CN102895172B

CN102895172B - 具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物、制备方法及其应用

Info

Publication number: CN102895172B
Application number: CN201210406082.0A
Authority: CN
Inventors: 刘晓英; 刘光荣; 何聪芬; 程华; 李丽; 董银卯
Original assignee: Infinitus China Co Ltd
Current assignee: Infinitus China Co Ltd
Priority date: 2012-10-22
Filing date: 2012-10-22
Publication date: 2017-03-29
Anticipated expiration: 2032-10-22
Also published as: CN102895172A

Abstract

本发明公开了一种具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物的制备方法，包括以下步骤：松茸烘干、粉碎后沸水提取2～5小时，离心取上清液，上清液过滤后浓缩得浓缩液，上清液浓缩前和浓缩后的质量比为10～25：1；浓缩液进行醇沉，离心，取沉淀物冷冻干燥得冻干粉；将冻干粉溶解于去离子水中，加入体积百分比为90%以上的乙醇至乙醇的体积百分数为60%，4℃醇沉6～10小时后离心取沉淀，即得。本发明提取条件温和，活性物质提取相对完全，提取物具有很好的美白功效、且可以清除体内自由基、改善面部血瘀减少色斑生成，具有良好的保湿、延缓衰老、促透等美容功效，具有广泛应用价值。

Description

具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种松茸提取物，具体地说是一种具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物及其制备方法和应用。

背景技术

松茸作为一种纯天然的珍稀名贵药食两用菌类，含有多种活性成分，具有多种抗肿瘤、抗辐射、美白等功效。目前对松茸口服抗肿瘤等功效研究比较深入，对其外用护肤功效研究甚少。

现有技术对松茸提取得到的提取液成分简单导致最终功效单一，无法满足现有护肤品复合功效的需求，尤其是作为基础添加剂无法对护肤品中的其他成分起到增效和促进作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗衰老保湿促透多种功效的松茸提取物。

本发明的再一目的在于提供上述提取物的制备方法。

本发明的第三目的是提供上述提取物的新应用。

为了实现本发明的目的，本发明采用如下具体技术手段：

一种具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物的制备方法，包括以下步骤：

（1）松茸烘干、粉碎后沸水提取2～5小时，离心取上清液，上清液过滤后浓缩得浓缩液，上清液浓缩前和浓缩后的质量比为10～25：1；

（2）浓缩液进行醇沉，离心，取沉淀物冷冻干燥得冻干粉；

（3）将冻干粉溶解于去离子水中，加入体积百分比为90%以上的乙醇至乙醇的体积百分数为60%，2～6℃醇沉6～10小时后离心取沉淀，即得。

优选的，所述步骤（1）中，松茸烘干粉碎至20～60目；沸水提取：松茸和水的质量比为1：30～1：50。

优选的，所述步骤（1）中，上清液过滤采用硅藻土抽滤至澄清。

优选的，所述步骤（1）中，上清液浓缩前和浓缩后的质量比为20：1。

优选的，所述步骤（2）中浓缩液加入无水乙醇进行醇沉，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3～1：4，静置4～8小时。

优选的，所述步骤（3）中，4℃醇沉8小时后离心取沉淀。

一种具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物，其特征在于，所述提取物由上述方法制备得到的。

上述提取物在制备护肤品中的应用。

所述护肤品为面霜、乳液、爽肤水、洗面奶、啫喱或精华素。

一种具有抗衰保湿促透功效的护肤品，所述护肤品由上述提取物和护肤品领域常规辅料制备而成。

本发明的有益效果：

利用本发明方法得到的松茸提取物提取方法温和，得到的提取物为松茸多糖，经发明人实验验证，其不仅具有优越的美白功效，同时兼具保湿、清除体内自由基、改善面部血瘀等功效，及良好的促进胶原蛋白、维生素C、海藻糖透皮的功效，可以作为护肤品添加剂使用。

