CN102908412B

CN102908412B - 一种白芍超微粉及其制备方法

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Publication number: CN102908412B
Application number: CN201210367211.XA
Authority: CN
Inventors: 陈照荣
Original assignee: ZHEJIANG BAICAO TRADITIONAL CHINESE MEDICINE PIECES CO Ltd
Current assignee: Zhejiang Zuo Libaicao prepared slices of Chinese crude drugs company limited
Priority date: 2012-09-28
Filing date: 2012-09-28
Publication date: 2014-04-23
Anticipated expiration: 2032-09-28
Also published as: CN102908412A

Abstract

本发明属于中药技术领域，涉及白芍药材加工技术领域，特别涉及一种采用冷冻干燥方法制得的白芍超微粉及其制备方法。该白芍超微粉是以如下方法制得的粉末：将新鲜的带皮白芍切片，粉碎，粉碎后将其完全冰冻结实，再进行真空冷冻干燥24小时以上，干燥后的药材置于振动式超微粉碎研磨混炼机中在-25℃到-30℃温度下进行超微粉碎，得到白芍超微粉产品。本发明解决了现有的白芍炮制或加工处理方法得到的产品中其有效成分芍药苷的含量不高的缺陷，提有效成分芍药苷的含量较高、稳定性好。

Description

一种白芍超微粉及其制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及白芍药材加工技术领域，特别涉及一种采用冷冻干燥方法制得的白芍超微粉及其制备方法。

背景技术

白芍为双子叶植物药毛茛科植物芍药（栽培种）的根。白芍的炮制一般有两种：1、白芍：拣去杂质，分开大小个，用水浸泡至八成透，捞出，晒晾，润至内外湿度均匀，切片，干燥。酒白芍：取白芍片，用黄酒喷淋均匀，稍润，置锅内用文火微炒，取出，放凉。(每白芍片100斤，用黄酒10斤) 。2、炒白芍；取白芍片，置锅内用文火炒至微黄色，取出，放凉。焦白芍：取白芍片，置锅内用武火炒至焦黄色，喷淋清水少许，取出，晾干。土炒白芍：取伏龙肝细粉，置锅内炒热，加入白芍片；炒至外面挂有土色，取出，筛去土，放凉。(每白芍片100斤，用伏龙肝细粉20斤) 。

申请号为CN201010217427.9的中国发明专利公开了一种减少芍药苷成分流失的道地药材亳白芍生产加工方法，该方法,将白芍的根刨出,切下肉质根,大小分档,抖去泥沙,经过洗药机用水洗净;将洗后除去泥沙的白芍投入微波干燥箱,利用微波加热干燥原理将白芍根迅速加热软化,待至软化一半时,取出,刮去外皮;再将刮去皮的白芍根送入微波干燥箱进行干燥软化,干燥至药材含水量在15～25%时,取出送至传送带用切药机切片;将切片在阴凉处阴干至含水量在13%以下,即得白芍饮片,包装。如该专利所述的，现有的白芍炮制或加工处理，以及白芍微粉的生产均是采用干燥后的白芍，而且处理中都刮去白芍皮，现有的白芍处理方法得到的产品中其有效成分芍药苷的含量并不理想。

发明内容

本发明为了解决现有的白芍炮制或加工处理方法得到的产品中其有效成分芍药苷的含量不高的缺陷，提供一种有效成分芍药苷的含量较高、稳定性好的白芍超微粉。

本发明还提供所述白芍超微粉的制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种白芍超微粉，其是以如下方法制得的粉末：将新鲜的带皮白芍切片，粉碎，粉碎后将其完全冰冻结实，再进行真空冷冻干燥24小时以上，干燥后的药材置于振动式超微粉碎研磨混炼机中在-25℃到-30℃温度下进行超微粉碎，得到白芍超微粉产品。

本发明的产品是采用毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的新鲜根，经炮制后加工而成的超微粉饮片。成品性状为淡绿色粉末；气香，味苦，酸。

