CN103040742B

CN103040742B - 一种银杏内酯b脂微球注射剂

Info

Publication number: CN103040742B
Application number: CN201210557263.3A
Authority: CN
Inventors: 王平
Original assignee: HAINAN BAISITE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: HAINAN SHENGXIN MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2012-12-20
Filing date: 2012-12-20
Publication date: 2014-04-16
Anticipated expiration: 2032-12-20
Also published as: CN103040742A

Abstract

本发明公开了一种银杏内酯B脂微球注射剂及其制法，该脂微球注射剂由特定重量配比的银杏内酯B、二油脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、二硬脂酰磷脂酰甘油和PEG400制成。本发明的脂微球注射剂具有微球粒径均匀、良好的稳定性、良好的包封率和极低的泄漏率，解决了银杏内酯B在体内易过氧化以及易水解失效的问题，并且制备方法重现性好，适合于工业化大生产。

Description

一种银杏内酯B脂微球注射剂

技术领域

本发明涉及一种脂微球注射剂及其制法，具体涉及一种银杏内酯B脂微球注射剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

随着银杏叶研究的发展，现已证实：银杏叶的活性成分主要是黄酮和内酯类化合物。银杏内酯是仅在银杏叶中发现的一类具有特殊结构及显著药理活性的重要成分，迄今尚未发现存在于其他任何植物中。更重要的是他们具有独特的药理作用和治疗价值。银杏内酯类化合物有：银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯M、银杏内酯J及白果内酯，已证明银杏内酯均为强血小板活化因子受体拮抗剂。随着对银杏叶中有效成分的明确，单一有效成分新药成为近十年来法国、英国、德国和美国等国家竞相开发的目标。对银杏叶中有效成分的深入研究，发现银杏内酯B具有更高的药用价值。银杏内酯B纯品目前国外已用于临床，用于休克、烧伤、中风、移植排斥和血液透析等试验，还可能为预防和治疗过敏性哮喘提供一类新的药物。

银杏内酯B的分子式C₂₀H₂₄O₁₀，分子量424.4，结构式如下：

由于银杏内酯B溶解性差，不溶于水，所以口服制剂生物利用度低，产品疗效相对较差，期待制成注射剂以提高疗效。但是制成注射剂难度较大，不利于银杏内酯B的稳定，如利用加碱成盐(多为葡甲胺或氢氧化钠等，专利号00115134.7、02134223.7等)，加碱成盐是在碱性条件下，使银杏内酯B部分开环，开环后内酯溶解性增加利于制成针剂，然而银杏内酯B的闭环结构形式才是主要活性形式，开环后结构破坏，活性减弱，例如参见US5798342。法国Beaufour-Ipsen公司开发的银杏内酯B针剂，代号：BN52021，就是部分开环形式的冻干粉针，临床疗效就没有达到预期效果[Brochet B，et al：J Neurology，Neurosurgery and Psychiatry.1995，58：360-362]。还有利用有机溶媒，但有机溶媒刺激性大，安全性是有待解决的问题。

目前国内还没有上市的银杏内酯B的任何剂型，因此，寻找出适合银杏内酯B给药的制剂及其的制备方法，以及充分发挥银杏内酯B的疗效，成为国内银杏内酯B开发的重要课题。

国外已经有口服银杏叶提取物脂质体上市，用于保护老年人的心脑血管，例如Shinjiro Yamamoto等[J.Biochemical Engineering Journal，2002，12:125-301]将不同溶剂和温度提取的银杏叶成分用二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和聚山梨酯-20以超声法包裹制成混合脂质体，发现其具有较强抗黑素瘤的活性，而未包裹的提取物抗肿瘤活性很低。

刘婷，银杏内酯B柔性纳米脂质体的制备及体外透皮研究，《中国中药杂志》第34卷第17期和刘婷，银杏内酯B柔性脂质体的透皮给药研究，《西北大学硕士学位论文》2010年度，按薄膜分散法制备柔性脂质体，公开了：称取500mg大豆卵磷脂,100mg胆固醇,50mgGB,20mgVitE,加入100mL无水乙醇使之溶解,转运至500mL圆底烧瓶中,将装有上述溶液的圆底烧瓶与旋转减压蒸发仪连接,在圆底烧瓶上形成均匀的薄膜。同时称取100mg胆酸钠,加入介质溶剂使之溶解,将其溶液滴加至圆底烧瓶中洗脱膜材,并继续水化1h。将得到的脂质体混悬液以水浴式超声仪超声10min,再以0.22μm的微孔滤膜过滤,即得到GB柔性纳米脂质体。制备过程中不加入胆酸钠,即得普通GB纳米脂质体。制备的GB柔性脂质体外观呈圆球形状，平均粒径在200nm左右，粒径分布良好;测得平均包封率为75.91%。

