CN102879588A - 一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法。本发明涉及分析测试领域，构建一种仿生免疫传感器对雌二醇的特异性检测。所述的仿生免疫传感器包含基底电极，在基底电极表面修饰石墨烯和沉积纳米金，以聚吡咯为骨架，将模板分子雌二醇分子嵌入聚吡咯膜层中，通过洗脱模板分子过程将雌二醇从聚吡咯膜层中移除，膜层表面形成与雌二醇相匹配的空穴，能够对雌二醇识别。所述的仿生免疫传感器表面具有大量的与雌二醇分子相匹配的空穴，在复杂的样品环境中能够对雌二醇分子的特异性识别，将雌二醇分子富集到传感器表面，通过电化学的分析方法，可以用于雌二醇的检测。本发明的仿生免疫传感器具有高的灵敏度和高的识别特性，其检测方法简单，能够适应高温，高压等恶劣环境中雌二醇的富集分析检测。

Description

一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法

技术领域

本发明涉及到雌激素的检测，基于石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素高容量，高选择性吸附，使之该修饰电极表面富集大量雌激素，通过电化学的方法测试其电极表面富集大量的雌激素，构建一个高灵敏度，高选择性的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器，建立电化学基于仿生免疫传感器的测试方法，实现对雌激素的检测分析。

背景技术

当前，食品安全问题以受到各方面的关注，尤其是近年来过量使用激素作为食品添加剂，这些添加剂或者残留激素通过食物链进入人体，并且积累，难以降解等特点。在各项激素污染问题中，雌激素残留问题往往最容易受到忽视，而雌激素在人体内积累，可诱发人体癌变，对人体生殖与神经系统造成不可逆的影响。因此监测雌激素在食品中的残留量是一个行之有效的手段来控制食品中激素残留问题，所以建立一套高灵敏度，高效简单的检测方法测试食品中雌激素的含量已经成为当务之急。

目前，对雌激素的检测方法主要有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质朴联用法等。但是上述的一些仪器分析方法操作复杂，依赖大型昂贵的仪器，且样品前处理过程繁琐，时间长，仪器的操作需要专业技术人员。当前许多分析工作者提出生物免疫分析方法，基于生物免疫传感器高灵敏度，高选择性，构建生物免疫传感器对激素的分析检测，但是生物免疫传感器难以在复杂恶劣的环境中对激素的分离富集，且构建生物免疫传感器所需的抗体本身就是一种昂贵且难以长期保存的生物试剂，不适合大量在线富集检测分析。因此，建立一种灵敏，快速，简单且干扰小技术方法，为检测激素成为一种迫切的需要。

石墨烯是一种二维平面结构的物质，其优良的导电性，化学稳定性，巨大的比表面积这些优异的纳米材料独特的结构和性能，在生物医学，生命科学，食品分析科学以及化学分析领域都有着广泛的应用。仿生免疫传感器是基于生物免疫传感器相类似的概念提出来的，生物免疫传感器主要是针对不同抗原或者抗体通过生物免疫的分析方法检测其目标物质，但是一般生物抗原或者抗体难以在复杂恶劣的环境中继续保持其生物活性，这样对于构建生物免疫传感器是一个很大的难题。仿生免疫传感器的构造有别于生物免疫传感器，其主要是通过化学聚合的的方法实现；首先是待分析的目标物质(模板分子)与相应的功能单体通过氢键或者化学键合作用结合在一起，然后通过加入交联剂与引发剂将功能单体和模板分子通过溶液聚合的方式将目标物质固定在交联剂的网络之中，在通过洗脱的过程将固定在交联剂网络中的模板分子除去，这样就在交联剂网络中形成了与模板分子相匹配的空穴(印迹位点)，能够识别模板分子。仿生免疫传感器是基于传感器表面有大量的与目标物质结构相匹配的印迹位点，这样该传感器就能够识别目标物质并且能够将目标物质大量富集于传感器表面，通过一系列化学检测实现对目标物质的分析。因为其是通过化学合成的方法构建的传感器，其机械强度，化学稳定性能均很稳定，能够适应在高温，高压等恶劣环境中，克服了普通生物免疫传感器适应性差的问题，而传感器表面有大量的与模板分析相匹配的空穴，这样可以实现模板分子的高选择性。

