CN102908343B - 可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物及制造方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是有关于一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物及其制造方法,本发明揭露的组合物包含monascin或是ankaflavin,亦可以同时含有monascin以及ankaflavin;该组合物的制造方法包含以下步骤:利用丙酮对一红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作;利用一减压浓缩的方式提升其浓度;依序利用一硅胶、一胶滤层析法、一硅胶以及一高效能制备型液相层析法进行分离纯化,便可萃取得到monascin以及ankaflavin成分。本发明提供的组合物可有效降低血脂并提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
Description
技术领域
本发明涉及一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物及其制造方法,特别是涉及一种含有红曲霉素(monascin)或红曲黄素(ankaflavin),或是同时含有monascin及ankaflavin的具有降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的功能组合物及其制造方法。
背景技术
血液中的胆固醇含量与心血管疾病的发生几率息息相关,根据研究显示,血脂肪异常在心脏血管疾病发展中扮演重要角色,因此血液中胆固醇浓度可作为一个很好的预测指标。当血清胆固醇浓度大于200mg/dL时,因冠状动脉心脏疾病死亡的几率急遽上升。胆固醇值高者,冠状动脉心脏疾病的罹病率和死亡率亦高,但若经过非药物或药物的治疗降低胆固醇值,确实可以明显降低冠状动脉硬化造成的心血管疾病的罹患率。
近年来保健食品蓬勃发展,具有多功效的机能性发酵制品红曲逐渐受到重视。在亚洲地区,红曲菌(Monascusspecies)在饮食、医药上的应用,已有千年的历史。
红曲菌重要的二级代谢产物包含下列四种:(1)一群色素,包括红色色素(rubropunctamine、monascorubramine)、黄色色素(ankaflavin、monascin)以及橘色色素(rubropunctanin、monascorubrin);(2)降胆固醇物质,如莫纳可林K(monacolinK)(又被称为洛伐他汀(lovastatin)、美维诺林(mevinolin)及美乏脂(mevacor));(3)降血压物质,如γ-胺基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA);以及(4)抗氧化物质,包括第一抗氧化物质(dimerumicacid)以及第二抗氧化物质(3-hydoxy-4-methoxy-benzoicacid)。
在红曲菌重要的二级代谢产物中,由于monacolinK具有抑制胆固醇生物合成过程中关键酵素羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(hydroxymethylglutaryl-CoAreductase,HMG-CoAreductase)的活性,因此monacolinK具有非常显着的降胆固醇效果。
另一方面,血液中的胆固醇可根据密度而区分为两大类,包括高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。HDL-C经研究指出是一种好的胆固醇,而LDL-C则被证实为不好的胆固醇。高浓度的HDL-C与低浓度的LDL-C,将有助于降低心血管疾病与动脉粥状硬化症的发生几率。
由于总胆固醇(totalcholesterol,TC)是HDL-C、LDL-C、三酸甘油脂(triglyceride,TG)及其他脂蛋白胆固醇所组成,故HDL-C与LDL-C会随着TC浓度显着提升而大量增加。由于多数研究显示降胆固醇药物在降低TC浓度后往往也会造成HDL-C浓度大幅下降,如能维持或提升HDL-C浓度将有助于心血管疾病的预防。
然而,前述的monacolinK虽然具有降低胆固醇的功效,但却无法提高HDL-C的浓度,因此对于心血管疾病与动脉粥状硬化症的预防效果是很有限的。
有鉴于此,必须提出一种新颖的组合物及其制造方法,使该组合物同时具有降血脂及提升HDL-C浓度的功能,以更有效的降低心血管疾病与动脉粥状硬化症的发生几率。
发明内容
本发明的目的在于,克服现有的降胆固醇药物存在的缺陷,而提供一种新的可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,所要解决的技术问题是有效降低血脂并提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度,非常适于实用。
为达到上述目的,本发明提供的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,至少包含一monascin,其为一种红曲黄色素,并且是由一红曲发酵产物中萃取得到。该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790(此红曲菌已保藏于美国农业研究菌种保藏中心(AgriculturalResearchCultureCollection(NRRL)),其地址为InternationalDepositaryAuthority1815N.UniversityStreetPeoria,Illinois61604U.S.A.,保藏日期为2009年11月13日,保藏编号为NRRL50337,菌种名称为MonascuspurpureusPAN790)所产生。
