CN102866219A

CN102866219A - 一种马铃薯中α-茄碱提取与检测的方法

Info

Publication number: CN102866219A
Application number: CN2012103213903A
Authority: CN
Inventors: 熊兴耀; 曾建国; 胡新喜; 伍慧敏; 曾静; 李美
Original assignee: Hunan Agricultural University
Current assignee: Hunan Agricultural University
Priority date: 2012-09-03
Filing date: 2012-09-03
Publication date: 2013-01-09
Anticipated expiration: 2032-09-03
Also published as: CN102866219B

Abstract

本发明公开了一种马铃薯中α-茄碱提取及检测的方法，其步骤包括：(1)α-茄碱提取：取新鲜马铃薯肉，用组织匀浆机粉碎成匀浆，称取样品置于瓶中，加入提取液，密封后，超声提取，将提取液过膜备用；所述的提取液为体积比=1:1的质量浓度1%甲酸-水/甲醇、体积比=1:1的质量浓度1%盐酸-水/甲醇、质量浓度0.5%甲酸-水或质量浓度0.5%盐酸-水；所述的超声提取在超声频率35kHz下提取时间为5～15min。(2)液质联用检测α-茄碱：以α-茄碱m/z[M+H]⁺=868.78为目标离子，用选择离子监测模式定量，将标准对照液进样检测，以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，根据回归方程计算α-茄碱的含量。该方法能简单、快捷、准确地检测出马铃薯中α-茄碱。

Description

一种马铃薯中α-茄碱提取与检测的方法

技术领域

本发明涉及一种简单、快捷、准确的基于液质联用技术测定马铃技术薯中α-茄碱含量的前处理方法及检测技术，具体讲涉及用快速超声提取从马铃薯肉中提取α-茄碱，并用液质联用技术(LC-MS)对α-茄碱的含量进行检测的技术，

背景技术

马铃薯(Solanum tuberosum L.)又名土豆、洋芋，是继水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。由于马铃薯植株和块茎中普遍含有一类甾体糖苷生物碱,称为茄碱，又叫龙葵素（目前已知的龙葵素有α、β、γ-茄碱或α、β、γ-卡茄碱）具有一定毒性，在马铃薯食用过程中存在一定安全隐患。马铃薯在放置一段时间后，很容易变绿发芽，绿皮与芽中龙葵素含量会迅速上升，过多摄入（发绿马铃薯30g左右）会引起舌头发麻、恶心呕吐、腹泻、头痛、晕眩等不良反应，甚至导致中毒者抽搐、昏迷、呼吸中枢麻痹而死亡。马铃薯消费量巨大，但其检测方法与技术却存在许多问题，一定程度上阻碍了马铃薯的安全预警和质量监管。

式1龙葵素的结构式

α-茄碱是龙葵素类化合物中含量较高的一种化合物，监测α-茄碱的含量基本能反映马铃薯中龙葵素类化合物的含量。马铃薯的主要食用部分是肉，较少食用皮和芽。但目前研究却较少关注马铃薯肉中的α-茄碱及其检测方法。目前马铃薯中龙葵素检测方法有：段光明等用四氢呋喃-水-乙腈-冰乙酸搅拌浸提，蒸干，再超声提取，再离心，碱沉，用紫外法检测龙葵素类化合物，耗时长，且紫外灵敏度有限，准确度不高。肖文军等用乙酸-乙醇回流提取4小时，用高效液相检测，基本实现α-茄碱与α-卡茄碱的分离，但是分离时间长达30分钟，且当α-茄碱含量很低的时候紫外检测器很难准确定量。黄红苹等用乙酸-乙醇超声提取2次，每次40min，再加硫酸溶解，加氨水沉淀，用高效液相检测，α-茄碱与α-卡茄碱没有完全分离。这些方法都存在耗时长，操作繁琐，且对低含量的α-茄碱难以准确定量的缺点。因此，迫切需要建立一种前处理简单、灵敏度高的方法来检测马铃薯肉中α-茄碱的含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种马铃薯中α-茄碱快速提取与检测的方法，该方法前处理快速简单、能快速准确检测出马铃薯中α-茄碱含量。

本发明的目的是提供一种马铃薯中α-茄碱快速提取与检测方法，步骤包括：

(1)α-茄碱快速提取

取新鲜马铃薯肉，用组织匀浆机粉碎成匀浆，称取样品置于瓶中，加提取液，密封后，超声提取，将提取液过膜备用；

所述的提取液为体积比=1:1的1%甲酸-水/甲醇、体积比=1:1的1%盐酸-水/甲醇、0.5%甲酸-水或0.5%盐酸-水；

所述超声提取在超声频率35kHz下提取5~15min。

(2)液质联用快速检测α-茄碱

α-茄碱m/z[M+H]⁺=868.78为目标离子，用选择离子监测模式，将标准对照液进样检测，以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，根据回归方程计算α-茄碱的含量。

所述准确称取马铃薯肉0.5～1.5g；提取液的用量为50~150mL。

所述的提取液体积比=1:1的1%甲酸-水/甲醇的提取液为最佳选择。

所述超声提取过程是控制温度在35～45℃。

所述膜的孔径为0.22μm。

所述的标准对照液被逐步稀释配制成7.125ppb，14.25ppb，28.5ppb，57ppb，114ppb，228ppb，456ppb浓度的溶液进行测试，得到回归方程为：