专利CN1759828A公开了一种银杏内酯B的脂肪乳剂及其制备方法，其中包括银杏内酯B0.001-0.25%、表面活性剂1.0-40%、脂肪油1.0-45%、等渗剂0.5-35%、增溶剂0.5-35%、抗氧剂0.001-0.2%、注射用水10-90%组成。然而，乳剂的稳定性不够好，存放过程中容易产生杂质。专利CN1857255A公开了一种注射用的银杏内酯B乳剂及其制备方法，其包括银杏内酯B、注射用植物油、乳化剂、等渗调节剂及注射用水。该乳剂不含稳定剂，存放过程中会产生杂质，影响其稳定性，且生物利用度低。CN101912364A公开了一种银杏内酯B脂质体组合药物，但没有提供了银杏内酯B脂质体组合药物冻干针剂及口服制剂制备步骤及方法和制备的具体实施例。专利CN101036642A公开了一种银杏内酯B纳米脂质体药物及其制备方法，由银杏内酯B、脑磷脂与二硬脂酰胆碱的混合物、大豆甾醇和胆固醇的混合物，环糊精等组成。然而，由于选用的辅料过多，药物的均匀性很难得到保证，脂质体的粒径也不适宜，生物利用度也不高。

在药物载体输送系统中，脂微球，或称脂质微球、脂质纳米粒和脂微粒，是一类由具有良好生物相容性的脂质材料制成的亚微粒。近年来人们开始将脂微球用于药物载体，其主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂微球中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

如何开发一种即能保持银杏内酯B结构的完整性，又不用有机溶媒，制成的注射剂又稳定，已成为当务之急。鉴于上述银杏内酯B注射剂的不足，目前对于银杏内酯B脂微球注射剂存在需求。本发明旨在克服上述注射剂的银杏内酯B开环后药效降低、使用有机溶媒毒性反应等问题，提供一种银杏内酯B既不开环，毒性反应及刺激性小，药效时间长，且具有持续释放性的银杏内酯B脂微球注射剂，还解决了银杏内酯B在水中溶解度小和在体内过氧化的问题以及内酯结构易水解失效的问题。

发明内容

脂微球注射剂的稳定性是长期以来限制其应用的重要问题，脂微球注射剂普遍存在容易聚集、融合，导致包封药物泄漏，且脂微球注射剂释放可控性差，因此制药领域具有一般经验的技术人员清楚地知道在制备脂微球注射剂面面临各种技术困难，绝非现有的理论可以预期解决的，需要克服许多技术难题。

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的银杏内酯B、二油脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、二硬脂酰磷脂酰甘油、和PEG400，可以形成品质优异的银杏内酯B脂微球注射剂，从而完成本发明。

本发明的目的是提供一种银杏内酯B脂微球注射剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:6-1:3，优选为二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:5。

优选地，根据本发明的银杏内酯B脂微球注射剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

进一步优选地，根据本发明的银杏内酯B脂微球注射剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:5。聚氧乙烯40氢化蓖麻油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:4。

本发明的另一目的是提供上述银杏内酯B脂微球注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）在氮气保护下，将二油脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油和银杏内酯B溶于适量的溶剂中，约50℃下经磁力搅拌1-2小时，得到银杏内酯B脂质溶液；将上述的磷脂溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液冷冻干燥，直至干燥完全，得到疏松的银杏内酯B固体；

（2）将PEG400和聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于适量的缓冲盐溶液中，以500～800转/分钟搅拌均匀，在60℃继续搅拌下加入上述银杏内酯B固体得到均匀的混悬液，然后转移至高速匀质机中以600bar到800bar做梯度均质7-9遍，得到均一的白色乳状的银杏内酯B脂微球液体；