附图说明

图1为松茸提取物安全性评价结果；

图2为松茸提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制率实验结果；

图3为松茸提取物清除DPPH自由基实验结果；

图4、5为松茸提取物保湿功效的检测；

图6a和图6b为松茸提取物减少皮肤粗糙度试验，图6a是使用前皮肤纹理，图6b是使用后皮肤纹理图；

图7为松茸提取物对Vc衍生物的促透效果图；

图8为松茸提取物对胶原蛋白的促透效果图；

图9为松茸提取物对海藻糖的促透效果图。

具体实施方式

本发明所用松茸为市售产品，实施例中使用的松茸购买自云南昆明仁辉商贸有限公司。

实施例1松茸提取物的制备

（1）松茸烘干粉碎后过40目筛得松茸粉，按照松茸粉：去离子水即料液比为1：40，沸水提取，提取时间3小时；提取液离心，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤，采用助滤剂硅藻土进行抽滤至澄清透亮，过滤液进行浓缩，浓缩前过滤液：浓缩后过滤液的质量比为20:1；

（2）浓缩液进行醇沉：浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3，静置6小时后，对混合液（浓缩液和无水乙醇的混合液体）进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后，冷冻干燥（冷冻干燥为现有技术，只要在低温条件下干燥即可，推荐条件参数为冷阱温度为-72℃，真空度小于10kpa，真空时间为18小时），得到松茸粗多糖冻干粉；

（3）将冻干粉溶解在去离子水中（溶解浓度为20mg/ml），加入无水乙醇至无水乙醇占整个体系的体积分数为60%，4℃醇沉8h；5000r/min离心，离心的时间为15分钟，取沉淀即为松茸提取物（松茸多糖TMSP-6）。

实施例2松茸提取物的制备

（1）松茸烘干粉碎后过20目筛得松茸粉，按照松茸粉：去离子水即料液比为1：30，沸水提取，提取时间5小时；提取液离心，离心的转速为4000rpm，离心时间为15分钟得上清液；上清液再过滤，采用助滤剂硅藻土进行抽滤至澄清透亮，过滤液进行浓缩，浓缩前过滤液：浓缩后过滤液的质量比为25:1；

（2）浓缩液进行醇沉：浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：4，静置4小时后，对混合液（浓缩液和无水乙醇的混合液体）进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间15分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后，冷冻干燥（冷冻干燥为现有技术，只要在低温条件下干燥即可，推荐条件参数为冷阱温度为-72℃，真空度小于10kpa，真空时间为18小时），得到松茸粗多糖冻干粉；

（3）将冻干粉溶解在去离子水中（溶解浓度为30mg/ml），加入无水乙醇至无水乙醇占整个体系的体积分数为70%，2℃醇沉5h；5000r/min离心，离心的时间为10分钟，取沉淀即为松茸提取物（松茸多糖TMSP-6）。

实施例3松茸提取物的制备

（1）松茸烘干粉碎后过60目筛得松茸粉，按照松茸粉：去离子水即料液比为1：50，沸水提取，提取时间2小时；提取液离心，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤，采用助滤剂硅藻土进行抽滤至澄清透亮，过滤液进行浓缩，浓缩前过滤液：浓缩后过滤液的质量比为10:1；

（2）浓缩液进行醇沉：浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3，静置8小时后，对混合液（浓缩液和无水乙醇的混合液体）进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间20分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后，冷冻干燥（冷冻干燥为现有技术，只要在低温条件下干燥即可，推荐条件参数为冷阱温度为-72℃，真空度小于10kpa，真空时间为16小时），得到松茸粗多糖冻干粉；

（3）将冻干粉溶解在去离子水中（溶解浓度为25mg/ml），加入无水乙醇至无水乙醇占整个体系的体积分数为50%，6℃醇沉6h；5000r/min离心，离心的时间为20分钟，取沉淀即为松茸提取物（松茸多糖TMSP-6）。