本发明的用法与用量：开水冲服。每日3~7.5（相当于临床去皮炒白芍饮片6~15g）。每袋装：3g（相当于临床去皮炒白芍饮片6g）。

作为优选，所述的白芍超微粉的颗粒粒径为10μm以下。

作为优选，所述的粉碎时间为5-10min。

一种白芍超微粉的制备方法，该方法步骤如下：将新鲜的带皮白芍切片，粉碎，粉碎后将其完全冰冻结实，再进行真空冷冻干燥24小时以上，干燥后的药材置于振动式超微粉碎研磨混炼机中在-25℃到-30℃温度下进行超微粉碎，得到白芍超微粉产品。

作为优选，所述的白芍超微粉的颗粒粒径为10μm以下。

作为优选，所述的粉碎时间为5-10min。

本发明的有益效果是：本发明的产品突破了现有工艺的常规思想，将白芍带皮进行加工，通过多次实验验证，其有效成分芍药苷的含量较高、稳定性好，1g本发明的白芍超微粉溶出其有效成分芍药苷的量相当于1.08g粗粉溶出的量，相当于1.15g药材浸膏，相当于1.96g去皮白芍浸膏。

附图说明

图1是实施例2中紫外分光光度法测定芍药苷的标准曲线；

图2是实施例2中不同产品的积累溶出率变化曲线。

图3是实施例3中产品的鉴别色谱图。其中，1:芍药苷对照品，2：白芍对照药材，3：带皮炒白芍，4：冷冻干燥白芍（带皮），5：去皮炒白芍。

图4是实施例3中紫外分光光度法测定芍药苷的标准曲线。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。

实施例1 冷冻干燥白芍微粉的制备

1、仪器与材料：

FD-1-50真空冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）、WQL粒度仪（上海精密科学仪器有限公司）、XDW-6B振动式超微粉碎研磨混炼机（济南达微机械有限公司）、新鲜白芍（浙江百草，批号20120115）、40%的甘油、无水乙醇。

2、方法

将新鲜白芍，切片，用搅拌机粉碎，粉碎后放在冰箱中将其完全冰冻结实，再放到真空冷冻干燥机中干燥24小时，干燥后药材置于振动式超微粉碎研磨混炼机中-25℃下进行超微粉碎，得到白芍超微粉。采用WQL粒度仪测定粒径分布，结果见表1。

表1

在粉碎后10min 时，药物颗粒粒径有94.76%达到10μm以下，白芍药材细胞基本完全破碎。

鉴别方法（后面的实施例同本法）：取本实施例制得的粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1m1含1mg溶液，作为对照品溶液。照《薄层色谱法检验标准操作程序》(2010药典附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸(40：5：10：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。

照水分测定法（<<2010中国药典>>附录ⅸ H 第一法）测定，低于5.0%。

照水溶性浸出物测定法(2010药典附录XA)项下的热浸法测定，不少于20.5％。

芍药苷含量测定：照《高效液相色谱法检验标准操作程序》测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一0.1％磷酸溶液(14：86)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算不低于2000。对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本发明的超微粉（后面简称本品）约0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超声处理(功率240W，频率45kHz)30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)不少于1.2％。

本品的用法与用量：开水冲服。每日3~7.5（相当于临床去皮炒白芍饮片6~15g）。每袋装：3g（相当于临床去皮炒白芍饮片6g）。

实施例2、冷冻干燥白芍超微粉体外溶出试验

1 实验试剂与仪器

ZRS-6G智能溶出试验仪（天津天大天发有限公司）；

UV759S紫外可见分光光度计（上海精科）；

FA2004电子天平（常州幸运电子设备有限公司）。

芍药苷对照品110736-201035（中国食品药品检定研究院提供）；

无水乙醇（分析纯）。

2 实验方法与结果

对照品溶液的配制：精密称取对照品9.5mg,置于10ml的容量瓶中，用50%乙醇定容。

供试品溶液的配制：精密称取本品0.85g，置于100ml的容量瓶中，加入70ml50%乙醇水溶液，超声处理30min，加50%乙醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.45μm），取续滤液作为供试品。

