CN102978143A - 乳杆菌冻干产品及其制备方法 - Google Patents
乳杆菌冻干产品及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102978143A CN102978143A CN2012105609002A CN201210560900A CN102978143A CN 102978143 A CN102978143 A CN 102978143A CN 2012105609002 A CN2012105609002 A CN 2012105609002A CN 201210560900 A CN201210560900 A CN 201210560900A CN 102978143 A CN102978143 A CN 102978143A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- temperature
- lactobacillus
- vitamin
- ratio
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的冻干粉制剂的制备方法，提供了一种在制备嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品过程中使用的培养基；发明人将影响细菌发酵的两个关键因素相结合，创造性地在高密度发酵过程中采用两段式pH、三段式变温相结合的方式进行发酵，最大细胞生物量和最高发酵活力较单一方式得到明显提高，同时得到的冻干制剂中活菌数高、稳定性好；同时还提供了一种优良的冻干保护剂。
Description
技术领域
本发明涉及嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的冻干粉制剂的制备方法。
背景技术
嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌都属于乳酸菌，革兰氏染色阳性、无芽孢杆菌，在其冻干制剂的生产中，存在菌体死亡率较高及稳定性能差的缺点，致使产品中活菌含量少、用量大、发酵效果差，制造和使用成本均较高。此外，高密度发酵培养基组分及用量配制不合理，缺乏针对性，不利于高密度发酵，不利于冻干制品的制备。
本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种适合嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基及其冻干产品的制备方法。
发明内容
具体技术方案之一：特别优选的一种培养基，一种适用于嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基，培养基由以组分配制而成，80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；其中，优选的，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3，这些配比带来了难以预料的技术效果。普通常规培养基也适用于本发明。
具体技术方案之二：深冻保护剂，其组成及配制：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL。
具体技术方案之三 ：嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行：
一、高密度培养
将按常规方法活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6.0-6.5，发酵7.0h；第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3.0h；发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42.5-45.0℃，发酵3.5h；第二阶段将发酵温度控制在35-37℃，发酵3.5h；第三阶段将发酵温度控制在37-40℃，发酵3h；其中所述培养基为：80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中；其中，优选，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3。
二、洗脱
发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
三、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4℃，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为：用孔径为100～200nm、面积为1.0m2的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3；离心浓缩具体为：以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min；
四、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为1：1-1：2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL；将此混合物在4-15℃的环境中放置20h。
五、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2℃/min的降温速率降至-50℃，保持30min；在真空度为0.05MPa的条件下，以1℃/min的速率升温至-35℃，并维持此温度至真空度达到0.01MPa完成主干燥阶段；以5℃/min的速率升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏。
申请人先前研究了单一温度培养模式和变温培养模式对乳酸菌发酵活力和生物量的影响，结果表明采用两阶段的温度控制方式，发酵初期高温进行发酵，后期低温进行发酵，与单一温度发酵相比，乳酸菌的最大细胞生物量和最高发酵活力均有所提高。但是，发明人在研究过程中发现变温发酵虽然提高了细胞生物量和最高发酵活力，但是受pH影响很大，而且在该菌冷冻干燥后发酵活力和细胞生物量有明显下降，影响冻干制剂质量、提高了使用成本，单独使用两段式的温度控制模式而不对pH进行优化控制会导致在发酵过程中出现代谢产物的积累，导致乳酸菌的生长和繁殖受到抑制。单独使用两段式的pH控制模式而不对温度进行优化控制会导致由于温度不是菌体细胞的最佳生长模式，而造成乳酸菌的生长率过低。