本发明的另一目的是提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,由一系列的萃取步骤,可纯化得到包含一monascin的组合物,并且该组合物可有效降低血脂及提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
为达上述目的,本发明提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,至少包含以下步骤:(1)提供一红曲发酵产物,该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生;(2)以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作;(3)将前一步骤的产物利用一减压浓缩的方式提升其浓度;(4)将前一步骤的产物利用一硅胶管柱层析法(silicagelcolumnchromatography)进行第一次分离纯化,并将色素区分液分离出来;(5)将前一步骤分离得到的色素区分液利用一葡聚糖凝胶管柱层析法(SephadexLH-20columnchromatography)进行第二次分离纯化,并将黄色素区分液分离出来;(6)将前一步骤分离得到的黄色素区分液利用该硅胶管柱层析法进行第三次分离纯化,并将含有monascin与ankaflavin的区分液分离出来;以及(7)将前一步骤分离得到的该含有monascin与ankaflavin的区分液由一制备型高效能液相层析法(preparativehighperformanceliquidchromatography,pre-HPLC)进行第四次分离纯化,并将monascin成分分离出来。
本发明的再一目的是提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇之组合物,至少包含一ankaflavin,而可有效降低血脂及提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
为达到上述目的,本发明提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,至少包含一ankaflavin,其为一种红曲黄色素,并且是由一红曲发酵产物中萃取得到。该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生。
本发明的再一目的是提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,由一系列的萃取步骤,可纯化得到包含一ankaflavin的组合物,并且该组合物可有效降低血脂并提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
为达上述目的,本发明提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,至少包含以下步骤:(1)提供一红曲发酵产物,该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生;(2)以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作;(3)将前一步骤的产物利用一减压浓缩的方式提升其浓度;(4)将前一步骤的产物利用一硅胶管柱层析法进行第一次分离纯化,并将色素区分液分离出来;(5)将前一步骤分离得到的色素区分液利用一葡聚糖凝胶管柱层析法进行第二次分离纯化,并将黄色素区分液分离出来;(6)将前一步骤分离得到的黄色素区分液利用该硅胶管柱层析法进行第三次分离纯化,并将含有monascin与ankaflavin的区分液分离出来;及(7)将前一步骤分离得到的含有monascin与ankaflavin的区分液由一制备型高效能液相层析法进行第四次分离纯化,并将ankaflavin成分分离出来。
本发明的再一目的是提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,至少包含一monascin以及一ankaflavin,而可有效降低血脂及提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
为达到上述目的,本发明提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,至少包含一monascin及ankaflavin,其皆为一种红曲黄色素,并且是由一红曲发酵产物中萃取得到。该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生。
本发明的再一目的是提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,由一系列的萃取步骤,可纯化得到包含一monascin以及一ankaflavin的组合物,并且该组合物可有效降低血脂及提升高密度脂蛋白胆固醇之浓度。
为达到上述目的,本发明提供一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,至少包含以下步骤:(1)提供一红曲发酵产物,该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生;(2)以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作;(3)将前一步骤的产物利用一减压浓缩的方式提升其浓度;(4)将前一步骤的产物由一硅胶管柱层析法进行第一次分离纯化,并将色素区分液分离出来;(5)将前一步骤分离得到的色素区分液利用一葡聚糖凝胶管柱层析法进行第二次分离纯化,并将黄色素区分液分离出来;(6)将前一步骤分离得到的黄色素区分液由该硅胶管柱层析法进行第三次分离纯化,并将含有monascin与ankaflavin的区分液分离出来;(7)将前一步骤分离得到的含有monascin与ankaflavin的区分液由一制备型高效能液相层析法进行第四次分离纯化,并分别将monascin以及ankaflavin成分分离出来;及(8)将该monascin以及该ankaflavin成分混合。