在应用分析检测手段中，电化学的分析方法是一种常见的分析方法，其简单的仪器以及易于控制的实验操作，自被发展成为一种分析检测方法就一直被重视。电化学分析在环境监测，食品分析，生命分析领域，有着广泛的应用。构建高灵敏度的，高稳定性，高选择性的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器，在传感器表面富集大量目标物质，通过电化学的分析方法实现目标物质的定量分析检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高灵敏度，简单，选择性高的检测雌二醇的仿生免疫传感器，通过该传感器实现对雌二醇的分析检测。

本发明是构建一个具有高灵敏度，高稳定性，高选择性的仿生免疫传感器，能够在复杂环境中选择性富集雌二醇，通过电化学的分析方法快速，在线检测雌二醇。

本发明所要解决的问题是，传统生物传感器的不稳定性，吸附容量低，实际操作困难等缺陷，通过化学的方法构建稳定的，高吸附容量，操作简单的仿生免疫传感器，在复杂的环境中富集雌二醇用于电化学分析检测。

本发明通过以下技术方案实现：

石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的构建包括基底电极，其特征在于所述的基底电极表面修饰石墨烯后，在电极表面沉积纳米金组成石墨烯-纳米金复合修饰电极，然后在溶液中吡咯和雌二醇的作用通过循环伏安扫描的方法将吡咯电聚合于电极表面，雌二醇嵌入到聚吡咯的骨架之中，通过洗脱的方式，除去雌二醇分子，形成与之相匹配的空穴，构成针对雌二醇选择富集的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器。

所述的基底电极为玻碳电极。

本发明提供石墨烯-纳米金仿生免疫传感器及针对雌二醇的特异性分析检测，其技术方案如下：

(1)均匀分散的石墨烯的制备：称取5mg石墨烯分散于10mL的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中超声分散30min以上，制备均匀分散的石墨烯溶液；

(2)玻碳电极的处理：选用的玻碳电极为柱状结构，其工作区域直径为3mm，分别用1.0，0.5，0.3μm的氧化铝粉末乳液抛光，然后在乙醇和蒸馏水中分别超声10min；

(3)石墨烯修饰电极的制备：取5μL分散均匀的石墨烯溶液滴涂在抛光过后电极的工作区域内，使石墨烯溶液均匀铺展在玻碳电极工作区域内，自然晾干形成石墨烯修饰层；

(4)石墨烯-纳米金修饰电极的制备：将上述步骤(3)所制备的石墨烯修饰电极用电化学方法沉积纳米金粒子，制备而成石墨烯-纳米金修饰电极；方法是将该石墨烯修饰电极于0.2g/L的HAuCl₄溶液中，在-0.2V的电位条件下恒电位扫描90s；

(5)石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的制备：将步骤(4)制备的石墨烯-纳米金修饰电极浸泡于含有1.0×10^-5mol/L雌二醇，0.01mol/L吡咯的PBS(pH＝6.86)溶液中按照-1.0～1.0V的扫描范围，50mV/s的扫描速度，用循环伏安法扫描20段，使之雌二醇嵌入到聚合在电极表面的聚吡咯的骨架中，构建而成石墨烯-纳米金仿生免疫传感器。

(6)模板分子的去除：将步骤(5)所构建的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器浸泡在0.5mol/L HCl的溶液中，通过磁力搅拌子将溶液搅动，浸泡30min以完全除去电极表面的雌二醇，形成与模板分析相匹配的空穴。

