CN103040767A - 稳定的注射用穿琥宁冷冻干燥粉针剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种稳定的注射用穿琥宁冷冻干燥粉针剂。具体地说，本发明提供了一种穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其包括穿琥宁、碱金属盐、和任选的药学可接受的辅料。本发明注射用穿琥宁冷冻干燥粉针剂可用于治疗病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染的疾病。本发明的粉针剂具有良好的药学性质例如稳定性，从而可以为临床提供一种安全、有效、可控的抗病毒药物。

Description

稳定的注射用穿琥宁冷冻干燥粉针剂

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种用于治疗病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染的疾病的药剂，特别是涉及一种穿琥宁制剂，具体涉及一种稳定的注射用穿琥宁冻干粉针剂。 

背景技术

穿琥宁，化学名称：14-脱羟11,12-二脱氢穿心莲内酯-3,19-二琥珀酸半酯单钾盐，英文名：Potassium Dehydroandrograpolide Succinate；分子式：C28H35KO10，分子量：570.68，其分子式如下以下式I(其在本发明中亦可称为式I化合物)： 

现有临床上应用的穿琥宁制剂有冷冻干燥粉针剂、小容量水针剂和大容量输液剂，由于穿琥宁的稳定性通常存在问题，因此经典的还是以粉针剂的方式应用于临床，例如中国药典2005年版以及中国药典2010年版均已收载穿琥宁的原料和粉针剂，其中穿琥宁冻干粉针剂为白色或微黄色的冻干块状物或粉末，规格为每瓶20mg、40mg、100mg或200mg。 

药理实验表明：(1)穿琥宁对细菌内毒素引起发热的家兔有较强的解热作用，能促进发热的消退，作用迅速并可维持4小时以上；(2)穿琥宁有较好的抗炎作用，能对抗由二甲苯或组织胺所引起毛细血管壁通透性增 高，并对肾上腺素急性肺水肿有明显对抗作用；(3)穿琥宁能缩短戊巴比妥钠引起的白鼠睡眠潜伏期，延长其睡眠时间，还能加强阈下量的戊巴比妥钠作用，引起小白鼠睡眠，该实验结果提示本品有明显的镇静作用；(4)穿琥宁能明显地促进大白鼠肾上腺皮质功能，增加机体对病原体感染的应急能力；(5)经临床病原学诊断实验和组织培养灭活试验表明穿琥宁对流感病毒甲I型、甲III型、肺炎腺病毒(Adv)III型、IV型，肠合胞病毒及呼吸道合胞病毒(RSV)均有灭活作用。穿琥宁毒性小、无刺激性，静脉滴注LD50为675±30mg/kg。穿琥宁肌内或静脉给药后，在体内迅速吸收、分布，其吸收相半衰期(t1/2Ka)为18.90±12.12min，分布相半衰期(t1/2α)仅为1.3±0.3min。用药6小时后血药浓度明显下降，其消除相半衰期(t1/2β)为3.86±1.06小时，用药2天后可排出给药量的85%以上。肌注的生物利用度达94.2±32.9%，表明肌注后吸收利用较完全。 

穿琥宁在临床上用于病毒性肺炎，病毒性上呼吸道感染等。粉针剂的使用方法通常是：临用前加氯化钠注射液适量溶解。肌内注射，一次100mg，一日1~2次，小儿酌减或遵医嘱。静脉滴注，一日400~800mg，用氯化钠注射液分2次稀释后滴注，每次不得过400mg，小儿酌减，或遵医嘱。此外，据产品说明书记载，穿琥宁忌与酸、碱性药物或含有亚硫酸氢钠，焦亚硫酸钠为抗氧剂的药物配伍。 