最大吸收波长确定：精密吸取对照品0.06mL，置于5ml容量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，以50%乙醇为空白，分贝在200～500nm波长范围内进行扫描，结果对照品溶液在230nm波长附近有最大吸收，故选择测定波长为230nm。

标准曲线的绘制：精密称取对照品9.5mg,置于10ml的容量瓶中，用50%乙醇定容，分别取0.04、0.06ml、0.08ml、0.10ml、0.12ml、0.14ml置于5ml的容量瓶中，用50%乙醇定容，在230nm波长处测定吸光度，以吸光度A对溶出质量浓度C（ mg/ml）进行线性回归，回归方程为A=35.083C+0.0471，r²=0.9942，表明芍药苷质量浓度在0.0076～0.266mg/ml范围内与吸光度线性关系良好，标准曲线见图1。

精密度试验

精密吸取对照品0.06mL，置于5ml容量瓶中，加50%乙醇至刻度，于230nm处测定吸光度，计算RSD,以考察仪器精密度。结果表明芍药苷对照品，相对标准偏差（RSD）为1.10%，表明该方法精密度良好。

稳定性试验

取上述供试品溶液1ml，于25ml容量瓶中用50%乙醇定容，分别于0、2、4、8、24、48h测定吸光度。计算相对标准偏差(RSD)，以考察该分析方法中样品的稳定性。结果显示样品稳定性相对标准偏差（RSD）为0.91%，表明该样品在48h内稳定性良好。

重现性实验

取同一批次样品按稳定性试验的制备方法平行制备6份，依次测定并计算含量，并计算其相对标准偏差，验证样品溶液批次差异是否在可信范围内。结果显示6批次样品重现性相对标准偏差为1.95%，各批次间差异性较小。

加样回收率

取已知含量的样品，共6份，精密称定，加入适量的芍药苷对照溶液，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定吸光度，计算回收率为98.11%， RSD为2.80%。

冷冻干燥白芍体外溶出度实验

分别取冷冻干燥白芍超微粉1.02g，粗粉1.03g，浸膏10ml(相当于1.0g药材)精密称定，投入溶出仪中，按照中国药典(2010年版附录)溶出度测定浆法，以500ml水为介质，转速100r/min，温度为(37士0.5)℃，分别于3、5、10、20、30、60min取样5mL，同时向溶出杯中补充相同温度和体积的水，滤过，取续滤液2mL，分别置于10ml容量瓶中，加50%乙醇定容，过微孔滤膜（0.45μm）。

按照2010中国药典一部白芍高效液相法中供试品配备的方法，1.0g炒白芍至于100ml的容量瓶中，加70ml稀乙醇（50%），超声30min,定容，再取1ml于25ml容量瓶中,以50%乙醇定容，在230nm下，测得紫外吸光度A1=0.6435。在不同时间段取样，吸光度/A1，计算冷冻干燥白芍超微粉、粗粉及浸膏的溶出累积百分率，实验数据见表2和图2。

表2

其中，1、2、3、4分别为冷冻干燥白芍普通粉，本发明制得的冷冻干燥白芍超微粉，冷冻干燥白芍浸膏，去皮炒白芍浸膏。

本发明以白芍主要成分芍药苷为指标，衡量其体外溶出度，实验中分别于3,5,10,20,30,45,60min进行溶出度的测定，表明超微粉在60min基本溶出，测得1g超微粉溶出其有效成分芍药苷的量相当于1.08g粗粉溶出的量，相当于1.15g药材浸膏，相当于1.96g去皮白芍浸膏。通过测定，给临床药物用量做为参考。