(7)电化学检测构件：石墨烯-纳米金仿生免疫传感器，参比电极(Ag/AgCl)，对电极(铂丝电极)组成三电极体系；电解池以及电化学工作站。

(8)反应环境：0.1mol/L的KCl溶液中含有0.05mol/L PBS(pH＝6.86)。

(9)数据采集系统，包含有电化学输出以及数据采集软件。

(10)数据结果输出与报告。

上述的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器可以用于雌二醇的分离富集并且在线检测雌二醇的含量。该传感器工作区域表面有大量与雌二醇相匹配的空穴，能够识别相应雌二醇的模板分子，当溶液中含有该雌二醇的模板分子时，则该传感器就能够识别并且捕获模板分子，富集在与之相匹配的空穴之中。当溶液中雌二醇模板分子浓度越高，传感器表面空穴之中捕获的模板分子就会越高，其信号在PBS溶液中信号会越强，由此可以建立检测雌二醇，基于石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的分析方法。

本发明在构建一种对雌二醇高选择性的传感器的基础之上还涉及到基于上述传感器对雌二醇的分析方法，包含有以下步骤：

(1)雌激素标准溶液的配制：配置一组含雌二醇的标准溶液，其浓度分布为：1.0×10^-11～5.0×10^-7mol/L；

(2)石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌二醇的富集：将制备好的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器分别浸泡于上述步骤(1)所配制的雌二醇标准溶液中，用磁力搅拌子搅拌，吸附时间为15min。

(3)传感器的清洗：将步骤(2)所得到富集了雌二醇的传感器浸泡在蒸馏水中使用磁力搅拌器搅拌，清洗10min，以除去非选择性的物质。

(4)分析测试：将步骤(3)所得到的电极在含有0.1mol/L的PBS(pH＝6.86)溶液中扫描循环伏安曲线，条件设置为：扫描范围，-0.2～0.8V；扫描速率，100mV/s；灵敏度，1.0×10^-5；

(5)建立标准曲线：重复(2)～(4)的步骤，在步骤(2)中雌二醇的浓度按照步骤(1)所列出的进行富集；记录步骤(4)扫描循环伏安响应电流I_s，空白样品响应电流为I₀，根据响应电流的增加值ΔI(ΔI＝I_s-I₀)的对数与溶液中雌二醇标准样品浓度C的对数成正比，绘制logΔI-log C标准曲线，得到线性回归方程；

(6)雌二醇样品的测定：将雌二醇样品粗配成一定浓度的溶液，按照步骤(2)～(4)的过程测试雌二醇样品响应电流I_x，通过I_x与标准曲线可以计算得出样品中雌二醇浓度。

本发明的仿生免疫传感器及其雌二醇的检测方法基于以下原理。

所述的仿生免疫传感器是一种石墨烯-纳米金复合修饰电极，然后在该修饰电极表面通过电聚合的方式将雌二醇嵌入到聚合物的骨架中，形成具有与雌二醇结构相匹配的空穴，构成对雌二醇具有识别作用的仿生免疫传感器。石墨烯巨大的比表面积，优良的导电性能，良好的化学稳定性，纳米金优良的信号扩增作用，良好的生物兼容性能等优点；通过电化学的方法将纳米金沉积在石墨烯修饰电极表面，既可以固定石墨烯修饰层，又可以将纳米金和石墨烯两者优良性质结合，构建而成的传感器综合以上优点，同时对雌二醇具有良好的识别作用，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器构造如图1。

基于发明的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器用于检测雌二醇的方法原理如图2。

所述的仿生免疫传感器对溶液中的雌二醇的检测，是基于该传感器工作区域表面有大量与雌二醇结构相匹配的空穴，在溶液中能够识别与之相对应的雌二醇而不会选择性吸附其他干扰物质，达到一个良好的选择性富集作用。其主要方法原理为，(a)将该传感器浸泡于含有一定浓度的雌二醇模板分子和其他干扰物质的溶液中，通过传感器表面的空穴将溶液中的模板分子富集到工作区域表面；(b)洗脱非选择吸附物质，通过这一步骤将一些通过物理吸附在传感器表面的干扰物质洗脱而留下选择性吸附的雌二醇；物理吸附的作用力很弱，而通过印迹位点吸附作用的是通过模板分子和功能单体作用的化学键很稳定，所以通过该洗脱过程，雌二醇高选择性的富集在传感器表面；(c)电化学检测，通过电化学的方法检测检测富集在传感器表面的雌二醇，因为电化学反应都是发生在电极表面，这样当电极表面所参加的反应物质越多，则信号越强。