现有技术中关于穿琥宁的稳定性，包括它的物理稳定性和化学稳定性问题均多有报道。常见的物理稳定性是溶解度问题，例如粉针在使用时在出现溶解性不足的情况发生，例如黄宝秀报道(黄宝秀，注射用穿琥宁沉淀现象的研究，黑龙江医药，2001，14(5):366)穿琥宁在与不同浓度/pH值的葡萄糖注射液配伍后有沉淀现象出现。据信穿琥宁药物分子结构中存在桥形共轭结构、α和β-不饱和内酯键，其水溶液容易发生水解，导致产品色泽加深，含量下降。常见的化学稳定性表现为杂质增加和/或含量下降，例如付春梅等(付春梅，刘三康，李章万，钱广生，穿琥宁原料药及其注射液的有关物质检查和含测定方法研究，药物分析杂志，2005，25(2):157)报道：“注射液稳定性考察发现，有关物质的峰面积明显增加，含量降低，市售多家产品在放置半年后含量只有标示量的80%左右，且有关物质的增加与含量降低不匹配，说明有关物质检查没有完全反映样品 的分解产物……建议生产单位改进注射液生产工艺或制成粉针剂，以改善其稳定性。” 

因此，人们期待为临床提供一种在物理稳定性和/或化学稳定性方面具有良好性能的穿琥宁制剂，例如穿琥宁冷冻干燥粉针剂。 

发明内容

本发明的目的在于为临床提供一种在物理稳定性和/或化学稳定性方面具有良好性能的穿琥宁制剂，例如穿琥宁冷冻干燥粉针剂。本发明人发现具有本发明所述配方的穿琥宁冷冻干燥粉针剂具有良好的物理稳定性和/或化学稳定性。本发明基于此发现而得以完成。 

在本发明的第一个方面提供了一种穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其包括穿琥宁、碱金属盐、和任选的药学可接受的辅料。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的碱金属盐选自碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、或其组合。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的碱金属盐选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、或其组合。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的碱金属盐是碳酸氢钠。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的药学可接受的辅料包括冷冻干燥用赋形剂(在本领域通常还理解为支架剂、支持剂等，其功能通常是赋予冻干粉一定的形状，也有助于产品在临床使用时更快地溶解)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的药学可接受的辅料包括冷冻干燥用赋形剂，所述赋形剂选自：甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、果糖、或其组合。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的药学可接受的辅料包括冷冻干燥用赋形剂，所述赋形剂是甘露醇。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的药学可接受的辅料还可以包括酸碱缓冲剂、渗透压调节剂等。酸碱缓冲剂的实例例如有磷酸盐，例如磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。渗透压调节剂的实例例如有氯化钠、葡萄糖等。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与碱金属 盐二者的摩尔比为1：(0.2~1.5)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与碱金属盐二者的摩尔比为1：(0.2~1.0)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与碱金属盐二者的摩尔比为1：(0.2~0.8)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与碱金属盐二者的摩尔比为1：(0.3~0.8)(如果其中碱金属盐使用的是碳酸氢钠，则此时二者的重量比约为100：(4.42~11.78))。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与药学可接受的辅料的重量比为100：(0~2000)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与药学可接受的辅料的重量比为100：(0~1000)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与药学可接受的辅料的重量比为100：(50~900)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与药学可接受的辅料的重量比为100：(50~750)。根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与药学可接受的辅料的重量比为100：(50~500)。 

进一步，本发明第二方面提供了制备本发明第一方面所述穿琥宁冷冻干燥粉针剂的方法，其包括以下步骤： 

(a)将碱金属盐溶解于适量注射用水中，加入穿琥宁原料药，搅拌使溶解； 

(b)向溶液中加入任选的药学可接受的辅料，使溶解，补加水适量使溶液中的溶质浓度达5%~20%，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，将药液分装到西林瓶中，转入冷冻干燥机内； 

(c)对药液进行冷冻干燥，压塞，密封，即得。 

下面对本发明作进一步的描述。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂或者本发明第二方面的方法，所述冷冻干燥粉针剂在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5~20%(w/v)。或者，该冻干粉针剂中穿琥宁、碱金属盐和任选的辅料特别是赋形剂特别是甘露醇的重量之和占冷冻干燥前溶液体积的5~20%(w/v)。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂或者本发明第二方面的方法，所述冷冻干燥粉针剂用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液 相同的体积，所得溶液中的固形物含量为5~20%(w/v)。或者，该冻干粉针剂用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，该冻干粉针剂中穿琥宁、碱金属盐和任选的辅料特别是赋形剂特别是甘露醇的重量之和占复溶溶液体积的5~20%(w/v)。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂或者本发明第二方面的方法，所述冷冻干燥粉针剂用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0。在一个实施方案中，pH值为6.5~7.5。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂或者本发明第二方面的方法，所述冷冻干燥粉针剂用水制成每1ml中含式I化合物10mg的溶液并根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0。在一个实施方案中，pH值为6.5~7.5。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂或者本发明第二方面的方法，所述冷冻干燥粉针剂中水分含量低于10%，优选低于8%，优选低于5%。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂或者本发明第二方面的方法，所述冷冻干燥粉针剂中还包括pH调节剂。在一个实施方案中，该pH调节剂的种类不受特别限制，只要其可以将所述冻干粉针剂(和/或在配制该冻干粉针剂过程中将配制中间物)的pH值调节至期望的范围即可。在一个实施方案中，所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。 