（3）将上述制备的脂微球液体经流通蒸汽灭菌处理，然后400W-600W超声处理两次，每次15～30分钟；经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得银杏内酯B脂微球注射剂。

优选地，本发明提供上述银杏内酯B脂微球注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）在氮气保护下，将二油脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油和银杏内酯B溶于适量的体积比为2:3的乙醇和叔丁醇的混合溶剂中，约50℃下经磁力搅拌1-2小时，得到银杏内酯B脂质溶液；将上述的磷脂溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液在-60℃～-70℃预冻2～3小时，接着在-40℃～-50℃冷冻6～8小时，再经18～22小时升华至20℃～25℃，最后在30℃～35℃干燥1～3小时，得到疏松的银杏内酯B固体；

（2）将PEG400和聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于适量的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液中，以500～800转/分钟搅拌均匀，在60℃继续搅拌下加入上述银杏内酯B固体得到均匀的混悬液，然后转移至高速匀质机中以600bar到800bar做梯度均质7-9遍，得到均一的白色乳状的银杏内酯B脂微球液体；

本发明的脂微球注射剂具有以下优点：（1）具有稳定均一的缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；（2）增加药物的溶解性，提高制剂的生物利用度；（3）具有对活性药物成分的保护作用，银杏内酯B不开环，提高了稳定性，降低毒副作用；（4）良好的包封率和极低的泄漏率。

通过本发明方法制得的银杏内酯B脂微球注射剂，提高了银杏内酯B的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高，长期储存后，脂微球同样保持良好的包封率，并且制备方法重现性好，适合于工业化大生产，解决了在体内易过氧化以及内酯结构易水解失效的问题。

附图说明

图1是银杏内酯B脂微球注射剂的血药浓度-时间曲线，表示实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂于0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、16h和24h的血药浓度与时间的关系曲线。

其中：

具体实施方式

以下通过具体实施方式本发明进行进一步说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚。

脂微球普遍存在容易聚集、融合，导致包封药物泄漏，因此在工业上制备符合稳定性要求的脂微球实非易事，因此需要想方设法地探索优化的处方，以获得稳定性优良的脂微球。为了形成品质优良的银杏内酯B脂微球注射剂，重要的不仅是寻找能与银杏内酯B良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，而且还要寻找能使脂微球形成稳定注射剂的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实验，发现特定重量配比的银杏内酯B、二油脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、二硬脂酰磷脂酰甘油和PEG400能制成银杏内酯B脂微球注射剂，其中，作为药物活性成分的银杏内酯B的包封率高，脂微球粒径小且分布均匀，与现有技术中的银杏内酯B注射剂相比，避免使用有毒溶剂和大量植物油，本发明制剂的药物活性成分在体循环中稳定不开环且保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

一方面，本发明提供一种银杏内酯B脂微球注射剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:6-1:3，优选为1:5。

条件是：聚氧乙烯40氢化蓖麻油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:5，聚氧乙烯40氢化蓖麻油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:4。

在本发明中，作为药物活性成分的银杏内酯B，其水溶性差，脂溶性良好，针对银杏内酯B的特点，本发明人通过研究发现一定比例的二油脂酰磷脂酰乙醇胺(即二油酰磷脂酰乙醇胺)和二硬脂酰磷脂酰甘油特别适于作为基础载体包裹材料。当使用其他非二油脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰甘油组合的任何脂质为载体材料时，难以形成品质优良的脂微球，脂微球的包封率、稳定性和渗漏率等性质均不如本发明的二油脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰甘油的组合效果，这可能是二油脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰甘油的协同作用的结果。

为了改善脂微球的稳定性，所用二油脂酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和二硬脂酰磷脂酰甘油的纯度为98%以上，优选99%以上。

在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，相对于1重量份的银杏内酯B而言，二油脂酰磷脂酰乙醇胺的用量为5-60重量份。如果二油脂酰磷脂酰乙醇胺的用量低于5重量份，则无法形成稳定的脂微球；反之，如果二油脂酰磷脂酰乙醇胺的用量的用量高于60重量份，则作为药物活性成分的银杏内酯B的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

负电荷磷脂可以是二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、双肉豆蔻酸磷脂酰甘油、双月桂酸磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酸、双肉豆蔻酸磷脂酸、双月桂酸磷脂酸、双软脂酸磷脂酸、双油酸磷脂酰丝氨酸或双亚油酸磷脂酰肌醇。在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，优选使用负电荷磷脂二硬脂酰磷脂酰甘油可以有效地阻止聚集，以进一步改进脂微球的稳定性。