本发明通过石墨烯-纳米金复合修饰电极，通过电聚合吡咯嵌入雌二醇，形成雌二醇印迹位点，构建而成的仿生免疫传感器可对雌二醇实现分离富集效果，通过电化学的循环伏安法实现对雌二醇的的定量分析检测。本发明的仿生免疫传感器，具有高的灵敏性和高的选择性，同时具有良好的机械性能和化学稳定性，检测方法简单，高效，能够适应高温高压等恶劣环境下雌二醇的分离富集检测。

为进一步说明本发明的特点和效果，在附图中说明相关构件的功能和检测方法。

附图说明

图1本发明的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器构建过程示意图，首先是石墨烯修饰电极的制备；在此基础之上，通过电化学方法电沉积纳米金在石墨烯修饰电极表面，制备而成石墨烯-纳米金修饰电极；然后通过电化学的方法将吡咯和雌二醇聚合在石墨烯-纳米金修饰电极表面，构建而成表面嵌有大量雌二醇的印迹膜，然后通过洗脱的方式将雌二醇模板分子洗脱掉，聚吡咯膜层具有与雌二醇相匹配的空穴，构建而成石墨烯-纳米金仿生免疫传感器。

图2本发明的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器检测雌二醇的原理，(a)将该免疫传感器浸入含有雌二醇的溶液中进行富集；(b)清洗传感器表面非选择性吸附的物质；(c)通过电化学检测信号检测雌二醇的浓度。

图3不同修饰电极对雌二醇的电化学电流响应值，曲线a是裸电极对雌二醇的电化学响应；曲线b是石墨烯修饰电极对雌二醇的电化学响应；曲线c是石墨烯-纳米金修饰电极对雌二醇的电化学响应；曲线d是石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌二醇的电化学响应。

图4本发明的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的循环伏安曲线，在含有不同浓度的雌二醇：(a)1.0×10^-11mol/L，(b)1.0×10^-10mol/L，(c)1.0×10^-9mol/L，(d)1.0×10^-8mol/L，(e)1.0×10^-7mol/L，(f)5.0×10^-7mol/L。

图5响应电流的变化ΔI的对数值与雌二醇浓度的对数值标准曲线图。

具体实施方式

下面就具体结合实例对本发明的进行详细描述：

本发明检测雌二醇，由仿生免疫传感器，电解池，数据输出、采集和处理系统组成。

以下实例中使用的电化学工作站为上海辰华公司电化学工作站(CHI660B)，三电极体系包括工作电极，参比电极，辅助电极，各电极通过一个橡胶板固定在同一个平面上。工作电极为石墨烯-纳米金仿生免疫传感器，参比电极为饱和甘汞电极，辅助电极为铂丝电极进行电化学测量；所用的雌二醇是Sigma-Aldrich公司购买。

实施例1石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的制备

一种分离富集并且用于雌二醇检测的仿生免疫传感器的制备是在石墨烯-纳米金修饰电极表面通过电化学方法在电极表面聚合一层吡咯并嵌入雌二醇制备而成。

其制备方法如下：

(1)石墨烯溶液的制备：称取5mg的石墨烯，加入到10mL的N，N-二甲基甲酰胺中在53kHz的条件下超声分散30min，制备得到分散均匀的石墨烯分散液。

(2)石墨烯修饰电极的制备：直径为3mm的玻碳电极在0.3～0.05μm的A1₂O₃粉末上抛光成镜面，用乙醇和二次蒸馏水分别超声清洗5min，然后将电极在0.1mol/L的KCl中含有0.001mol/L K₃Fe(CN)₆的溶液中扫描循环伏安实验，直到得到一对可逆的氧化还原峰。洗净之后，自然晾干，然后吸取5μL上述步骤(1)所制备的石墨烯分散液，均匀滴涂于电极表面，是石墨烯分散液均匀铺展在玻碳电极工作区域范围内，自然晾干，得到石墨烯修饰电极。

