CN102994389B - 一种鱼腥藻培养基配方 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于鱼腥藻的培养基，该培养基的配方如下：NH₄NO₃ 200～250mg/L，NaNO₃ 500～550mg/L，K₂SO₄ 400～500mg/L，CaCl₂.2H₂O 150～200mg/L，MgSO₄.7H₂O 100～150mg/L，K₂HPO₄ 400～500mg/L，Na₂S₂O₃.5H20 15～20mg/L,H₃BO₃ 20～25mg/L，CuSO₄.5H₂O 2～4mg/L；柠檬酸铁铵0.2～0.4mg/L，烟酸0.1～0.2mg/L，维生素B₆ 0.2～0.3mg/L，维生素B₁ 0.2～0.3mg/L，NNA 0.05～0.1mg/L，IBA 0.03～0.05mg/L。本发明所述的培养基在培养鱼腥藻时具有存活率高，生长速率快的特点，而且不易被其他细菌污染。

Description

一种鱼腥藻培养基配方

技术领域

本发明涉及一种藻类培养基，特别地涉及一种鱼腥藻的培养基配方。

背景技术

水华鱼腥藻能固定大气中的游离氮，是固氮蓝藻的一种。它生长繁殖迅速，固氮量达10-51kg/ha，其藻体沉入土壤后可被作物根系吸收，特有的藻促生长素能促进作物茁壮生长，使作物增产10-30％，因此这是一种良好的有机肥。而农用化学肥料和农药的生产、施用又会带来大量的温室气体排放，因此开发农业生物固氮技术，降低化肥施用量，是当前发展低碳农业的重要途径。水华鱼腥藻的用途主要有：提取天然色素、藻胆蛋白和多糖，藻毒素研究及利用，生物固氮及其他方面等。尤其是水华鱼腥藻能够在一定条件的诱导下产生大量厚壁孢子，这种厚壁孢子比营养细胞的存活率要高很多，因此更利于运输和保藏，因此水华鱼腥藻的应用前景是广阔的。

为了进一步研究鱼腥藻的生理特性，并繁育足够的鱼腥藻以供干燥使用，需要对其进行实验室专项培养。但是目前关于鱼腥藻的培养方法少有报道，而专门用于鱼腥藻的培养基的报道就更少了。

发明内容

本发明提供了一种用于鱼腥藻的培养基，该培养基的配方如下：

NH₄NO₃ 200～250mg/L，NaNO₃ 500～550mg/L，K₂SO₄ 400～500mg/L，CaCl₂.2H₂O 150～200mg/L，MgSO₄.7H₂O 100～150mg/L，K₂HPO₄ 400～500mg/L，Na₂S₂O₃.5H₂0 15～20mg/L,H₃BO₃ 20～25mg/L，CuSO₄.5H₂O 2～4mg/L；

柠檬酸铁铵0.2～0.4mg/L，烟酸0.1～0.2mg/L，维生素B₆ 0.2～0.3mg/L，维生素B₁ 0.2～0.3mg/L，NNA 0.05～0.1mg/L，IBA 0.03～0.05mg/L。

优选地，在上述培养基中添加Mo(NO₃)₃.5H₂O 1.5～2mg/L。

本发明所述的培养基在培养鱼腥藻时具有存活率高，生长速率快的特点，而且不易被其他细菌污染。尤其是通过实验发现较一般培养基中更高的铜离子含量能加快鱼腥藻的生长速度。下面的实施例以及对比实验可以清楚地反应本发明所述培养基的特点。

具体实施方式

实施例1

配制如下配方的培养基：

NH₄NO₃ 200mg/L，NaNO₃ 500mg/L，K₂SO₄ 400mg/L，CaCl₂.2H₂O 150mg/L，MgSO₄.7H₂O 100mg/L，K₂HPO₄ 400mg/L，Na₂S₂O₃.5H₂0 15mg/L,H₃BO₃ 20mg/L，CuSO₄.5H₂O 2mg/L，Mo(NO₃)₃.5H₂O 1.5mg/L；

柠檬酸铁铵0.2mg/L，烟酸0.1mg/L，维生素B₆ 0.2mg/L，维生素B₁ 0.2mg/L，NNA0.05mg/L，IBA 0.03mg/L。

取对数生长期的水华鱼腥藻接种到该培养基中进行培养，每天光照10小时，培养箱温度控制在30摄氏度左右，每2天记录培养基中鱼腥藻的细胞密度。

实施例2

NH₄NO₃ 250mg/L，NaNO₃ 550mg/L，K₂SO₄ 500mg/L，CaCl₂.2H₂O 200mg/L，MgSO₄.7H₂O 150mg/L，K₂HPO₄ 500mg/L，Na₂S₂O₃.5H₂0 20mg/L,H₃BO₃25mg/L，CuSO₄.5H₂O 4mg/L，Mo(NO₃)₃.5H₂O 2mg/L；