根据本发明第一方面的穿琥宁冷冻干燥粉针剂其基本上是按包括如下的步骤制备的： 

(a)将碱金属盐溶解于适量注射用水中，加入穿琥宁原料药，搅拌使溶解； 

(b)向溶液中加入任选的药学可接受的辅料，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭，补加水适量使溶液中的溶质浓度达5%~20%，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸溶液或碱溶液调节至pH值6.5~8.0，优选pH值6.5~7.5；用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，将药 液分装到西林瓶中，转入冷冻干燥机内； 

(c)对药液进行冷冻干燥，压塞，密封，即得。 

在上述步骤(b)中，所得经过滤的滤液，其中固形物含量是5~20%(w/v)。 

根据本发明第二方面的方法，其基本上包括以下步骤： 

(a)将碱金属盐溶解于适量注射用水中，加入穿琥宁原料药，搅拌使溶解； 

(b)向溶液中加入任选的药学可接受的辅料，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭，补加水适量使溶液中的溶质浓度达5%~20%，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸溶液或碱溶液调节至pH值6.5~8.0，优选pH值6.5~7.5；用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，将药液分装到西林瓶中，转入冷冻干燥机内； 

(c)对药液进行冷冻干燥，压塞，密封，即得。 

根据上述方法，其中步骤(b)所得经过滤的滤液，其中固形物含量是为5~20%(w/v)。 

根据上述方法，其中步骤(a)所述适量注射用水是注射用水处方量的约70~90%。 

根据上述方法，其中步骤(b)所述活性炭用量是溶液重量的0.05%~1%，优选0.05%~0.5%。 

根据上述方法，其中步骤(b)中所述酸溶液和碱溶液是使用选自下列的pH调节剂配制成的水溶液：氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。这些水溶液的浓度是本领域技术人员公知的，例如1~10%，例如2%~5%。 

根据上述方法，其中步骤(c)中除去水分后所得冷冻干燥物料中水分含量低于10%，优选低于8%，优选低于5%，更优选低于3%。 

在上述方法步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出本发明上述特别是第二方面所述的方法步骤。 

在本发明中式I化合物还将包括式I所示化合物可能存在的任一种单 一异构体，或者式I所示化合物可能存在的任意2个以上的异构体以任意比例的混合物。 

本文所用的“药学可接受的辅料”指的是可用于配制药物特别注射用药物的辅料，其对生物体基本上没有不良影响，并且通常是生物体可耐受的。 

在本发明中，优选的本发明冻干粉针剂在用水制成每1ml中含式I化合物10mg的溶液后，再根据中国药典2010年版二部附录VIH项下的方法即pH值测定法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0。 

虽然本领域技术人员理解，本发明的赋形剂可以是任一种可用于冷冻干燥的赋形剂，特别是甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘氨酸、右旋糖苷、氯化钠、及其组合，然而在本发明中，特别优选的赋形剂是甘露醇。 

在一个实施方案中，本发明组合物是冷冻干燥的药物制剂，其中式I化合物与所述赋形剂的重量比为100：(0~2000)，优选100：(0~1000)，优选100：(10~750)，优选100：(50~500)。此外，该冻干粉针剂在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5~20%(w/v)。这样，在冷冻干燥前所配制的药液是包括以下组成的配方： 