借由上述技术方案,本发明可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物至少具有下列优点及有益效果:
①本发明所提供的每一种组合物皆具有有效降低血脂及提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度的功效,因此对于心血管疾病与动脉粥状硬化症的预防与治疗皆具有很大的功效。
②由本发明所提供的制造方法,可高纯度的萃取出本发明的各种组合物成分,以便用于有效降低心血管疾病与动脉粥状硬化症的发生几率。
③由于本发明所提供的各种组合物皆由红曲发酵产物中萃取得到,并非人工合成的化合物,因此可作为天然的食物补给品而食用,不仅可降低心血管疾病与动脉粥状硬化症的发生几率,更可避免副作用的产生。
综上所述,本发明可有效降低血脂并提升高密度脂蛋白胆固醇的浓度。本发明在技术上有显着的进步,并具有明显的积极效果,诚为一新颖、进步、实用的新设计。
上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,而可依照说明书的内容予以实施,并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂,以下特举较佳实施例,并配合附图,详细说明如下。
附图说明
图1是本发明的红曲发酵产物的制造方法流程图;
图2是本发明第一实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法流程图;
图3是本发明第一实施例的步骤104的详细步骤流程图;
图4是本发明第一实施例的步骤105的详细步骤流程图;
图5是本发明第一实施例的步骤106的详细步骤流程图;
图6是本发明第一实施例的步骤107的详细步骤流程图;
图7是本发明第二实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法流程图;
图8是本发明第二实施例的步骤207的详细步骤流程图;
图9是本发明第三实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法流程图;
图10是本发明第三实施例的步骤307的详细步骤流程图;
图11是脂质斑块染色的量化结果图示;以及
图12是相同浓度的monascin、ankaflavin与monacolinK抑制胆固醇生成效果比较图示。
具体实施方式
为达到前述的目的与功效,发明人以红曲发酵产物作为萃取基质,并以一连串特殊步骤对红曲发酵产物进行萃取,在不断的试验与调整之下,得到本发明的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物及其制造方法。下面结合附图分别以本发明第一较佳实施例、第二较佳实施例以及第三较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物及其制造方法,对本发明的组合物成分及其制作方法作详细介绍。
在介绍本发明的较佳实施例之前,先对红曲发酵产物的制造方法进行介绍。图1示出了本发明的红曲发酵产物的制造方法流程图,其包含以下步骤:提供一培养基质(步骤001),其中,该培养基质可以是米或干燥山药,其水分含量须在15%以下,最佳水分含量为7%;加水至培养基质中(步骤002),使培养基质与水的比例为1∶0.5%-1∶1.5%,最佳比例为1∶0.75%;将培养基质浸泡于水中(步骤003),浸泡时间为0-60分钟,最佳浸泡时间为30分钟;将培养基质进行灭菌动作(步骤004),灭菌条件为121℃、10-60分钟;将灭菌完成的培养基质进行冷却动作(步骤005);将特定红曲菌种接菌至该培养基质中(步骤006),该特定红曲菌种可以是MonascuspurpureusPAN790;将接菌完成的培养基质进行培养动作(步骤007),培养条件为25-37℃、50-80%的湿度、培养8-20天,最佳培养条件为30℃、60%的湿度、培养10天;将培养完成所得到的红曲发酵产物进行干燥动作(步骤008),使产物含有15%以下的水分,最佳为含有6%的水分,如此便完成红曲发酵产物的制造流程。
本发明所使用的红曲菌MonascuspurpureusPAN790,其生长特性为生长速度较慢,可产生大量的monacolinK,并且此菌种是由红曲米中突变并选殖而得到的。培养红曲菌MonascuspurpureusPAN790的培养基含有2%的米粉末,培养温度为30℃、培养时间为48小时、培养压力为1大气压、灭菌方式为121℃之下20分钟、灭菌前的酸碱值为5、需氧气生长、保存温度为4℃。
接着对本发明的第一较佳实施例进行详细的介绍。本发明第一较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,其成份包含monascin,其为一种红曲黄色素,并且是由前述的红曲发酵产物中萃取得到,该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生。其中,该monascin的服用量为成人每日摄食2.4mg以上,方可有效降低血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇在血液中的浓度。