柠檬酸铁铵0.4mg/L，烟酸0.2mg/L，维生素B₆ 0.3mg/L，维生素B₁ 0.3mg/L，NNA 0.1mg/L，IBA 0.05mg/L。

取对数生长期的水华鱼腥藻接种到该培养基中进行培养，每天光照10小时，培养箱温度控制在30摄氏度左右，每2天记录培养基中鱼腥藻的细胞密度。

实施例3

NH₄N_O3 220mg/L，NaNO₃ 520mg/L，K₂SO₄ 450mg/L，CaCl₂.2H₂O 170mg/L，MgSO₄.7H₂O 120mg/L，K₂HPO₄ 450mg/L，Na₂S₂O₃.5H₂0 17mg/L,H₃BO₃ 22mg/L，CuSO₄.5H₂O 3mg/L，Mo(NO₃)₃.5H₂O 1.7mg/L；

柠檬酸铁铵0.3mg/L，烟酸0.15mg/L，维生素B₆ 0.25mg/L，维生素B₁ 0.25mg/L，NNA0.07mg/L，IBA 0.04mg/L。

取对数生长期的水华鱼腥藻接种到该培养基中进行培养，每天光照10小时，培养箱温度控制在30摄氏度左右，每2天记录培养基中鱼腥藻的细胞密度。

实施例4

NH₄NO₃ 220mg/L，NaNO₃ 520mg/L，K₂SO₄ 450mg/L，CaCl₂.2H₂O 170mg/L，MgSO₄.7H₂O 120mg/L，K₂HPO₄ 450mg/L，Na₂S₂O₃.5H₂0 17mg/L,H₃BO₃ 22mg/L，CuSO₄.5H₂O 3mg/L；

柠檬酸铁铵0.3mg/L，烟酸0.15mg/L，维生素B₆ 0.25mg/L，维生素B₁ 0.25mg/L，NNA0.07mg/L，IBA 0.04mg/L。

取对数生长期的水华鱼腥藻接种到该培养基中进行培养，每天光照10小时，培养箱温度控制在30摄氏度左右，每2天记录培养基中鱼腥藻的细胞密度。

培养基对比实验

使用BG11，Zarrouk，Allen这三种培养基作为对照培养基，与实施例1－4进行对比，对比的结果如下表所示：

从该表可以看出，使用本发明所提供的培养基比使用对比培养基能更快速地使鱼腥藻增殖，达到鱼腥藻密度顶峰的时间比使用对照的培养基快了2天，而且鱼腥藻能达到的最高浓度也高于对照培养基。说明了本发明提供的培养基具有明显优势。

另外，可以注意到实施例1－3的培养基中均添加了Mo(NO₃)₃.5H₂O，而实施例4中的培养基中未添加Mo(NO₃)₃.5H₂O。从上表看，当鱼腥藻处于增长期时加不加Mo(NO₃)₃.5H₂O效果不明显。但是我们通过实验可以看到，实施例4中的鱼腥藻在达到浓度顶峰之后鱼腥藻死亡的速度远远快于实施例1－3，因此添加Mo(NO₃)₃.5H₂O可以使鱼腥藻在培养基中保持浓度高峰水平的时间大大增加，可以增加2天左右。

对于Mo(NO₃)₃.5H₂O的添加计量，我们做了如下实验。直接取实施例4中第6天的培养液，在其中加入不同计量的Mo(NO₃)₃.5H₂O，然后继续培养，从而确定合适的Mo(NO₃)₃.5H₂O的添加计量。通过下表的数据可以看出，Mo(NO₃)₃.5H₂O的添加计量在1.5～2mg/L的范围内时效果最好。

Mo(NO3)3.5H2O（mg/L）	第0天(×106·ml)	第2天(×106·ml)	第4天(×106·ml)
				0.5	27.05	18.11	10.38
1	27.05	19.34	14.36
				1.5	27.05	22.77	18.78
2	27.05	22.31	17.66
				2.5	27.05	17.35	11.47
3	27.05	16.77	10.12

本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。

Claims (1)

1.一种用于鱼腥藻的培养基，该培养基的配方如下：

NH₄NO₃200～250mg/L，NaNO₃500～550mg/L，K₂SO₄400～500mg/L，CaCl₂.2H₂O150～200mg/L，MgSO₄.7H₂O100～150mg/L，K₂HPO₄400～500mg/L，Na₂S₂O₃.5H₂015～20mg/L,H₃BO₃20～25mg/L，CuSO₄.5H₂O2～4mg/L；

柠檬酸铁铵0.2～0.4mg/L，烟酸0.1～0.2mg/L，维生素B₆0.2～0.3mg/L，维生素B₁0.2～0.3mg/L，NNA0.05～0.1mg/L，IBA0.03～0.05mg/L，Mo(NO₃)₃.5H₂O1.5～2mg/L。