在高密度培养过程中，往往通过控制培养过程中培养液的pH值，以解除酸对菌体生长的抑制作用，促进菌株生长。但是该方法当菌体浓度达一定的数量时，中和反应将不起作用。因此，本发明专利采用两段式的pH控制方式，此外第二阶段不控制pH，使菌体细胞处于应激的状态，从而产生应激蛋白，增加了菌体抵御不良条件的抗性和冻干存活率。最适温度随着菌体生长阶段变化而改变。温度通过影响蛋白质、核酸等生物大分子的结构和功能、细胞结构如细胞膜的流动性和完整性以及胞内酶的活性来影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢。较低的接种温度导致活菌数量缓慢增加，有利于延长乳酸菌的对数期和稳定期，较高的培养温度将增加菌体细胞的生长速度。本发明专利发酵初期采用较高的发酵温度以缩短迟滞期使其快速进行对数生长期，当进入对数生长期时采用较低的发酵温度以延长乳酸菌的对数生长期，当到达对数生长期末期时，采用相对适中的温度以缩短到达稳定期的时间。
本发明高密度培养基是针对嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌特别配制的，本发明专利在基础培养基中加入的甜菜糖蜜和玉米淀粉糖浆中含有的甜菜碱和多种糖类有效的缓解了菌种在增殖过程中由于高的渗透压对菌体细胞带来的损伤并为其生长提供了大量优质的碳源；尿嘧啶和黄嘌呤直接快速的为乳杆菌合成遗传物质提供了基本成分；生物素、叶酸、尼克酸、泛酸钙、核黄素和盐酸硫胺素是乳杆菌生长过程中重要酶的辅助因子，为乳杆菌在增殖过程中快速有效的合成蛋白和脂肪提供了有力的物质保障。增菌培养基中同时增加了黄嘌呤和尿嘧啶的使用量，为后续冻干产品的制备过程中增加了功能性益生性乳杆菌的存活率。黄嘌呤和尿嘧啶的用量比2:1效果好，可明显提高存活率。
[014]与现有技术相比，本发明具有以下突出效果：
(1)发明人将影响细菌发酵的两个关键因素相结合，创造性地在高密度发酵过程中采用两段式pH、三段式变温相结合的方式进行发酵，最大细胞生物量和最高发酵活力较单独的两阶段的温度或单独的两段式pH控制方式，得到明显提高，同时得到的冻干制剂中活菌数高、稳定性好。
（2）本发明高密度培养基是针对嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌特别配制的，在先前研究的基础上，特别加入了0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁，甲酸是乳酸杆菌的促生长因子，乳糖是乳酸杆菌生长的优质碳源，麦芽汁中含有丰富的氨基酸和维生素，三者协同作用，为提供高质量的高密度培养基做出重要贡献，优选配制的培养基与两段式pH、三段式变温发酵的方式相结合产生了预料不到的技术效果。另外，使用其他常规的培养基，同时采用本申请中所述的两段式pH、三段式变温相结合的方式进行发酵，也能够取得好的技术效果。
（3）冻干保护剂也是针对深冻产品配制的，是特别优选的。本发明专利充分的利用了乳蛋白对菌体细胞的包埋作用、斯盘60对细胞膜的保护作用、海藻糖防止大冰晶的形成和保水作用、甜菜糖蜜降低渗透压作用及维生素C保持适合的氧化还原电势的作用，上述保护体系增加了冷冻干燥对菌体的损伤，此外，在冷冻干燥前将菌体置于低温下，使菌体产生抗冻蛋白，也有效的提高了菌体的冻干存活率。其它常规冻干保护剂也可以被用于本发明。
（4）本专利技术产品在冻藏的条件下可保存1年，活菌数不低于1×1012cfu/g。
（5）上述乳酸菌在优化的单一温度（42.5℃）和pH（6.2）的条件下培养的活菌数为2.2×108CFU/mL。两段式变温培养：第一阶段（42.5-45.0℃），第二阶段（35-37℃）的条件下培养的活菌数为8.7×108CFU/mL。与单一的温度和pH培养模式相比，活菌数增加了3.9倍。然而，本申请中的两段式pH、三段式变温相结合的发酵方式中进行乳酸菌的高密度培养，乳酸菌的活菌数为7.6×109CFU/mL。与单一的培养模式相比活菌数增加了34.5倍，与两段式变温培养模式相比活菌数增加了8.7倍。两段式pH、三段式变温相结合的发酵方式与 “ 两段式变温”的培养模式及常规单一温度和PH的培养模式的活菌数相比差异显著（P＜0.001）。
具体实施方式：
实施例1、一种适用于嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基，培养基由以组分配制而成，80g的脱脂乳粉，50g的甜菜糖蜜，40g的玉米淀粉糖浆、0.50g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；其中，。
实施例2、一种适用于嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基，培养基由以组分配制而成， 120g的脱脂乳粉， 70g的甜菜糖蜜， 60g的玉米淀粉糖浆、0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3。
实施例3、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行：
1、高密度培养
将经过活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6.0，发酵7.0h；第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3.0h；发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42.5℃，发酵3.5h；第二阶段将发酵温度控制在35℃，发酵3.5h；第三阶段将发酵温度控制在37℃，发酵3h；其中所述培养基为：80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3。
2、洗脱
发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
3、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4℃，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为：用孔径为100～200nm、面积为1.0m2的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3；离心浓缩具体为：以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min；
4、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为1：1-1：2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL；将此混合物在4-15℃的环境中放置20h。