在一个实施方案中，本发明组合物是冷冻干燥的药物制剂，其中式I化合物与所述赋形剂的重量比为100：0~2000，优选100：0~1000重量份，优选100：10~750重量份，优选100：50~500重量份。此外，该冷冻干燥得到的冻干粉针剂，其在用水制成每1ml中含式I化合物10mg的溶液后，根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0。在一个实施方案中，pH值为6.5~7.5。经冷冻干燥得到的冻干粉针剂包括：1摩尔份的式I化合物、(0.2~1.5)或者(0.2~1.0)或者(0.2~0.8)或者(0.3~0.8)摩尔份的碱金属盐。 

在一个实施方案中，发现在特别优选的本发明组合物中，式I化合物与所述赋形剂特别是甘露醇的重量比为100：50~500，并且式I化合物与碱金属盐的摩尔比为1：(0.3~0.8)时具有出人意料的优异性能。 

冷冻干燥粉针剂的制备过程是本领域技术人员公知的制药工艺，例如如下冻干曲线A和冻干曲线B所示的两种示意性的冻干曲线： 

业已发现，诸多本发明范围内的配方在使用以上两种冻干曲线进行处理时，得到的产品在物理稳定性和化学稳定性方面完全相同，例如每瓶配方为：100mg(~0.175mmol，计为1摩尔份)穿琥宁+6mg(~0.071mmol，相对于穿琥宁而言为0.4摩尔份)碳酸氢钠+294mg甘露醇+水至5ml制成配方1，或者每瓶配方为：100mg(~0.175mmol，计为1摩尔份)穿琥宁+10mg(~0.119mmol，相对于穿琥宁而言为0.68摩尔份)碳酸氢钠+640mg甘露醇+水至5ml制成配方2，两种配方照常规方法配制药液，均分别使用以上两种冻干曲线进行处理，得到的四批冻干产品在pH3.5和pH5.5葡萄糖中溶解性(每瓶加溶剂5ml溶解的时间)以及化学稳定性(40℃放置4个月前后杂质的变化)完全一致，表明冻干曲线对本发明冻干粉的制备基本没有影响。 

冷冻干燥粉针剂中的水含量是一般在8%以下，优选低于5%，更优选低于3%。水分控制可通过适当调整冷冻干燥程序来控制。该冷冻干燥粉针剂中的水分含量可根据许多已知方法来测定，例如干燥失重法。 

在本发明中，术语“固形物含量”是指固体物质(例如本发明式I化合物、碱金属盐及所用的全部赋形剂，重量/克)加入到溶剂(例如注射用水)中，溶解后得到一个溶液，所述固体物质的重量除以终溶液体积的百分数(重量/体积百分数，例如g/100ml)。 

在本发明中，符号%，根据其所使用的语境，可以具有本领域技术人 员容易理解的含义。例如在提及固形物含量时，该符号表示重量/体积的百分数(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷冻干燥粉针剂中的“水含量”时，例如水含量在8%以下，此时该符号%表示重量/重量的百分数(w/w，g/100g)。一般而言，在固体分散在液体中时，%表示重量/体积百分数；在固体分散在固体中或者液体分散在固体中(例如粉针的含水量)时，%表示重量/重量百分数。在其它情况下，如无另外说明，符号%表示重量/重量百分数。 

在配制本发明的药液时，本领域技术人员公知，可使用例如约0.45um的微孔滤膜进行粗滤过滤，在将药液灌装到西林瓶中之前，可以使用例如约0.22um的微孔滤膜进行精滤过滤以除菌，必要时可以过滤多次。 

根据本发明的冻干粉针剂，其为冷冻干燥粉针剂。在一个实施方案中，该冷冻干燥粉针剂为单剂量制剂(例如西林瓶装的粉针剂)，每一单位剂量中式I化合物的量可以例如但不限于约5mg、约10mg、约20mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、或约500mg。 

中国药典2010年版二部收载的注射用穿琥宁粉针剂描述该品为穿琥宁加适量碳酸氢钠制成的无菌冻干品。按平均装量计算，含穿琥宁(C28H35KO10)应为标示量的90.0%~110.0%。 

在本发明中，本发明冻干粉针剂中式I化合物的含量和有关物质，以及原料药的含量和有关物质，均可以采用高效液色谱法(例如参见中国药典2010年版二部附录VD)测定，或者采用分光光度法测定。在一个示例性含量和有关物质的测定方法中，均可以采用如下具体的HPLC法进行(在本发明上下文中，如未另外说明，测定各种制品中穿琥宁的含量和/或有关物质)： 

