CN103833798B - 树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法，其特征在于：包含以下步骤：（1）装柱：三菱HP20树脂装柱后甲醇浸泡，水洗至无味；（2）减压过滤：将烤烟超临界总提物与水充分搅拌混合，减压过滤；（3）萃取：用水层与萃取液按体积比1:2的比例进行萃取，然后把萃取后的水层进行减压旋蒸；（4）过树脂：用水层上样到三菱HP20树脂，待其充分吸附后以PH=4.5盐酸酸水洗脱至无生物碱、无色，用甲醇洗脱，将其浓缩去除甲醇后用水溶解即得糖苷初提物；（5）过层析柱：把糖苷初提物采用干法或湿法上样先选择过正相硅胶柱，用氯仿与甲醇的混合物冲洗正相硅胶柱，然后根据不同分离段薄层展析硅胶板上斑点的位置及形状情况确定合并分离段以及选择过反相硅胶或凝胶柱。

Description

树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法
技术领域
本发明涉及一种树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法。
背景技术
烟草香味是烟草品质的重要体现。因此对于烟草香味成分的分离、鉴定和分析一直以来都是烟草研究的重要领域，其中潜香物质结合态糖苷就是烟草香气组成的重要部分。糖苷是单糖或低聚糖的半缩醛羟基和另一分子中的羟基、氨基、硫羟基等失水而产生的化合物，当配基为香气成分时形成的物质即为糖苷。糖苷类化合物是在烟叶生长发育过程中形成的，在自然状态下虽不具挥发性或挥发性很低，但通过分解、调制、陈化、醇化、加工或燃烧能释放出致香成分，因此糖苷类物质的组成和含量对烟叶和烟气香气质量有重要影响。
目前分离烟草中糖苷的方法主要分为三大类：第一类方法是提取的烟叶浸膏经水溶解后直接过树脂，然后再用水层进行有机溶剂萃取，该方法选择先过树脂再萃取，则水层因杂质太多不利于树脂对糖苷的充分吸附；第二类方法是提取的烟叶浸膏经水溶解后，先用有机溶剂萃取，再过不同种类的树脂，该方法提取物经有机溶剂萃取后水层直接上样进树脂，不利于除有机溶剂环节，不利于糖苷的充分吸附。
目前在分离烟叶糖苷类物质的方法中，均存在不利于去除有机溶剂、不利于糖苷类物质充分吸附等缺点，且尚无对树脂柱与层析柱之间以及层析柱之间的先后顺序做出过详细分析论证，也没有报道过糖苷富集过程中层析柱的成本核算和分离效率分析。针对这些缺点，分离富集烟叶中的糖苷类物质并建立相关的检测方法，对于分析烟叶中重要糖苷类物质含量、制备烟叶重要潜香物质具有十分重要的现实意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种成本低廉、高效快速分离烟草多种类糖苷的方法，以解决现有技术中树脂对糖苷的充分吸附不充分、分离成本高的问题。
本发明的技术方案是：一种树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法，其特征在于：包含以下步骤：
（1）装柱：三菱HP20树脂装柱后甲醇浸泡，水洗至无味；（2）减压过滤：将烤烟超临界总提物与水充分搅拌混合，减压过滤；
（3）萃取：用水层与萃取液按体积比1:2的比例进行萃取，然后把萃取后的水层进行减压旋蒸；
（4）过树脂：用水层上样到三菱HP20树脂，待其充分吸附后以PH=4.5盐酸酸水洗脱至无生物碱、无色，用甲醇洗脱，将其浓缩去除甲醇后用水溶解即得糖苷初提物；
（5）过层析柱：把糖苷初提物采用干法或湿法上样先选择过正相硅胶柱，用氯仿与甲醇的混合物冲洗正相硅胶柱，然后根据不同分离段薄层展析硅胶板上斑点的位置及形状情况确定合并分离段以及选择过反相硅胶或凝胶柱。
步骤（2）中烤烟超临界总提物与水的混合比例为体积比1:10。所述萃取液为正己烷:乙醚体积比1:1混合而成。
本发明的有益效果：