5、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2℃/min的降温速率降至-50℃，保持30min；在真空度为0.05MPa的条件下，以1℃/min的速率升温至-35℃，并维持此温度至真空度达到0.01MPa完成主干燥阶段；以5℃/min的速率升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏。
实施例4、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行：
1、高密度培养
将经过活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6.5，发酵7.0h；第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3.0h；发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在45.0℃，发酵3.5h；第二阶段将发酵温度控制在37℃，发酵3.5h；第三阶段将发酵温度控制在40℃，发酵3h；其中所述培养基为：80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3。
2、洗脱
发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
3、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4℃，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为：用孔径为100～200nm、面积为1.0m2的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3；离心浓缩具体为：以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min；
4、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为1：1-1：2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL；将此混合物在4-15℃的环境中放置20h。
5、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2℃/min的降温速率降至-50℃，保持30min；在真空度为0.05MPa的条件下，以1℃/min的速率升温至-35℃，并维持此温度至真空度达到0.01MPa完成主干燥阶段；以5℃/min的速率升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏。
实施例5
嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行：
1、高密度培养
将经过活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6.2，发酵7.0h；第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3.0h；发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在43.0℃，发酵3.5h；第二阶段将发酵温度控制在36℃，发酵3.5h；第三阶段将发酵温度控制在38℃，发酵3h；其中所述培养基为：80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3。
2、洗脱
发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
3、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4℃，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为：用孔径为100～200nm、面积为1.0m2的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3；离心浓缩具体为：以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min；
4、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为1：1-1：2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL；将此混合物在4-15℃的环境中放置20h。
5、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2℃/min的降温速率降至-50℃，保持30min；在真空度为0.05MPa的条件下，以1℃/min的速率升温至-35℃，并维持此温度至真空度达到0.01MPa完成主干燥阶段；以5℃/min的速率升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏。
Claims (5)
1.一种在制备嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌深冻产品过程中使用的培养基，培养基由以下组分及用量配制而成，80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3。
2.嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行：
一、高密度培养
将按常规方法活化的嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6.0-6.5，发酵7.0h；第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3.0h；发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42.5-45.0℃，发酵3.5h；第二阶段将发酵温度控制在35-37℃，发酵3.5h；第三阶段将发酵温度控制在37-40℃，发酵3h；其中所述培养基为：80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3；
二、洗脱
三、富集
四、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为1：1-1：2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL；将此混合物在4-15℃的环境中放置20h；