(3)石墨烯-纳米金修饰电极的制备：将步骤(2)制备得到的石墨烯修饰电极浸泡在0.2g/L的HAuCl₄溶液中，在-0.2V的恒电位下扫描90s，其扫描速度为50mV/s，分别用0.2mol/L的H₂SO₄和蒸馏水润洗，则通过该步骤制备得到石墨烯-纳米金修饰电极。

(4)石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的构建：将步骤(3)所制备得到的石墨烯-纳米金修饰电极近浸泡在含有1.0×10^-5mol/L雌二醇，0.01mol/L吡咯的PBS缓冲溶液中(pH＝6.86)，选择实验方法为循环伏安法，扫描范围为-1.0～1.0V，扫描速率为50mV/s，扫描20段，将吡咯聚合到电极表面形成一层聚吡咯膜层，因为雌二醇和吡咯之间的氢键作用，可以将雌二醇固定住，通过循环伏安法扫描的过程中将雌二醇嵌入在聚吡咯的骨架中，就制备得到该仿生免疫传感器。

(5)雌二醇模板分子的洗脱：上述制备得到的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器其工作区域表面的聚吡咯膜层中嵌入有大量雌二醇的模板分子，在后续的实验过程中要实现对雌二醇的分离富集检测，则首先必须将传感器表面的雌二醇分子洗脱下来，形成与雌二醇相匹配的空穴，才能分离富集溶液中的雌二醇；其洗脱雌二醇模板分子的方法是将该传感器浸泡于0.5mol/L的NaOH-CH₃OH溶液中15min，通过磁力搅拌不断的将洗脱液搅拌，这样有利于模板分子的洗脱。

实施例2几种不同修饰电极对雌二醇的检测比较

不同修饰电极对雌二醇的电化学电流响应值研究，其结果如图3。裸电极(曲线a)在含有1.0×10^-8mol/L雌二醇的PBS(pH＝6.86)溶液中其峰电位在0.5V，电流响应值很弱；当在电极表面修饰石墨烯后(曲线b)，峰电流明显增大，显示出了石墨烯优异的电化学性质；而继续在石墨烯修饰电极表面沉积纳米金后(曲线c)，表现出来的峰电流更加增大，这表明，石墨烯与纳米金的复合修饰电极具有更加优越的电化学性能，其主要原因是因为石墨烯巨大的比表面积，在此表面上可以沉积大量纳米金。纳米金优异电化学活性以及催化性能，结合石墨烯的优越性能两者的优点，石墨烯-纳米金修饰电极其具有比普通石墨烯修饰电极或者纳米金修饰电极更加优越的性质。

在石墨烯-纳米金修饰电极的基础之上发展起来的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器兼有石墨烯-纳米金复合修饰电极的优点，同时还能够对雌二醇的识别，使之在复杂的溶液中分离富集出来进行电化学检测。曲线d可以看出，以雌二醇为模板分子构建的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器，其对雌二醇的电流响应值明显比石墨烯-纳米金修饰电极电流响应值要大，这表明该传感器可以有效的实现对雌二醇的富集，使雌二醇能够很好的富集在传感器的表面，这样通过电化学的反应，其响应电流进一步增大。其原因是因为电化学反应是在电极表面进行的，普通的修饰电极只是能和在电极工作区域附近的少量的雌二醇发生反应，信号弱，而该传感器能够识别雌二醇分子并且将雌二醇分子富集在工作区域表面，这样工作区域表面富集有大量的雌二醇，则其电流响应值增强。