实施例4本发明乳液的制备

1、原料及用量：

A相：鲸蜡硬脂醇5wt%

山俞醇2wt%

季戊四醇双硬脂酸酯2wt%

单硬脂酸甘油酯2wt%

乳木果油5wt%

二甲基硅油3wt%

B相：鲸蜡硬脂基葡萄糖苷3wt%

卡波姆0.1wt%

乙二胺四乙酸二钠盐0.15wt%

实施例1制备的松茸提取物0.5wt%

C相：防腐剂0.5wt%

香精0.2wt%

胶原蛋白3wt%

10%NaOH 0.5wt%

余量为去离子水。

2、制备方法：

（1）按上述的组分及用量称取各原料；

（2）将A相和B相分别加热至80℃搅拌使原料溶解完全；

（3）将A相加入乳化锅中搅拌，搅拌速率为80转/分钟，边搅拌边将B相加入乳化锅中，加入的速度以乳化锅中B相原料全部乳化为准，当B相原料全部加入后抽真空（真空度为-0.1个大气压）、搅拌均质4分钟，搅拌速率为80转/分钟，加热至80℃保温，20分钟后开始降温，当温度降到30℃时加入C相原料，搅拌均匀继续降温，当温度在40℃时均质1～2分钟出料即可。

本发明松茸提取物功效实验及安全性测试

一、本发明松茸提取物安全性测试

1、采用红细胞溶血实验测定其刺激性，该实验为欧盟认证的安全性动物替代实验。

柠檬酸缓冲液的配制：按照柠檬酸三钠：柠檬酸=66：44mmol/L，超纯水配制。

磷酸盐缓冲液（PBS）的配制：磷酸盐缓冲液pH=7.4，超纯水配制。

SDS标准溶液的配制：将十二烷基硫酸钠用PBS缓冲液溶解，浓度为1.0g/L，即质量分数为0.1%。

测试样品的配置：将实施例1制备的松茸提取物配制成0.1%与1%的溶液。

具体实验步骤与方法：

取新鲜鸡血50mL，盛装于聚乙烯塑料容器中，与10mL柠檬酸缓冲液混匀。用10mL聚乙烯无菌离心管分装采集的血液样本，室温下，4000r/min，离心5min。取上清液，弃之。实验前，将RBC放置，使其温度稳定于室温，整个过程无菌操作。用PBS配制1.0mg/mL（即0.1%）的SDS溶液。向1.5mL EP管中依次加入0、5、10、15、20、25、30、35、40μL的SDS溶液，分别加入PBS补齐至960μL。快速加入40μL RBC悬液，37℃下150r/min振荡孵育10min。8000r/min离心1min终止反应，取上清液于1cm比色皿中于530nm波长处测吸光度。同时在显微镜下观察血红细胞的形态和细胞膜的完整性。

红细胞溶血率的计算公式：

其中：A_待测液：SDS组在530nm处吸光度。

A_自溶：RBC自溶对照组在530nm处吸光度。

A_全溶：阳性对照组在530nm处吸光度。

设960μL PBS中加入40μL RBC溶血率为0，960μL超纯水中加入40μL RBC发生溶血率为100%。

实验分为2组：①阳性对照组：向1.5mL EP管中加入40μL RBC悬液，920μL PBS和40μL质量浓度为1.0mg/mL的SDS溶液，37℃下150r/min振荡孵育10min；②测试样品组：向1.5mL EP管加入320μL的测试样品（PBS配制），加入PBS至960μL混匀。快速加入40μL RBC轻缓混匀，37℃下3500r/min振荡孵育10min。8000r/min离心1min终止各组反应，取上清液于1cm比色皿中于530nm波长处测吸光度，计算溶血率。实验设三次重复。

实验结果见图1，0.1%与1%的松茸提取物均没有发生明显的血红细胞溶血现象，说明该物质对细胞无刺激，具有较高的安全性。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1。

