную смесь, дл этого растворы смешивают в соотношении А:В:С 1:2:4, что

0 соответствует весовому соотношению акриламида , N.N -метиленбисакриламида и разветвленного полиакриламида 15,0:0,11:0,11. Смесь разливают в чашки Петри. Сопо- лимеризацию провод т на воздухе в тече5 ние 10-15 минут до образовани гел . Полученный гель отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч. Пропитку гел осуществл ют м со-пептонным бульоном в течение 3 ч при

0 температуре 50-60°С, после стерилизации засевают споровую культуру.

Полученна среда плотна , обладает хорошими адгезионными свойствами, эластичностью , плотностью, прозрачностью,

5 ровной поверхностью, рко выраженным эффектом скольжени при посеве микроорганизмов бактериологической петлей. Культура вырастает типична , хорошо снимаетс петлей без повреждени поверх0 ности.

. Пример 4. Дл получени полиакри- ламидного гел используют растворы А, В, С, D такие, как в примере 1. Приготовление раствора Е.

5 0,1 мл раствора D добавл ют к 99,9 мл раствора С и тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готов т из раствора , вз тых в следующих соотношени х: А:В:Е - 1:2:4. Что соответствует весовому соотношению акриламида. М,М -метиленбисфриламида и разветвленного полиакрила- м|||да 7,0:0,21:0,005.

Смесь разливают в чашки Петри и ставит на воздухе. Сополимеризаци протека- ет в течение 10-15 минут до образовани гел , который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом дл получени пи- тадельной среды.

I УЗКОЙ гель и питательна среда удов- лфтворительной плотности, прозрачны, од- н|ако имеют неровную, волнистую поверхность, что затрудн ет скольжение бактериологической петли при посеве микроорганизмов . Полученна питательна среда не пригодна дл работы.

П р и м е р 5. Дл получени полиакри- л мидного гел используют растворы А, В, С, D такие, как в примере 1.

Приготовление раствора Е.

10 мл раствора D добавл ют к 90 мл раствора С и тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готов т из раство- рЬв, вз тых в следующих соотношени х: АШ:Е 1:2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, N.N -метиленби- оакриламида и разветвленного полиакрила- мида 7,0:0,21:0.57. Смесь разливают в чишки Петри и став т на воздухе. Сопо име- ризаци протекает в течение 10-15 минут до

Среднее количество колоний выросших на средах по прототипу и за вл емых

образовани гел , который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом дл получени питательной среды.

Такой гель и питательна среда удовлетворительной плотности слабо прозрачна, имеет матовый цвет, поверхность имеет некоторую шероховатость. Полученна питательна среда не пригодна дл работы.

Claims

1.Способ получени плотной питательной среды дл культивировани микроорганизмов сополимеризацией акриламида и N,N -мешлен-бис-акриламида в присутствии инициатора и структурообрэзовател в физиологическом растворе до образовани гел , отмывкой его и пропиткой питательным субстратом, о т ли чающийс тем, что. с целью упрощени технологии изготовлени , в качестве структурообразовател используют разветвленный полиакриламид со средней мол.м. 7,2 to4 при массовом соотношении разветвленного полиакрила- мида, акриламида, N.N -метиленбисакрила- мида, равном 0.028-0,11:7.0-15,0:0,11-021 соответственно.

2.Способ по n.t, отпичающийс тем, что используют водный раствор разветвленного полиакриламида.