图2是本发明第一较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法流程图,包含以下步骤:提供一红曲发酵产物(步骤101),该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生;以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作(步骤102),其中,红曲发酵产物与该丙酮的比例为1∶10-1∶50;将前一步骤的产物在一特定温度范围之下,利用一减压浓缩的方式提升其浓度(步骤103),其中,该特定温度范围为40℃-60℃;将前一步骤的产物利用一硅胶管柱层析法(silicagelcolumnchromatography)进行第一次分离纯化,并将色素区分液分离出来(步骤104);将前一步骤分离得到的色素区分液利用一葡聚糖凝胶管柱层析法(SephadexLH-20columnchromatography)进行第二次分离纯化,并将黄色素区分液分离出来(步骤105);将前一步骤分离得到的黄色素区分液利用该硅胶管柱层析法进行第三次分离纯化,并将含有monascin与ankaflavin的区分液分离出来(步骤106);以及将前一步骤分离得到的含有monascin与ankaflavin的区分液由一制备型高效能液相层析法(preparativehighperformanceliquidchromatography,pre-HPLC)进行第四次分离纯化,并将monascin成分分离出来(步骤107)。
图3是本发明第一较佳实施例的步骤104的详细步骤流程图。在前述的步骤104中,可以细分为以下步骤:将步骤103所得到的产物加入一硅胶管柱(silicagelcolumn)中(步骤104a);将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中(步骤104b),其中,该多种流洗液依序为己烷(Hexane)、Hexane∶乙醇(Ethanol)=9∶1、Hexane∶Ethanol=8∶2、Hexane∶Ethanol=7∶3、Hexane∶Ethanol=1∶1以及Ethanol;每隔一特定时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集12-15个区分液(步骤104c),其中,该特定时间约为5-10分钟;以一高效能液相层析仪(highperformanceliquidchromatography,HPLC)配合一光二极管侦测器(photodiode-array,PDA)对前一步骤所收集到的每一区分液进行分析,以筛选出含有monascin与ankaflavin成分的区分液(步骤104d);及将前一步骤所筛选得到的区分液混合在一起,以得到该色素区分液(步骤104e)。
图4是本发明第一较佳实施例的步骤105的详细步骤流程图。在前述的步骤105中,可以细分为以下步骤:将步骤104所得到的该色素区分液加入一葡聚糖凝胶管柱(SephadexLH-20column)中(步骤105a);将流洗液加入该葡聚糖凝胶管柱中(步骤105b),该流洗液为甲醇(Methanol)∶乙腈(Acetonitrile)=9∶1;每隔一特定时间收集由葡聚糖凝胶管柱流出的区分液,并且共收集3-5个区分液(步骤105c),其中,该特定时间约为5-10分钟;以一高效能液相层析仪配合一光二极管侦测器对前一步骤所收集到的每一区分液进行分析,以筛选出含有monascin与ankaflavin成分的区分液(步骤105d);以及将前一步骤所筛选得到的区分液混合在一起,以得到该黄色素区分液(步骤105e)。
图5是本发明第一较佳实施例的步骤106的详细步骤流程图。在前述的步骤106中,可以细分为以下步骤:将步骤105所得到的该黄色素区分液加入一硅胶管柱中(步骤106a);将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中(步骤106b),其中,该多种流洗液依序为二氯甲烷(Dichloromethane)∶Ethanol=95∶5、Dichloromethane∶Ethanol=9∶1以及Dichloromethane∶Ethanol=4∶1;每隔一特定时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集3-5个区分液(步骤106c),其中,该特定时间约为5-10分钟;以一高效能液相层析仪配合一光二极管侦测器对前一步骤所收集到的每一区分液进行分析,以筛选出含有monascin与ankaflavin成分的区分液(步骤106d);及将前一步骤所筛选得到的区分液混合在一起,以得到该含有monascin与ankaflavin的区分液(步骤106e)。
图6是本发明第一较佳实施例的步骤107的详细步骤流程图。在前述的步骤107中,可以细分为以下步骤:将步骤106所得到的该含有monascin与ankaflavin的区分液以一C18管柱并配合HPLC以及一流洗液进行流洗分离(步骤107a),其中,该流洗液为Methanol∶水=85∶15;每隔一特定时间收集由C18管柱流出的区分液,并且共收集2个区分液(步骤107b),其中,该特定时间约为5-10分钟;以及以一高效能液相层析仪配合一光二极管侦测器对前一步骤所收集到的每一区分液进行分析,以筛选出含有monascin成分的区分液(步骤107c)。
前述步骤104d、105d以及106d中,HPLC分析法所使用的管柱(column)为C18column(25cmx4.6mm,i.d.=5μm),而移动相为Acetonitrile∶water∶trifluoroacetate=62∶38∶0.05,流速为1mL/min,并以多波长侦测器(multiwavelengthdetector)侦测231nm的UV吸收波长(因为monascin与ankaflavin可在231nm的UV吸收波长下产生波峰)。另外,需利用monascin与ankaflavin的标准品作为比对组,将标准品的波峰时间与待测物的波峰作比对,以判断待测物是否为monascin与ankaflavin。
另外,在前述的步骤107c中,HPLC分析法所使用的条件与步骤104d、105d及106d大致相同,步骤107c较特别之处在于,monascin与ankaflavin是由极性差异的特性而彼此分离。由于C18column可将较极性成分在较早的时间流洗出来,而monascin相较于ankaflavin属于较极性成分,因此monascin会先被流洗出来,ankaflavin会较晚被流洗出来。由此特性,可收集较早流出的区分液,并且与monascin标准品做流洗时间与吸收波长的比对,以确认区分液中是否含有monascin。