二、功效实验

1、松茸提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制率实验

酪氨酸酶是黑素形成过程中主要的限速酶，该酶的活性大小决定着黑素形成的数量，当前化妆品市场上的美白产品绝大多数以酪氨酸酶抑制剂为主。L-酪氨酸酶与其底物L-酪氨酸可以发生催化反应，当在反应体系中添加有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂后，对催化反应可以产生抑制作用，通过测定添加有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂前后475nm处吸光度值的变化，来评价该有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂对L-酪氨酸酶活性的抑制率。具体实验过程如下：

称取17.91g十二水磷酸氢二钠溶于500mL蒸馏水中，得到溶液a；称取7.8g二水磷酸二氢钠溶于500mL蒸馏水中，得到溶液b；将92.6mL溶液a和107.4mL溶液b混合，得到200mLpH为6.8的PBS缓冲溶液。

称取0.05g L-酪氨酸，先用少量0.1mol/L的盐酸溶解，待其溶解后用上述配制的pH为6.8的PBS缓冲液定容至100mL。

实验过程中，各组中各物质的加入量如表1所示。

表1松茸提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制实验中各物质的加入量

注：C₁组和T₁组均加入0.5mL酪氨酸酶，酶活为100U/mL。

C₀组各溶液配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。C₁组溶液配好摇匀后，37℃水浴10min后加入0.5ml酶活为100U/mL的酪氨酸酶，继续水浴10分钟，测定吸光度值。

T₀组各溶液配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。T₁组溶液配好摇匀后，37℃水浴10min后加入0.5ml酶活为100U/mL的酪氨酸酶，继续水浴10分钟，测定吸光度值。

计算酪氨酸酶的活性抑制率T（%），T（%）=（C₁-T₁）/C₁×100%。

实验设三次重复，三次重复的平均结果如图2所示，结果表明，当上述实施例1制备的松茸提取物，在低浓度时（80-160μg/mL），具有抑制酪氨酸酶的功效，且抑制率随着浓度的增大而提高，当浓度为160μg/mL，酪氨酸酶抑制率为48.53%。这说明该物质具有良好美白功效，且添加量低。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1，在此不赘述。

2、清除DPPH自由基（DPPH·）实验

DPPH是一种稳定的有机自由基，在可见光区最大吸收峰为517nm，在乙醇溶液中，每个DPPH分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型紫色，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅。其褪色程度与配对电子数成化学计量关系。因而可用分光光度法进行定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的清除自由基的能力。

准确称取20mg DPPH·（sigma公司），用无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到浓度为20mmol/L的DPPH·溶液，将上述实施例1制备的松茸提取物分别用蒸馏水稀释成不同浓度的测试液。分别取2ml不同浓度的测试液及2ml 20mmol/L DPPH·，混匀后反应30min，测定517nm波长下吸光度的变化，对照溶剂用无水乙醇代替，按下式计算抑制率。

抑制率(%)=[1-(A_i－A_j)/Ac]×100。

式中，Ai为2ml DPPH·液与2ml不同浓度的测试液组成的混合液的吸光度；Aj为2ml不同浓度的测试液与2ml无水乙醇组成的混合液的吸光度；Ac为2ml DPPH·液与2ml无水乙醇组成的混合液的吸光度。

实验设三次重复，三次重复的平均结果如图3所示。结果表明，当上述实施例1制备的松茸提取物，在低浓度时（10-70μg/mL），具有清除DPPH自由基的功效，且清除率随着浓度的增大而提高，当浓度为70μg/mL，DPPH清除率为51.21%。这说明该物质具有良好抗氧化功效，且添加量低。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1。

3、松茸提取物对凝血酶的活性抑制率实验

从中医角度，血瘀可造成面部肤色暗黄，抑制皮肤中的凝血酶与纤维蛋白原作用，可改善血瘀状况。本实验采用纤维蛋白原作为底物，用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板，以凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应，制作相应的标准曲线及回归曲线，并对样品抑制凝血酶活性作定量测定。

