CN103031354B - 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法 - Google Patents
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103031354B CN103031354B CN201210591513.5A CN201210591513A CN103031354B CN 103031354 B CN103031354 B CN 103031354B CN 201210591513 A CN201210591513 A CN 201210591513A CN 103031354 B CN103031354 B CN 103031354B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pheophorbide
- spirulina
- extracting
- chlorophylline
- organic solvent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，属于生物医药技术领域。本发明的提取方法，包括以下步骤：（1）取经预处理的螺旋藻粉，加水配成螺旋藻粉悬浊液，用叶绿素酶处理，得酶解液；（2）向酶解液中加入有机溶剂回流提取2次，每次1h，合并提取液；（3）向提取液中加入稀酸调节pH值为3后，浓缩去除有机溶剂后，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；（4）将脱镁叶绿酸A粗品用异丙醇进行重结晶得到的目标产物。本发明采用的方法，工艺精简，成本低廉，适合工业化生产，获得的高纯度的脱镁叶绿酸A，有望在消炎药、肿瘤抑制药等药品或医药中间体中广泛应用。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法。
背景技术
螺旋藻是一种低等植物，属于蓝藻门，颤藻科，其结构简单，细胞内没有真正的细胞核，在显微镜下可见其形态为螺旋丝状故得名螺旋藻。螺旋藻共有35种，繁殖力强，适于广泛种植，便宜易得。螺旋藻中含有丰富的叶绿素A，具有独特的造血净血功能，并具有安全性和高消化吸收率，经中国卫生部和美国食品药品管理局认证螺旋藻完全无毒副作用，是安全的植物药品及保健品。
脱镁叶绿酸A为一种光敏剂，可以用于通过光动力学治疗肿瘤或研发新型抗菌药，其分子式如下所示：
美国科学家利于脱镁叶绿酸A制备了2-[1-己氧基乙基]-2-去乙烯基焦脱镁叶绿酸A，这是一种脱镁叶绿酸A的衍生物，研究表明其具有治疗肿瘤的效果好，毒副作用小的特点。
再者脱镁叶绿酸A具有良好的抑菌作用，对大肠杆菌原生质具有再生的作用，对金黄色葡萄球菌具有抑制作用，故脱镁叶绿酸A具有广泛的医用价值和市场价值。
合成制备脱镁叶绿酸A的起始原料来源于一种海洋藻类植物，或者人工合成叶绿酸A，植物资源较少，导致最终的产品生产成本很高。近年来，国内外科学家陆续发明了采用原材料价格比较低廉的植物进行合成制备脱镁叶绿酸A，中国申请号为：200610020877.2，名称为“从蚕沙中制取铜叶绿酸盐的方法”的专利，利用蚕沙为原材料制备铜叶绿酸盐产品，中国申请号为：200810084616.6，名称为“一种从水华蓝藻中制备脱镁叶绿酸A甲酯的方法”的专利，其生产工艺较为复杂，对原材料要进行较为复杂的处理，比如进行冷冻固化处理，在提取过程中需要加入10倍以上的溶剂，并采用二氯甲烷等有机溶剂萃取，整个工艺复杂，成本较高，且不环保。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供了一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，该方法工艺简单，成本低廉，环境友好。
本发明的技术方案是通过以下技术方案来实现：
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，包括以下步骤：
1）将螺旋藻中的叶绿素转化为叶绿酸；
2）用有机溶剂提取叶绿酸A；
3）用氢离子取代所提取的叶绿酸A中的镁离子，得到脱镁叶绿酸A粗品；
4）采用重结晶的方法对脱镁叶绿酸A粗品进行纯化，得到纯化的脱镁叶绿酸A。
所述的将螺旋藻中的叶绿素转化为叶绿酸为：
将螺旋藻粉碎后，将螺旋藻粉制成悬浊液，加入叶绿素酶后，于至40～50℃保温处理至少1h，将螺旋藻中的叶绿素转化为叶绿酸。
所述的叶绿素酶与螺旋藻粉的质量比为1～5:10000。
所述的有机溶剂为C3～C5的酮、C2～C6的醚或C2～C8的烷烃醇。
所述的有机溶剂为丙酮、乙醇或乙醚。
所述用氢离子取代所提取的叶绿酸A中的镁离子为：
调节叶绿酸A的提取液的pH值为2～3，充分搅拌，以氢离子取代镁离子，生成脱镁叶绿酸A。
所述将脱镁叶绿酸A粗品用异丙醇进行重结晶得到纯化的脱镁叶绿酸A。
所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，具体包括以下步骤：
1）将螺旋藻粉与其质量2～5倍的水混合，配成螺旋藻粉悬浊液，然后加入叶绿素酶，升温至40～50℃，保温处理1～3h后，得酶解液；所述叶绿素酶与螺旋藻粉的质量比为1～5:10000；
2）向酶解液中加入有机溶剂采用回流的方法提取2～3次提取叶绿酸A，每次1～3h，合并提取液得到叶绿酸A提取液；所述的有机溶剂为C3～C5的酮、C2～C6的醚或C2～C8的烷烃醇，用量为螺旋藻粉质量2～5倍；
3）调节叶绿酸A提取液的pH值为2～3后，充分搅拌，以氢离子取代镁离子，生成脱镁叶绿酸A；让浓缩去除有机溶剂，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；
4）将脱镁叶绿酸A粗品用异丙醇进行重结晶得到纯化的脱镁叶绿酸A；所述异丙醇用量为螺旋藻粉质量的2～5倍。
所述将干燥后的螺旋藻粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。