五、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2℃/min的降温速率降至-50℃，保持30min；在真空度为0.05MPa的条件下，以1℃/min的速率升温至-35℃，并维持此温度至真空度达到0.01MPa完成主干燥阶段；以5℃/min的速率升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏。
3.根据权利要求2任一项所述的方法，其中的所述的洗脱步骤具体为：发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
4.根据权利要求3任一项所述的方法，其中所述的富集步骤具体为：洗脱结束后，将发酵液的温度降至4℃，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为：用孔径为100～200nm、面积为1.0m2的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3；离心浓缩具体为：以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min。
5.嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的冻干产品，按权利要求1-4任一项所述的方法制备。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210560900.2A CN102978143B (zh) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | 乳杆菌冻干产品及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210560900.2A CN102978143B (zh) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | 乳杆菌冻干产品及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102978143A true CN102978143A (zh) | 2013-03-20 |
| CN102978143B CN102978143B (zh) | 2014-04-30 |
Family
ID=47852485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210560900.2A Active CN102978143B (zh) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | 乳杆菌冻干产品及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102978143B (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104419644A (zh) * | 2013-09-10 | 2015-03-18 | 上海市刑事科学技术研究院 | 一种发光细菌冻干制剂及其制备方法 |
| CN106616789A (zh) * | 2016-12-09 | 2017-05-10 | 北京味食源食品科技有限责任公司 | 老油风味香精及其制备方法 |
| CN106754374A (zh) * | 2016-11-22 | 2017-05-31 | 郑州大学 | 一种冻干保护剂及其制备方法、使用方法 |
| CN111286469A (zh) * | 2018-12-10 | 2020-06-16 | 东北农业大学 | 一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法 |
| EP3369805B1 (en) | 2015-10-30 | 2020-08-26 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Method for producing dried microbial cells |
| CN113025514A (zh) * | 2019-12-25 | 2021-06-25 | 百岳特生物技术（上海）有限公司 | 具有高浓度活菌的微粒结构及其制备方法 |
| CN114292788A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 江苏德禧生物科技有限公司 | 一种活性益生菌冷冻干燥的制备方法 |
| CN114601169A (zh) * | 2022-04-11 | 2022-06-10 | 上海明现生物科技有限公司 | 一种可即食的高活性益生菌冻干粉的制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101948776A (zh) * | 2010-08-30 | 2011-01-19 | 哈尔滨工业大学 | 功能性益生性乳杆菌高密度培养及其深冻产品的制备方法 |
-
2012
- 2012-12-21 CN CN201210560900.2A patent/CN102978143B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101948776A (zh) * | 2010-08-30 | 2011-01-19 | 哈尔滨工业大学 | 功能性益生性乳杆菌高密度培养及其深冻产品的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张丁丁等: "B族维生素和核酸碱基对唾液乳杆菌生长和产胞外多糖的影响", 《中国奶牛》 * |
| 张兰威: "乳酸菌优良菌株的选育及直投式酸奶发酵剂的研制", 《中国博士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 * |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104419644A (zh) * | 2013-09-10 | 2015-03-18 | 上海市刑事科学技术研究院 | 一种发光细菌冻干制剂及其制备方法 |
| EP3369805B1 (en) | 2015-10-30 | 2020-08-26 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Method for producing dried microbial cells |
| CN106754374B (zh) * | 2016-11-22 | 2019-11-12 | 郑州大学 | 一种冻干保护剂及其制备方法、使用方法 |