实验试剂与溶液：

0.05mol/L，pH7.4的PBS的配置：取二水磷酸二氢钠0.3705g，十二水磷酸氢二钠3.6263g，放入250ml容量瓶中，加去离子水溶解，待固体完全溶解后，定容至250ml。

0.1mol/L，pH7.4的PBS的配置：取二水磷酸二氢钠0.741g，十二水磷酸氢二钠7.2522g，放入250ml容量瓶中，加去离子水溶解，待固体完全溶解后，定容至250ml。

2%琼脂糖：准确称取1.25g的琼脂糖，加入50ml去离子水，置于电磁炉上加热沸腾至溶解。

0.1%的纤维蛋白溶液：称取0.05g的纤维蛋白原（平时放于4℃冰箱保存），加入50ml0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液，置于30℃恒温水域锅中溶解。

凝血酶溶液配置：取出1kU/mL的凝血酶（未使用前放于-20℃冰箱保存），加入9ml0.05mol/L pH 7.4磷酸缓冲液溶解，即为100U/mL的凝血酶，分装于1.5mlEP管中，放在4℃冰箱保存。使用时，将100U/mL的凝血酶，稀释至12.5U/mL。

测试样品配置：准确称取实施例1松茸提取物0.05g，用0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液稀释，配制成浓度为100μg/mL、200μg/mL、250μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL的测试样品。

实验步骤：

用去离子水将琼脂糖配制成2%的浓度，加热充分溶解。纤维蛋白原用0.1mol/LpH7.4磷酸缓冲液溶解，纤维蛋白原浓度为0.1％，与上述2%琼脂糖(加热至约90℃)以1∶1的体积比例混匀，在平皿中灌板，灌板厚度约为2mm，冷却后即制成纤维蛋白原平板。按1.6cm的间距打孔。孔径约为4mm。

将样品、0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液、12.5U/mL的凝血酶，按1∶1∶2充分混合，37℃孵育5min后，取40μL上样纤维蛋白原平板。平皿加盖后置37℃恒温扩散反应9h。用油标卡尺测量各反应孔沉淀圈直径(mm)大小。

凝血酶活性抑制率的计算见公式。

实验重复三次。实验结果如表2所示。结果表明，松茸提取物浓度在1％、3％、5%时，均有很好抑制凝血酶的功效，同浓度阳性对照（一种市售松茸提取物)基本上不具有抑制效果，本发明松茸提取物具有可以改善面部气滞血瘀现象。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1。

表2松茸提取物凝血酶抑制功效测定结果

4、松茸提取物保湿功效的检测

采用人体测试方式，用水分测试仪测试皮肤的水份含量和TEWL值，选取20个自愿者；志愿者男女各半。采用两种溶液涂覆于皮肤表面：一种溶液为含有3.0%（质量百分比浓度）的海藻糖溶液，另一种溶液为含有1.0%（质量百分比浓度)本发明实施例1松茸提取物的溶液；每半小时测试一次，共4小时。皮肤表面的水份含量变化的百分比随时间的变化曲线如图4所示，结果表明：与海藻糖相比，本发明提供的含有1.0%（质量百分比浓度）的松茸提取物为主要成分的润肤添加剂具有更好的保湿效果。皮肤水分散失量变化的百分比随时间的变化曲线如图5所示，结果表明：与空白样相比，本发明提供的松茸提取物具有很好的锁水性能，可长效保湿。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1。

5、松茸提取物减少皮肤粗糙度试验

实验中，要求志愿者每天在前臂内侧早晚各涂抹1%的松茸提取物一次，持续使用8周后，皮肤纹理改善数据对比见表3及图6a和图6b所示。可以看出本发明提取物能明显使皮肤变得细腻光滑。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1。