Y=2664.1x+6505.5，R²=0.9991。

本发明中液质联用检测条件为：超高效液相色谱串联单四级杆质谱仪型号为UPLC-SQD MS，Waters；色谱柱型号为Unitary C₁₈，规格为2.1mm×150mm，5μm；流动相A为0.1%甲酸-水，流动相B为乙腈；梯度洗脱时间和洗脱液成份为0min(95%A，5%B）；5min(50%A，50%B）；6min(5%A，95%B）；柱温为35°C；流速为0.2mL/min；进样量为5μL；离子源为电喷雾离子源，ESI正离子模式检测；毛细管电压为2.8kV；锥孔电压为30V；离子源温度为120°C；脱溶剂气温度为350°C；脱溶剂气流速为600L/hr；锥孔气流速为50L/hr。

本发明的效果：

本发明以马铃薯肉为原料，通过超声提取法快速提取α-茄碱，确采用液质联用技术为检测手段，建立了α-茄碱前处理与检测技术体系。其中马铃薯肉中α-茄碱的前处理能快速地将α-茄碱提取，用体积比=1:1的1%甲酸水/甲醇的提取液超声提取，只花费时间10min左右，提取效率高达到77.66%，达到了马铃薯肉中α-茄碱快速提取的目的；同时采用了离子监测模式，能迅速建立标准曲线，获得回归方程，计算出α-茄碱的准确含量，保留时间5.51min，检测时间只花费了8min，达到了快速准确测试的目的。

附图说明

【图1】是选择离子监测模式下对照品（a）和马铃薯肉样品（b）中α-茄碱质谱图。

具体实施方式

下面的实施例中进一步说明了本发明，这并不限定本发明的范围。

实施例1

取市场上购买的新鲜马铃薯，洗净，擦干，削皮。将肉匀浆。搅匀后称取1g，置于锥形瓶，分别加入1%甲酸-水：甲醇(1:1,v:v)、1%盐酸-水：甲醇(1:1,v:v)、0.5%甲酸-水、0.5%盐酸-水溶剂100mL，密封，称重。以35kHz分别超声提取5-15min，15-25min，25-35min，35-45min，45-55min，55-65min，过0.22μm膜，进样检测。检测条件为：色谱柱Unitary C₁₈(2.1mm×150mm，5μm)；流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为乙腈；梯度洗脱：0min(95%A，5%B）；5min(50%A，50%B）；6min(5%A，95%B）；柱温：35°C；流速：0.2mL/min；进样量：5μL。离子源为电喷雾离子源，ESI正离子模式检测。毛细管电压：2.8kV；锥孔电压：30V；离子源温度：120°C；脱溶剂气温度：350°C；脱溶剂气流速：600L/hr；锥孔气流速：50L/hr。α-茄碱（m/z[M+H]⁺=868.78）为目标离子，用选择离子监测模式（SIM）定量。以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=2664.1x+6505.5，R²=0.9991。

溶剂和不同提取时间对α-茄碱的含量测定结果如下表：

表1不同提取时间对α-茄碱提取效果的影响

各个时间提取效果差异不大，从省时角度考虑，最佳提取时间为10min左右。

表2不同提取溶剂对α-茄碱提取效果的影响

1％甲酸-水：甲醇(1:1,v:v)为最佳提取溶剂。

Claims

1.一种马铃薯中α-茄碱提取与检测的方法，其特征在于，步骤包括：

(1)α-茄碱提取

取新鲜马铃薯肉，用组织匀浆机粉碎成匀浆，称取样品置于瓶中，加入提取液，密封后，超声提取，将提取液过膜备用；

所述的提取液为体积比=1:1的质量浓度1%甲酸-水/甲醇、体积比=1:1的质量浓度1%盐酸-水/甲醇、质量浓度0.5%甲酸-水或质量浓度0.5%盐酸-水；

所述的超声提取在超声频率35kHz下提取时间为5～15min。

(2)液质联用检测α-茄碱

以α-茄碱m/z[M+H]⁺=868.78为目标离子，用选择离子监测模式定量，将标准对照液进样检测，以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，根据回归方程计算α-茄碱的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，准确称取马铃薯肉0.5～1.5g；提取液用量为50～150mL。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的提取液为体积比=1:1的质量浓度1%甲酸-水/甲醇。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声提取是控制温度在35~45°C。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜的孔径为0.22μm。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的标准对照液逐步稀释配制成7.125ppb，14.25ppb，28.5ppb，57ppb，114ppb，228ppb，456ppb浓度的溶液进行测试，得到回归方程为Y=2664.1x+6505.5，R²=0.9991。

7.按照权利要求书1所述方法，其特征在于液质联用检测条件为：超高效液相色谱串联单四级杆质谱仪型号为UPLC-SQD MS，Waters；色谱柱型号为Unitary C₁₈规格为2.1mm×150mm，5μm；流动相A为0.1%甲酸-水，流动相B为乙腈；梯度洗脱时间和洗脱液成份分别为0min(95%A，5%B），5min(50%A，50%B），6min(5%A，95%B）；柱温为35°C；流速为0.2mL/min；进样量为5μL；离子源为电喷雾离子源，ESI正离子模式检测；毛细管电压为2.8kV；锥孔电压为30V；离子源温度为120°C；脱溶剂气温度为350°C；脱溶剂气流速为600L/hr；锥孔气流速为50L/hr。