接着对本发明的第二较佳实施例进行详细介绍。本发明第二较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,其成份是包含ankaflavin,其为一种红曲黄色素,并且是由前述的红曲发酵产物中萃取得到,该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生。其中,该ankaflavin的服用量为成人每日摄食0.6mg以上,方可有效降低血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇在血液中的浓度。
图7是本发明第二较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法流程图,其步骤201-206大致上与第一较佳实施例相同,因此不再赘述,不同之处在于第二较佳实施例的步骤207是利用pre-HPLC将ankaflavin成分分离出来。
图8是本发明第二较佳实施例的步骤207的详细步骤流程图。在前述的步骤207中,更可以细分为以下步骤:将步骤206所得到的该含有monascin与ankaflavin的区分液以一C18管柱并配合HPLC以及一流洗液进行流洗分离(步骤207a),其中,该流洗液为Methanol∶水=85∶15;每隔一特定时间收集由C18管柱流出的区分液,并且共收集2个区分液(步骤207b),其中,该特定时间约为5-10分钟;以及以一高效能液相层析仪配合一光二极管侦测器对前一步骤所收集到的每一区分液进行分析,以筛选出含有ankaflavin成分的区分液(步骤207c)。
在前述的步骤207c中,monascin与ankaflavin是由极性差异的特性而彼此分离。由于C18column可将较极性成分在较早的时间流洗出来,而monascin相较于ankaflavin属于较极性成分,因此monascin会先被流洗出来,ankaflavin会较晚被流洗出来。由此特性,可收集较晚流出的区分液,并且与ankaflavin标准品做流洗时间与吸收波长的比对,以确认区分液中是否含有ankaflavin。
接着对本发明的第三较佳实施例进行详细的介绍。本发明第三较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物,其成份包含monascin及ankaflavin,其皆为一种红曲黄色素,并且是由前述的红曲发酵产物中萃取得到,该红曲发酵产物是由红曲菌MonascuspurpureusPAN790所产生。其中,该monascin以及该ankaflavin的含量比例范围为1∶1-10∶1,而最佳含量比例为3.56∶1,方可有效降低血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇在血液中的浓度。另外,该monascin的服用量为成人每日摄食2.4mg以上,该ankaflavin的服用量为成人每日摄食0.6mg以上,方可有效降低血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇在血液中的浓度。
图9是本发明第三较佳实施例的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法流程图,其步骤301-306大致上与第一及第二较佳实施例相同,因此不再赘述,不同之处在于第三较佳实施例的步骤307是利用pre-HPLC分别将monascin以及ankaflavin成分分离出来,最后再依照步骤308所述,将该monascin以及该ankaflavin成分依照特定比例混合,而该特定比例的范围值为1∶1-10∶1,最佳值为3.56∶1。
图10是本发明第三较佳实施例的步骤307的详细步骤流程图。在前述的步骤307中,更可以细分为以下步骤:将步骤306所得到的该含有monascin与ankaflavin的区分液以一C18管柱并配合HPLC以及一流洗液进行流洗分离(步骤307a),其中,该流洗液为Methanol∶水=85∶15;每隔一特定时间收集由C18管柱流出的区分液,并且共收集2个区分液(步骤307b),其中,该特定时间约为5-10分钟;以及以一高效能液相层析仪配合一光二极管侦测器对前一步骤所收集到的每一区分液进行分析,以筛选出分别含有monascin以及ankaflavin成分的区分液(步骤307c)。
在前述的步骤307c中,monascin与ankaflavin是由极性差异的特性而彼此分离。由于C18column可将较极性成分在较早的时间流洗出来,而monascin相较于ankaflavin属于较极性成分,因此monascin会先被流洗出来,ankaflavin会较晚被流洗出来。由此特性,可分别收集较早及较晚流出的区分液,并且分别与monascin以及ankaflavin标准品做流洗时间与吸收波长的比对,以确认区分液中是否含有monascin或ankaflavin。
为了证实本发明第一、第二及第三较佳实施例的组合物的确具有降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇浓度的功效,以下利用多种实验对其进行分析及比较。在以下的分析内容中,本发明第一较佳实施例的组合物为monascin(简称为MS),其服用量相当于成人每日摄食9.82mg,第二较佳实施例的组合物为ankaflavin(简称为AF),其服用量相当于成人每日摄食1.43mg,第三较佳实施例的组合物为monascin加上ankaflavin(简称为MS+AF),其服用量分别相当于成人每日摄食9.82mg以及1.43mg。另外,亦利用一含有monacolinK的组合物作为比较组,其简称为MK。