照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定； 

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05%磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至2.5±0.05)-甲醇(3:7)为流动相；检测波长为251nm。理论板数按脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯峰计算不低于3000； 

含量测定法：取本品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动 相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注人液相色谱仪，记录色谱图；另取脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(C28H36O10)的含量，与1.072相乘，即得； 

涉及穿琥宁原料的有关物质测定法：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相稀释制成每1ml含8μg的溶液作为对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%；精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍；供试品溶液的色谱图中，如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(2.0%)； 

涉及穿琥宁制剂例如穿琥宁粉针的有关物质测定法：取装量差异项下的内容物适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含穿琥宁0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含穿琥宁8μg的溶液作为对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%；精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍；供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(4.0%)。 

根据本发明的冻干粉针剂，其用注射用水复溶，通常而言复溶时间(其测定方法在下文详述)在30秒内，优选在20秒内，更优选在15秒内。 

根据本发明的冻干粉针剂，其用水制成每1ml中含式I化合物10mg的溶液并根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0。在一个实施方案中，pH值为6.5~7.5。 

在本发明中，式I化合物，以及它们的标准品，均可从市场购得，或者采用现有技术公开的方法制备。 

本发明提供的冻干粉针剂可以在在25℃以下干燥处保存至少24个月，可以满足一般的冷冻干燥粉针剂的贮藏要求。 

本发明提供的冻干粉针剂可以有效地用于治疗病毒性肺炎、病毒性上 呼吸道感染的疾病。 

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中。下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备冻干粉针剂的方法。 

在下面制备各种冻干粉针剂的例子中，每批次样品的制备规模为1000瓶，每瓶中所包含的式I化合物的量为100mg(各例子中所列配方为1瓶含量的量)；尽管现有产品中有多种包装规格的产品，例如有20mg/瓶、40mg/瓶、200mg/瓶，本领域技术人员容易通过上述100mg/瓶的配方获得上述多种装量规格的产品，例如在将药液分装到西林瓶中时，每瓶加倍分装药液，再进行冷冻干燥，即可容易获得200mg/瓶的装量规格的产品。在下面制备各种冻干粉针剂的例子中，在配液过程中，必要时使用pH调节剂(1M氢氧化钠溶液或者1M盐酸溶液)调节药液至使得该药液在用水稀释至活性药物浓度为10mg/ml时的pH值在6.5-7.5的范围内；下面各实例在注明其pH值时，如未另外说明，亦是指使药液或者冻干粉在用水稀释至活性药物浓度为10mg/ml时所测定的pH值。各批冻干粉样品，如未另外说明，均通过冷冻干燥除水分以使水分含量降到3.0~4.8%的范围内。 

A、试验方法例部分 

试验例1：粉针剂的外观和溶解性测定 

肉眼观察各制备的粉针剂的外观、形态。本领域技术人员知晓，良好的冻干粉针剂通常是外观呈结实、完整的圆饼状，无萎缩、塌陷、裂块、和/或喷瓶等异常情况。 

复溶时间测定方法：分别取各制备的粉针剂，揭开瓶盖塑料顶，用注射器从瓶塞穿刺注入注射用水(用量约为相应样品冷冻干燥前溶液体积的2倍)，用秒表记录复溶时间，每批样品测试5次，取平均值。 

试验例2：测定各粉针剂样品高温放置后的残余率

本试验例中，测定各试验所得的冷冻干燥粉针剂在40℃下放置4个月后，其中式I化合物的含量[40℃，4月，可称为高温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20℃下处理相应时间时式I化合物的含量[20℃，4月，可称为常温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]的百分数，其可理解为残余百分数(%)，即可用下式计算： 

其中，高温平均含量(mg/瓶)和常温平均含量(mg/瓶)是样品溶解后经HPLC法测定并经计算得到的每瓶中式I化合物的含量(10瓶的均值)，该残余百分数(%)的大小反映粉针剂中活性成分的变化情况，残余百分数(%)越大则粉针经40℃放置4月处理后粉针中活性成分保持更多，稳定性更好。 