在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，相对于1重量份的银杏内酯B而言，二硬脂酰磷脂酰甘油的用量为1-10重量份。如果二硬脂酰磷脂酰甘油的用量低于1重量份，则由于其用量过低导致对银杏内酯B脂微球注射剂的稳定性改进不够，反之，如果二硬脂酰磷脂酰甘油的用量高于10重量份，则导致Zeta电位过高，体内释放不易控制，不利于提高生物利用度。

在本发明的脂微球注射剂的一方面，其Zeta电位为-10～-50mV，优选为-20-40mV。

本发明人经过研究发现，当二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:6-1:3时，能形成稳定的银杏内酯B脂微球。当二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺重量比高于1:3时，银杏内酯B释放不均匀；当二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺重量比低于1:6时，银杏内酯B脂微球膜稳定性降低，银杏内酯B易于渗漏。此外，研究发现，当二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:6-1:3时，所形成的脂微球毒性低。

研究表明，脂微球的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的银杏内酯B脂微球注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，PEG400和聚氧乙烯40氢化蓖麻油能有效保护脂微球颗粒的形态和稳定性，进一步提高脂微球注射剂在储存中的稳定性。

在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，使用聚氧乙烯40氢化蓖麻油来进一步改进脂微球的稳定性。聚氧乙烯40氢化蓖麻油是一种非离子表面活性剂，当用于脂微球载体中时，能提高该载体之间膜的化学能，从而提高脂微球在水性液体中的化学稳定性，进而提高银杏内酯B脂微球注射剂的稳定性。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，相对于1重量份的银杏内酯B而言，二油脂酰磷脂酰乙醇胺的用量为5-60重量份，二硬脂酰磷脂酰甘油为1-10重量份，聚氧乙烯40氢化蓖麻油为1-20重量份，且聚氧乙烯40氢化蓖麻油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺重量比为1:4时，所形成的银杏内酯B脂微球注射剂的包封率高。

研究发现，当使用上述特定量的银杏内酯B、二油脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯40氢化蓖麻油和二硬脂酰磷脂酰甘油时，可以得到品质优良的银杏内酯B脂微球，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，使用PEG400作为赋形剂，用于形成稳定的注射剂。不受理论限制，本发明人令人惊奇地发现加入PEG400可以改变银杏内酯B的药学性质，PEG400在水和有机溶剂中的溶解性均良好，毒性低，生理相容性良好，具有分散药物的作用，聚乙二醇400有一定粘度和表面活性作用，可降低脂微球与胃肠道黏液之间的表面张力，促进药物进入胃肠黏膜，从而提高生物利用度和治疗效果。经研究，发明人发现PEG400优于PEG200、PEG600、PEG800或PEG1000等其他聚乙二醇。

研究发现，脂微球的大小是影响脂微球在体内分布和停留时间的主要因素，脂微球的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的银杏内酯B脂微球颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。因此，在本发明的银杏内酯B脂微球注射剂的一个方面，优选所述脂微球粒径在50-150nm之间。

本发明的银杏内酯B脂微球注射剂中，其银杏内酯B的规格为10mg。

另一方面，本发明还提供一种银杏内酯B脂微球注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

上述所述的制备方法，发明的一方面，所述的溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、苯甲醇、二氯甲烷、氯仿、三氯甲烷中的一种或几种，优选为体积比为2:3的乙醇和叔丁醇的混合溶剂。

上述所述的制备方法，发明的一方面，所述冷冻干燥的过程为：在-60℃～-70℃预冻2～3小时，接着在-40℃～-50℃冷冻6～8小时，再经18～22小时升华至20℃～25℃，最后在30℃～35℃干燥1～3小时。

上述所述的制备方法，发明的一方面，所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液中的一种，优选pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。

制备脂微球的挑战在于如何使脂微球膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的脂微球。而且这些材料在形成脂微球不漏出。本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的银杏内酯B脂微球注射剂，脂微球粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