表3

6、松茸提取物对胶原蛋白、Vc衍生物及海藻糖的促透作用

溶液的配制：

Vc衍生物提取液：主要成分为Vc衍生物（维生素C衍生物AA2G即L-抗坏血酸2-葡糖苷），将1g Vc衍生物的固体粉末（购买厂家为日本岩濑公司），纯品溶解于100g去离子水中，浓度为1%（wt）。

1%胶原蛋白溶液：将1g胶原蛋白（上海江莱生物科技有限公司购买）溶解于99g去离子水中，浓度为1%。

1%海藻糖溶液：1g海藻糖固体粉末（购买厂家为上海甘源实业有限公司），纯品溶解于100g去离子水中，浓度为1%（wt）。

配制溶液A（1ml Vc衍生物提取液+100ml 1%松茸提取物水溶液）；

配制溶液B（1mlVc衍生物提取液+100ml 0.9%生理盐水）作为空白。

配制溶液C（1ml 1%胶原蛋白溶液+100ml 1%松茸提取物水溶液）。

配制溶液D（1ml1%胶原蛋白溶液+100ml 0.9%生理盐水）作为空白。

配制溶液E（1ml 1%海藻糖溶液+100ml 1%松茸提取物水溶液）。

配制溶液F（1ml1%海藻糖溶液+100ml 0.9%生理盐水）作为空白。

松茸提取物采用实施例1制备。

采用Franz试验扩散装置，将大鼠腹部皮肤固定于扩散池的给药室与接受室之间，两池有效接触面积为2.83cm²，接受室容积8ml。真皮一侧与接受液接触，注意结合紧密，不能有气泡。接受液为生理盐水。分别取溶液A、B、C、D置于释放室中并将其顶部密封，以免损失，平行做3组。水浴温度37.4±0.5℃，待水浴槽温度到达预置试验温度时，将Franz玻璃扩散池放入水箱上部相应槽孔内，即可试验。试验开始时刻为0时刻，在设定时间1h、2h、3h、4h、5h、6h时刻取样5ml，将样液置于试管中，然后立即向接受池补充等体积的0.9%生理盐水。用紫外分光光度仪检测样液中Vc衍生物提取液在245.5nm处得吸光值，计算Vc衍生物的透皮释放累积量；对于胶原蛋白含量进行测定，计算透皮累计量；多总糖含量进行测定，计算透皮的总糖含量。结果如图7、8、9所示。

从图7、8、9中可以看出，与空白试剂相比，添加实施例1制备的松茸提取物水溶液能明显增加Vc衍生物、胶原蛋白和海藻糖的渗透量，这表明松茸提取物不但有美容功效，还有很好的促透功效，能让护肤品中其他多种活性物质更易被肌肤吸收。实施例2和实施例3的提取物重复上述实验，结果同实施例1。

Claims

1.松茸提取物在制备对胶原蛋白、Vc衍生物及海藻糖具有促透功效的护肤品中的应用，其特征在于，所述松茸提取物由下述方法制备得到：

(1)松茸烘干、粉碎后沸水提取2～5小时，离心取上清液，上清液过滤后浓缩得浓缩液，上清液浓缩前和浓缩后的质量比为10～25：1；

(2)浓缩液进行醇沉，离心，取沉淀物冷冻干燥得冻干粉；

(3)将冻干粉溶解于去离子水中，加入体积百分比为90％以上的乙醇至乙醇的体积百分数为60％，2～6℃醇沉6～10小时后离心取沉淀，即得；

所述步骤(1)中，松茸烘干粉碎至20～60目；沸水提取：松茸和水的质量比为1：40～1：50。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，上清液过滤采用硅藻土抽滤至澄清。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，上清液浓缩前和浓缩后的质量比为20：1。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(2)中浓缩液加入无水乙醇进行醇沉，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3～1：4，静置4～8小时。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)中，4℃醇沉8小时后离心取沉淀。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述护肤品为面霜、乳液、爽肤水、洗面奶、啫喱或精华素。