首先,利用高胆固醇饮食的仓鼠做为实验动物,并分别服用八周的MS、AF、MS+AF以及MK以后,进行血液中各项胆固醇参数的分析,包括血清中的总胆固醇(totalcholesterol,TC)含量、三酸甘油脂(triglyceride,TG)含量、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)含量、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C)含量、LDL-C与HDL-C的比例以及血清中脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。其中,MK的服用量相当于成人每日摄食14.46mg。另外,正常饮食组简称为NOR组,而高胆固醇饮食组简称为HC组。
下列表一为上述动物实验的结果,而表二为MS、AF、MS+AF以及MK组相对于HC组的各项参数的降低或增加率。首先,在TC下降率的结果中,MS组与AF组皆可显着降低血清中的TC含量,并且其效果高于MK组,而MS+AF组降低TC的效果又高于其他组别。在TG下降率的结果中,MS组、AF组以及MS+AF组皆可显着下降血清中TG含量,并且效果高于MK组。在HDL-C上升率的结果中,MS组与AF组皆可显着提升血清中HDL-C的含量,并且其效果皆高于MK组,而MS+AF组提升HDL-C的效果又高于其他组别。在HDL-C下降率的结果中,虽然MS组的效果与MK组差不多,但是AF组与MS+AF组对于血清中HDL-C的下降效果高于MK组。在LDL/HDL比值的下降率结果中,MS组的效果高于MK组,而AF组与MS+AF组的效果又高于其他组别,因此monascin、ankaflavin与monascin+ankaflavin相较于monacolinK更有助于改善心血管疾病与动脉粥状硬化症的发生。在MDA下降率的结果中,MS组、AF组以及MS+AF组皆可显着降低血清中MDA含量,并且其效果高于MK组。
表一
表二
评估动脉粥状硬化症的另一重要指标为动脉脂质斑块的染色分析,由染色结果可了解脂质斑块是否沉积在动脉血管壁上。大量的脂质过氧化会造成泡沫细胞大量沉积,血管壁失去弹性且沉积大量的脂质斑块,引起动脉粥状硬化症。图11是脂质斑块染色的量化结果图,研究结果显示,连续八周的高胆醇饮食会造成实验动物胸腔动脉血管上的斑块大量沉积,与正常饮食组相比具有显着提高的现象。MK组(服用量2.89mg/day)虽可降低脂质斑块含量,但是效果不如MS组(服用量9.82mg/day)、AF组(服用量1.43mg/day)以及MS+AF组(MS與AF之比例為3.56∶1);而AF组的效果高于MS组,且MS+AF组的效果又高于AF组。
为比较monascin、ankaflavin与monacolinK的抑制胆固醇生成效果,利用细胞实验方法,并以相同浓度(100ppb)的monascin、ankaflavin与monacolinK处理细胞以探讨其对胆固醇生成的影响。图12是相同浓度的monascin、ankaflavin与monacolinK抑制胆固醇生成效果比较图,抑制细胞胆固醇生成的效果依序为ankaflavin、monascin、monacolinK。此结果与动物试验相符,ankaflavin与monascin比monacolinK具有较佳的降血脂效果,并且,结果显示抑制细胞胆固醇生成之效果依序为ankaflavin、monascin、monacolinK。
经由前述的实验结果可得知,monascin、ankaflavin以及monascin+ankaflavin皆具有显着降低血清TC、TG、LDL-C、MDA、动脉脂质斑块的效果,以及提升HDL-C的效果,并且其效果皆高于monacolinK;另外,monascin+ankaflavin的效果又比monascin以及ankaflavin更加显着。因此,本发明的第一、第二以及第三较佳实施例的组合物不仅可有效降低血清中胆固醇含量,更可提升血清中HDL-C的浓度,对心血管疾病与动脉粥状硬化症的发生几率的降低效果具有非常大的帮助。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,虽然本发明已以较佳实施例揭露如上,然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (11)
1.一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于至少包含以下步骤:
步骤1、提供一红曲发酵产物;
步骤2、以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作,其中,该红曲发酵产物与该丙酮的比例为1:10~1:50;
步骤3、将步骤2的产物在温度范围为40℃~60℃的情况下,利用一减压浓缩的方式提升其浓度;
步骤4.1、将步骤3所得到的产物加入一硅胶管柱中;
步骤4.2、将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中,其中,所述多种流洗液依序为:己烷、己烷:乙醇=9:1、己烷:乙醇=8:2、己烷:乙醇=7:3、己烷:乙醇=1:1以及乙醇;
步骤4.3、每隔一时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集12~15个区分液;
步骤4.4、以一高效能液相层析仪配合一光二极管侦测器对步骤4.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤4.5、将步骤4.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到色素区分液;
步骤5.1、将步骤4.5所得到的该色素区分液加入一葡聚糖凝胶管柱中;
步骤5.2、将流洗液加入该葡聚糖凝胶管柱中,其中,该流洗液为甲醇:乙腈=9:1;
步骤5.3、每隔一时间收集由葡聚糖凝胶管柱流出的区分液,并且共收集3~5个区分液;