实施例

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1银杏内酯B脂微球注射剂的制备

所用成分及其重量如下（1000支）：

采用制备工艺制备银杏内酯B脂微球注射剂：

（1）在氮气保护下，将100g二油脂酰磷脂酰乙醇胺、20g二硬脂酰磷脂酰甘油和10g银杏内酯B溶于300ml的体积比为2:3的乙醇和叔丁醇的混合溶剂中，在50℃下经磁力搅拌1小时，得到银杏内酯B脂质溶液；将上述的磷脂溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液在-60℃预冻2小时，接着在-40℃冷冻6小时，再经18小时升华至20℃，最后在30℃干燥1小时，得到疏松的银杏内酯B固体；

（2）将30g PEG400和25g聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于3000ml的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液中，以500转/分钟搅拌均匀，在60℃继续搅拌下加入上述银杏内酯B固体得到均匀的混悬液，然后转移至高速匀质机中以600bar到800bar做梯度均质7遍，得到均一的白色乳状的银杏内酯B脂微球液体；

（3）将上述制备的脂微球液体经流通蒸汽灭菌处理，然后400W超声处理两次，每次15～30分钟；经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得银杏内酯B脂微球注射剂。

实施例2银杏内酯B脂微球注射剂的制备

所用成分及其重量如下（1000支）：

采用制备工艺制备银杏内酯B脂微球注射剂：

（1）在氮气保护下，将250g二油脂酰磷脂酰乙醇胺、50g二硬脂酰磷脂酰甘油和10g银杏内酯B溶于600ml的体积比为2:3的乙醇和叔丁醇的混合溶剂中，在50℃下经磁力搅拌1.5小时，得到银杏内酯B脂质溶液；将上述的磷脂溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液在-65℃预冻2.5小时，接着在-45℃冷冻7小时，再经20小时升华至23℃，最后在32℃干燥2小时，得到疏松的银杏内酯B固体；

（2）将45g PEG400和63g聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于5000m l的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液中，以650转/分钟搅拌均匀，在60℃继续搅拌下加入上述银杏内酯B固体得到均匀的混悬液，然后转移至高速匀质机中以600bar到800bar做梯度均质8遍，得到均一的白色乳状的银杏内酯B脂微球液体；

（3）将上述制备的脂微球液体经流通蒸汽灭菌处理，然后500W超声处理两次，每次15～30分钟；经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得银杏内酯B脂微球注射剂。

实施例3银杏内酯B脂微球注射剂的制备

所用成分及其重量如下（1000支）：

采用制备工艺制备银杏内酯B脂微球注射剂：

（1）在氮气保护下，将400g二油脂酰磷脂酰乙醇胺、80g二硬脂酰磷脂酰甘油和10g银杏内酯B溶于900ml的体积比为2:3的乙醇和叔丁醇的混合溶剂中，约50℃下经磁力搅拌2小时，得到银杏内酯B脂质溶液；将上述的磷脂溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液在-70℃预冻3小时，接着在-50℃冷冻8小时，再经22小时升华至25℃，最后在35℃干燥3小时，得到疏松的银杏内酯B固体；

（2）将60g PEG400和80g聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于8000ml的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液中，以800转/分钟搅拌均匀，在60℃继续搅拌下加入上述银杏内酯B固体得到均匀的混悬液，然后转移至高速匀质机中以600bar到800bar做梯度均质7-9遍，得到均一的白色乳状的银杏内酯B脂微球液体；

（3）将上述制备的脂微球液体经流通蒸汽灭菌处理，然后600W超声处理两次，每次15～30分钟；经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得银杏内酯B脂微球注射剂。

对比例1-3银杏内酯B脂微球注射剂的制备

发明人曾经应用过以下脂质材料：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和聚山梨酯-20；大豆卵磷脂、胆固醇和维生素E和/或胆酸钠；CN101912364A所述的氢化大豆卵磷脂与蛋黄卵磷脂摩尔数比2.5∶1组合物；专利CN101036642A纳米脂质体材料，均没有获得良好的银杏内酯B脂微球。也就是说现有技术没有给出本发明技术方案的技术启示，本发明的技术效果也显著优于现有技术。

现例举性列出证实本发明组合具有协同作用效果的部分对比例，但不应理解为对本发明的限制，其采用与分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成银杏内酯B脂微球注射剂：