试验例3：测定各粉针剂样品高温放置后的有关物质变化值 

本试验例中，测定各试验所得的冷冻干燥粉针剂在40℃下放置4个月后，其中有关物质的量[40℃，4月，可称为高温有关物质，以%表示，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20℃下处理相应时间时有关物质的量[20℃，4月，可称为常温有关物质，以%表示，测定10瓶的平均值]的差值，其可理解为总的有关物质变化值(%)，即可用下式计算： 

有关物质变化值(%)=高温有关物质(%)—常温有关物质(%) 

2010年版二部收载的穿琥宁原料以及注射用穿琥宁(粉针)有关物质限度分别为2%和4%。 

该有关物质变化值(%)的大小反映粉针剂中杂质总量的变化情况，有关物质变化值(%)越大则粉针经40℃放置4月处理后粉针中总杂质量更多，稳定性更差。由于有关物质变化值(%)由上述公式计算，因此该值为1%时，其亦表明有较大变化；例如粉针在20℃放置4月后总的有关物质 为3%，而经测定经40℃放置4月处理后粉针有关物质变化值(%)为1%时，该40℃高温处理样品杂质含量就已临近不合格产品(>4%)的限度了。 

B、制备例部分：制备包含式I化合物的本发明粉针剂 

制备例1、制备含穿琥宁的粉针剂 

配方： 

式I化合物	100mg，
		碳酸氢钠	10mg，
甘露醇	300mg，
		注射用水	适量，加至5ml。

制备方法： 

(1)称取处方量的碱金属盐置于不锈钢桶中，加入处方量约80%的注射用水，使溶解；加入主药，搅拌使溶解，再加入赋形剂使溶解；再按溶液体积加入0.2%(w/v)的活性炭，搅拌30分钟，过滤脱炭，补加注射用水至接近处方全量。 

(2)滤液取样，测定pH值，必要时用pH调节剂调节至规定值，再补加注射用水至处方全量。 

(3)药液先用0.45um微孔滤膜过滤，再用0.22um微孔滤膜过滤2次。 

(4)以每瓶灌装药液5ml灌装于15ml西林瓶中(在以下各例子中，引用本制备例方法时，如未另外说明，灌装药液量为包含100mg式I化合物的药液体积；在其它例子中如果灌装药液体积明显增加或者明显减小，可以根据经验适当调整西林瓶的体积)，半加胶塞。 

(5)按照本文所述冻干曲线A进行冷冻干燥，至水分低于5%；冻干结束后，进行液压加塞；扎铝盖，即得。在本发明中该制备例1的样品可简称为Ex1-01。 

在本制备例中，补充以下制备过程，作为补充制备例： 

补充制备例1：在不同的配方中，除了碳酸氢钠用量改为以下表第2行(mg行)所列用量外，处方中的其它要素以及制备工艺均同上述制备例1。表中第1行(No.行)为所得粉针样品编号，编号01的完整编号为Eb1-01，表示补充制备例1所得01号粉针，编号02的完整编号为Eb1-02，亦有 类似含义。 

No.	01	02	03	04	05	06	07	08	09	10	11	12	13	14
															mg	2	3	4	4.5	5	6	7.5	9	10.5	11.8	12.5	14	16	20

考察以上Ex1-01以及Eb1-01至Eb1-14各试样： 

外观：各试样均呈白色的完整的圆饼状冻干块状物， 

残余百分数(%)：Ex1-01以及Eb1-04至Eb1-10各试样的残余百分数(%)均在95%~99%之间，例如Ex1-01、Eb1-04、Eb1-10三者的残余百分数分别为97.8%、96.2%、98.1%；而Eb1-01至Eb1-03以及试样Eb1-11至Eb1-14各试样的残余百分数(%)均在71%~85%之间，例如Eb1-01、Eb1-02、Eb1-12、Eb1-14四者的残余百分数分别为81.3%、77.6%、75.1%、71.3%。 

Ex1-01以及Eb1-04至Eb1-10各试样的有关物质变化值(%)均在0.04%~0.17%之间，例如Ex1-01、Eb1-05、Eb1-09三者的有关物质变化值(%)别为0.08%、0.12%、0.14%；而试样Eb1-11至Eb1-14各试样的有关物质变化值(%)均在0.9%~2.1%之间，例如Eb1-11、Eb1-13、Eb1-14三者的有关物质变化值(%)分别为1.03%、1.61%、2.02%。另外发现，虽然Eb1-01至Eb1-03的残余百分数(%)降低较大，但是它们的有关物质变化值(%)却变化不大，均在0.11%~0.43%之间，这种变化是不受任何技术理论的束缚的，或者无法用任何技术理论来解释。 