步骤5.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤5.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤5.5、将步骤5.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到黄色素区分液;
步骤6.1、将步骤5.5所得到的该黄色素区分液加入一硅胶管柱中;
步骤6.2、将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中,其中,所述多种流洗液依序为:二氯甲烷:乙醇=95:5、二氯甲烷:乙醇=9:1以及二氯甲烷:乙醇=4:1;
步骤6.3、每隔一时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集3~5个区分液;
步骤6.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤6.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤6.5、将步骤6.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液;
步骤7、将步骤6.5分离得到的该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液由一制备型高效能液相层析法进行第四次分离纯化,并将红曲霉素(monascin)成分分离出来。
2.如权利要求1所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于,其中,成人每日摄食2.4mg以上的经由该步骤7所获得的该红曲霉素(monascin),能够获得降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇之功效。
3.如权利要求1所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于其中,步骤7包含以下步骤:
步骤7.1、将步骤6.5所得到的该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液以一C18管柱并配合高效能液相层析仪以及一流洗液进行流洗分离;
步骤7.2、每隔一时间收集由C18管柱流出的区分液,并且共收集2个区分液;以及
步骤7.3、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤7.2所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)成分的区分液。
4.如权利要求3所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于其中,步骤7.1所述的该流洗液为甲醇:水=85:15。
5.一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于至少包含以下步骤:
步骤1、提供一红曲发酵产物;
步骤2、以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作,其中,该红曲发酵产物与该丙酮的比例为1:10~1:50;
步骤3、将步骤2的产物在温度范围为40℃~60℃的情况下,利用一减压浓缩的方式提升其浓度;
步骤4.1、将步骤3所得到的产物加入一硅胶管柱中;
步骤4.2、将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中,其中,该步骤4.2所述的该多种流洗液依序为:己烷、己烷:乙醇=9:1、己烷:乙醇=8:2、己烷:乙醇=7:3、己烷:乙醇=1:1以及乙醇;
步骤4.3、每隔一时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集12~15个区分液;
步骤4.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤4.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤4.5、将步骤4.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到色素区分液;
步骤5.1、将步骤4.5所得到的该色素区分液加入一葡聚糖凝胶管柱中;
步骤5.2、将流洗液加入该葡聚糖凝胶管柱中,其中,所述流洗液为甲醇:乙腈=9:1;
步骤5.3、每隔一时间收集由葡聚糖凝胶管柱流出的区分液,并且共收集3~5个区分液;
步骤5.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤5.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤5.5、将步骤5.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到黄色素区分液;
步骤6.1、将步骤5.5所得到的该黄色素区分液加入一硅胶管柱中;
步骤6.2、将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中,其中,步骤6.2所述的该多种流洗液依序为:二氯甲烷:乙醇=95:5、二氯甲烷:乙醇=9:1以及二氯甲烷:乙醇=4:1;
步骤6.3、每隔一时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集3~5个区分液;
步骤6.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤6.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤6.5、将步骤6.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液;以及