实施例3 冷冻干燥白芍超微粉质量标准实验

一、薄层鉴别

芍药苷对照溶液，白芍对照药材（120905-200508，中国食品药品检定研究院提供），炒白芍样品，取冷冻干燥白芍超微粉样品三批，批号①120113，批号②120207，批号③120228，各0.5g,加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1m1含1mg溶液，作为对照品溶液。照2010中国药典《薄层色谱法检验标准操作程序》(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40：5：10：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点，见图3。

二、质量参数

1、水分

烘干法（2010中国药典第一部附录IX H）：本法适用于不含或少含挥发性成分的药品。取供试品2～5g,平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定,打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好,移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。三批样品测定结果见表3。

表 3

批号	重量	恒重后重量	测定结果
				120113	2.279	2.170	4.8%
120207	2.275	2.183	4.0%
				120228	2.265	2.159	4.7%

从表3中可得含水量均在规定的<5.0%以下，符合规定。

2、灰分

总灰分测定法：测定用的供试品须粉碎，使能通过二号筛（约40目），混合均匀后，取供试品2～3g（如须测定酸不溶性灰分，可取供试品3～5g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。三批样品结果见表4。

表4

批号	重量	恒重后重量	测定结果
				120113	2.506	0.098	3.91%
120207	2.507	0.097	3.87%
				120228	2.510	0.089	3.55%
普通粉	2.509	0.084	3.35%

以上结果均小于4.0%，符合药典规定要求。

3、浸出物

浸出物测定法：取供试品2 ～4g，精密称定，置100～250ml的锥形瓶中，精密加乙醇50～100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连续回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。三批样品结果见表5。

表5

从表中可见，其结果均大于20.5%，符合药典规定。

三、芍药苷含量测定

1、药材与试剂

芍药苷对照品由中国生物制品检定所提供（批号：110736-201035），乙腈、甲醇为色谱纯，其他所用试剂，如未注明规格，均指分析纯。

2 、色谱条件及溶液配制

色谱条件：色谱柱为依利特Hypersl BDS C18（4.6mm×250mm, 5μm）；流动相：乙腈一0.1％磷酸溶液(14：86)，流速1ml﹒ml^-1;进样量10μl,检测波长230nm。

供试品溶液的制备：取0.102g药材, 置50ml量瓶中，加50%乙醇35ml，超声处理(功率240W，频率45kHz)30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.45μm），取续滤液。

3、线性关系

对照品溶液的制备：参照2010中国药典，精密称取芍药苷对照品2.4mg放入10ml容量瓶中，加甲醇定容，过微孔滤膜（0.45μm），即得。

标准曲线的制备：将芍药苷对照品溶液稀释成0.0525mg﹒ml^-1,0.1050mg﹒ml^-1, 0.1575 mg﹒ml^-1, 0.2100 mg﹒ml^-1, 0.2625 mg﹒ml^-1, 0.3150 mg﹒ml^-1,分别进样分析，以样品峰面积（微伏﹒秒）对样品浓度作图，得芍药苷校正曲线：y=799792x-2889.7,相关系数r²=0.9996,线性范围0.0525mg～0.3150mg，见图4。

4、精密度试验

取芍药苷对照品溶液4ml，定容到10ml，重复进样6次，每次10μl,按上述色谱条件测定峰面积，结果芍药苷峰面积的RSD为0.40%，表明仪器精密度良好。

5、重复性试验

精密称取0.102g冷冻干燥白芍药材，按照供试品溶液配制方法配制成供试品溶液，连续进样6次，每次10μl, 按上述色谱条件测定峰面积,结果样品中芍药苷含量的RSD为0.40%，表明重复性良好。

6、稳定性试验

取上述白芍供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、48进样10μl,记录芍药苷的峰面积。结果样品芍药苷RSD为1.60%，表明供试品溶液中芍药苷48h小时内稳定。

