CN105061437A - 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法 - Google Patents

一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105061437A
CN105061437A CN201510528132.6A CN201510528132A CN105061437A CN 105061437 A CN105061437 A CN 105061437A CN 201510528132 A CN201510528132 A CN 201510528132A CN 105061437 A CN105061437 A CN 105061437A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chlorophyll
normal hexane
ethanol
water
ethyl alcohol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510528132.6A
Other languages
English (en)
Inventor
于道永
李泉
张宏玉
李富强
吴晨露
葛保胜
黄方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China University of Petroleum East China
Original Assignee
China University of Petroleum East China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China University of Petroleum East China filed Critical China University of Petroleum East China
Priority to CN201510528132.6A priority Critical patent/CN105061437A/zh
Publication of CN105061437A publication Critical patent/CN105061437A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种高纯度叶绿素a的制备方法，所述方法的步骤如下：(1)以培养至对数生长期末期的钝顶螺旋藻为原料，离心收集藻体；(2)藻体用乙醇萃取三次，萃取液合并；(3)萃取液中加入适量正己烷或石油醚，加水至分相进行反萃取，含色素的溶液用水洗涤两次；(4)100～200目中性氧化铝柱层析分离纯化叶绿素a，首先用含0.3％乙醇的正己烷或石油醚溶液润洗氧化铝柱，上样后用乙醇－正己烷或乙醇－石油醚混合溶剂梯度冲洗；(5)含叶绿素a的溶液减压旋转蒸发回收溶剂，即可获得高纯度的叶绿素a。本发明制备的叶绿素a不含叶绿素b，HPLC纯度大于99.5％。