一、水层中混有的有机溶剂与水及溶于水中的糖苷不溶而相互排斥，不利于树脂对水层中糖苷等物质的吸附截留，在过三菱HP20树脂之前将其减压旋蒸除去夹杂在水层中的有机溶剂，削弱因相互不溶的排斥力，使得糖苷完全溶于水后更易进入三菱HP20树脂的空腔内，达到最大限度的保留了糖苷种类的齐全。
二、在层析柱的顺序上选择先过正相硅胶柱，然后再过反相硅胶或凝胶柱。这样可以将更多的杂质充分的吸附在便宜的正相硅胶柱上，从而实现保护昂贵反相硅胶或凝胶柱的目的。这样节约了成本。糖苷在烟草中的含量极低，加上糖苷属于极性分子，所以在同等柱床体积下，优先选择正相硅胶柱因其便宜且能吸附分离含量极低的极性分子糖苷，可以实现一次上样量最大化。
附图说明
图1为总提物核磁共振图谱；
图2为三菱HP20树脂分离后糖苷类物质核磁共振图谱；
图3为三菱HP20树脂分离后薄层展析图，其中1、暗箱三用紫外线分析仪；2、碘缸显色；3、ａ萘酚糖苷显色剂；4、生物碱显色剂；
图4为层析柱分离后糖苷类物质核磁共振图谱；
图5为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
1、装柱：三菱HP20树脂装柱后甲醇浸泡48小时，水洗至无味。
2、减压过滤：将烤烟超临界总提物与水按1:10的比例充分搅拌混合，减压过滤。
从图1看出，总提物中化学成分较为复杂，从核磁图谱中，能看出含有生物碱类，糖苷类，萜类，脂肪酸类物质的1H吸收特征峰。
3、萃取：用水层与萃取液（正己烷：乙醚=1:1）按1:2的比例进行萃取，直至萃取液无色为止，最后把萃取后的水层进行减压旋蒸，直至水层中的有机溶剂蒸发完毕。
4、过树脂：用水层上样到三菱HP20树脂，控制流速以快速滴落为宜，待其充分吸附后以PH=4.5盐酸酸水洗脱至无生物碱、无色，用甲醇洗脱，将其浓缩去除甲醇后用水溶解即得糖苷初提物，薄层展析甲醇：丙酮=1:2。采用丙酮、甲醇、水交替的冲洗树脂至白色，最后用水洗至无色无味后加几滴甲醇待下次使用。
从图2和图3对比可以看出，两图得出的结果相互印证，三菱HP20树脂分离后的混合物糖苷特征吸收峰得以加强且杂质峰减少。低场区生物碱类物质的核磁共振吸收基本上消失，可以判断，生物碱类成分与糖苷类成分分离程度较好。
5、过层析柱：把糖苷初提物采用干法或湿法上样先选择过正相硅胶柱，用不同比例的氯仿与甲醇的混合物冲洗正相硅胶柱，然后再根据不同分离段薄层展析斑点情况确定合并分离段以及选择过反相硅胶或凝胶柱。过反相硅胶或凝胶柱的操作流程与正相硅胶类似。
在图4上已经看出，处于糖苷特征吸收峰位置的峰形单一，吸收强度大。说明分离效果良好，能够满足解析化合物结构的需要。

Claims (3)

1.一种树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法，其特征在于：包含以下步骤：
（1）装柱：三菱HP20树脂装柱后甲醇浸泡，水洗至无味；（2）减压过滤：将烤烟超临界总提物与水充分搅拌混合，减压过滤；
（3）萃取：用水层与萃取液按体积比1:2的比例进行萃取，然后把萃取后的水层进行减压旋蒸；
（4）过树脂：用水层上样到三菱HP20树脂，待其充分吸附后以pH=4.5盐酸洗脱至无生物碱、无色，用甲醇洗脱，将其浓缩去除甲醇后用水溶解即得糖苷初提物；
（5）过层析柱：把糖苷初提物采用干法或湿法上样先选择过正相硅胶柱，用氯仿与甲醇的混合物冲洗正相硅胶柱，然后根据不同分离段薄层展析硅胶板上斑点的位置及形状情况确定合并分离段以及选择过反相硅胶或凝胶柱。
2.根据权利要求1所述的一种树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法，其特征在于：步骤（2）中烤烟超临界总提物与水的混合比例为体积比1:10。
3.根据权利要求1所述的一种树脂串联层析柱分离烟草多种类糖苷的方法，其特征在于：所述萃取液为正己烷:乙醚体积比1:1混合而成。
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