CN103018390B - 一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法 - Google Patents
一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法，具体包括鉴别方法和含量测定方法，属于医药技术领域。其中鉴别方法包括性状鉴别和薄层色谱鉴别；含量测定方法是对本发明鲜地黄总苷提取物中的梓醇、益母草苷和毛蕊花糖苷采用高效液相色谱法测定。
Description
技术领域
本发明涉及一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法，具体包括鉴别方法和含量测定方法，属于医药技术领域。
背景技术
在制药技术上，药品生产要达到安全有效、质量可控的基本要求。完善的质量控制标准能够保证药品的可靠性和均一性。本发明是关于一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法。
从鲜地黄及干地黄中，已分离鉴定出多种苷类成分，其中环烯醚萜苷主要有：梓醇，二氢梓醇，乙酰梓醇，益母草苷，桃叶珊瑚苷，单蜜力特苷，蜜力特苷，RehmaglutinA、B、C、D，Acteoside，地黄苷A、B、C、D，Cerebrosid及含氯的Glutinoside，RehmaionosideA、B、C，Rehmapicroside，PurpureasideC，海胆苷，CistanosideA、F，JionosideA、B，JioglutosideA，B，去羟栀子苷，筋骨草苷，8-表番木鳖酸，乙酰梓醇苷等。
从地黄愈伤组织的甲醇提取物中分离鉴定了4种苯乙醇苷类：Acteoside、Forsythiaside、3，4-二羟基-O--D-吡喃葡糖-(1-3)-4-O-咖啡酰--D-吡喃葡糖苷、3，4-二羟基-O--D-吡喃葡糖-(1-3)-O--L-鼠李吡喃糖-(1-6)-4-O-咖啡酰--D-吡喃葡糖苷及3，4-二羟基--苯乙基-O--L-鼠李吡喃糖-(1-3)-O--D-半乳吡喃糖-(1-6)-4-O-咖啡酰-α-D-喃葡糖苷。采用HPLC法测定鲜地黄、干地黄、熟地黄中毛蕊花糖苷含量，测得鲜地黄、干地黄、熟地黄中毛蕊花糖苷的含量分别是：0.116％、0.093％、0.04％。
地黄中还含有水苏糖、棉子糖、葡萄糖、甘露三糖、毛蕊花糖、半乳糖等寡糖及地黄多糖、地黄多糖β等糖类成分。
经过发明人长期对地黄的药学研究，发现了一种从鲜地黄中提取的总苷类提取物，及其在制备治疗糖尿病药物中的用途。
发明内容
本发明目的是提供一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法，通过此方法可以很好地控制该鲜地黄总苷提取物的质量，为该鲜地黄总苷提取物建立了质量标准。
本发明所提到的鲜地黄总苷提取物是通过如下方法制备而成的：
取鲜地黄，压榨榨汁，榨汁液加入4倍量95％乙醇，放置过夜，上清液减压浓缩至相对密度1.1，喷雾干燥，得鲜地黄干粉；鲜地黄干粉加水溶解并稀释至相对密度1.05，滤过，滤液上大孔吸附树脂，控制流速为0.5～1.5BV/h；先用2.0BV的水进行除杂，然后用2.0BV80％乙醇洗脱，收集80％醇洗脱液，减压浓缩，60～70℃真空干燥，粉碎，即得。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法，其特征是包括如下方法中的一种或全部：性状鉴别、薄层色谱鉴别和有效成分含量测定。
一、性状鉴别
本发明的鲜地黄总苷提取物，呈棕黄色粉末；气特异，味微苦。
二、薄层鉴别
(1)梓醇、益母草苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末10-50mg，置10ml量瓶中，加50％-80％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取梓醇、益母草苷对照品，分别用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12～16∶4～8∶0.1～1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
(2)毛蕊花糖苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末10-50mg，置10ml量瓶中，加50％-80％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷照品，用甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以14～18∶0.2～2∶0.5～5的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
优选地，薄层鉴别鉴别方法为：
(1)梓醇、益母草苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末25mg，置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取梓醇、益母草苷对照品，分别用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以14∶6∶1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
(2)毛蕊花糖苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末50mg，置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷照品，用甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以16∶0.5∶2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
三、含量测定
(1)梓醇和益母草苷：用高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为210nm，柱温30℃。理论塔板数按梓醇峰计算应不低于10000。
对照品溶液的制备：取梓醇、益母草苷对照品适量，精密称定，各加5％乙腈制成每1ml含梓醇、益母草苷0.4mg、0.4mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷10-50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入0-50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2)毛蕊花糖苷用高效液相色谱法测定。
色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以15∶85～20∶80的乙腈-水-0.1％冰醋酸为流动相；检测波长为334nm；流速为1ml/min。理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：精密称取毛蕊花糖苷对照品适量，加流动相制成每1ml中含毛蕊花糖苷10μg的溶液。
供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷约10-100mg，精密称定，置50ml量瓶中，加20％-50％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
鲜地黄总苷按干燥品计算，含梓醇、益母草苷及毛蕊花糖苷之和(C29H36015)不得少于50.0％。
优选地，含量测定方法：
(1)梓醇和益母草苷含量测定中，供试品溶液的制备：取本品50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
(2)毛蕊花糖苷含量测定中，色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以16∶84的乙腈-水-0.1％冰醋酸为流动相；供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
说明书附图
图1鲜地黄总苷中梓醇和益母草苷高效液相图
图2鲜地黄总苷中毛蕊花糖苷高效液相图
图3梓醇对照品高效液相图
图4益母草苷对照品高效液相图
图5毛蕊花糖苷对照品高效液相图
具体实施方式
实施例1
梓醇、益母草苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末10mg，置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取梓醇、益母草苷对照品，分别用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(12∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
毛蕊花糖苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末10mg，置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷照品，用甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(14∶0.2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例2