此外，经测定，Ex1-01以及Eb1-04至Eb1-10各试样的pH值均在6.5~7.5之间，例如Eb1-04、Eb1-07、Eb1-10三者的pH值分别为6.63、6.88、7.37。 

此外，经测定，Ex1-01以及Eb1-04至Eb1-10各试样的复溶时间均在6~20秒的范围内，表明这些粉针剂具有良好的溶解性。 

制备例2、制备含穿琥宁的粉针剂

就配方而言，甘露醇用量改为650mg外，其它均分别参照制备例1及补充制备例1，进行制备例2和补充制备例2的冻干粉针剂试样的制备。在冷冻干燥工艺上使用B冻干曲线。 

制得本例子中的制备例Ex2-01样品以及补充制备例样品Eb2-01至 Eb2-14。 

考察以上Ex2-01以及Eb2-01至Eb2-14各试样： 

外观：各试样均呈白色的完整的圆饼状冻干块状物， 

残余百分数(%)，与制备例1中对应碳酸盐使用量的试样基本相同，具体地：Ex2-01以及Eb2-04至Eb2-10各试样的残余百分数(%)均在95.7%~98.8%之间；而Eb2-01至Eb2-03以及试样Eb2-11至Eb2-14各试样的残余百分数(%)均在72%~85%之间。 

有关物质变化值(%)，与制备例1中对应碳酸盐使用量的试样基本相同，具体地：Ex2-01以及Eb2-04至Eb2-10各试样的有关物质变化值(%)均在0.03%~0.19%之间；而试样Eb2-11至Eb2-14各试样的有关物质变化值(%)均在0.86%~2.25%之间。另外发现，虽然Eb2-01至Eb2-03的残余百分数(%)降低较大，但是它们的有关物质变化值(%)却变化不大，均在0.10%~0.38%之间。 

此外，经测定，Ex2-01以及Eb2-04至Eb2-10各试样的pH值均在6.6~7.4之间。 

此外，经测定，Ex2-01以及Eb2-04至Eb2-10各试样的复溶时间均在8~30秒的范围内，表明这些粉针剂具有良好的溶解性。 

制备例3、制备含穿琥宁的粉针剂 

配方参考Ex1-01，不同的是仅将其中的赋形剂甘露醇及用量作替换，替换成以下表中编号Ex3-01至Ex3-10所列的赋形剂(或与其它辅料例如渗透压调节剂氯化钠组合)，得到10个处方。制法同Ex1-01。 

编号	赋形剂	编号	赋形剂
				Ex3-01	甘露醇50mg(配液加水至2.5ml)	Ex3-06	山梨醇650mg
Ex3-02	甘露醇150mg	Ex3-07	右旋糖苷300mg
				Ex3-03	甘露醇900mg	Ex3-08	右旋糖苷650mg
Ex3-04	甘露醇500mg+氯化钠40mg	Ex3-08	乳糖300mg
				Ex3-05	山梨醇300mg	Ex3-10	乳糖650mg

考察以上Ex3-01至Ex3-10各试样： 

外观：各试样均呈白色的完整的圆饼状冻干块状物， 

残余百分数(%)，Ex3-01至Ex3-04用甘露醇为赋形剂的各试样的残余百分数(%)均在96.2%~98.7%之间，例如Ex3-01和Ex3-04的残余百分数(%)分别为97.3%和96.8%；出人意料地，Ex3-05至Ex3-10这些未用甘露醇的配方，各试样的残余百分数(%)均在77%~88%之间。 

有关物质变化值(%)，Ex3-01至Ex3-04用甘露醇为赋形剂的各试样的有关物质变化值(%)均在0.05%~0.21%之间；出人意料地，Ex3-05至Ex3-10未用甘露醇的各试样的有关物质变化值(%)均在0.75%~1.55%之间。 

此外，经测定，Ex3-01至Ex3-10各试样的pH值均在6.7~7.2之间。 

此外，经测定，Ex3-01至Ex3-10各试样的复溶时间均在12~30秒的范围内，表明这些粉针剂具有良好的溶解性。 

在补充的试验中，照CN102657673A(中国专利申请号201210170150.8)说明书[0021]至[0027]段实施例一的配方和方法制备注射用穿琥宁冻干粉针组合物(其中含有病毒唑)，所得样品记为C1。照CN101721359A(中国专利申请号200910172754.4)说明书[0059]至[0060]段实施例的配方和方法制备穿琥宁注射液，所得样品记为C2。照CN101380302B(中国专利申请号200810230585.0)说明书[0013]至[0018]段实施例的配方和方法制备穿琥宁注射液，所得样品记为C3。照本发明方法测定，结果显示C1、C2、C3三者的残余百分数(%)分别为87.4%、83.7%、81.3%，而有关物质变化值(%)分别为1.16%、1.83%、1.44%。 

在补充的试验中，参考以上Ex3-01，但是不使用甘露醇得到Ex3-11；或者参考Ex3-03，但是使用甘露醇的量增加到1200mg或1500mg，分别得到Ex3-12或Ex3-13。对Ex3-11至Ex3-13三个试样测定它们的复溶时间，分别为230秒、95秒和155秒，显示复溶性能不足。 

另外，在补充的试验中，参考Ex1-01，不同的是仅将其中的碱金属盐碳酸氢钠替换为碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、或碳酸氢钠，且它们的加入量分别相当于穿琥宁摩尔量的0.6倍(即100mg穿琥宁合约0.175mmol，各碱金属盐的量分别为0.105mmol)，得到Ex3-14、Ex3-15、Ex3-16、Ex3-17。结果：Ex3-14、Ex3-15、Ex3-16三者的残余百分数(%)分别为 69.2%、73.7%、88.7%，而Ex3-17的残余百分数(%)为97.3%；Ex3-14、Ex3-15、Ex3-16三者的有关物质变化值(%)分别为2.26%、1.87%、0.74%，而Ex3-17的有关物质变化值(%)为0.26%。 

发明人对上文制备的一些本发明冻干粉针剂，包括Ex1-01、Eb1-04至Eb1-10、Ex2-01、Eb2-04至Eb2-10、Ex3-01至Ex3-04、Ex3-17，照中国药典2010年版二部“注射用穿琥宁”项下的方法测定，结果各项指标均符合药典标准。特别是，这些试样在阴凉干燥处密封保存24月后，有关物质均小于0.35(各杂质峰面积的和小于对照溶液主峰面积的1.75倍)，并且含量均在标示量的94%~105%范围内。 

Claims (10)

1.一种穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其包括穿琥宁、碱金属盐、和任选的药学可接受的辅料。

2.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的碱金属盐选自碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、或其组合，其例如选自：碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、或其组合；优选碳酸氢钠。

3.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的药学可接受的辅料包括冷冻干燥用赋形剂，其例如选自：甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、果糖、或其组合；优选甘露醇。

4.根据权利要求3的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中所述的药学可接受的辅料还可以包括酸碱缓冲剂、渗透压调节剂等，例如磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、葡萄糖等。

5.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与碱金属盐二者的摩尔比为1：(0.2~1.5)。

6.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其中穿琥宁与药学可接受的辅料的重量比为100：(0~2000)。

7.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0；或者，其用水制成每1ml中含式I化合物10mg的溶液并根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5~8.0。

8.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，其在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5~20%(w/v)；或者，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为5~20%(w/v)。

9.根据权利要求1的穿琥宁冷冻干燥粉针剂，所述冷冻干燥粉针剂中水分含量低于5%。

10.制备权利要求1-9任一项所述穿琥宁冷冻干燥粉针剂的方法，其包括以下步骤：

(a)将碱金属盐溶解于适量注射用水中，加入穿琥宁原料药，搅拌使溶解；

(b)向溶液中加入任选的药学可接受的辅料，使溶解，补加水适量使溶液中的溶质浓度达5%~20%，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，将药液分装到西林瓶中，转入冷冻干燥机内；

(c)对药液进行冷冻干燥，压塞，密封，即得。