7、加样回收试验

取冷冻干燥白芍超微粉样品6组，分别加0.226mg﹒ml^-1标准品1ml，按照“供试品制备” 进行平行制备，在上述色谱条件下测定峰面积，计算回收率为95.15%， RSD为1.24%。

8、样品含量测定

分别取3批样品，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，进样10μl，按上述色谱条件测定，即得冷冻干燥白芍微粉的芍药苷含量4.25%，RSD 为0.51%，粗粉的芍药苷含量为4.22%，RSD为0.14%，具体数据见表6。

表6

本发明通过HPLC法测定冷冻干燥白芍超微粉、粗粉的含量，临床用去皮炒白芍每日6～15g，通过含量测定得冷冻干燥白芍芍药苷的含量是去皮炒白芍中芍药苷含量的1.76倍，所以临床用冷冻干燥白芍每日3.5～8.5g。

实施例4 冷冻干燥白芍微粉颗粒药效学研究

1、小鼠免疫低下模型的建立

腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，连续注射3天，制备免疫低下的小鼠模型。

2、对免疫力低下小鼠非特异性免疫功能的影响

　取84只小鼠,雌雄各半，随机分为7组,空白组和模型组给予0.9%生理盐水0.4ml,冷冻干燥白芍超微粉高剂量组2000mg/kg, 冷冻干燥白芍超微粉中剂量组1000mg/kg，冷冻干燥白芍超微粉低剂量组500mg/kg。给药第1 d除空白组外每只小鼠腹腔注射环磷酰胺(Cy)50 mg/kg,连续3 d,制备免疫功能低下的小鼠模型。连续给药10d，测各组的脾脏指数和胸腺指数，数据见表7。

3、检测指标

脾脏指数（mg/10g）=（脾脏重量×1000/小鼠体重）×10 ，

胸腺指数（mg/10g）=（胸腺重量×1000/小鼠体重）×10 。

表7

组别	胸腺指数（mg/10g）	脾脏指数（mg/10g）
			普通粉组	18.169±9,648	87.641±31.720
高剂量组	33.367±6.575	90.048±25.957
			中剂量组	24.176±7.260	90.020±39.957
低剂量组	20.317±8.878	111.458±23.718
			浸膏组	27.857±7.055	114.074±22.265
空白组	26.078±6.930	41.115±12.613
			模型组	23.628±7.670	38.157±12.139

结果显示：免疫低下模型组与空白，脾指数与胸腺指数明显低于空白组，造模成功，与空白对照组比较，炒白芍超微粉高、中、低剂量组及浸膏和普通粉组的脾脏系数、胸腺系数比较有显著性差异(P<0．05)；上述结果表明，本发明制得的冷冻干燥白芍超微粉能增加正常小鼠免疫器官的重量，其中低剂量组最接近于浸膏的疗效。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims

1. 一种白芍超微粉，其特征在于其是以如下方法制得的粉末：将新鲜的带皮白芍切片，粉碎，粉碎后将其完全冰冻结实，再进行真空冷冻干燥24小时以上，干燥后的药材置于振动式超微粉碎研磨混炼机中在-25℃到-30℃温度下进行超微粉碎，得到白芍超微粉产品；所述的白芍超微粉的颗粒粒径为10μm以下；所述的粉碎时间为5-10min。

2. 一种白芍超微粉的制备方法，其特征在于该方法步骤如下：将新鲜的带皮白芍切片，粉碎，粉碎后将其完全冰冻结实，再进行真空冷冻干燥24小时以上，干燥后的药材置于振动式超微粉碎研磨混炼机中在-25℃到-30℃温度下进行超微粉碎，得到白芍超微粉产品。

3. 根据权利要求2所述的白芍超微粉的制备方法，其特征在于：所述的白芍超微粉的颗粒粒径为10μm以下。

4. 根据权利要求2或3所述的白芍超微粉的制备方法，其特征在于：所述的粉碎时间为5-10min。