梓醇、益母草苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末50mg，置10ml量瓶中，加80％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取梓醇、益母草苷对照品，分别用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(16∶8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
毛蕊花糖苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末50mg，置10ml量瓶中，加80％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷照品，用甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(18∶2∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例3
梓醇、益母草苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末30mg，置10ml量瓶中，加60％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取梓醇、益母草苷对照品，分别用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(14∶6∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
毛蕊花糖苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末30mg，置10ml量瓶中，加60％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷照品，用甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(15∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例4
梓醇、益母草苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末25mg，置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取梓醇、益母草苷对照品，分别用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(14∶6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
毛蕊花糖苷的鉴别
取鲜地黄总苷粉末50mg，置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并于室温下定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷照品，用甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16∶0.5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5
梓醇和益母草苷高效液相色谱法进行含量测定
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为210nm，柱温30℃。理论塔板数按梓醇峰计算应不低于10000。
对照品溶液的制备：取梓醇、益母草苷对照品适量，精密称定，各加5％乙腈制成每1ml含梓醇、益母草苷0.4mg、0.4mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图1。
毛蕊花糖苷高效液相色谱法进行含量测定
色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-0.1％冰醋酸(16∶84)为流动相；检测波长为334nm；流速为1ml/min。理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：精密称取毛蕊花糖苷对照品适量，加流动相制成每1ml中含毛蕊花糖苷10μg的溶液。
供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图2。
鲜地黄总苷按干燥品计算，含梓醇、益母草苷及毛蕊花糖苷之和(C29H36O15)不少于50.0％。
实施例6
梓醇和益母草苷高效液相色谱法进行含量测定，供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入10％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
毛蕊花糖苷高效液相色谱法进行含量测定中，色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以15∶85的乙腈-水-0.1％冰醋酸为流动相；供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加20％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
实施例7
梓醇和益母草苷高效液相色谱法进行含量测定，供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷40mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入30％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
毛蕊花糖苷高效液相色谱法进行含量测定中，色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20∶80的乙腈-水-0.1％冰醋酸为流动相；供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷约80mg，精密称定，置50ml量瓶中，加40％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
Claims (2)
1.一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法，其特征是有效成分含量测定如下：
(1)梓醇和益母草苷含量测定
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为210nm，柱温30℃；理论塔板数按梓醇峰计算应不低于10000；
对照品溶液的制备：取梓醇、益母草苷对照品适量，精密称定，各加5％乙腈制成每1ml含梓醇、益母草苷0.4mg、0.4mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷提取物10-50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入0-50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(2)毛蕊花糖苷含量测定
色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以15∶85～20∶80的乙腈-水-0.1％冰醋酸为流动相；检测波长为334nm；流速为1ml/min；理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：精密称取毛蕊花糖苷对照品适量，加流动相制成每1ml中含毛蕊花糖苷10μg的溶液；
供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷提取物20-100mg，精密称定，置50ml量瓶中，加20％-50％甲醇溶解并稀释至刻度，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
鲜地黄总苷提取物按干燥品计算，含梓醇、益母草苷及毛蕊花糖苷(C29H36O15)之和不得少于50.0％。
2.根据权利要求1所述的一种鲜地黄总苷提取物的质量控制方法，其特征是
(1)梓醇和益母草苷含量测定中，供试品溶液的制备：取本品50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
(2)毛蕊花糖苷含量测定中，色谱条件和系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以16∶84的乙腈-水-0.1％冰醋酸为流动相；供试品溶液的制备：取鲜地黄总苷提取物50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
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| CN103018390A (zh) | 2013-04-03 |
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