Description

一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法
技术领域
本发明涉及天然色素技术领域，尤其涉及一种高纯度叶绿素a的制备方法。
背景技术
叶绿素是高等植物、藻类和光合细菌进行光合作用的主要色素，是一类含脂的色素家族，位于叶绿体中的类囊体膜上。叶绿素具有促进造血、补充维生素、强化解毒、提高抗病等多种用途。例如：饮用叶绿素对产妇或因意外而失血的人都很有益处。
叶绿素的主要类型有：镁卟啉化合物(包括叶绿素a、b、c等)、原叶绿素和细菌叶绿素等。叶绿素不是很稳定，光、酸、碱、氧、氧化剂等都可以导致其分解。在酸性条件下，叶绿素分子很容易失去卟啉环中的镁离子成为脱镁叶绿素。因此，商品化的叶绿素a纯度一般都低于95％。
微藻具有单位面积产量高，生长不需要肥沃的土地，可以利用滩涂、盐碱地、荒漠等不适宜耕种的土地进行规模化养殖等优势。与从高等植物叶片中提取色素相比，从微藻中提取叶绿素的原料来源更广泛，不需要叶片粉碎，便于自动化操作。
钝顶螺旋藻是蓝藻的一种，本发明以钝顶螺旋藻为原料，本发明制备的叶绿素a不含叶绿素b，HPLC纯度大于99.5％。
发明内容
本发明针对商品化叶绿素a纯度较低的问题，提出了一种高纯度叶绿素a的制备方法。
本发明采取的技术方案是：
本发明高纯度叶绿素a制备方法的具体步骤如下：
⑴以培养至对数生长期末期的钝顶螺旋藻为原料，离心收集藻体；
⑵藻体用乙醇萃取若干次，萃取液合并；
⑶萃取液中加入适量石油醚(60～90℃)，加水至分相，含色素的石油醚相用水洗涤两次；
⑷100～200目中性氧化铝柱层析分离纯化叶绿素a。首先用含0.3％乙醇的石油醚溶液润洗中性氧化铝柱，然后上样，再用体积含量0.3％～10％的乙醇－石油醚混合溶剂梯度冲洗；
⑸含叶绿素a的溶液经减压旋转蒸发回收溶剂，获得叶绿素a沉淀
⑹用适量的乙醇溶解叶绿素a沉淀，加水制成悬浊液，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿素a粉末。
步骤⑶中用正己烷反萃取。
步骤⑶中所用的水为饱和食盐水。
步骤⑷中用含0.3％乙醇的正己烷溶液润湿氧化铝柱，上样后采用乙醇－正己烷混合溶剂梯度冲洗。
本发明制备的叶绿素a纯度高，HPLC纯度大于99.5％。
附图说明
图1为实施例4所得产品乙醇溶液的吸收光谱图。
图2为实施例4所得产品乙醇溶液的荧光发射光谱图。
图3为实施例4所得产品的高效液相色谱(HPLC)分析图。
图4为实施例4所得产品的基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱图。基质中的三氟乙酸使叶绿素a脱镁转化为脱镁叶绿素a，带正电的脱镁叶绿素a的分子离子峰([M+H]+)，质荷比m/z为872.050，与脱镁叶绿素a的理论分子量871.20一致。注：叶绿素a的理论分子量893.49。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步描述。
实施例1
本发明的高纯度叶绿素a的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入适量石油醚(60～90℃)，加水至分相，含色素的石油醚相用水洗涤两次。
在层析柱中填充100-200目中性氧化铝，先用含0.3％乙醇的石油醚溶液润湿氧化铝柱，然后上样，再采用0.3％、10％的乙醇－石油醚混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素，后冲出的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂，获得墨绿色的叶绿素a沉淀。
实施例2
本发明的高纯度叶绿素a的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入适量石油醚(60～90℃)，加饱和食盐水至分相，含色素的石油醚相用饱和食盐水洗涤两次。
在层析柱中填充100-200目中性氧化铝，先用含0.3％乙醇的石油醚溶液润湿氧化铝柱，然后上样，再采用0.3％、1％的乙醇－石油醚混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素，后冲出的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂，获得墨绿色的叶绿素a沉淀。
实施例3
本发明的高纯度叶绿素a的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入适量正己烷，加水至分相，含色素的正己烷相用水洗涤两次。
在层析柱中填充100-200目中性氧化铝，先用含0.3％乙醇的正己烷溶液润湿氧化铝柱，然后上样，再采用0.3％、10％的乙醇－正己烷混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素，后冲出的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂，获得墨绿色的叶绿素a沉淀。
实施例4
本发明的高纯度叶绿素a的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入适量正己烷，加饱和食盐水至分相，含色素的正己烷相用饱和食盐水洗涤两次。
在层析柱中填充100-200目中性氧化铝，先用含0.3％乙醇的正己烷溶液润湿氧化铝柱，然后上样，再采用0.3％、1％的乙醇－正己烷混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素，后冲出的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂，获得墨绿色的叶绿素a沉淀。
用适量的乙醇溶解叶绿素a沉淀，加水制成悬浊液，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿素a粉末。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，应当理解的是，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据上述说明对这些实施例进行改进或变换，而这些改进或变换都应属于本发明所述权利要求的保护范围。

Claims (3)

1.一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：
⑴以培养至对数生长期末期的钝顶螺旋藻为原料，离心收集藻体；
⑵藻体用乙醇萃取若干次，萃取液合并；
⑶萃取液中加入适量正己烷或石油醚，加水至分相进行反萃取，含色素的溶液用水洗涤；
⑷100～200目中性氧化铝柱层析分离纯化叶绿素a，首先用含0.3％乙醇的正己烷或石油醚溶液润洗氧化铝柱，上样后用乙醇－正己烷或乙醇－石油醚混合溶剂梯度冲洗；
(5)含叶绿素a的溶液经减压旋转蒸发回收溶剂，获得叶绿素a沉淀。
2.如权利要求1所述的高纯度叶绿素a的制备方法，其特征在于用适量的乙醇溶解(5)中的叶绿素a沉淀，加水制成悬浊液，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿素a粉末。
3.如权利要求1所述的高纯度叶绿素a的制备方法，其特征在于(3)中所用的水为饱和食盐水。
CN201510528132.6A 2015-08-25 2015-08-25 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法 Pending CN105061437A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510528132.6A CN105061437A (zh) 2015-08-25 2015-08-25 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510528132.6A CN105061437A (zh) 2015-08-25 2015-08-25 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105061437A true CN105061437A (zh) 2015-11-18