| CN106754374A (zh) * | 2016-11-22 | 2017-05-31 | 郑州大学 | 一种冻干保护剂及其制备方法、使用方法 |
| CN106616789B (zh) * | 2016-12-09 | 2018-06-22 | 北京味食源食品科技有限责任公司 | 老油风味香精及其制备方法 |
| CN106616789A (zh) * | 2016-12-09 | 2017-05-10 | 北京味食源食品科技有限责任公司 | 老油风味香精及其制备方法 |
| CN111286469A (zh) * | 2018-12-10 | 2020-06-16 | 东北农业大学 | 一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法 |
| CN111286469B (zh) * | 2018-12-10 | 2022-11-01 | 东北农业大学 | 一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法 |
| CN113025514A (zh) * | 2019-12-25 | 2021-06-25 | 百岳特生物技术（上海）有限公司 | 具有高浓度活菌的微粒结构及其制备方法 |
| US11066637B1 (en) | 2019-12-25 | 2021-07-20 | Tci Co., Ltd. | Particulate structure with a high concentration of live bacteria and method of preparing the same |
| TWI740323B (zh) * | 2019-12-25 | 2021-09-21 | 大江生醫股份有限公司 | 高穩定性的菌粉微粒結構及其製備方法 |
| CN114292788A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 江苏德禧生物科技有限公司 | 一种活性益生菌冷冻干燥的制备方法 |
| CN114601169A (zh) * | 2022-04-11 | 2022-06-10 | 上海明现生物科技有限公司 | 一种可即食的高活性益生菌冻干粉的制备方法 |
| CN114601169B (zh) * | 2022-04-11 | 2023-04-21 | 上海明现生物科技有限公司 | 一种可即食的高活性益生菌冻干粉的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102978143B (zh) | 2014-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102978143B (zh) | 乳杆菌冻干产品及其制备方法 | |
| Hayek et al. | Cultivation media for lactic acid bacteria used in dairy products | |
| CN101502287B (zh) | 一种直投式酸奶发酵剂的制备方法 | |
| CN103555598B (zh) | 一种食用酵素复合菌剂及其制备方法 | |
| US20120064606A1 (en) | Method for producing high concentrate lactic acid bacteria with membrane bioreactor and freeze-dried, lactic acid bacteria powder | |
| CN107034149A (zh) | 一种马克斯克鲁维酵母菌冻干菌剂的制备方法及其用途 | |
| CN102031248B (zh) | 一种微生物活菌制剂及其制备方法和应用 | |
| CN110616159A (zh) | 一种马克斯克鲁维酵母菌冻干菌粉制备方法 | |
| CN103999982B (zh) | 一种发酵藤茶和发酵藤茶饮料的生产方法 | |
| CN104152371A (zh) | 一种直投式乳酸菌发酵乳用发酵剂的制作方法 | |
| CN106509100A (zh) | 一种含有高活性菌固体酸奶粉的生产方法 | |
| CN103141722B (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌大豆酸乳直投式发酵剂的制备方法 | |
| CN103141723B (zh) | 一种干酪乳杆菌大豆酸乳直投式发酵剂的制备方法 | |
| CN102453681B (zh) | 用于约氏乳杆菌真空冷冻干燥的保护剂及其应用 | |
| CN102311927A (zh) | 一种酿酒酵母高密度发酵培养基和酿酒酵母高密度发酵方法 | |
| CN102334605B (zh) | 一种直投式丁酸梭菌发酵剂及其制备方法 | |
| CN106497842B (zh) | 一种乳酸菌与黑曲霉混合固态发酵制剂的制备方法与应用 | |
| CN101700105A (zh) | 奶牛用微生态饲料添加剂及制备方法 | |
| CN101948774A (zh) | 功能性益生性乳杆菌高密度培养及其冻干产品的制备方法 | |
| CN102172253B (zh) | 一种常温下制备乳酸菌直投式发酵剂的方法 | |
| CN100400649C (zh) | 一种直投式双歧杆菌纯种冻干发酵剂的复合保护剂 | |
| CN103013832B (zh) | 乳杆菌深冻产品及其制备方法 | |
| CN104357359A (zh) | 一种产胆盐水解酶副干酪乳杆菌干粉活菌制剂的生产技术 | |
| CN100480372C (zh) | 高含l-乳酸发酵乳的混合菌发酵剂及其制备方法 | |
| CN112175851A (zh) | 乳酸杆菌混合高密度发酵及乳酸杆菌复合菌制剂的制备 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220824 Address after: 1st and 2nd Floor, Building 5, No. 1151, Guangtai Road, Fengxian District, Shanghai, 201400 Patentee after: Zhongchuang Yike (Shanghai) Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 150000 No. 92, West Da Zhi street, Nangang District, Harbin, Heilongjiang. Patentee before: HARBIN INSTITUTE OF TECHNOLOGY |