所述的有机溶剂为丙酮；采用稀盐酸、稀硫酸或稀磷酸调节pH值。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，首次从螺旋藻中提取得到了高纯度的脱镁叶绿酸A，经过重结晶纯化后制得纯度高达98%以上的脱镁叶绿酸A。其制备工艺简单，成本低廉，环境友好，适合工业化生产，所制备的脱镁叶绿酸A有望在消炎药、肿瘤抑制药等药品或医药中间体中广泛应用，为开发新型的脱镁叶绿酸A药品开辟了广阔了市场。
进一步，本发明提供的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，用叶绿素酶对螺旋藻粉进行酶解处理，比机械破碎或者冷冻破碎操作简便，对设备要求低；通过将提取液体系pH值调节至酸性，从而达到以氢离子取代镁离子的目的，生成脱镁叶绿酸A，再经过重结晶方法制得纯度高的脱镁叶绿酸A。
附图说明
图1为脱镁叶绿酸A的色谱检测图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，包括以下步骤：
（1）螺旋藻干燥后粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。取1kg螺旋藻粉，用2.5kg水搅拌均匀，得到螺旋藻粉悬浊液，加入0.1g叶绿素酶，升温至40℃，保温处理3h，得酶解液；
（2）向酶解液中，加入3kg丙酮回流提取2次，每次1h，合并2次的提取液，搅拌均匀；
（3）向提取液中加入稀盐酸，调节pH值至3后，浓缩该溶液至丙酮基本去除，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；
（4）将该粗品用2kg异丙醇进行重结晶，得到黑色带有光泽的固体为纯度达到98%以上的脱镁叶绿酸A。
实施例2
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，包括以下步骤：
（1）螺旋藻干燥后粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。取100g螺旋藻粉，用250g水搅拌均匀，得到螺旋藻粉悬浊液，加入0.02g叶绿素酶，升温至50℃，保温处理3h，得酶解液；
（2）向酶解液中，加入300g乙醇回流提取2次，每次1h，合并2次的提取液，搅拌均匀；
（3）向提取液中加入稀磷酸，调节pH值至2.8后，浓缩该溶液至乙醇基本去除，过滤得到的固体即为脱镁叶绿酸A粗品；
（4）将该粗品用500g异丙醇进行重结晶，得到黑色带有光泽的固体为纯度达到98%以上的脱镁叶绿酸A。
实施例3
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，包括以下步骤：
（1）螺旋藻干燥后粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。取5kg螺旋藻粉，用7.5kg水搅拌均匀，得到螺旋藻粉悬浊液，加入1.5g叶绿素酶，升温至45～50℃，保温处理1.5h，得酶解液；
（2）向酶解液中，加入15kg丙酮回流提取2次，每次1h，合并2次的提取液，搅拌均匀；
（3）向该溶液中加入稀硫酸，调节pH值至2后，浓缩该溶液至丙酮基本去除，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；
（4）将该粗品用15kg异丙醇进行重结晶，得到黑色带有光泽的固体为纯度达到98%以上的脱镁叶绿酸A。
实施例4
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，包括以下步骤：
（1）螺旋藻干燥后粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。取2.5kg螺旋藻粉，用5kg水搅拌均匀，得到螺旋藻粉悬浊液，加入0.75g叶绿素酶，升温至42～45℃，保温处理3h，得酶解液；
（2）向酶解液中，加入7kg乙醚回流提取2次，每次1h，合并2次的提取液，搅拌均匀；
（3）向该溶液中加入稀硫酸，调节pH值至3后，浓缩该溶液至乙醚基本去除，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；
（4）将该粗品用8kg异丙醇进行重结晶，得到黑色带有光泽的固体为纯度达到98%以上的脱镁叶绿酸A。
实施例5
一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，包括以下步骤：
（1）螺旋藻干燥后粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。取5kg螺旋藻粉，用20kg水搅拌均匀，得到螺旋藻粉悬浊液，加入1g叶绿素酶，升温至42～45℃，保温处理3h，得酶解液；
（2）向酶解液中，加入7kg丙醇回流提取2次，每次1h，合并2次的提取液，搅拌均匀；
（3）向该溶液中加入稀盐酸，调节pH值至2.6后，浓缩该溶液至丙醇基本去除，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；
（4）将该粗品用20kg异丙醇进行重结晶，得到黑色带有光泽的固体为纯度达到98%以上的脱镁叶绿酸A。
所制备的脱镁叶绿酸A的色谱图如图1所示，可以看到图谱中杂峰较少，所得到的脱镁叶绿酸A的纯度相当高，可达98%以上。
Claims (7)
1.一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将螺旋藻中的叶绿素转化为叶绿酸：将螺旋藻粉碎后，将螺旋藻粉制成悬浊液，加入叶绿素酶后，于40～50℃保温处理至少1h，将螺旋藻中的叶绿素转化为叶绿酸；
2）用有机溶剂提取叶绿酸A：所述的有机溶剂为C3～C5的酮、C2～C6的醚或C2～C8的烷烃醇；
3）用氢离子取代所提取的叶绿酸A中的镁离子，得到脱镁叶绿酸A粗品；所述用氢离子取代所提取的叶绿酸A中的镁离子为：调节叶绿酸A的提取液的pH值为2～3，充分搅拌，以氢离子取代镁离子，生成脱镁叶绿酸A；
4）采用重结晶的方法对脱镁叶绿酸A粗品进行纯化，得到纯化的脱镁叶绿酸A。
2.如权利要求1所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，所述的叶绿素酶与螺旋藻粉的质量比为1～5:10000。