实施例3石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素检测方法的建立

以石墨烯-纳米金仿生免疫传感器针对雌二醇有高的选择性，可以实现对雌激素的定量检测。

配制标准雌二醇溶液，浓度分布为1.0×10^-11～5.0×10^-7mol/L；首先将未富集雌二醇的传感器在含有0.1mol/L KCl的PBS(pH＝6.86)溶液中扫描循环伏安实验记录电流信号I₀，然后将石墨烯-纳米金仿生免疫传感器分别浸泡在上述浓度的雌二醇溶液中，富集时间为15min，在蒸馏水中清洗10min；然后将富集雌二醇的传感器于含有0.1mol/L KCl的PBS(pH＝6.86)溶液中扫描循环伏安实验，分别记录该传感器在不同浓度的雌二醇中富集后检测信号，分别记为I₁，I₂，I₃…，如图4所示。上述实验都是在同样的实验条件下进行，实验条件设置为：扫描范围，-0.2～0.8V；扫描速率，100mV/s；灵敏度，1.0×10^-5。

结果表明，随着雌激素浓度的增加，其检测信号逐渐增大，定义未富集雌二醇的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器其电化学电流响应值I₀(空白背景信号)，在含有雌激素的溶液中富集过后检测信号其电流响应值为I_x(I₁，I₂，I₃…)，响应电流的增加值ΔI(ΔI＝I_x-I₀)的对数值与雌二醇浓度的对数值(1.0×10^-11～5.0×10^-7mol/L)成正比。

绘制logΔI-log C标准工作曲线如图5所示。其线性回归方程为：

logΔI＝0.959+0.1298log C

以大于3倍噪声信号的电流信号浓度为最低检测限，上述实验方法最低检测限为4×10^-12mol/L(n＝5)。

Claims (10)

1.一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，该检测方法步骤如下：a，石墨烯修饰电极的制备；b，纳米金沉积在石墨烯修饰电极表面制备石墨烯-纳米金复合修饰电极；c，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的制备；d，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的在线富集；e，通过电化学方法检测信号。

2.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，通过在电极表面修饰石墨烯，增加电极的比表面积，其修饰的石墨烯必须均匀分散于N，N-二甲基甲酰胺中，这样在修饰电极过程中才能均一铺展在电极表面，形成稳定的石墨烯修饰层。

3.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，纳米金沉积在石墨烯修饰电极表面，形成石墨烯-纳米金复合修饰电极，在沉积纳米金是在一定浓度的氯金酸溶液中，其氯金酸溶液沉积纳米金的浓度，电位以及沉积时间控制一定。

4.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器的制备是在石墨烯-纳米金复合修饰电极表面聚合一层聚吡咯膜层；其方法是，溶液中吡咯和雌激素通过氢键的作用结合，通过电极表面施加电压，使吡咯在电极表面形成一层聚吡咯膜层，吡咯和雌激素的氢键作用，使得雌激素被嵌入到聚吡咯膜层的骨架结构中，电极表面形成一层嵌有雌激素的石墨烯-纳米金和聚吡咯膜层构建的石墨烯-纳米金仿生免疫传感器。

5.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，对雌激素的富集检测，首先是要除去电极表面的雌激素，使电极表面形成大量的雌激素的印迹位点，这样可以在将此电极富集样品中的雌激素，通过电化学的分析方法进行检测；其电极表面模板除去的方法是将此电极浸泡在0.5M的HCl溶液中15min。

6.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的富集是在含有0.1M的KCl溶液中富集。

7.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素富集过后要对电极表面进行洗涤，以除去电极表面非选择性吸附的物质，其洗涤液是pH＝6.86的PBS标准缓冲溶液。

8.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测，所述修饰电极原基底电极是常见的玻碳电极，工作区域直径为3mm，通过导线与连同参比电极和对电极与控制系统连接，构成三电极系统。

9.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，参比电极和对电极分别是Ag/AgCl电极和铂丝电极。

10.根据权利要求1所述的一种石墨烯-纳米金仿生免疫传感器对雌激素的检测方法，其特征在于，其检测雌激素是在pH＝6.86的PBS标准缓冲溶液中进行。

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