Family

ID=54490999

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510528132.6A Pending CN105061437A (zh) 2015-08-25 2015-08-25 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105061437A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116375719A (zh) * 2023-03-16 2023-07-04 江苏大学 一种低聚叶绿素、抑制叶绿素自聚的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101648955A (zh) * 2009-09-04 2010-02-17 北京化工大学常州先进材料研究院 一种利用超临界流体从螺旋藻中萃取叶绿素的方法
CN103031354A (zh) * 2012-12-29 2013-04-10 西安岳达植物科技有限公司 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法
CN103923639A (zh) * 2014-04-25 2014-07-16 中国科学院合肥物质科学研究院 菠菜叶绿素修饰的改性花生壳及其制备方法和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101648955A (zh) * 2009-09-04 2010-02-17 北京化工大学常州先进材料研究院 一种利用超临界流体从螺旋藻中萃取叶绿素的方法
CN103031354A (zh) * 2012-12-29 2013-04-10 西安岳达植物科技有限公司 一种从螺旋藻中提取脱镁叶绿酸a的方法
CN103923639A (zh) * 2014-04-25 2014-07-16 中国科学院合肥物质科学研究院 菠菜叶绿素修饰的改性花生壳及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张所信，权艳梅: "《精细化工新产品研究与开发》", 31 December 2000, 西北大学出版社 *
马贵武，等: "螺旋藻制取叶绿素铜钠盐", 《湛江海洋大学学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116375719A (zh) * 2023-03-16 2023-07-04 江苏大学 一种低聚叶绿素、抑制叶绿素自聚的方法
CN116375719B (zh) * 2023-03-16 2024-03-29 江苏大学 一种低聚叶绿素、抑制叶绿素自聚的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102295667B (zh) 从青花菜花椰菜提取萝卜硫苷化合物的方法
CN101914075B (zh) 一种从褐藻中提取褐藻黄素的方法
CN101747196A (zh) 一种用菊芋制备绿原酸的方法
CN101899224A (zh) 一种利用大孔树脂富集纯化紫甘薯色素的方法
Amin et al. Extraction and quantification of chlorophyll from microalgae Chlorella sp.
CN110156655B (zh) 超声辅助亲水疏水双相系统制备微藻β-胡萝卜素的方法
Lu et al. Identification and production of a novel natural pigment, cordycepoid A, from Cordyceps bifusispora
CN105061437A (zh) 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法
CN103992365B (zh) 一种阿维菌素B2a的提取方法
CN102977172A (zh) 一种提取虫草素的方法
Majik et al. Recent advances in extraction of natural compounds
CN101967177A (zh) 从油茶籽饼粕中提取茶皂素的提取液及提取方法
CN103570647A (zh) 从红豆杉细胞培养液中制备高纯度紫杉醇的方法
CN104031109A (zh) 一种微生物发酵纯化茶皂素的方法
CN103497534A (zh) 一种利用超临界co2流体提取火龙果果皮色素的方法
CN102827125B (zh) 大麦化感抑藻旋光异构体赛克灵的制备方法和应用
CN104341472A (zh) 从火炬树果实提取花色苷的方法
CN103333922B (zh) 一种高色价朱红菌素的获取方法
Anuar et al. Production and extraction of Quercetin and (+)-Chatechin from Phyllanthus niruri callus culture
CN110917235A (zh) 一种植物中天然成分的提取方法
CN104774773A (zh) 转化虎杖苷的虎杖内生菌株烟曲霉j3菌株
CN105348363B (zh) 具有抑制脂堆积作用的六环三萜类化合物及其提取分离方法和应用
CN101307057B (zh) 一种从红乳菇子实体中提取分离红乳菇素的方法
CN103524574A (zh) 一种从列当科植物中制备类叶升麻苷的方法
CN103833798B (zh) 树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20151118

RJ01 Rejection of invention patent application after publication