3.如权利要求1所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为丙酮、乙醇或乙醚。
4.如权利要求1所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，将脱镁叶绿酸A粗品用异丙醇进行重结晶得到纯化的脱镁叶绿酸A。
5.如权利要求1所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1）将螺旋藻粉与其质量2～5倍的水混合，配成螺旋藻粉悬浊液，然后加入叶绿素酶，升温至40～50℃，保温处理1～3h后，得酶解液；所述叶绿素酶与螺旋藻粉的质量比为1～5:10000；
2）向酶解液中加入有机溶剂，回流提取叶绿酸A，提取2～3次，每次1～3h，合并提取液得到叶绿酸A提取液；所述的有机溶剂为C3～C5的酮、 C2～C6的醚或C2～C8的烷烃醇，用量为螺旋藻粉质量2～5倍；
3）调节叶绿酸A提取液的pH值为2～3后，充分搅拌，以氢离子取代镁离子，生成脱镁叶绿酸A；浓缩去除有机溶剂，过滤得到的固体为脱镁叶绿酸A粗品；
4）将脱镁叶绿酸A粗品用异丙醇进行重结晶得到纯化的脱镁叶绿酸A；所述异丙醇用量为螺旋藻粉质量的2～5倍。
6.如权利要求5所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，将干燥后的螺旋藻粉碎，过20目筛，得到螺旋藻粉。
7.如权利要求5所述的从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸A的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为丙酮；采用稀盐酸、稀硫酸或稀磷酸调节pH值。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210591513.5A CN103031354B (zh) | 2012-12-29 | 2012-12-29 | 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210591513.5A CN103031354B (zh) | 2012-12-29 | 2012-12-29 | 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103031354A CN103031354A (zh) | 2013-04-10 |
| CN103031354B true CN103031354B (zh) | 2014-05-14 |
Family
ID=48018753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210591513.5A Active CN103031354B (zh) | 2012-12-29 | 2012-12-29 | 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103031354B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105061437A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-18 | 中国石油大学(华东) | 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法 |
| CN112521393A (zh) * | 2019-09-18 | 2021-03-19 | 康俄(上海)医疗科技有限公司 | 一种脱镁叶绿酸a甲酯的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2007144740A (ru) * | 2007-12-05 | 2009-06-10 | Гелий Васильевич Пономарев (RU) | Фотосенсибилизатор и способы его получения |
| WO2012114232A1 (en) * | 2011-02-23 | 2012-08-30 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Process |
-
2012
- 2012-12-29 CN CN201210591513.5A patent/CN103031354B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2007144740A (ru) * | 2007-12-05 | 2009-06-10 | Гелий Васильевич Пономарев (RU) | Фотосенсибилизатор и способы его получения |
| WO2012114232A1 (en) * | 2011-02-23 | 2012-08-30 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Process |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Chlorophyll breakdown in higher plants and algae;S.Hortensteiner;《Cellular and Molecular Life Science》;19991231;第56卷;330-347 * |
| Relationship between Appearance of Photosensitivity and total pheophorbide level in spirulina powder;Toshimitsu Kato等;《Journal of the Food Hygienic Society of Japan》;19951231;第36卷(第5期);632-634 * |