步骤7、将步骤6.5分离得到的含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液由一制备型高效能液相层析法进行第四次分离纯化,并将红曲黄素(ankaflavin)成分分离出来。
6.如权利要求5所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于其中,步骤7包含以下步骤:
步骤7.1将步骤6.5所得到的该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液以一C18管柱并配合高效能液相层析仪以及一流洗液进行流洗分离;
步骤7.2、每隔一时间收集由C18管柱流出的区分液,并且共收集2个区分液;以及
步骤7.3、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤7.2所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液。
7.如权利要求6所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于其中,步骤7.1所述的该流洗液为甲醇:水=85:15。
8.一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于至少包含以下步骤:
步骤1、提供一红曲发酵产物;
步骤2、以丙酮对该红曲发酵产物反复进行三次萃取的动作,其中,该红曲发酵产物与该丙酮的比例为1:10~1:50;
步骤3、将步骤2的产物在温度范围为40℃~60℃的情况下,利用一减压浓缩的方式提升其浓度;
步骤4.1、将步骤3所得到的产物加入一硅胶管柱中;
步骤4.2、将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中,其中,所述的多种流洗液依序为:己烷、己烷:乙醇=9:1、己烷:乙醇=8:2、己烷:乙醇=7:3、己烷:乙醇=1:1以及乙醇;
步骤4.3、每隔一时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集12~15个区分液;
步骤4.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤4.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤4.5、将步骤4.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到色素区分液;
步骤5.1、将步骤4所得到的该色素区分液加入一葡聚糖凝胶管柱中;
步骤5.2、将流洗液加入该葡聚糖凝胶管柱中,其中,所述的该流洗液为甲醇:乙腈=9:1;
步骤5.3、每隔一时间收集由葡聚糖凝胶管柱流出的区分液,并且共收集3~5个区分液;
步骤5.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤5.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤5.5、将步骤5.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到黄色素区分液;
步骤6.1、将步骤5所得到的该黄色素区分液加入一硅胶管柱中;
步骤6.2、将多种流洗液依序加入该硅胶管柱中,其中,步骤6.2所述的该多种流洗液依序为:二氯甲烷:乙醇=95:5、二氯甲烷:乙醇=9:1以及二氯甲烷:乙醇=4:1;
步骤6.3、每隔一时间收集由硅胶管柱流出的区分液,并且共收集3~5个区分液;
步骤6.4、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤6.3所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液;
步骤6.5、将步骤6.4所筛选得到的区分液混合在一起,以得到该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液;以及
步骤7、将步骤6.5分离得到的含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液由一制备型高效能液相层析法进行第四次分离纯化,并分别将红曲霉素(monascin)以及红曲黄素(ankaflavin)成分分离出来;以及
步骤8、依据特定的混合比例将该红曲霉素(monascin)以及该红曲黄素(ankaflavin)成分混合,其中,所述的特定的混合比例的范围值为1:1~10:1,并且。
9.如权利要求8所述的可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于,其中所述的特定的混合比例的范围值为3.56:1。
10.如权利要求8所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于其中,步骤7包含以下步骤:
步骤7.1、将步骤6.5所得到的该含有红曲霉素(monascin)与红曲黄素(ankaflavin)的区分液以一C18管柱并配合高效能液相层析仪以及一流洗液进行流洗分离;
步骤7.2、每隔一时间收集由C18管柱流出的区分液,并且共收集2个区分液;以及
步骤7.3、以一高效能液相层析仪-光二极管侦测器仪器对步骤7.2所收集到的每一区分液进行筛选,以筛选出分别含有红曲霉素(monascin)以及红曲黄素(ankaflavin)成分的区分液。
11.如权利要求10所述的一种可降血脂且提升高密度脂蛋白胆固醇的组合物的制造方法,其特征在于其中,步骤7.1所述的该流洗液为甲醇:水=85:15。
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