表1对比例1-3中所用成分

其中，“/”表示未使用。

具体而言，对比实施例1用二硬脂酰磷脂酰乙醇胺代替二油脂酰磷脂酰乙醇胺，用PEG 600代替PEG 400；对比实施例2用聚氧乙烯35蓖麻油代替聚氧乙烯40氢化蓖麻油，用二油酰磷脂酰甘油代替二硬脂酰磷脂酰甘油；对比实施例3用二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和聚山梨酯-20分别代替二油脂酰磷脂酰乙醇胺和聚氧乙烯40氢化蓖麻油，用胆固醇代替二硬脂酰磷脂酰甘油。

以下通过试验例对比，证实了本发明的组合具有协同作用的效果，本发明提供了品质优异的银杏内酯B脂微球注射剂。

试验例1脂微球粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的银杏内酯B脂微球注射剂，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂微球粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂微球粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂微球粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得银杏内酯B脂微球的颗粒外观及其粒径分布范围明显优于对比例1-3中所得的银杏内酯B脂微球。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得银杏内酯B脂微球的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

进一步地，就粒径和外观方面而论，在对比实施例1-3中，对比实施例1大致为球状但分布范围不均匀，相对于对比实施例2-3分布范围较小，说明二硬脂酰磷脂酰甘油和聚氧乙烯40氢化蓖麻油对粒径和外观影响最为显著；对比实施例3最差说明本发明限定的材料最优。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测银杏内酯B含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂微球制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂微球制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂微球的脂微球包封率低于本发明。进一步地，就包封率而论，在对比实施例1-3中，对比实施例3最差，说明本发明限定的材料最优。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，对比例含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。进一步地，就稳定性而论，在对比实施例1-3中，对比实施例3最差，说明了本发明所限定的材料最优，本发明脂微球制剂所包封的银杏内酯B不会开环产生有关物质。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂微球渗漏严重，这说明本发明制备的银杏内酯B脂微球注射剂具有更高的稳定性。就稳定性而论，在对比实施例1-3中，对比实施例3最差，说明本发明限定的材料最优。

试验例5血药浓度的测定

将48只大鼠随机分成6组，每组分别注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂，注射量为20mg银杏内酯B。给药后分别于0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、16h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂和对比例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂相比，本发明实施例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的可控缓释效果，生物利用度增加，重现性好。

对比实施例1-3和实验例1-3中的结果从不同方面证实了本发明实施例1-3中制备的银杏内酯B脂微球注射剂具有优异的制剂学特征，取得了协同的意外效果，解决了制剂学技术问题，证实了本发明组分彼此之间产生了协同作用。

工业实用性

通过多因素分析上述实施例以及实验例的结果可知，证实了本发明的组合具有协同作用效果，本发明的银杏内酯B脂微球具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims

1.一种银杏内酯B脂微球注射剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

且其中所述二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:6-1:3。

2.根据权利要求1所述的银杏内酯B脂微球注射剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

3.根据权利要求2所述的银杏内酯B脂微球注射剂，其特征在于所述二硬脂酰磷脂酰甘油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:5。

4.根据权利要求1-3任一所述的银杏内酯B脂微球注射剂，其特征在于所述聚氧乙烯40氢化蓖麻油与二油脂酰磷脂酰乙醇胺之间的重量比为1:4。

5.根据权利要求4所述的银杏内酯B脂微球注射剂，其银杏内酯B的规格为10mg。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述的银杏内酯B脂微球注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）在氮气保护下，将二油脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油和银杏内酯B溶于适量的溶剂中，50℃下经磁力搅拌1-2小时，得到银杏内酯B脂质溶液；将上述的磷脂溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液冷冻干燥，直至干燥完全，得到疏松的银杏内酯B固体；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于步骤（1）中所述的溶剂是体积比为2:3的乙醇和叔丁醇的混合溶剂；

步骤（1）中所述冷冻干燥的过程为：在-60℃～-70℃预冻2～3小时，接着在-40℃～-50℃冷冻6～8小时，再经18～22小时升华至20℃～25℃，最后在30℃～35℃干燥1～3小时；

步骤（2）中所述的缓冲溶液是pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求4所述的银杏内酯B脂微球注射剂，其特征在于所述脂微球粒径在50-150nm之间。

9.根据权利要求5所述的银杏内酯B脂微球注射剂，其特征在于所述脂微球粒径在50-150nm之间。