| S.Hortensteiner.Chlorophyll breakdown in higher plants and algae.《Cellular and Molecular Life Science》.1999,第56卷330-347. |
| Toshimitsu Kato等.Relationship between Appearance of Photosensitivity and total pheophorbide level in spirulina powder.《Journal of the Food Hygienic Society of Japan》.1995,第36卷(第5期),632-634. |
| 唐蕾等.脱镁叶绿酸的制备及其光敏抗菌活性.《中国抗生素杂志》.2008,第33卷(第8期),474-476. |
| 脱镁叶绿酸的制备及其光敏抗菌活性;唐蕾等;《中国抗生素杂志》;20080831;第33卷(第8期);474-476 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103031354A (zh) | 2013-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101434608B (zh) | 一种高纯度的鞣花酸的制备方法 | |
| CN101147537B (zh) | 一种从苦瓜中高效提取苦瓜多糖的方法 | |
| CN102732585B (zh) | 一种纯化菊苣低聚果糖的新方法 | |
| CN104432075B (zh) | 一种辣木叶口服液及其制备方法 | |
| CN101565411A (zh) | 一种由褐藻中提取岩藻黄素的方法 | |
| CN105085695A (zh) | 一种铁皮石斛浸膏粉制备方法 | |
| CN105753828A (zh) | 一种山葡萄籽原花青素的快速提取方法 | |
| CN103951722A (zh) | 一种从柑橘皮中联合提取橙皮苷和果胶的方法 | |
| CN103102408B (zh) | 一种从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的方法 | |
| CN104546989A (zh) | 一种蔓越莓提取物的制备方法及其胶囊 | |
| CN103031354B (zh) | 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法 | |
| CN104558066A (zh) | 一种熊果苷的提取方法 | |
| CN111848362A (zh) | 一种超声提取结合动态轴向压缩柱系统制备高纯度大麻二酚的方法 | |
| CN103642594A (zh) | 一种大蒜油的提取方法 | |
| CN103420969A (zh) | 一种提取葡萄汁中花青素的方法 | |
| CN101879208A (zh) | 一种从绿豆壳中提取总黄酮的方法 | |
| CN103012071A (zh) | 一种从花生粕中提取纯化白藜芦醇的方法 | |
| CN103450135A (zh) | 一种提取纯化构树黄酮醇a的方法 | |
| CN104045616B (zh) | 一种杨梅黄酮的提取方法 | |
| CN104045624A (zh) | 一种高纯烟碱的制备方法 | |
| CN102911056A (zh) | 一种从紫锥菊中制备菊苣酸的高效环保工艺 | |
| CN104163873A (zh) | 一种桑枝秀珍菇菇脚多糖的提取技术 | |
| CN103265648B (zh) | 从梨皮中提取果胶的方法 | |
| CN102008070B (zh) | 一种制备菊芋多酚的方法 | |
| CN102669188B (zh) | 除虫菊素的提取及脱色方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hua Xiufu Inventor after: Hu Xiaoan Inventor after: Ma Pengfei Inventor after: Tong Hongxia Inventor after: Zhang Guoyue Inventor after: Zhang Tian Inventor before: Zhang Tian |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 710075 Shaanxi city of Xi'an province high tech Zone Jinye Road No. 69 adventure Garden Block F Room 501 gazelle Valley Patentee after: Xi'an Yue biological Polytron Technologies Inc Address before: 710075 Shaanxi city of Xi'an province high tech Zone Jinye Road No. 69 adventure Garden Block F Room 501 gazelle Valley Patentee before: Xi'an Day Natural Tech Co., Ltd. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Method for extracting pheophorbide A from spirulina Effective date of registration: 20200611 Granted publication date: 20140514 Pledgee: Pudong Development Bank of Shanghai Limited by Share Ltd. Xi'an branch Pledgor: XI'AN DAY NATURAL Inc. Registration number: Y2020610000068 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |